l Nghiên cứu - Kỹ thuật studies”, Anticancer Res 23(1A), 363-98 Chaudhary G (2011), “Inhibition of dimethylebenz (a) anthracene (DMBA)/croton oil induced skin tumorigenesis in Swiss albino mice by Aloe vera treatment”, International Journal of Biological & Medical Research, 2(3), 671-678 Huang M T., Newmark H L., Frenkel K J (1997), “Inhibitory effects of curcumin on tumorigenesis in mice”, Cell Biochem Suppl 27, 26-34 Hunter J., Savin J., Dahl M (2002), Clinical Dermatology, Blackwell Science Ltd Co., 253-282 Huynh NT, Morille M, Bejaud J, et al (2011) “Treatment of 9L gliosarcoma in rats by ferrociphenolloaded lipid nanocapsules based on a passive targeting strategy via the EPR effect”, Pharm Res., 28 (12), 3189-98 Limtrakul P.(2001), Curcumin inhibits carcinogen induced c-Ha-ras and c-fos proto-oncogenes expression, and protein kinase c activity in mouse skin, BMC Cancer, 1:7 Limtrakul P., Anuchapreeda S., Lipigorngoson S, et al (2001), "Inhibition of carcinogen induced c-Haras and c-fos proto-oncogenes expression by dietary curcumin", BMC Cancer, 1,1 Manoharan S., Selvan M V (2012), “Chemopreventive potential of geraniol in 7,12-dimethylbenz(a) anthracene (DMBA) induced skin carcinogenesis in Swiss albino mice”, J of Environmental Biology, 32, 255-260 10 Quintanilla M., Brown K., Ramsden M., et al (1986), “Carcinogen specific mutation and amplification of Ha-ras during mouse skin carcinogenesis”, Nature 322, p 78-80 11 Sonavane K, Phillips J, Ekshyyan O, et al (2012), “Topical curcumin – based cream is equivalent to dietary curcumin in a skin cancer model”, J of Skin Cancer, 2012, Article ID 147863 12 Wilken R., Veena M S., Wang M B., et al (2011) “Curcumin: A review of anti-cancer properties and therapeutic activity in head and neck squamous cell carcinoma”, Molecular Cancer, 10, 12 13 Yuspa S H., Hennings H., Saffiotti U (1976) “Cutaneous chemical carcinogenesis: past, present and future”, The J of Investigative Dermatology, 67, 199-208 (Ngày nhận bài: 14/03/2016 - Ngày duyệt đăng: 25/04/2016) Tác dụng kháng khuẩn, chống viêm tầm (Cardiospermum halicacabum L.) Dương Thị Ly Hương1*, Nguyễn Thanh Thảo2, Trần Văn Ơn2 Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Trường Đại học Dược Hà Nội * E- mail: lyhuong.smp@vnu.edu.vn Summary Antimicrobial activity of Cardiospermum halicacabum L against Escherichia coli and Samonella sp was evaluated by the diffusion method on agar plates No sterile circles were observed with either aqueous and alcohol extracts from the plant in experimental bacteria incubation Acute anti-inflammatory action was tested on carrageenan-induced paw edema in rats and peritonitis exudation, subacute inflammatory property through weight gain of granuloma caused by subcutaneous implantation of amiante, and the thymus weights after using the test agents Both aqueous and alcohol extracts from Cardiospermum halicacabum L exhibited acute anti-inflammatory action Only the aqueous extracts decreased the weight of granuloma Neither aqueous nor alcohol extraction affected the weight of thymus after days’ administeration Keywords: Cardiospermum halicacabum L., antibacterial, anti-inflammation Tầm (Cardiospermum halicacabum L.) thân thảo, sống lâu năm, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới châu Mỹ, châu Phi, châu Á Cây dùng phổ biến để làm thuốc điều trị bệnh viêm đa khớp dạng thấp, eczema, viêm da, viêm đường tiết niệu, viêm thận, phù thũng…[1,6,9,10] Ngồi ra, cịn có tác dụng kháng histamin, kháng khuẩn, chống ung thư dày [5,7] Các nghiên cứu thành phần hóa học cho thấy tồn tầm có chứa saponin, alcaloid, flavonoid, proanthocyanidin, apigenin phytosterol [1,6,7] Phân đoạn steroid, cao cồn phần mặt đất tầm có hoạt tính chống viêm thử nghiệm gây phù chân chuột cống carragenan Cao cồn có tác dụng giảm đau, chống viêm thử nghiệm gây u hạt thực nghiệm Cơ chế chống viêm 30 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 5/2016 (SỐ 481 NĂM 56) Đặt vấn đề l Nghiên cứu - Kỹ thuật tầm chứng minh có liên quan đến COX [7] Ngoài ra, dịch chiết tầm làm giảm TNFa NO [9] Bên cạnh tác dụng chống viêm, tầm biết đến với tác dụng kháng khuẩn [4], điều trị eczema [10], hạ huyết áp, lợi tiểu [1], giảm đường huyết [2], diệt ấu trùng sán[8]… Ở Việt Nam, tầm biết đến chủ yếu với tác dụng chữa bệnh ngồi da Các nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng sinh học, lợi ích khác tầm sức khỏe người chưa biết rõ Mục tiêu đề tài đánh giá tác dụng kháng khuẩn chống viêm dịch chiết toàn phần tầm Việt Nam Nguyên liệu Nguyên liệu toàn phần mặt đất tầm (cây bóp bép - tiếng Mường), thu hái vào tháng 7/2015 xã Long Sơn, huyện Kim Bơi, tỉnh Hịa Bình Mẫu sấy khô nhiệt độ 50oC bảo quản túi nilon Mẫu tiêu lưu phòng tiêu Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP), số hiệu mẫu HNIP/15362/08 Để nghiên cứu tác dụng dược lý, sử dụng dịch chiết nước dịch chiết cồn toàn tầm phỏng, cụ thể sau: - Dịch chiết nước: nguyên liệu khô tán nhỏ, sắc lần nước, gộp nước sắc lại, lọc qua bông, cô đến cao lỏng 1:1 - Dịch chiết cồn: nguyên liệu khô tán nhỏ, chiết dung môi ethanol 70o Dịch chiết lọc qua bông, cất thu hồi dung môi cô cách thủy đến cao lỏng 1:1 Đối tượng nghiên cứu - Các chủng vi khuẩn Escherichia coli ATCC 29522 Samonella sp ATCC 14028 phòng vi sinh, Viện Kiểm nghiệm Trung ương cung cấp - Chuột cống trắng, khỏe mạnh, giống, cân nặng trung bình 160 ± 20 gam, Học viện Quân Y cung cấp Riêng mơ hình chống viêm thơng qua tuyến ức, sử dụng chuột cống đực cịn non, trọng lượng trung bình 100 ± 20 gam Phương pháp nghiên cứu Tác dụng kháng khuẩn + Nguyên tắc: Hoạt chất có chế phẩm thử khuếch tán vào mơi trường dinh dưỡng có vi sinh vật thị Sau thời gian (24 giờ) ủ chế phẩm thử với mơi trường dinh dưỡng có chứa vi sinh vật thị, đo đường kính vịng vơ khuẩn để đánh giá khả ức chế vi sinh vật mẫu nghiên cứu + Cách tiến hành: Chuẩn bị môi trường dinh dưỡng thạch thường Hấp tiệt trùng 121oC 15 phút Khi nhiệt độ môi trường khoảng 45-50oC, trộn vi sinh vật thị vào môi trường lắc (vi sinh vật thị trước thử làm thành nhũ dịch có khoảng 106-107 tế bào ml, trộn vào môi trường theo tỷ lệ 1%) Đổ mơi trường dinh dưỡng có chứa vi sinh vật thị vào hộp petri hấp tiệt trùng 121oC 15 phút (25 ml/hộp) Sau cho hộp petri vào buồng ni cấy Sau thạch đông, tiến hành đục lỗ (6 giếng/đĩa, đường kính mm) Nhỏ 0,2 ml mẫu thử vào giếng thạch Để yên 15 phút cho mẫu thử khuyếch tán Cho vào tủ ấm nhiệt độ 28-30oC 24 Sau 24 giờ, đo đường kính vùng ức chế để đánh giá khả ức chế vi sinh vật mẫu nghiên cứu Nếu đường kính vịng vơ khuẩn > 15 mm, hoạt chất có chế phẩm thử có tính kháng khuẩn Tác dụng chống viêm + Mơ hình gây phù chân chuột carrageenan: theo mơ hình Winter[3] Chuột chia ngẫu nhiên thành lô nghiên cứu (lô uống NaCl 0,9%, lô uống Indomethacin mg/kg, lô uống dịch chiết tầm nước 10 g/kg lô uống dịch chiết tầm cồn 10 g/kg) Tất chuột uống chất thử vào thời điểm 24 60 phút trước gây viêm carrageenin 0,5% (pha NaCl 0,9%) tiêm vào gan bàn chân chuột Trước gây viêm, chuột đo thể tích bàn chân chuột bình thường (Vo), sau gây viêm giờ, giờ, giờ, 24 chuột đo lại thể tích bàn chân chuột (được giá trị V1, V3, V5, V24) Kết chống viêm thể mức độ phù chân chuột (DV%) tỷ lệ phần trăm ức chế phù (I%) + Mơ hình gây tràn dịch màng bụng: Chuột chia thành lô giống trên, uống thuốc liên tục ngày Ngày thứ 3, sau uống thuốc thử, chuột tiêm màng bụng dung dịch carrageenin 0,005 g + formaldehyd 1,4 ml + nước cất vừa đủ 100 ml với thể tích tiêm ml/ chuột Sau tiêm 24 giờ, mở khoang màng bụng để hút dịch đếm số lượng tế bào máu dịch tiết Tác dụng chống xuất tiết đánh giá qua thể tích dịch rỉ viêm số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm + Mơ hình gây viêm mạn amiant: Sử dụng phương pháp gây u hạt thực nghiệm Ducrot, Jolou cộng [3] Chuột chia lô uống thuốc liên tục ngày liền (vào 8.30 sáng) Trước cho uống thuốc, tất chuột cấy amiant với khối lượng 30 ± 0,1 mg (đã tiệt trùng 160oC giờ) vào da lưng chuột TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 5/2016 (SỐ 481 NĂM 56) 31 Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu l Nghiên cứu - Kỹ thuật Chiều ngày thứ 5, sau liều uống thuốc cuối cùng, giết chuột, bóc tách khối u, đặt vào tủ sấy nhiệt độ 56oC, sấy 18 giờ, sau cân trọng lượng khối u Tác dụng chống viêm đánh giá tỷ lệ phần trăm giảm trọng lượng khối u lô thử với lô chứng + Tác dụng chống viêm thông qua tuyến ức: Chuột chia lô uống thuốc tương tự trên, riêng lô thay indomethacin prednisolon mg/kg ngày (vào 8.30 sáng) Chiều ngày thứ 3, giết chuột, bóc tách tuyến ức đem cân So sánh trọng lượng tuyến ức lô thử lô chứng Kết nghiên cứu Tác dụng kháng khuẩn dịch chiết tầm Sử dụng chủng vi khuẩn E coli Samonella sp để đo hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết tầm Kết thể hình hình Hình 1: Tác dụng kháng khuẩn dịch chiết tầm nước đối với: A) E coli; B) Salmonella sp Hình 2: Tác dụng kháng khuẩn dịch chiết tầm cồn đối với: A) E coli; B) Salmonella sp Nhận xét: Kết cho thấy dịch chiết nước tầm có tác dụng kìm khuẩn yếu, nhiên khơng quan sát thấy vịng vơ khuẩn dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm Tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột carrageenan Kết thể qua hình bảng Hình 3: Mức độ phù chân chuột (DV%) theo thời gian * ( : p < 0,05 so với chứng; **:p < 0,01 so với chứng; ***: p < 0,001 so với chứng) Bảng 1: Tỷ lệ phần trăm ức chế phù (I%) lô chuột thực nghiệm Lô Thuốc dùng NaCl 0,9% Indomethacin mg/kg Tầm nước 10 g/kg Tầm cồn 10 g/kg Số chuột (n) 10 10 10 10 Sau 57,96 24,29 1,76 Tỷ lệ phần trăm ức chế phù (I%) Sau Sau 0 55,61 40,62 28,30 35,20 31,06 29,18 Sau 24 30,80 16,68 8,14 Nhận xét: Indomethacin làm giảm mức độ phù chân chuột rõ theo thời gian, dịch chiết nước dịch chiết cồn có tác dụng ức chế phù chân chuột rõ thời điểm sau gây viêm giờ, dịch chiết nước tầm làm giảm viêm thời điểm sau gây viêm Khơng có khác biệt tác dụng chống viêm indomethacin mg/kg, dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm 10 g/kg thời điểm sau gây viêm Tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây tràn dịch màng bụng 32 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 5/2016 (SỐ 481 NĂM 56) l Nghiên cứu - Kỹ thuật Bảng 2: Thể tích dịch rỉ viêm số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm Lô Thuốc dùng NaCl 0,9% Indomethacin mg/kg Số chuột (n) 10 Thể tích dịch rỉ viêm (ml) Số lượng bạch cầu (G/L) 3,53 ± 0,03 4,33 ± 0,09 p1-2 = 0,3 8,65 ± 0,36 8,61 ± 0,92 p1-2 = 0,6 10 4,08 ± 0,01 p1-3 = 0,4 4,46 ± 0,34 p1-3 = 0,002 10 4,30 ± 0,29 p1-4 = 0,4 3,88 ± 0,24 p1-4 = 0,0001 p3-4 = 0,52 10 Nhận xét: Chỉ có prednisolon mg/kg làm giảm trọng lượng tuyến ức so với lô uống nước muối sinh lý cách có ý nghĩa thống kê Cả dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm chưa làm thay đổi trọng lượng tuyến ức so với lô chứng Bàn luận Trọng lượng Tỷ lệ giảm trọng Số p so với lượng tuyến ức so tuyến ức chuột chứng (n) trung bình (mg) với lơ chứng (%) NaCl 0,9% 10 0,23 ± 0,01 Prednisolon mg/kg 10 0,15 ± 0,01 34,56 0,013 Tầm nước 10 0,22 ± 0,01 4,54 0,79 10g/kg Tầm cồn 10 0,22 ± 0,01 4,93 0,74 10 g/kg Về tác dụng kháng khuẩn: kết nghiên cứu hình hình cho thấy dịch chiết nước cồn tầm khơng thể hoạt tính kháng khuẩn rõ chủng E coli Samonella sp Nghiên cứu Jigna Parekh cho thấy dịch chiết nước cồn tầm khơng có tác dụng E coli [4] Trong nghiên cứu khác cho thấy alkaloid từ tầm có tác dụng ức chế E coli, Klebsiella pneumonia, Shigella boydii, Salmonella typhimurium [7,8] Như vậy, với cách chiết khác nhau, phân đoạn khác nhau, dịch chiết tầm cho tác dụng khác chủng vi khuẩn Về tác dụng chống viêm: Kết nghiên cứu cho thấy dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm có tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột carrageenan gây tràn dịch màng bụng Tác dụng tương đương chí cịn tốt so với indomethacin mg/kg mơ hình gây tràn dịch màng bụng, dịch chiết tầm làm giảm số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm, indomethacin không làm thay đổi số Theo số nghiên cứu, để làm giảm viêm mơ hình gây tràn dịch màng bụng, cần dùng indomethacin với liều 20 mg/kg [2,3] Tác dụng chống viêm tầm cho thành phần triterpenoid [7,8] Trên mô hình chống viêm mạn amiant, có dịch chiết nước tầm thể tác dụng ức chế khối u, dịch chiết cồn tác dụng Nghiên cứu Sadique cho thấy cao toàn phần tầm thể tác dụng chống viêm rõ với liều 500 mg/kg Trong thử nghiệm gây u hạt thực nghiệm, cao tầm ức chế thoát dịch tăng sinh tế bào viêm viêm mạn tính, giảm lipid peroxidase, giảm g-glutamyl transpeptidase giảm hoạt động phospholipase A2 dịch tiết u hạt [6] Tác dụng chống viêm thông qua giảm trọng lượng tuyến ức xem mơ hình mơ tác dụng chống viêm theo kiểu corticoid Corticoid hormon vỏ thượng thận có tác dụng ngăn cản hình thành tế bào miễn dịch nên gây ly giải lympho bào làm teo tuyến ức[3] Kết nghiên cứu bảng cho thấy prednisolon với liều mg/kg làm giảm trọng lượng tuyến ức rõ sau ngày điều trị Dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm rõ tác dụng TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 5/2016 (SỐ 481 NĂM 56) 33 Tầm nước 10 g/kg Tầm cồn 10 g/kg Nhận xét: Indomethacin, dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm khơng làm thay đổi thể tích dịch rỉ viêm Số lượng bạch cầu giảm cách đáng kể lô uống tầm nước tầm cồn, nhiên không thay đổi lô uống indomethacin với liều mg/kg Khơng có khác biệt số lượng bạch cầu lô uống tầm nước tầm cồn Tác dụng chống viêm mạn amiant Bảng 3: Trọng lượng u hạt tỷ lệ ức chế u hạt lô chuột thực nghiệm Lô Thuốc dùng NaCl 0,9% Indomethacin mg/kg Tầm nước 10 g/kg Tầm cồn 10 g/kg Số Trọng lượng u Tỷ lệ ức chuột hạt trung bình chế u hạt (n) (mg) (%) 10 188,60 ± 0,02 p 10 118,70 ± 0,01 37,08 p1-2 = 0,023 10 83,14 ± 0,01 55,99 p1-3 = 0,001 p2-3 =0,013 10 135,23 ± 0,01 28,28 p1-4 = 0,10 Nhận xét: Cả indomethacin dịch chiết nước tầm có tác dụng chống viêm mạn thơng qua giảm trọng lượng u hạt thực nghiệm Tỷ lệ ức chế u hạt dịch chiết nước tầm mạnh so với indomethacin liều mg/kg (p < 0,05) Dịch chiết cồn tầm chưa thể tác dụng chống viêm thơng qua mơ hình Tác dụng chống viêm thông qua giảm trọng lượng tuyến ức Bảng 4: Trọng lượng tuyến ức lô chuột thực nghiệm Lô Thuốc dùng l Nghiên cứu - Kỹ thuật Các nghiên cứu chế chống viêm tầm giới cho thấy ức chế phospholipase A2, ức chế COX2, giảm TNFa giảm NO mơ viêm đích tác dụng quan trọng dịch chiết tầm Chưa có nghiên cứu rõ thành phần hoạt chất tầm có tác dụng chống viêm Kết luận - Dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm (liều 10 g/kg) chưa thể hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn E coli Samonella sp - Cả dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm (liều 10 g/kg) thể tác dụng chống viêm cấp qua mơ hình gây phù chân chuột carrageenan gây tràn dịch màng bụng hỗn hợp carrageenan + formaldehyd - Chỉ có dịch chiết nước tầm 10 g/kg thể tác dụng chống viêm mạn thông qua làm giảm trọng lượng khối u mô hình gây u hạt thực nghiệm cấy amiant da - Cả dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm (liều 10 g/kg) không ảnh hưởng đến trọng lượng tuyến ức sau cho chuột uống thuốc liên tục ngày Tài liệu tham khảo Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Trung, Nguyễn Thượng Dong (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập 2, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, trang 794-795 Lê Thị Diễm Hồng, Nguyễn Xuân Thắng (2003), “Góp phần tìm hiểu tác dụng chống viêm hoa kim ngân (Lonicera japonica Thunb.)”, Tạp chí Dược học số 4/2003, trang 13-15 H Gerhard Vogel (2002), “Drug discovery and evaluation, pharmacological assays”, Springer-Verlag Berlin Haidelberg, pp 725-771 Jigna Parekh, Sumitra V Chanda (2006), “In vitro antimicrobial activity and phytochemical analysis of some Indian medicinal plant”,Turk J Biol., 31 (3), pp 53-58 M S Sheeba and V V Asha (2006), “Effect of Cardiospermum halicacabum L on ethanol-induced gastric ulcer in rats”, J of Ethnopharmacology, volume 106, issue 1, pp 105-110 Sadique, J Chandra, T Thenmozhi, V Elango (2007), “Biochemical models of action of Cassia occidentalis and Cardiospermum halicacabum in inflammation”, International Bibliographic Information Dietary Supplements, 19(2), pp 201-212 S M Jachak, C Selvam, A S Rivastava, V Ahuja (2007), “Evaluation of anti-inflammatory activity and identification of bioactive compounds from Vitex negundo L., Cardiospermum halicacabum L and Tridax procumbens L.”, Theme Connect, 73 The European agency for the evaluation of medicinal products (1990), “Committee for veterinary medicinal products, Cardiospermum halicacabum L report”, Veterinary Medicines Evaluation Unit, 664, 99 Venkatesh Babu K C and Krishnak U M (2006), “Cardiospermum halicacabum L suppresses the production of TNF-alpha and Nitric oxide by human peripheral blood mononuclear calls”, African J of Biomedical Research, Vol.9, pp 95-99 10 Z Phytother (2005), “Treatment of eczema with Cardiospermum halicacabum L., Cardiospermum ointment and ointment based on a part-place comparison controlled trial”, Salbbe and Sallbengrundlage in Halbseitenverglerich, 5, pp 263-266 (Ngày nhận bài: 20/03/2016 - Ngày duyệt đăng: 25/04/2016) Nghiên cứu tác dụng giảm đau chống viêm gối hạc Nguyễn Thị Phương1*, Nguyễn Thùy Dương2, Đậu Thị Giang2 Nguyễn Minh Khởi1, Phương Thiện Thương1 Viện Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội * E-mail: phuong76.hpttc@gmail.com Summary The analgesic and anti-inflammatory activities of Leea rubra Blume (Leeaceae) extracts were investigated in mice and rats Acute and chronic anti-inflammatory activity was estimated by the model of carrageenaninduced paw edema and cotton pellets in rats Analgesic effect was tested in mice by hot plate and writhing test to distinguish the central and peripheral effects, respectively In writhing tests, effects of the ethanol extracts of root and leaf were significant at doses of 100; 200 and 400 mg/kg By the model of carrageenan-induced paw edema, both root nad leaf extracts showed a trend to reduce the edema at doses of 100 and 200 mg/kg 34 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 5/2016 (SỐ 481 NĂM 56) ... đoạn khác nhau, dịch chiết tầm cho tác dụng khác chủng vi khuẩn Về tác dụng chống viêm: Kết nghiên cứu cho thấy dịch chiết nước dịch chiết cồn tầm có tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân... kháng khuẩn dịch chiết tầm Kết thể hình hình Hình 1: Tác dụng kháng khuẩn dịch chiết tầm nước đối với: A) E coli; B) Salmonella sp Hình 2: Tác dụng kháng khuẩn dịch chiết tầm cồn đối với: A) E... Nghiên cứu - Kỹ thuật tầm chứng minh có liên quan đến COX [7] Ngồi ra, dịch chiết tầm làm giảm TNFa NO [9] Bên cạnh tác dụng chống viêm, tầm biết đến với tác dụng kháng khuẩn [4], điều trị eczema