Nghiên cứu điều chế mangosteen hỗn hợp các xanthon của vỏ quả măng cụt garcinia mangostana l và thử tác dụng kháng vi khuẩn của mangosteen

VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ************************** NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ MANGOSTEEN “ HỖN HỢP CÁC XANTHON” CỦA VỎ QUẢ MĂNG CỤT VÀ THỬ TÁC DỤNG KHÁNG VI KHUẨN CỦA MANGOSTEEN HƯỚNG DẪN: PGS.TS HÀ HUY KẾ TS PHAN QUỐC KINH NGƯỜI THỰC HIỆN: LÊ THỊ THANH THANH CHUYÊN NGÀNH: VI SINH VẬT KHÓA: 14 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Hà Nội – 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẶT VẤN ĐỀ Cây măng cụt có tên khoa học Garcinia mangostana L., thuộc họ Bứa Clusiaceae (Guttierae), loài ăn nhiệt đới quen thuộc Đông Nam Á Cây măng cụt cịn có tên khác Giáng Châu, Sơn Trúc Tử , người phương Tây gọi măng cụt “ Nữ hoàng trái ” (Queen of fruits)… Ở nước ta măng cụt trồng nhiều tỉnh miền Đông Nam Bộ đồng sơng Cửu Long, số trồng miền Trung Măng cụt trồng nhiều Thái Lan, Campuchia, Myanmar, Sri Lanka Philippin Từ lâu y học cổ truyền Việt Nam, Thái Lan, Ấn Độ sử dụng vỏ măng cụt để chữa bệnh tiêu chảy, bệnh lỵ, đau bụng, bệnh vàng da, …[1], [3], [6] Nhiều nghiên cứu cho thấy măng cụt chứa hydroxy, prenyl xanthon, flavonoid, triterpenoid Các hợp chất thể hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, chống khối u, kháng virut, chống ơxy hố, giảm đau [8] … Những nghiên cứu cho thấy hoạt chất chứa vỏ măng cụt gây độc mạnh cho dòng tế bào ung thư gan, ung thư vú, ức chế tế bào ung thư máu HL60 người [29], kháng vi khuẩn Helicobacter pylori (Hp) gây viêm loét dày kháng virut HIV Khi sử dụng với liều cao để đắp da chuột, không gây phản ứng phụ, trị mụn vết thương lành nhanh [42] Nhiều nghiên cứu cho thấy có nhiều chất chống lão hố, có khoảng 200 loại mạnh gọi xanthon, nhà nghiên cứu y khoa tìm thấy khoảng 40 dẫn xuất xanthon tồn vỏ măng cụt Trong đó, hoạt chất nghiên cứu nhiều mangosteen (có chứa α–mangostin; β–mangostin γ– mangostin) Hiện giới hoạt chất vỏ măng cụt sử dụng rộng rãi với nhiều sản phẩm có chứa mangosteen dạng thực phẩm Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn chức như: mangosteen capsules, xanthon juice (nước ép) … Ở Việt Nam công ty dược phẩm Kingphar sản xuất sản phẩm Kingphar Phyma, Kingphar Codanbe, … Từ trước tới Việt Nam có nhiều cơng trình cơng bố nghiên cứu chiết xuất xác định xanthon từ vỏ măng cụt nhóm tác giả: Đào Hùng Cường, Đỗ Thuý Vân (2010), nghiên cứu chiết tách xác định xanthon [2]; Hà Diệu Ly cộng (2009), cô lập xanthon có hoạt tính kháng khuẩn [5]; Nguyễn Văn Đậu (2009), phân lập xanthon từ vỏ măng cụt [8]; Đỗ Thị Tuyên cộng (2012), nghiên cứu quy trình tách chiết α-mangostin từ vỏ măng cụt quy mơ phịng thí nghiệm [4]; Nguyễn Thị Mai Phương cộng (2003), tác dụng dịch chiết vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) lên vi khuẩn sâu Streptococcus mutans” [7], … Tuy nhiên nghiên cứu chủ yếu nghiên cứu phịng thí nghiệm, chưa thấy có tài liệu Việt Nam cơng bố nghiên cứu chiết xuất mangosteen (có chứa xanthon) quy mô công nghiệp, để phục vụ cho việc sản xuất thực phẩm chức năng, hoàn cảnh trang thiết bị chiết xuất nhà máy Việt Nam quy mô thủ cơng, chưa đại hố Luận văn nhằm góp phần nghiên cứu quy trình sản xuất mangosteen “hỗn hợp xanthon” dựa vào dung mơi có sẵn Việt Nam, rẻ tiền không dễ cháy nổ Quy trình chiết xuất ngâm kiệt, an tồn quy trình chiết xuất dung mơi hữu dễ cháy gia nhiệt giá thành dung môi hữu đắt Luận văn chủ yếu tập trung nghiên cứu phương pháp chiết xuất soxhlet để nghiên cứu hàm lượng mangosteen có vỏ măng cụt chiết tách xác định xanthon có mangosteen thử hoạt tính kháng sinh với vi khuẩn thường gặp Việt Nam Staphylococus aureus Trên sở Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn sử dụng phương pháp ngâm kiệt chiết ethanol 95o, để sản xuất mangosteen Việt Nam với giá thành rẻ với quy trình tương đối an tồn Với mục đích đó, chúng tơi thực đề tài “ Nghiên cứu điều chế mangosteen “hỗn hợp xanthon” vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) thử tác dụng kháng vi khuẩn mangosteen” với mục tiêu: - Nghiên cứu phương pháp chiết xuất mangosteen từ vỏ măng cụt phương pháp đơn giản để dễ dàng đưa vào sản xuất quy mô lớn - Thử tác dụng kháng khuẩn mangosteen α-mangostin loại vi khuẩn thường gặp Việt Nam Staphylococus aureus nồng độ mangosteen α-mangostin khác Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan măng cụt 1.1.1 Giới thiệu tổng quan măng cụt Măng cụt có tên khoa học: Garcinia mangostana L., thuộc họ Bứa Clusiaceae (Guttiferae) Tuỳ theo quốc gia măng cụt có nhiều tên gọi khác nhau: mangosteen (Anh, Mỹ), mangoustanier (Pháp), Sơn trúc tử (Trung Quốc), mangostán (Tây Ban Nha), manggis (Indonesia, Malaysia), mangkhut (Thái Lan, Lào), … Tên La - tinh: Garcinia mangostana, tên “Garcinia” để ghi nhớ nhà thực vật học Laurence Garcia, người sưu tập mẫu cỏ sống Ấn Độ vào kỷ 18, “mangostana” tên tiếng Anh mangosteen xuất phát từ tên Mã lai “mangustan” 1.1.1.1 Nguồn gốc phân bố Cây măng cụt có nguồn gốc từ Mã Lai Indonesia, trồng từ hàng chục kỷ Ngày bắt gặp khắp Đông Nam Á, Ấn Độ, Myanma Sri Lanka, Philippine, nhà truyền giáo đạo Gia tô di thực vào miền Nam Việt Nam, tỉnh Tây Ninh, Gia Định Hiện măng cụt chủ yếu trồng vùng đồng sông Cửu Long (Cần Thơ, Đồng Tháp, Vĩnh Long, Tiền Giang, Kiên Giang, Bình Dương, Cà Mau, Trà Vinh, …) với tổng diện tích lên tới gần 5000 ha, cho sản lượng khoảng 4500 tấn/năm Theo dự án phát triển sản xuất xuất rau, hoa tươi Việt Nam, dự kiến phát triển diện tích trồng măng cụt vùng đồng sơng Cửu Long lên khoảng 11300 ha, cho sản lượng 24000 tấn/năm Cây măng cụt đòi hỏi điều kiện thổ nhưỡng khắc khe, khí hậu nóng ẩm, măng cụt chủ yếu trồng nhiều miền Nam Việt Nam, khơng tiến xa vùng khí hậu lạnh miền Bắc mà dừng lại Huế [3] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình Vùng trồng nhiều măng cụt Việt Nam 1.1.1.2 Đặc điểm thực vật Măng cụt loại to, cao trung bình – 12m, cao đến 20 – 25m Thân có vỏ màu nâu đen sậm, có nhựa màu vàng Lá dày, dai cứng, bóng, mọc đối, màu lục sẫm, mặt có màu sậm mặt dưới, hình thn dài 15 – 25cm, rộng – 11cm, cuống dài – 2cm Hoa đa tính thường hoa hoa lưỡng tính Hoa mọc đơn hay đơi Quả hình cầu trịn, đường kính khoảng – 7cm, vỏ màu đỏ tím, dày xốp, đỏ tươi rượu vang, phía có đài, phía đỉnh có đầu nhuỵ Quả chứa – hạt, quanh hạt có lớp áo bọc màu trắng, ăn ngọt, thơm ngon Mỗi trung bình nặng 60 – 80g [3], [6] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Theo kinh nghiệm người trồng măng cụt sau trồng năm, măng cụt hoa kết Năm đầu 15 – 20 quả/cây, sau 10 năm thu từ 350 – 500 quả/cây, sau 15 năm thu 1000 – 1500 quả/cây Cây trổ hoa vào tháng – 5, tháng – Hình Hình ảnh măng cụt 1.1.1.3 Thành phần hoá học Lá chứa protein (7,8%), tanin (11,2%), xanthon (1,6– dihydroxy–3–methoxy–2–isoprenyl xanthon; gartanin; 1,5,8–trihydroxy–3– methoxy–2-isoprenyl xanthon), ethyl methyl maleimid glucopyranosid [16], triterpenoid cycloartenol, friedlin, α–sitosterol, betulin, Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn mangiferadiol, mangiferolic acid, cyclolanostendiol, hydroxy cyclolanostenon [35] Vỏ phần nghiên cứu nhiều nhất, chứa khoảng 40 xanthon (Phụ lục 2) [25] Thành phần xanthon α– mangostin, β–mangostin, γ–mangostin, isomangostin, trioxyxanthon, pyranoxanthon, dihydroxy methyl butenyl xanthon, trihydrroxy methyl, butenyl xanthon, pyrano xanthenon [18], [23], [41] Những garcinon A, B, C, D, E; mangostinon; garcimangoson A, B, C; gartanin; egonol; epicatechin; procyanidin từ măng cụt nguồn gốc Việt Nam, benzophenon glucosid với hàm lượng vỏ chứa – 13% tanin [3] Một vài nghiên cứu xác định thành phần hoá học ruột thân măng cụt gồm tetrahydroxy xanthon dẫn xuất O-glucosid, pentahydroxy xanthon, maclurin [17] Vỏ phận chứa nhiều xanthon khác (Phụ lục 3) [25] Ngồi thịt măng cụt có nhiều thành phần dinh dưỡng khác (Bảng 1) [25] Bảng Thành phần dinh dưỡng thịt măng cụt Các thành phần Hàm lƣợng Fructose 2,4% Sucrose 10,0% Glucose 2,2% Maltose 0,1% Lactose < 0,1% pH Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 3,52 http://www.lrc-tnu.edu.vn Độ ẩm 80,69% Protein 0,50% Chất xơ 1,35% Vitamin B2 < 0,08 mg/100 g Vitamin B1 0,08 mg/100 g Vitamin A/B – caroten < 50 IU/100 g Vitamin C 7,2 mg/100 g Vitamin E 0,6 IU/100 g Nitơ 0,08% Photpho 9,21 mg/100 g Kali 61,6 mg/100 g Canxi 5,49 mg/100 g Đồng 0,06 mg/100 g Sắt 0,17 mg/100 g Magiê 13,9 mg/100 g Mangan 0,10 mg/100 g Natri 6,43 mg/100 g Kẽm 0,12 mg/100 g 1.1.2 Tổng quan dẫn chất xanthon 1.1.2.1 Cấu trúc Nhân xanthon có tính đối xứng, đánh số theo quy ước quốc tế (danh pháp IUPAC) Nguyên tử C1 – C4 đánh từ vịng bên phải Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn nguyên tử C5 – C8 đánh vòng bên trái Hệ thống đánh số dựa khung xanthen-9 [10] Các xanthon phân loại thành nhóm chính: xanthon oxy hoá đơn giản, xanthon glycosid, prenyl xanthon, xanthonolignoid loại khác [28] Khung xanthon có cấu trúc tương tự khung acridon, alkakoid có nhiều họ cam (Rutaceae), chúng khác chỗ nguyên tử nitơ nhân acridon thay nguyên tử oxy Các acridon có màu vàng xanthon Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 14 Phổ hồng ngoại V2 (α-mangostin) Hình 15 Phổ hồng ngoại V1 (β-mangostin) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 16 Phổ hồng ngoại V3 (γ-mangostin) 3.1.5.4 Phân tích HPLC Sắc ký đồ HPLC ghi máy sắc ký lỏng hiệu cao Hitachi DAD L215 Cục tiêu chuẩn đo lường chất lượng – Bộ khoa học công nghệ môi trường Thời gian lưu (phút) V1,V2,V3 : - V2 (α-mangostin) là: 13,313 phút (Hình 19) - V1 (β-mangostin) là: 18,907 phút (Hình 18) - V3 (γ-mangostin) là: 29,173 phút (Hình 17) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 17 HPLC V3 (γ-mangostin) Hình 18 HPLC V1 (β-mangostin) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 19 HPLC V2 (α-mangostin) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.2 Chiết xuất mangosteen (chứa xanthon) phƣơng pháp ngâm kiệt 3.2.1 Sơ đồ tóm tắt Vỏ măng cụt sấy khô, tán nhỏ Làm ẩm bột măng cụt EtOH 95o, trộn đều, để yên - Cho bột vỏ măng cụt làm ẩm vào bình ngâm kiệt - Cho EtOH, tỷ lệ nguyên liệu:dung môi = 1:7 - Để yên 24 Rút dịch chiết - Cho dịch chiết chảy với tốc độ: 3ml/phút - Cất thu hồi dung môi - Làm khô chân không Cao măng cụt thô Loại bớt tạp chất: - Hoà tan vào EA - Cho chạy qua cột silicagel – than hoạt tính, tỷ lệ: 1:1 - Rửa giải EA Mangosteen Để chiết xuất cao măng cụt thô với phương pháp đơn giản hơn, chúng tơi tiến hành thí nghiệm với phương pháp ngâm kiệt Phương pháp có ưu điểm đơn giản, đưa vào sản xuất với khối lượng lớn cao măng cụt thô để làm nguyên liệu sản xuất thực phẩm chức Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.2.2 Nguyên tắc phương pháp Khi cho dung môi vào bột dược liệu, trọng lực dung môi chảy xuống khe hở Trong thời gian dung môi giữ lại tiếp xúc với dược liệu, hoạt chất hồ tan Sau thêm dung mơi lên mặt khối dược liệu, lớp dung môi ngấm vào khối dược liệu đẩy dịch chiết (lớp dung môi cũ hoà tan dược liệu) Lớp dung mơi tiếp tục hồ tan hoạt chất cịn lại tế bào dược liệu Quá trình tiếp diễn không thêm dung môi Như dược liệu tiếp xúc với dung môi nên chiết kiệt hoạt chất 3.2.3 Chiết xuất mangosteen (chứa xanthon) phương pháp ngâm kiệt với dung môi EtOH 95o 3.2.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu Vỏ măng cụt sấy khô, tán nhỏ rây qua mặt rây 1,5 mm 3.2.3.2 Làm ẩm bột măng cụt Số lượng dùng kg bột vỏ măng cụt Mục đích giai đoạn để bột vỏ măng cụt khô hút dung môi trương nở hồn tồn trước chuyển vào bình chiết Nếu nguyên liệu không làm ẩm trương nở trước, chúng tiếp tục trương nở bình chiết, tạo khối nén chắc, cản trở dung môi thấm qua Hơn nguyên liệu không làm ẩm từ trước, vào bình chiết khó đuổi hết khơng khí khỏi dược liệu, tạo khoảng trống làm cản trở dược liệu tiếp xúc với dung môi, giảm hiệu suất chiết xuất 1kg bột vỏ măng cụt làm ẩm 1000ml EtOH 95o, trộn đều, đậy kín để n Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.2.3.3 Chiết hoạt chất Cho vào đáy bình ngâm kiệt lớp vừa đủ, không dầy không mỏng, mỏng bột lọt xuống lẫn vào dịch chiết Cho từ từ bột vỏ măng cụt làm ẩm vào bình lớp một, nén nhẹ nhàng san bề mặt khối bột Nếu cho bột không tạo rãnh, dung môi chảy theo rãnh mà khơng thấm qua tồn khối bột Điều ý khối bột vỏ măng cụt cho vào bình khơng q 3/4 thể tích bình Khi bột cho hết vào bình, đặt lên giấy lọc, đặt số bi sứ hịn sỏi chặn lên giấy lọc, mục đích để dung môi phân bố tránh xáo trộn ngun liệu chiết Sau mở van đáy bình, thêm dung mơi EtOH 95o để khơng khí hết dịch chiết bắt đầu chảy Khoá van lại cho thêm EtOH 95o dung môi ngập mặt nguyên liệu từ – 6cm để ngâm 24 3.2.3.4 Rút dịch chiết Mở khoá cho dịch chiết chảy giọt vào bình hứng Tốc độ chảy nhỏ giọt trung bình 3ml/phút Rút dịch nhanh, không chiết kiệt hoạt chất, rút dịch chậm, làm thời gian chiết kéo dài hao phí dung mơi bay Hứng dịch chiết chảy liên tục, đồng thời đổ thêm EtOH 95o vào bình, đảm bảo mức EtOH 95o cao bột nguyên liệu – 6cm, hứng dịch chiết đến hứng 7L dịch chiết ngừng bỏ bã 3.2.3.5 Thu nhận cao măng cụt thô Dung dịch chiết cô cách thuỷ, để loại bớt dung môi Cao thu làm khô tủ sấy chân không 50oC Cao măng cụt thơ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn thu 96,01g Hàm lượng cao măng cụt thô thu so với vỏ là: 96,01 x 100% = 9,601% ≈ 9,6% 1000 3.2.3.6 Điều chế mangosteen (chứa xanthon) Lấy 96,01g cao măng cụt thơ thu hồ tan 700ml dung môi EA Cho chạy qua cột silicagel 100g than hoạt tính 100g (tỷ lệ: 1:1) Rửa giải 500ml dung môi EA Dung dịch mangosteen EA thu sau qua cột, làm bay cách thuỷ để loại dung môi, sấy khô, ta thu mangosteen 84,96g Mangosteen thu có hàm lượng bằng: 84,96 x 100% = 88,49% so với cao thô ≈ 88,5% 96,01 x 100% = 88,49% so với cao thô Biết hàm lượng măng cụt thô so với vỏ 9,6%; nên hàm lượng mangosteen so với vỏ quả: 88,5% x 9,6% = 8,496% ≈ 8,5% 100% Sau đó, ta tiến hành phân tích sắc ký lớp mỏng mangosteen chiết phương pháp ngâm kiệt cho vết có R f : (1) = 0,12; (2) = 0,62; (3) = 0,88 giống vết sắc ký lớp mỏng mangosteen chiết phương pháp Soxhlet Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn (3) (2) (1) Hình 20 Sắc ký lớp mỏng mangosteen chiết phương pháp ngâm kiệt Rf: (1) = 0,12; (2) = 0,62; (3) = 0,88 Qua thí nghiệm trên, ta kết luận được: để bào chế sản phẩm thực phẩm chức dùng mangosteen (có chứa xanthon) sau chiết xuất phương pháp ngâm kiệt với dung môi EtOH 95o sau loại tạp chất qua cột silicagel than hoạt tính 3.3 Hoạt tính kháng vi khuẩn S aureus mangosteen α-mangostin - Sau 24 nuôi, lỗ thạch thử dung dịch EtOH chứng 20%, 10%, 5%, khơng có khả ức chế vi sinh vật, khơng tạo vịng vơ khuẩn Điều chứng tỏ, nồng độ EtOH dùng để hoà tan mẫu thử: mangosteen αmangostin, có nồng độ thử, khơng ảnh hưởng đến vi khuẩn S aureus hay nói cách khác nồng độ EtOH dùng để hoà tan mẫu thử không ức chế không diệt vi khuẩn S aureus Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1/50 1/100 20% 1/200 10% 5% Hình 21 Đĩa thạch có mẫu mangosteen với nồng độ 1/50, 1/100, 1/200 dung dịch EtOH chứng 20%, 10%, 5% - Quan sát thấy, lỗ thạch thử nồng độ loại mẫu thử: mangosteen (có chứa: α-mangostin, β-mangostin, γ-mangostin) αmangostin tạo thành vòng vơ khuẩn Hai loại mẫu thử mangosteen (có chứa: α-mangostin, β-mangostin, γ-mangostin) α-mangostin có khả ức chế phát triển S aureus nồng độ: 1/50, 1/100, 1/200 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn mangosteen 1/50 mangosteen 1/100 α-mangostin 1/200 mangosteen 1/200 α-mangostin 1/100 α-mangostin 1/50 Hình 22 Hoạt tính kháng khuẩn mangosteen α-mangostin vi khuẩn S aureus Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng KÊT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đã chiết xuất cao măng cụt thô phương pháp soxhlet với dung môi EtOH 95o nhiệt độ 80oC Đã tách α-mangostin, β-mangostin, γ-mangostin dạng tinh khiết phương pháp sắc ký lớp mỏng điều chế Hàm lượng α-mangostin, βmangostin, γ-mangostin dạng tinh khiết đạt 2,15 % so với cao thô 0,204 % so với vỏ măng cụt Đã xác định cấu trúc α-mangostin, β-mangostin, γ-mangostin phương pháp khối phổ: UV, IR, HPLC, MS Đã nghiên cứu quy trình chiết cao măng cụt thơ phương pháp ngâm kiệt với dung môi EtOH 95o nhiệt độ phịng thí nghiệm Hàm lượng đạt cao măng cụt thô so với vỏ măng cụt 9,6% hàm lượng mangosteen 8,5% tính từ bột vỏ măng cụt Hoạt tính kháng vi khuẩn S aureus mangosteen α-mangostin Kết nhận mangosteen α-mangostin: với nồng độ 1/50, 1/100 1/200 có tác dụng ức chế rõ ràng phát triển vi khuẩn S aureus Kiến nghị Các dẫn chất xanthon, hoạt chất vỏ măng cụt nguyên liệu có nhiều triển vọng Cần tiếp tục nghiên cứu để hồn thiện quy trình cơng nghệ chiết xuất mangosteen (có chứa xanthon) với số lượng lớn quy mô công nghiệp, để làm nguyên liệu bào chế sản phẩm thực phẩm chức năng, phù hợp với hồn cảnh thực tế (trang thiết bị, dung mơi) Việt Nam Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan măng cụt 1.1.1 Giới thiệu tổng quan măng cụt 1.1.1.1 Nguồn gốc phân bố 1.1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.1.3 Thành phần hoá học 1.1.2 Tổng quan dẫn chất xanthon 1.1.2.1 Cấu trúc 1.1.2.2 Tính chất lý hóa α-mangostin, β- mangostin, γmangostin 11 1.1.3 Tác dụng công dụng măng cụt xanthon 12 1.1.3.1 Theo y học cổ truyền 12 1.1.3.2 Theo y học đại 13 1.1.4 Độc tính 15 1.1.5 Nguyên tắc chiết xanthon 16 1.1.6 Tinh chế xanthon 16 1.1.7 Các phương pháp phân tích dẫn xuất xanthon 16 1.2 Giới thiệu tổng quan vi khuẩn Staphylococus aureus 17 1.2.1 Vi khuẩn Staphylococus aureus 17 1.2.2 Đặc tính yếu tố độc lực vi khuẩn Staphylococus aureus 19 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Nguyên liệu dụng cụ chiết xuất xanthon 21 2.1.1 Nguyên liệu, hoá chất 21 2.1.2 Máy móc dụng cụ 21 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu chiết xuất xanthon 22 2.3 Phƣơng pháp thử hoạt tính kháng vi khuẩn S aureus mangosteen α-mangostin 22 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1 Xây dựng quy trình chiết xuất mangosteen soxhlet 25 3.1.1 Chiết cao măng cụt thô 26 3.1.2 Phân tích sắc ký lớp mỏng 26 3.1.3 Loại tạp chất qua cột silicagel than hoạt tính 27 3.1.4 Tách mangosteen (chứa xanthon) phương pháp sắc ký lớp mỏng điều chế (preparative thin layer chromatography) 28 3.1.5 Phân tích dẫn chất xanthon (α-mangostin, β-mangostin, γmangostin) phương pháp khối phổ 31 3.1.5.1 Phổ khối lƣợng (MS) 31 3.1.5.2 Phân tích phổ tử ngoại (UV) 33 3.1.5.3 Phân tích phổ hồng ngoại (IR) 36 3.1.5.4 Phân tích HPLC 38 3.2 Chiết xuất mangosteen (chứa xanthon) phƣơng pháp ngâm kiệt 41 3.2.1 Sơ đồ tóm tắt 41 3.2.2 Nguyên tắc phương pháp 42 3.2.3 Chiết xuất mangosteen (chứa xanthon) phương pháp ngâm kiệt với dung môi EtOH 95o 42 3.2.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu 42 3.2.3.2 Làm ẩm bột măng cụt 42 3.2.3.3 Chiết hoạt chất 43 3.2.3.4 Rút dịch chiết 43 3.2.3.5 Thu nhận cao măng cụt thô 43 3.2.3.6 Điều chế mangosteen (chứa xanthon) 44 3.3 Hoạt tính kháng vi khuẩn S aureus mangosteen αmangostin 45 Chƣơng KÊT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 Kết luận 48 Kiến nghị 48 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... tác dụng kháng vi khuẩn mangosteen? ?? với mục tiêu: - Nghiên cứu phương pháp chiết xuất mangosteen từ vỏ măng cụt phương pháp đơn giản để dễ dàng đưa vào sản xuất quy mô l? ??n - Thử tác dụng kháng khuẩn. .. mangosteen Vi? ??t Nam với giá thành rẻ với quy trình tương đối an tồn Với mục đích đó, chúng tơi thực đề tài “ Nghiên cứu điều chế mangosteen ? ?hỗn hợp xanthon? ?? vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L. ) thử tác. .. Luận văn chủ yếu tập trung nghiên cứu phương pháp chiết xuất soxhlet để nghiên cứu hàm l? ?ợng mangosteen có vỏ măng cụt chiết tách xác định xanthon có mangosteen thử hoạt tính kháng sinh với vi