Xây dựng quy trình phát hiện các đột biến gen liên quan đến bệnh khiếm thính di truyền bằng kỹ thuật giải trình tự DNA thế hệ mới

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TP.HCM NGUYỄN THỊ DIỆU ÁI XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN CÁC ĐỘT BIẾN GEN LIÊN QUAN ĐẾN BỆNH KHIẾM THÍNH DI TRUYỀN BẰNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ DNA THẾ HỆ MỚI Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2019 i CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA –ĐHQG – TP HCM Cán hướng dẫn khoa học : PGS.TS Hồ Huỳnh Thùy Dương Cán chấm nhận xét : TS Nguyễn Hoàng Chương Cán chấm nhận xét : TS Hoàng Anh Hoàng Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 11 tháng 01 năm 2019 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: CHỦ TỊCH: PGS.TS NGUYỄN TIẾN THẮNG PHẢN BIỆN 1: TS NGUYỄN HOÀNG CHƯƠNG PHẢN BIỆN 2: TS HOÀNG ANH HOÀNG ỦY VIÊN: PGS TS LÊ PHI NGA THƯ KÝ: TS PHAN THỊ HUYỀN Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HĨA HỌC PGS TS NGUYỄN TIẾN THẮNG GS.TS Phan Thanh Sơn Nam ii ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Thị Diệu Ái MSHV: 1670542 Ngày, tháng, năm sinh: 16/08/1993 Nơi sinh: Cà Mau Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60420201 I TÊN ĐỀ TÀI: Xây dựng quy trình phát đột biến gen liên quan đến bệnh khiếm thính di truyền kỹ thuật giải trình tự DNA hệ II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Xây dựng quy trình phát đột biến gen liên quan đến bệnh khiếm thính di truyền kỹ thuật giải trình tự DNA hệ với nội dung sau: Thiết lập quy trình giải trình tự DNA hệ phát đột biến gây bệnh khiếm thính gen GJB2, GJB3, GJB6, KCNQ4, MYO7A, MYO15A SLC26A4 Xác định thông số kỹ thuật đánh giá chất lượng liệu giải trình tự Phân tích kết quy trình phát biến thể mẫu chuẩn dương, mẫu chuẩn âm mẫu âm tính với bệnh khiếm thính III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 13/08/2018 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 02/12/2018 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS TS Hồ Huỳnh Thùy Dương CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Tp HCM, ngày tháng năm 20 CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO PGS TS Hồ Huỳnh Thùy Dương PGS TS Lê Thị Thủy Tiên TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC GS.TS Phan Thanh Sơn Nam iii LỜI CÁM ƠN Để thực hoàn thành đề tài luận văn này, xin gửi lời cám ơn chân thành đến: Ban Giám hiệu trường Đại học Bách Khoa, Ban chủ nhiệm Khoa Kỹ Thuật Hóa Học, Bộ mơn Cơng nghệ Sinh học tất thầy cô giảng dạy kiến thức quý báu cho suốt q trình học tập trường Ban Giám Đốc Cơng ty TNHH Công nghệ Sinh học Khoa Thương đồng ý cho thực đề tài công ty PGS.TS Hồ Huỳnh Thùy Dương, Bộ môn Di truyền – Đại học Khoa Học Tự Nhiên TP HCM, người hướng dẫn khoa học cho tơi q trình hồn thành luận văn Các anh, chị phòng nghiên cứu đồng nghiệp công ty TNHH CNSH Khoa Thương tạo điều kiện hỗ trợ suốt trình thực luận văn Tp Hồ Chí Minh, ngày 01 tháng 12 năm 2018 iv TĨM TẮT Khiếm thính khuyết tật giác quan phổ biến người với tỷ lệ từ đến bốn 1000 trẻ sinh Khoảng 50 – 70% trường hợp khiếm thính bẩm sinh đột biến gen Nhằm phát đột biến gây bệnh cung cấp thông tin đánh giá lâm sàng cho người bị nghe khó thính, chúng tơi xây dựng quy trình giải trình tự DNA hệ phát đột biến gen phổ biến gây bệnh khiếm thính Đề tài nhân thành cơng exon mã hóa vùng intron +/- 15 bp kế cận gen GJB2, GJB3, GJB6, KCNQ4, MYO7A, MYO15A SLC26A4 longrange PCR Kết giải trình tự NGS thành cơng với mật độ cluster 219 k/mm2, Q30 đạt 89.9%, passing filter đạt 89% thu chất lượng liệu tốt Đề tài thực quy trình mẫu chuẩn dương, mẫu chuẩn âm mẫu máu người không mắc bệnh khiếm thính Kết cho thấy quy trình phát đột biến gây bệnh c.35delG c.101T>C gen GJB2, với đột biến tồn mẫu chuẩn dương khơng tìm thấy đột biến gây bệnh mẫu chuẩn âm mẫu bình thường Đồng thời chúng tơi giải trình tự gen mục tiêu với độ phủ cao 100X độ xác 99.9% Kết cho phép phát trình tự gen quy định chức nghe từ phát biến thể gây bệnh Nghiên cứu tiền đề cho phát triển quy trình xét nghiệm di truyền phát đột biến gây bệnh khiếm thính v ABSTRACTS Hearing loss is the most common sensory impairment in humans, with a prevalence of one to four in 1,000 newborns Approximately 50% to 70% of congenital hearing loss cases are attributable to genetic causes Establishing a genetic diagnosis of hereditary hearing loss is a critical component of the clinical evaluation of deaf and hard-of-hearing persons and their families In this study, a targeted DNA next-generation sequencing (NGS) gene panel for hearing loss was developed including genes which have a well-established causal role in hearing loss Targeted regions including coding exon and +/- 15 base pairs of adjacent intronic sequence from GJB2, GJB3, GJB6, KCNQ4, MYO7A, MYO15A and SLC26A4 genes were successfully amplified by long-range PCR The sequencing run clustered at 219 k/mm2 and resulted in 89.9% of reads exceeded Q30, 89% of the original reads passing filter and generated high-quality DNA sequence data The developed testing procedures were performed on four samples normal for hearing loss and two reference samples including one positive and one negative for mutation The two mutations c.35delG and c.101T>C on GJB2 gene were identified which were exactly two previously identified mutations Good quality sequence data with 99.9% accuracy and coverage on target region greater than 100X were also obtained These results indicated that generated data were reliable for variant calling This study established an initial step for developing a molecular diagnostic for hereditary hearing loss vi LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực, có sai sót tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tp Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 11 năm 2018 Nguyễn Thị Diệu Ái vii MỤC LỤC TÓM TẮT iv ABSTRACTS v LỜI CAM ĐOAN vi MỤC LỤC vii DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT ix DANH MỤC CÁC BẢNG x DANH MỤC CÁC HÌNH xi MỞ ĐẦU .1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Khiếm thính di truyền gen liên quan .3 1.2 Chương trình tầm sốt xét nghiệm chẩn đốn khiếm thính 1.3 Giải trình tự hệ xét nghiệm di truyền 1.4 Giá trị hạn chế xét nghiệm di truyền khiếm thính 14 1.5 Tình hình nghiên cứu nước 17 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 2.2 Vật liệu – hóa chất 19 2.2.1 Mẫu thực nghiệm .19 2.2.2 Hóa chất-vật tư tiêu hao 19 2.2.3 Thiết bị - dụng cụ .20 2.3 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 21 2.4 Bố trí thí nghiệm 22 2.4.1 Thiết lập quy trình giải trình tự NGS .22 2.4.2 Xác định thông số kỹ thuật đánh giá chất lượng liệu giải trình tự .25 2.4.3 Phân tích kết quy trình phát biến thể mẫu chuẩn mẫu âm tính .27 viii 2.5 Phương pháp nghiên cứu 27 2.5.1 Thiết kế hệ mồi dùng cho phản ứng long-range PCR .27 2.5.2 Tách chiết gDNA .27 2.5.3 Long-range PCR 30 2.5.4 Chuẩn bị thư viện cho giải trình tự hệ 31 2.5.5 Giải trình tự DNA hệ 34 2.5.6 Phân tích liệu 35 2.5.7 Giải trình tự Sanger 35 2.5.8 Xử lý số liệu .36 CHƯƠNG KẾT QUẢ - BIỆN LUẬN 37 3.1 Kết thiết lập quy trình giải trình tự NGS 37 3.1.1 Kết thiết kế hệ mồi long-range 37 3.1.2 Kết tối ưu phản ứng long-range PCR 39 3.1.3 Chuẩn bị thư viện giải trình tự DNA .46 3.1.4 Giải trình tự DNA hệ 48 3.2 Kết xác định thông số kỹ thuật đánh giá chất lượng liệu giải trình tự .50 3.3 Kết phân tích quy trình phát biến thể mẫu chuẩn mẫu âm tính .54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 62 4.1 Kết luận 62 4.2 Đề nghị 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 PHỤ LỤC a ix DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT (-): Âm tính (+): Dương tính BLAST: Basic Local Alighnment Search Tool bp: base pair DNA: Deoxyribonucleic acid dNTP: Deoxynucleoside triphosphate HL: Hearing loss KT: Khiếm thính LINE: Long interspersed nuclear element NCBI: National Center for Biotechnology Information PCR: Polymerase Chain Reaction SINE: Short interspersed nuclear element TE: Dung dịch gồm Tris EDTA Tm: Melting temperature U: unit WES: Whole exome sequencing WGS: Whole genome sequencing WHO: World Health Organization XNDT: Xét nghiệm di truyền Trang 67 sequencing: Comparison of six enzymes and evaluation on the MiSeq sequencer,” Sci Rep., vol 4, pp 1–8, 2014 [41] E Knierim, B Lucke, J M Schwarz, M Schuelke, and D Seelow, “Systematic comparison of three methods for fragmentation of long-range PCR products for next generation sequencing,” PLoS One, vol 6, no 11, 2011 [42] S R Head et al., “Library construction for next-generation sequencing: overviews and challenges.,” Biotechniques, vol 56, no 2, p 61–4, 66, 68, passim, 2014 [43] M A Quail, H Swerdlow, D J Turner, and H Swerdlow, “Improved protocols for the illumina genome analyzer sequencing system.,” Curr Protoc Hum Genet., vol Chapter 18, p Unit 18.2, Jul 2009 [44] F S Turner, “Assessment of insert sizes and adapter content in fastq data from NexteraXT libraries.,” Front Genet., vol 5, p 5, 2014 [45] S P Strom et al., “Assessing the necessity of confirmatory testing for exomesequencing results in a clinical molecular diagnostic laboratory,” Genet Med., vol 16, no 7, pp 510–515, 2014 [46] L M Baudhuin, S A Lagerstedt, E W Klee, N Fadra, D Oglesbee, and M J Ferber, “Confirming variants in next-generation sequencing panel testing by sanger sequencing,” J Mol Diagnostics, vol 17, no 4, pp 456–461, 2015 Website [31]https://sapac.illumina.com/systems/sequencingplatforms/miniseq/specifications html Luận văn Thạc sĩ Nguyễn Thị Diệu Ái Trang 68 [35] https://support.illumina.com/faqs.html Luận văn Thạc sĩ Nguyễn Thị Diệu Ái a PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết thiết lập quy trình giải trình tự NGS Hình 1.1 Kết giải trình tự Sanger xếp gióng cột sản phẩm cặp mồi HL-1F&R với gen tham chiếu GJB2 Hình 1.2 Kết giải trình tự Sanger xếp gióng cột sản phẩm cặp mồi HL-2F&R với gen tham chiếu GJB3 Hình 1.3 Kết giải trình tự Sanger xếp gióng cột sản phẩm cặp mồi b HL-3F&R với gen tham chiếu GJB6 Hình 1.4 Kết giải trình tự Sanger xếp gióng cột sản phẩm cặp mồi nhân vùng gen KCNQ4 với gen tham chiếu Peak giải trình tự mồi 7F Peak giải trình tự mồi 8F Peak giải trình tự mồi 9F c Peak giải trình tự mồi 10F Peak giải trình tự mồi 11F Peak giải trình tự mồi 12F Hình 1.5 Kết giải trình tự Sanger xếp gióng cột sản phẩm cặp mồi nhân vùng gen SLC26A4 với gen tham chiếu Peak giải trình tự mồi 15F d Peak giải trình tự mồi 16R Hình 1.6 Kết giải trình tự Sanger xếp gióng cột sản phẩm cặp mồi nhân vùng gen MYO15A với gen tham chiếu Peak giải trình tự mồi 21F Peak giải trình tự mồi 22F Hình 1.7 Kết giải trình tự Sanger xếp gióng cột sản phẩm cặp mồi nhân vùng gen MYO7A với gen tham chiếu e f Hình 1.8 Kết chạy 28 mix long-range PCR mẫu NA12878, NA23853, HL001 dùng cho thiết lập quy trình Chú giải a: Mẫu NA12878, b: Mẫu NA23853, c: Mẫu HL001 1: HL-1F&R 2: HL-2F&R 3:HL-3F&R 4:HL-14.2F&R HL- HL-2F&R HL-2F&R 2F&R HL-2F&R HL2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R HL-2F&R g Phụ lục 2: Kết xác định thông số kỹ thuật đánh giá chất lượng thư viện giải trình tự Biểu đồ 1.1 Bản đồ nhiệt (Heat map) độ phủ exon vùng gen mục tiêu Chr Star End Gen chr13 20187446 20189619 GJB2 chr13 20192766 20192991 GJB2 chr13 20187462 20188900 GJB2 chr13 20189581 20189603 GJB2 chr13 20192782 20192975 GJB2 chr1 34781172 34781794 GJB3 chr1 34784721 34786380 GJB3 chr1 34785575 34786364 GJB3 chr1 34781188 34781778 GJB3 chr1 34784737 34784762 GJB3 chr13 20221945 20223511 GJB6 chr13 20229563 20229765 GJB6 chr13 20230849 20231249 GJB6 chr13 20221961 20222694 GJB6 chr13 20223480 20223495 GJB6 chr13 20229579 20229749 GJB6 chr13 20230865 20231233 GJB6 chr1 40832997 40833129 KCNQ4 chr1 40834950 40835114 KCNQ4 chr1 40817248 40817371 KCNQ4 chr1 40837648 40837810 KCNQ4 chr1 40838294 40840468 KCNQ4 chr1 40818147 40818306 KCNQ4 chr1 40818488 40818696 KCNQ4 chr1 40819330 40819488 KCNQ4 chr1 40819858 40820001 KCNQ4 chr1 40820148 40820276 KCNQ4 chr1 40822297 40822418 KCNQ4 chr1 40824080 40824274 KCNQ4 chr1 40831067 40831320 KCNQ4 chr1 40838523 40840452 KCNQ4 chr17 18108689 18108840 MYO15A chr17 18132436 18132582 MYO15A chr17 18133208 18133402 MYO15A chr17 18135694 18135840 MYO15A chr17 18136400 18136491 MYO15A chr17 18136546 18136702 MYO15A chr17 18137567 18137695 MYO15A chr17 18138098 18138262 MYO15A chr17 18138794 18138952 MYO15A chr17 18139517 18139627 MYO15A chr17 18140500 18140681 MYO15A chr17 18140770 18140848 MYO15A chr17 18141002 18141159 MYO15A chr17 18124466 18124581 MYO15A chr17 18141636 18141786 MYO15A chr17 18142062 18142270 MYO15A chr17 18142739 18142856 MYO15A NA12878 NA23853 HL001 h chr17 18143549 18143635 MYO15A chr17 18143698 18143812 MYO15A chr17 18143853 18144016 MYO15A chr17 18144480 18144608 MYO15A chr17 18145855 18146123 MYO15A chr17 18148012 18148226 MYO15A chr17 18148479 18148584 MYO15A chr17 18125151 18125247 MYO15A chr17 18148744 18148968 MYO15A chr17 18149199 18149392 MYO15A chr17 18149469 18149596 MYO15A chr17 18150412 18150559 MYO15A chr17 18150681 18150781 MYO15A chr17 18150819 18150929 MYO15A chr17 18151093 18151306 MYO15A chr17 18151378 18151543 MYO15A chr17 18151829 18151967 MYO15A chr17 18152095 18152200 MYO15A chr17 18126330 18126472 MYO15A chr17 18153758 18153912 MYO15A chr17 18154114 18154206 MYO15A chr17 18154663 18154771 MYO15A chr17 18155093 18155241 MYO15A chr17 18155297 18155448 MYO15A chr17 18156178 18156352 MYO15A chr17 18156937 18157081 MYO15A chr17 18157139 18157246 MYO15A chr17 18157705 18157916 MYO15A chr17 18158506 18158654 MYO15A chr17 18126774 18126881 MYO15A chr17 18158908 18159013 MYO15A chr17 18159258 18159363 MYO15A chr17 18159589 18159695 MYO15A chr17 18159918 18160033 MYO15A chr17 18161300 18161463 MYO15A chr17 18162568 18162695 MYO15A chr17 18163227 18163337 MYO15A chr17 18163725 18163854 MYO15A chr17 18166344 18166537 MYO15A chr17 18167573 18167739 MYO15A chr17 18127058 18127181 MYO15A chr17 18171621 18171787 MYO15A chr17 18172140 18172306 MYO15A chr17 18173764 18173937 MYO15A chr17 18178752 18179818 MYO15A chr17 18130788 18130826 MYO15A chr17 18131222 18131358 MYO15A chr17 18131451 18131547 MYO15A chr17 18178870 18179802 MYO15A chr17 18108705 18108824 MYO15A chr11 77128247 77128505 MYO7A chr11 77160146 77160298 MYO7A chr11 77160956 77161131 MYO7A chr11 77130572 77130668 MYO7A chr11 77162103 77162346 MYO7A chr11 77162836 77163004 MYO7A chr11 77166039 77166178 MYO7A i chr11 77172731 77172901 MYO7A chr11 77174739 77174930 MYO7A chr11 77175355 77175480 MYO7A chr11 77179028 77179145 MYO7A chr11 77179718 77179969 MYO7A chr11 77180357 77180497 MYO7A chr11 77142692 77142838 MYO7A chr11 77181363 77181605 MYO7A chr11 77181934 77182170 MYO7A chr11 77182407 77182616 MYO7A chr11 77183051 77183173 MYO7A chr11 77184571 77184731 MYO7A chr11 77189327 77189486 MYO7A chr11 77190003 77190155 MYO7A chr11 77190680 77190886 MYO7A chr11 77192034 77192294 MYO7A chr11 77194337 77194540 MYO7A chr11 77147781 77147966 MYO7A chr11 77197464 77197614 MYO7A chr11 77198478 77198637 MYO7A chr11 77199518 77199834 MYO7A chr11 77201431 77201654 MYO7A chr11 77202283 77202440 MYO7A chr11 77203043 77203233 MYO7A chr11 77204059 77204245 MYO7A chr11 77205445 77205633 MYO7A chr11 77206080 77206218 MYO7A chr11 77207272 77207418 MYO7A chr11 77155890 77156107 MYO7A chr11 77208413 77208533 MYO7A chr11 77208680 77208819 MYO7A chr11 77211135 77211353 MYO7A chr11 77211804 77211953 MYO7A chr11 77212935 77213051 MYO7A chr11 77213843 77213995 MYO7A chr11 77214590 77215257 MYO7A chr11 77156643 77156797 MYO7A chr11 77156845 77157020 MYO7A chr11 77157262 77157408 MYO7A chr11 77158260 77158446 MYO7A chr11 77159430 77159539 MYO7A chr11 77214696 77215241 MYO7A chr11 77128263 77128489 MYO7A chr11 77130588 77130634 MYO7A chr7 107660618 107660871 SLC26A4 chr7 107694386 107694496 SLC26A4 chr7 107694604 107694732 SLC26A4 chr7 107661622 107661821 SLC26A4 chr7 107695916 107696055 SLC26A4 chr7 107698025 107698127 SLC26A4 chr7 107700066 107700191 SLC26A4 chr7 107701084 107701212 SLC26A4 chr7 107701810 107702073 SLC26A4 chr7 107704314 107704401 SLC26A4 chr7 107710037 107710215 SLC26A4 chr7 107712522 107712638 SLC26A4 chr7 107715406 107717825 SLC26A4 j chr7 107663279 107663451 SLC26A4 chr7 107672121 107672264 SLC26A4 chr7 107674147 107674364 SLC26A4 chr7 107674928 107675125 SLC26A4 chr7 107683185 107683370 SLC26A4 chr7 107683438 107683553 SLC26A4 chr7 107689036 107689216 SLC26A4 chr7 107690107 107690253 SLC26A4 chr7 107715446 107717809 SLC26A4 chr7 107661638 107661641 SLC26A4 Độ phủ trung bình % Độ phủ ngang >30X Độ phủ dọc nhỏ Độ phủ dọc lớn Mi n 10 12 14 16 18 20 50 100 150 200 300 400 500 600 700 1232 1641 2577 94.1 95.3 92.4 131.13 131.87 294.76 5761.92 7348.03 800 900 1000 1200 1400 1600 1800 11544.60 2000 2200 2400 2600 2800 3000 3200 Max 20 max k Phụ lục 3: Kết đánh giá tính xác quy trình phát biến thể mẫu âm tính HL002 HL003 HL004 Hình 3.1 Kết kiểm tra kích thước nồng độ thư viện BioAnalyzer 2100 mẫu HL002, HL003, HL004 l Hình 3.2 Tỷ lệ phần trăm read xếp gióng cột khơng xếp gióng cột lên trình tự tham chiếu mẫu HL002, HL003, HL004 Hình 3.3 Điểm chất lượng vị trí đọc trình tự mẫu HL002, HL003, HL004 m Hình 3.4 Kích thước đoạn Insert (Insert Size) mẫu HL002, HL003, HL004 ... bệnh khiếm thính di truyền kỹ thuật giải trình tự DNA hệ II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Xây dựng quy trình phát đột biến gen liên quan đến bệnh khiếm thính di truyền kỹ thuật giải trình tự DNA hệ với... biến gen liên quan đến bệnh khiếm thính di truyền kỹ thuật giải trình tự DNA hệ mới? ?? thực nhằm bước đầu cung cấp tảng cho việc xây dựng quy trình xét nghiệm chẩn đốn bệnh khiếm thính di truyền. .. sinh đột biến gen Nhằm phát đột biến gây bệnh cung cấp thông tin đánh giá lâm sàng cho người bị nghe khó thính, chúng tơi xây dựng quy trình giải trình tự DNA hệ phát đột biến gen phổ biến gây bệnh