Thu thập phân lập và chọn môi trường nhân sinh khối nấm hirsutella citriformis ký sinh trên rầy nâu tại bốn huyện chợ mới thoại sơn châu phú và tri tôn an giang

TĨM LƯỢC Q trình thu mẫu rầy bị nhiễm nấm ký sinh Hirsutella citriformis thực 12 xã thuộc bốn huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú, Tri Tôn tỉnh An Giang Kết thu thập 180 mẫu rầy bị nhiễm nấm có triệu chứng nấm Hirsutella, phân lập định danh 41 dịng Hirsutella citriformis Năm dịng nấm có hiệu cao rầy nâu HiLK-CM 3, HiMHĐ-CM 1, HiVPHiBM- CP 2, HiTĐ- TT 4, thực phịng thí nghiệm để chọn dịng nấm có hiệu cao Hiệu lực (%) rầy nâu năm dòng nấm chọn vào thời điểm 12 ngày sau cấy 63,30; 60,47; 67,60; 61,57 60,20% TS 5, Đường kính khuẩn lạc đo cao thể môi trường YDA, với đường kính lớn vào thời điểm 12 ngày sau cấy dòng nấm HiLK-CM 3, HiMHĐ-CM 1, HiVP- TS 5, HiBMCP 2, HiTĐ- TT 7,6; 8,6; 8,2; 8,6 8,0 cm Mơi trường YDA có số lượng bào tử ml cao nhất, vượt trội so với môi trường MA, MYA, PDA, PDAY Môi trường YDA tạo mật số với dòng nấm HiLK-CM 3, HiMHĐ-CM 1, HiVP- TS 5, HiBM- CP 2, HiTĐ- TT 59,08 x105 bào tử/ml; 6,23 x105 bào tử/ml; 11,43 x105 bào tử/ml; 7,98 x105 bào tử/ml; 29,75 x105 bào tử/ml i Mục lục Mục lục i MỞ ĐẦU A MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU I MỤC TIÊU II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU B ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU I ĐỐI TƯỢNG II PHẠM VI NGHIÊN CỨU C CƠ SỞ LÝ LUẬN, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU I CƠ SỞ LÝ LUẬN Đặc điểm phân loại, phát triển hình thái học nấm Hirsutella citriformis.3 1.1 Phân loại 1.2 Sự phân bố 1.3 Sự phát triển nấm rầy nâu 1.3 Đặc điểm hình thái Khả biến đổi chất khác nhờ hệ thống enzyme Khả sinh độc tố diệt côn trùng 4 Phương thức lây nhiễm 5 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Hirsutella citriformis 5.1 Chất dinh dưỡng 5.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 5.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 5.4 Ảnh hưởng ẩm độ 5.5 Ánh sáng 6 Thành tựu ứng dụng nấm Hirsutella citriformis Mô tả triệu chứng rầy nhiễm nấm II PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu, dụng cụ thiết bị Phương pháp 2.1 Thu thập dòng nấm Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu bốn huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú Tri Tôn 2.2 Phân lập tách ròng dòng nấm Hirsutella citriformis đĩa pêtri môi trường PDA 2.3 Khảo sát hiệu lực dòng nấm phân lập rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm 12 2.4 Khảo sát ảnh hưởng năm loại môi trường dinh dưỡng MA, MYA, PDA, PDAY YDA lên khả sinh trưởng khuẩn ty hình thành bào tử nấm Hirsutella citriformis 13 2.4.1 Chuẩn bị khuẩn ty nấm nấm Hirsutella citriformis 13 2.4.2 Bố trí thí nghiệm 13 2.4.3 Chỉ tiêu đánh giá 14 2.4.4 Xử lý số liệu 15 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16 Thu thập, phân lập dòng nấm Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu bốn huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú Tri Tôn 16 ii Khảo sát hiệu lực dòng nấm phân lập rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm Khảo sát ảnh hưởng năm môi trường dinh dưỡng MA, MYA, PDA, PDAY YDA lên khả sinh trưởng khuẩn ty hình thành bào tử dịng nấm Hirsutella citriformis 26 3.1 Khảo sát ảnh hưởng năm môi trường dinh dưỡng MA, MYA, PDA, PDAY YDA lên khả sinh trưởng khuẩn ty dòng nấm Hirsutella citriformis 26 3.1.1 Khả sinh trưởng khuẩn ty nấm HiLK-CM môi trường dinh dưỡng 26 3.1.2 Khả sinh trưởng khuẩn ty nấm HiMHĐ-CM môi trường dinh dưỡng 27 3.1.3 Khả sinh trưởng khuẩn ty nấm HiVP- TS môi trường dinh dưỡng 28 3.1.4 Khả sinh trưởng khuẩn ty nấm HiBM-CP môi trường dinh dưỡng 29 3.1.5 Khả sinh trưởng khuẩn ty nấm HiTĐ-TT môi trường dinh dưỡng 30 3.2 Khảo sát ảnh hưởng năm môi trường dinh dưỡng MA, MYA, PDA, PDAY YDA lên hình thành bào tử dòng nấm Hirsutella citriformis 31 3.2.1 Khả sinh bào tử HiLK-CM loại môi trường thử nghiệm 31 3.2.2 Khả sinh bào tử HiMHĐ-CM loại môi trường thử nghiệm 32 3.2.3 Khả sinh bào tử HiVP- TS loại môi trường thử nghiệm 33 3.2.4 Khả sinh bào tử HiBM- CP loại môi trường thử nghiệm 34 3.2.5 Khả sinh bào tử HiTĐ-TT loại môi trường thử nghiệm 35 CHƯƠNG IV 37 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 37 4.1 Kết luận 37 4.2 Đề nghị 37 iii DANH SÁCH BẢNG Bảng Tỷ lệ khoáng chất loại môi trường 15 Bảng Số mẫu rầy nâu bị nhiễm nấm ký sinh Hirsutella citriformis thu thập từ bốn huyện tỉnh An Giang, tháng 05 - 07 năm 2012 16 Bảng Danh sách số dòng nấm phân lập 12 xã huyện, tỉnh An Giang ký sinh lên rầy nâu giống lúa (ký chủ) khác 20 Bảng Hiệu lực (%) dòng nấm rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm 24 Bảng Danh sách mười dịng nấm có hiệu cao chọn qua thí nghiệm phịng, trữ mẫu để tiếp tục thí nghiệm sau 26 Bảng Đường kính khuẩn lạc nấm HiLK-CM sau cấy 4, 6, 8, 10 12 ngày 26 Bảng Đường kính khuẩn lạc nấm HiMHĐ-CM vào thời điểm 4, 6, 8, 10 12 ngày sau cấy 27 Bảng Đường kính khuẩn lạc nấm HiVP- TS vào thời điểm 4, 6, 8, 10 12 ngày sau cấy 28 Bảng Đường kính khuẩn lạc nấm HiBM-CP sau cấy 4, 6, 8, 10 12 ngày29 Bảng 10 Đường kính khuẩn lạc nấm HiTĐ-TT sau cấy 4, 6, 8, 10 12 ngày 30 Bảng 11 Số lượng bào tử nấm HiLK-CM đĩa pêtri sau cấy 7, 9, 11 13 ngày 31 Bảng 12 Số lượng bào tử HiMHĐ-CM đĩa pêtri sau cấy 7, 9, 11 13 ngày 32 Bảng 13 Số lượng bào tử nấm HiVP- TS đĩa pêtri sau cấy 7, 9, 11 13 ngày 33 Bảng 14 Số lượng bào tử nấm HiBM- CP đĩa pêtri sau cấy 7, 9, 11 13 ngày 34 Bảng 15 Số lượng bào tử nấm HiTĐ-TT đĩa pêtri sau cấy 7, 9, 11 13 ngày 36 iv DANH SÁCH HÌNH Hình Nấm Hirsutella citriformis ký sinh rầy nâu tự nhiên Hình Nấm Hirsutella citriformis giai đoạn đầu nhiễm vào rầy khoảng ngày có màu trắng đục (Rombach MC ctv , 1994, Humber RA, 1997) Hình Nấm Hirsutella citriformis giai đoạn sau có màu nâu đất (Rombach MC ctv., 1994) Hình Ni cấy nấm theo phương pháp Slide Culture (Harris, J L, 1986) 11 Hình Phương pháp cấy ria (cấy truyền liên tục) 11 Hình Cách cấy khuẩn ty nấm Hirsutella citriformis đĩa pêtri 14 Hình Mẫu rầy nâu nhiễm nấm thu trực tiếp từ ruộng lúa 17 Hình 10 Mẫu rầy nâu nhiễm nấm Hirsutella citriformis đồng giống lúa IR50404 xã Long Điền A, huyện Chợ Mới 17 Hình 11 Mẫu rầy nâu chết nhiễm nấm ký sinh Hirsutella citriformis Long Điền A, Chợ Mới (code HiLĐa-CM2) 17 Hình 12 Thu mẫu rầy nâu nhiễm nấm Hirsutella citriformis xã Vọng Đông, huyện Tri Tôn 18 Hình 13 Mẫu rầy nâu chết nhiễm nấm ký sinh Hirsutella citriformis Tân Tuyến, Tri Tôn (code HiVĐ- TS 4) 18 Hình 14 Ruộng thu mẫu rầy nâu nhiễm nấm Hirsutella citriformis xã Mỹ Phú, huyện Châu Phú 18 Hình 15 Mẫu rầy nâu chết nhiễm nấm ký sinh Hirsutella citriformis xã Mỹ Phú, huyện Châu Phú (code HiMP- CP 2) 18 Hình 16 Ruộng thu mẫu rầy nâu Tân Tuyến, Thoại Sơn 19 Hình 17 Mẫu rầy nâu chết nhiễm nấm ký sinh Hirsutella citriformis Tân Tuyến, Tri Tôn (code HiTT-TS 1) 19 Hình 18 Dạng cành bào đài nấm Hirsutella citriformis 19 Hình 19 Bào tử nấm Hirsutella citriformis KHV 40X 19 Hình 20 Nấm Hirsutella citriformis phân lập xã Long Kiến, Chợ Mới (mặt mặt dưới) 22 Hình 21 Nấm Hirsutella citriformis phân lập xã Vĩnh Phú, Thoại Sơn (mặt mặt dưới) 22 Hình 22 Nấm Hirsutella citriformis phân lập xã Bình Mỹ, Châu Phú 22 Hình 23 Nấm Hirsutella citriformis phân lập xã Tà Đảnh, Tri Tôn (mặt mặt dưới) 23 Hình 24 Một số dòng nấm Hirsutella citriformis (mặt dưới) 23 Hình 25 Nấm nguồn 23 Hình 26 Pha lỗng huyền phù nấm, chuẩn bị phun 23 v NHỮNG TỪ VIẾT TẮT ĐKKL đường kính khuẩn lạc SLBT số lượng bào tử Hi Hirsutella citriformis MA Malt agar MAY Malt agar Yeast PDA Potato Dextrose agar PDAY Potato Dextrose agar Yeast YDA Yeast Dextro agar CM Chợ Mới TS Thoại Sơn CP Châu Phú TT Tri Tôn LK Long Kiến LĐA Long Điền A MHĐ Mỹ Hội Đông VT Vĩnh Trạch VP Vĩnh Phú VĐ Vọng Đơng BM Bình Mỹ ĐHC Đào Hữu Cảnh MP Mỹ Phú Tt Tân Tuyến TĐ Tà Đảnh CL Châu Lăng vi CHƯƠNG I MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, quan điểm chiến lược bảo vệ trồng giới, đặc biệt nước, chuyển dần sang biện pháp sinh học biện pháp quản lý côn trùng phối hợp với biện pháp hóa học để tạo nơng sản an tồn hơn, thân thiện với mơi trường Nhiều nghiên cứu nấm ký sinh côn trùng trồng, đặc biệt lúa ứng dụng bước đầu vào sản xuất, ví dụ nấm Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana nấm Paecilomyces spp Bên cạnh đó, lồi nấm Hirsutella citriformis nấm ký sinh côn trùng, đặc biệt rầy nâu, nghiên cứu ứng dụng rộng rãi nhiều nước giới Úc, Mỹ, Anh, Thái Lan,… Ở nước, có số nghiên cứu Viện Bảo vệ thực vật phân lập dòng nấm ký sinh Metarhizium, Beauveria rầy nâu hại lúa, châu chấu hại bắp, sâu đo xanh hại đay, bọ hại dừa, sùng đất hại đậu phộng sử dụng đạt hiệu cao Viện Lúa Đồng sông Cửu Long sử dụng dòng nấm rầy nâu đạt hiệu tốt, 67% sau 10 ngày, góp phần vào việc quản lý côn trùng gây hại, giảm lượng thuốc trừ sâu hóa học báo động Gần đây, có vài nghiên cứu ứng dụng nấm Hirsutella citriformis phịng trừ trùng gây hại trồng Viện Bảo vệ Thực vật Do vậy, cần có nhiều nghiên cứu việc thu thập, phân lập, chọn mơi trường nhân sinh khối thích hợp nấm Hirsutella citriformis rầy nâu, tạo bước chuẩn bị để sản xuất chế phẩm trừ rầy vi sinh Đề tài “Thu thập, phân lập chọn môi trường nhân sinh khối nấm Hirsutella citriformis ký sinh rầy nâu bốn huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú Tri Tôn, An Giang” thực A MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU I MỤC TIÊU Phân lập số dòng nấm nấm ký sinh Hirsutella citriformis rầy nâu Bước đầu chọn dịng nấm có hiệu rầy nâu phịng thí nghiệm Tìm mơi trường thích hợp để nhân nhanh sinh khối lồi nấm mơi trường dinh dưỡng nhân tạo, làm sở cho việc nghiên cứu chế phẩm sinh học phòng trừ rầy nâu gây hại lúa II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Thu thập dòng nấm Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu huyện trồng lúa có diện tích lớn tỉnh An Giang Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú Tri Tơn Phân lập tách rịng dịng nấm đĩa pêtri môi trường chuẩn PDA Khảo sát hiệu lực dòng nấm phân lập rầy nâu điều kiện phòng thí nghiệm Khảo sát ảnh hưởng năm loại môi trường dinh dưỡng MA, MAY, PDA, PDAY YDA lên hình thành phát triển bào tử nấm Hirsutella citriformis để chọn dịng nấm có hiệu cao, phục vụ cho việc lưu trữ nguồn nấm nghiên cứu chọn môi trường nhân sinh khối thích hợp B ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU I ĐỐI TƯỢNG Nấm ký sinh côn trùng Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu II PHẠM VI NGHIÊN CỨU Nguồn nấm Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú, Tri Tôn Phân lập nấm môi trường PDA, sau so sánh hình thành phát triển bào tử nấm với năm loại môi trường MA, MAY, PDA, PDAY YDA đĩa pêtri Hiệu lực diệt rầy dòng nấm phân lập phịng thí nghiệm với mơi trường PDA Chương II CƠ SỞ LÝ LUẬN Đặc điểm phân loại, phát triển hình thái học nấm Hirsutella citriformis 1.1 Phân loại Nấm Hirsutella citriformis Speare thuộc lớp Hyphomycetes, Moniliales, họ Stilbaceae, giống Hirsutella (Hodge, 2008) Theo Trần Văn Mão (2002), nấm Hirsutella thuộc ngành phụ lớp nấm bất tồn (Deuteromycotina), họ cuống bó (Stilbaceae), lớp Nấm bào tử sợi trần 1.2 Sự phân bố Nấm Hirsutella citriformis phân bố Châu Phi, Châu Á, New Zealand, Hawaii, đảo Solomon Nấm Hirsutella citriformis phân tán rộng rãi cánh đồng trồng lúa khu vực Châu Á, nguyên nhân gây tử vong cao rầy nâu qua thời kỳ phát triển rầy Loại nấm có lúc nhiễm đến 90-95% rầy nâu ruộng lúa (Hodge, 2008) 1.3 Sự phát triển nấm rầy nâu Các tua nấm Hirsutella citriformis mọc rầy nâu dài có nhiều, dài khoảng 1-10 mm Tua nấm có màu xám hay nâu, với nhiều nhánh bên ngắn (Hill, 1999) (Hình 1) 1.3 Đặc điểm hình thái Nấm Hirsutella citriformis bó cuống bào tử đính đơn giản có nhiều nhánh góc (một số lồi thiếu bó cuống bào tử đính); thể bình suốt xuất bó sợi từ sợi nấm ký chủ, cuống bào tử đính bên phồng lên, hẹp lại tới dài mảnh khảnh; bào tử đính suốt, tế bào dài tới hình ống, bào tử bao phủ lớp chất nhầy, ký sinh côn trùng (Barnett and Hunter, 1998) Đặc điểm nấm Hirsutella citriformis sợi nấm xếp thành bó, cuống bào tử mọc bên bó sợi, phía phình to, cuống khơng màu Bào tử mọc đơn cuống, đơn bào hình thoi uống cong, có dịch nhầy che phủ (Trần Văn Mão, 2002) Ngoài ra, nấm Hirsutella uncinata có cuống bào tử đính dài từ 200 – 400 m, thể bình suốt dạng móc (21–36 x 2,5–4,0 µm) Bào tử đính khơng vách, suốt (5,5–7 x 3–4 µm), dạng hình thoi méo (Hodge, 2008) Trong đó, nấm Hirsutella sinensis có bào tử đính dạng thận dài khoảng 14 m (Hodge, 2008) Bào tử nấm Hirsutella citriformis bao phủ chất dịch nhầy, giúp gắn chặt vào lớp biểu bì vật chủ Bào tử nảy mầm thâm nhập vào phận thể, thâm nhập thông thường qua chân vật chủ (Nguồn: http://en.wikipedia.org/wiki/Hirsutella) Hình Nấm Hirsutella citriformis ký sinh rầy nâu tự nhiên Khả biến đổi chất khác nhờ hệ thống enzyme Các enzyme mặt thành tế bào tế bào xenlulase, amylase, lipase kitinase,…là thành phần cấu tạo hợp chất sản phẩm trao đổi chất tế bào vi nấm Từ hệ enzyme người ta phát tuyến mỡ mơ bị hịa tan protease tiết q trình ni cấy nấm chế gây bệnh côn trùng Thông qua đặc điểm phân biệt trùng bị bệnh động vật nguyên sinh hay nấm bậc thấp gây Các nhà khoa học chứng minh vai trị hệ enzyme q trình phân hủy chất hữu lớp biểu bì, lớp mô, lớp mỡ, lympho ruột côn trùng (Phạm Thị Thùy, 2004) Các nhà khoa học phân lập số enzyme có nguồn gốc từ nấm Hirsutella citriformis protease, hitinolytic amylase, α-esterase, proteolytic, elastase, chitinase, chitinase deficiencies (Humber, 1997) Khả sinh độc tố diệt côn trùng Độc tố sản phẩm thứ cấp không ổn định, sản phẩm thứ cấp loại hợp chất sinh từ chất trao đổi sơ cấp nhờ q trình chuyển hóa sinh hóa đặc biệt Các sản phẩm thứ cấp thường tích lũy vào cuối giai đoạn sinh trưởng nấm nguồn thức ăn lượng cạn dần (Phạm Thị Thùy, 2004) Một nhiều loại protein Hirsutella citriformis Hirsutellin A (HtA), ngăn chặn phát triển tế bào côn trùng nguyên nhân làm cho tế bào trở nên suy dinh dưỡng, phá vỡ nội quan bên tế bào màng tế bào (Boucias Pendland, 1998) 10 11 12 13 14 15 | | | | | | | | | | | R2 R2 R3 R1 R1 R2 R3 R3 R1 R3 R1 M2 M5 M5 M5 M1 M4 M4 M3 M4 M1 M3 Phụ chương Ngẫu nhiên hóa sơ đồ bố trí thí nghiệm chọn mơi trường nhân sinh khối nấm HiVP- TS IRRITAT 5.0 RANDOMIZATION AND LAYOUT ======================== FILENAME = "C:\PROGRAM FILES\VP.RND" TITLE = "Thi nghiem duoc bo tri theo the thuc hoan toan ngau nhien" EXPERIMENTAL DESIGN = COMPLETELY RANDOMIZED DESIGN REPLICATIONS = TREATMENTS = x **** FACTOR(S) **** REP (R) = levels REP (1) = R1 REP (2) = R2 REP (3) = R3 MOITRUON (M) = levels MOITRUON (1) = M1 MOITRUON (2) = M2 MOITRUON (3) = M3 MOITRUON (4) = M4 MOITRUON (5) = M5 ====================================================================== Experimental layout for file: "C:\PROGRAM FILES\VP.RND" (COMPLETELY RANDOMIZED DESIGN) (Note: layout is not drawn to scale) + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | 10 | + -+ | 11 | + -+ | 12 | + -+ | 13 | + -+ | 14 | + -+ | 15 |+ -+ PLOT NO | | | | | TREATMENT ID R2 M4 R3 M3 R1 M2 R2 M2 44 10 11 12 13 14 15 | | | | | | | | | | | R3 R2 R1 R2 R1 R3 R3 R2 R3 R1 R1 M2 M1 M4 M5 M5 M5 M1 M3 M4 M1 M3 Phụ chương Ngẫu nhiên hóa sơ đồ bố trí thí nghiệm chọn mơi trường nhân sinh khối nấm HiBM- CP IRRITAT 5.0 RANDOMIZATION AND LAYOUT ======================== FILENAME = "C:\PROGRAM FILES\BM.RND" TITLE = "Thi nghiem duoc bo tri theo the thuc hoan toan ngau nhien" EXPERIMENTAL DESIGN = COMPLETELY RANDOMIZED DESIGN REPLICATIONS = TREATMENTS = x **** FACTOR(S) **** REP (R) = levels REP (1) = R1 REP (2) = R2 REP (3) = R3 MOITRUON (M) = levels MOITRUON (1) = M1 MOITRUON (2) = M2 MOITRUON (3) = M3 MOITRUON (4) = M4 MOITRUON (5) = M5 ====================================================================== Experimental layout for file: "C:\PROGRAM FILES\BM.RND" (COMPLETELY RANDOMIZED DESIGN) (Note: layout is not drawn to scale) + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | 10 | + -+ | 11 | + -+ | 12 | + -+ | 13 | + -+ | 14 | + -+ | 15 | + -+ PLOT NO | | TREATMENT ID R2 M3 45 10 11 12 13 14 15 | | | | | | | | | | | | | | R1 R2 R1 R3 R3 R2 R2 R1 R3 R3 R2 R3 R1 R1 M1 M1 M4 M2 M1 M2 M5 M3 M3 M4 M4 M5 M5 M2 Phụ chương Ngẫu nhiên hóa sơ đồ bố trí thí nghiệm chọn môi trường nhân sinh khối nấm HiTĐ- TT IRRITAT 5.0 RANDOMIZATION AND LAYOUT ======================== FILENAME = "C:\PROGRAM FILES\TD.RND" TITLE = "Thi nghiem duoc bo tri theo the thuc hoan toan ngau nhien" EXPERIMENTAL DESIGN = COMPLETELY RANDOMIZED DESIGN REPLICATIONS = TREATMENTS = x **** FACTOR(S) **** REP (R) = levels REP (1) = R1 REP (2) = R2 REP (3) = R3 MOITRUON (M) = levels MOITRUON (1) = M1 MOITRUON (2) = M2 MOITRUON (3) = M3 MOITRUON (4) = M4 MOITRUON (5) = M5 ====================================================================== Experimental layout for file: "C:\PROGRAM FILES\TD.RND" (COMPLETELY RANDOMIZED DESIGN) (Note: layout is not drawn to scale) + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | | + -+ | 10 | + -+ | 11 | + -+ | 12 | + -+ | 13 | + -+ | 14 | + -+ | 15 | + -+ PLOT NO | TREATMENT ID | R1 M2 46 10 11 12 13 14 15 | | | | | | | | | | | | | | R1 R2 R3 R2 R2 R3 R3 R2 R1 R1 R2 R3 R1 R3 M4 M1 M1 M3 M4 M4 M2 M5 M1 M3 M2 M5 M5 M3 47 PHỤ CHƯƠNG PHÂN TÍCH ANOVA Phụ chương Phân tích phương sai (ANOVA) hiệu lực (%) 41 dòng nấm Hirsutella citriformis rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm, vào thời điểm ngày sau chủng Nguồn biến Độ tự Tổng bình TB bình F-tính Xác xuất động phương phương Nghiệm thức 14675,921 366,898 9,552 0,0000 Sai số 10 3149,560 38,409 Tổng cộng 14 17825,481 CV= 23,59% Phụ chương Phân tích phương sai (ANOVA) hiệu lực (%) 41 dòng nấm Hirsutella citriformis rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm, vào thời điểm ngày sau chủng Nguồn biến Độ tự Tổng bình TB bình F-tính Xác xuất động phương phương Nghiệm thức 21377,432 534,436 23,025 0,0000 Sai số 10 1903,327 23,211 Tổng cộng 14 CV= 18,60 % Phụ chương Phân tích phương sai (ANOVA) hiệu lực (%) 41 dòng nấm Hirsutella citriformis rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm, vào thời điểm ngày sau chủng Nguồn biến Độ tự Tổng bình TB bình F-tính Xác xuất động phương phương Nghiệm thức 19543,694 488,592 25,110 0,0000 Sai số 10 1595,560 19,458 Tổng cộng 14 CV= 12,33 % Phụ chương 10 Phân tích phương sai (ANOVA) hiệu lực (%) 41 dòng nấm Hirsutella citriformis rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm, vào thời điểm 10 ngày sau chủng Nguồn biến Độ tự Tổng bình TB bình F-tính Xác xuất động phương phương Nghiệm thức 13313,794 332,845 16,512 0,0000 Sai số 10 1652,913 20,157 Tổng cộng 14 CV= 10,44 % 48 Phụ chương 11 Phân tích phương sai (ANOVA) hiệu lực (%) 41 dòng nấm Hirsutella citriformis rầy nâu điều kiện phịng thí nghiệm, vào thời điểm 12 ngày sau chủng Nguồn biến Độ tự Tổng bình TB bình F-tính Xác xuất động phương phương Nghiệm thức 12283,488 307,087 16,267 0,0000 Sai số 10 1548,033 18,878 Tổng cộng 14 CV= 8,63 % Phụ chương 12., Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiLK-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất động phương Nghiệm thức 35,962 11,987 88,795 0,0000 Sai số 10 2,160 0,135 Tổng cộng 14 38,122 CV= 11,12% Phụ chương 13 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiLK-CM mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 3,538 1,179 19,574 0,0000 Sai số 10 0,964 0,060 Tổng cộng 14 4,502 CV= 13,24% Phụ chương 14 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiLK-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 9,394 3,131 36,096 0,0000 Sai số 10 1,388 0,087 Tổng cộng 14 10,782 CV= 9,14% Phụ chương 15 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiLK-CM mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 10 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 0,620 0,207 3,347 0,0456 Sai số 10 0,988 0,062 Tổng cộng 14 1,608 CV = 8,65% 49 Phụ chương 16 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiLK-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm12 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 1,738 0,579 8,103 0,001 Sai số 10 1,144 0,072 Tổng cộng 14 2,882 CV= 9,43% Phụ chương 17 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiMHĐ-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 7,412 2,471 17,277 0,0000 Sai số 10 2,288 0,143 Tổng cộng 14 9,700 CV= 7,22% Phụ chương 18 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiMHĐ-CM mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 21,238 7,079 55,743 0,0000 Sai số 10 2,032 0,127 Tổng cộng 14 23,270 CV= 11,36% Phụ chương 19 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiMHĐ-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 2,606 0,869 5,979 0,0062 Sai số 10 2,324 0,145 Tổng cộng 14 4,930 CV = 9,03% Phụ chương 20 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiMHĐ-CM mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 10 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 1,042 0,347 1,599 0,2289 Sai số 10 3,476 0,217 Tổng cộng 14 4,518 CV= 14,69% 50 Phụ chương 21 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn dịng nấm HiMHĐ-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm 12 cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính phương Nghiệm thức 5,225 1,742 24,025 Sai số 10 1,160 0,073 Tổng cộng 14 6,385 CV = 19,44% lạc (cm) ngày sau Xác xuất 0,0000 Phụ chương 22 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiVP- TS mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 21,768 7,256 110,357 0,0000 Sai số 10 1,052 0,066 Tổng cộng 14 22,820 CV = 13,32% Phụ chương 23 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiVP- TS môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 109,482 36,494 22,809 0,0000 Sai số 10 25,600 1,600 Tổng cộng 14 135,082 CV = 12,38% Phụ chương 24 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dòng nấm HiVP- TS môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 34,896 11,632 16,731 0,0000 Sai số 10 11,124 0,695 Tổng cộng 14 46,020 CV = 9,89% Phụ chương 25 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiVP- TS mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 10 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 4,746 1,582 8,217 0,0015 Sai số 10 3,080 0,192 Tổng cộng 14 7,826 CV = 18,88% 51 Phụ chương 26 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiVP- TS môi trường thử nghiệm vào thời điểm 12 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 4,952 1,651 12,771 0,0002 Sai số 10 2,068 0,129 Tổng cộng 14 7,020 CV = 13,44% Phụ chương 26 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dòng nấm HiBM- CP môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 3,457 1,152 67,794 0,0000 Sai số 10 0,272 0,017 Tổng cộng 14 3,729 CV = 11,20% Phụ chương 27 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiBM- CP môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 1,510 0,503 11,062 0,0004 Sai số 10 0,728 0,046 Tổng cộng 14 2,238 CV = 10,25% Phụ chương 28 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiBM- CP môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 12,710 4,237 41,333 0,0000 Sai số 10 1,640 0,103 Tổng cộng 14 14,350 CV = 16,24% Phụ chương 29 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiBM- CP mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 10 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 19,449 6,483 29,402 0,0000 Sai số 10 3,528 0,220 Tổng cộng 14 22,977 CV = 18,60% 52 Phụ chương 30 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiBM- CP môi trường thử nghiệm vào thời điểm 12 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 6,874 2,291 24,570 0,0000 Sai số 10 1,492 0,093 Tổng cộng 14 8,366 CV = 18,87% Phụ chương 31 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dòng nấm HiTĐ- TT môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 6,077 2,026 18,845 0,0000 Sai số 10 1,720 0,108 Tổng cộng 14 7,797 CV = 12,44% Phụ chương 32 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiTĐ- TT mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 0,217 0,072 5,577 0,0082 Sai số 10 0,208 0,013 Tổng cộng 14 0,426 CV= 7,24% Phụ chương 33 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiTĐ- TT môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 12,708 4,236 74,973 0,0000 Sai số 10 0,904 0,057 Tổng cộng 14 13,612 CV = 10,56% Phụ chương 34 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiTĐ- TT mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 10 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 12,708 4,236 74,973 0,0000 Sai số 10 0,904 0,057 Tổng cộng 14 13,612 CV = 9,10% 53 Phụ chương 35 Phân tích phương sai (ANOVA) đường kính khuẩn lạc (cm) dịng nấm HiTĐ- TT môi trường thử nghiệm vào thời điểm 12 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 18,028 6,009 105,427 0,0000 Sai số 10 0,912 0,057 Tổng cộng 14 18,940 CV = 9,43% Phụ chương 36 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiLK-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 37,882 12,627 106,560 0,0000 Sai số 10 1,896 0,119 Tổng cộng 14 39,778 CV = 9,15% Phụ chương 37 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiLK-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 44,670 14,890 283,616 0,0000 Sai số 10 0,840 0,053 Tổng cộng 14 45,510 CV = 4,31% Phụ chương 38 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiLK-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm 11 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 129,505 43,168 388,031 0,0000 Sai số 10 1,780 0,111 Tổng cộng 14 131,285 CV = 7,19% Phụ chương 39 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiLK-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm 13 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 39,254 13,085 99,882 0,0000 Sai số 10 2,096 0,131 Tổng cộng 14 41,350 CV = 3,88% 54 Phụ chương 40 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiMHĐ-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 15,788 5,263 32,840 0,0000 Sai số 10 2,564 0,160 Tổng cộng 14 18,352 CV = 5,30% Phụ chương 41 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dịng nấm HiMHĐ-CM mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất Nguồn biến động Độ tự phương Nghiệm thức 5,509 1,836 31,939 0,0000 Sai số 10 0,920 0,058 Tổng cộng 14 6,429 CV = 1,99% Phụ chương 42 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiMHĐ-CM môi trường thử nghiệm vào thời điểm 11 ngày sau cấy Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất Nguồn biến động Độ tự phương Nghiệm thức 7,218 2,406 16,855 0,0000 Sai số 10 2,284 0,143 Tổng cộng 14 9,502 CV = 1,86% Phụ chương 43 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dịng nấm HiMHĐ-CM mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 13 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 10,797 3,599 30,501 0,0000 Sai số 10 1,888 0,118 Tổng cộng 14 12,685 CV = 1,74% Phụ chương 44 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiVP- TS môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 14,790 4,930 11,843 0,0000 Sai số 10 6,660 0,416 Tổng cộng 14 21,449 CV= 3,98% 55 Phụ chương 45 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dịng nấm HiVP- TS mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 7,110 2,370 15,825 0,0000 Sai số 10 2,396 0,150 Tổng cộng 14 9,505 CV= 4,65% Phụ chương 46 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiVP- TS môi trường thử nghiệm vào thời điểm 11 ngày sau cấy Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV= 6,54% Độ tự 10 14 Tổng BP 11,969 2,000 13,969 TB bình phương 3,990 0,125 F-tính 31,919 Xác xuất 0,0000 Phụ chương 47 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dịng nấm HiVP- TS mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 13 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 0,620 0,207 3,347 0,045 Sai số 10 0,988 0,062 Tổng cộng 14 1,608 CV= 4,72% Phụ chương 48 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiBM- CP môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 1,738 0,579 8,103 0,0017 Sai số 10 1,144 0,072 Tổng cộng 14 2,882 CV= 5,98% Phụ chương 49 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dịng nấm HiBM- CP mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 7,412 2,471 17,277 0,0000 Sai số 10 2,288 0,143 Tổng cộng 14 9,700 CV= 3,45% 56 Phụ chương 50 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiBM- CP môi trường thử nghiệm vào thời điểm 11 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 21,238 7,079 55,743 0,0000 Sai số 10 2,032 0,127 Tổng cộng 14 23,270 CV= 3,55% Phụ chương 51 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dịng nấm HiBM- CP mơi trường thử nghiệm vào thời điểm 13 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 2,606 0,869 5,979 0,0062 Sai số 10 2,324 0,145 Tổng cộng 14 38,122 CV= 3,35% Phụ chương 52 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiTĐ- TT môi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 1,042 0,347 1,599 0,2289 Sai số 10 3,476 0,217 Tổng cộng 14 4,518 CV= 5,02% Phụ chương 53 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dịng nấm HiTĐ- TT mơi trường thử nghiệm vào thời điểm ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 1,882 0,627 6,047 0,0059 Sai số 10 1,660 0,104 Tổng cộng 14 3,542 CV= 10,89% Phụ chương 54 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiTĐ- TT môi trường thử nghiệm vào thời điểm 11 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 10,229 3,410 44,866 0,0000 Sai số 10 1,216 0,076 Tổng cộng 14 11,445 CV= 4,59% 57 Phụ chương 55 Phân tích phương sai (ANOVA) mật số bào tử dòng nấm HiTĐ- TT môi trường thử nghiệm vào thời điểm 13 ngày sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng BP TB bình F-tính Xác xuất phương Nghiệm thức 16,294 5,431 38,316 0,0000 Sai số 10 2,268 0,142 Tổng cộng 14 18,562 CV= 3,73% 58 ... trường nhân sinh khối nấm Hirsutella citriformis ký sinh rầy nâu bốn huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú Tri Tôn, An Giang? ?? thực A MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU I MỤC TIÊU Phân lập số dòng nấm nấm... cứu: phân lập thí nghiệm Đại học An Giang Phương pháp 2.1 Thu thập dòng nấm Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu bốn huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú Tri Tôn - Chọn điểm thu thập. .. Nấm ký sinh côn trùng Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu II PHẠM VI NGHIÊN CỨU Nguồn nấm Hirsutella citriformis ký sinh tự nhiên rầy nâu huyện Chợ Mới, Thoại Sơn, Châu Phú, Tri Tôn