Khảo sát sơ bộ thành phần có bào tử nấm linh chi phá vỡ vách bằng enzyne và siêu âm

TÊN ĐỀ TÀI.txt Khảo sát sơ thành phần có bào tử nấm linh chi phá vỡ vách Enzyne siêu âm Giảng viên hướng dẫn: TS: Nguyễn Hoài Hương SV: Lê Nguyễn Phương Uyên lớp: 13DSH06 MSSV: 1311100859 Page LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu đồ án hồn tồn trung thực, chưa cơng bố cơng trình khác Các thơng tin, tài liệu trích dẫn đồ án ghi rõ nguồn gốc Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2017 Sinh viên thực Lê Nguyễn Phương Uyên LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến trường Đại học Công nghệ Tp Hồ Chí Minh - HUTECH tạo hội cho tơi học tập trường Cảm ơn quý thầy cô khoa Công nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trường truyền đạt lại tri thức quý báu cho thời gian học tập trường Tôi xin cảm ơn khoa Dược giúp đỡ tơi thiết bị siêu âm để tơi hồn thành đồ án tốt nghiệp Đặc biệt xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Nguyễn Hoài Hương, người tận tình trực tiếp hướng dẫn, bảo để tơi hồn thành đồ án tốt nghiệp Cùng với đó, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn học có động viên to lớn, giúp đỡ trình học tập hồn thành chương trình học trường cách tốt Tôi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực Lê Nguyễn Phương Uyên Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH .v MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Tinh hình nghiên cứu Mục đích đề tài Phương pháp nghiên cứu Kết thu đề tài Hạn chế đề tài CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm linh chi 1.1.1 Nguồn gốc phân bố .4 1.1.2 1.2 1.3 1.4 Bào tử nấm Linh chi .10 Thành phần hóa học chủ yếu 13 1.2.1 Các polysaccharide peptidoglycan 15 1.2.2 Triterpenes 17 1.2.3 Saponin 23 1.2.4 Những thành phần khác 24 Sử dụng 24 1.3.1 Phòng ngừa ung thư 25 1.3.2 Tăng cường khả miễn dịch 26 1.3.3 Khả chống oxy hoá 26 1.3.4 Điều trị bệnh đái tháo đường 27 1.3.5 Tác dụng bệnh tim mạch .27 Các phương pháp phá vỡ trích ly hoạt chất từ bào tử phá vỡ 28 1.4.1 Phương pháp phá vỡ bào tử 28 i Đồ án tốt nghiệp 1.4.2 Phương pháp trích ly hoạt chất 28 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 29 2.1 2.2 Phương tiện nghiên cứu .29 2.1.1 Vật liệu 29 2.1.2 Nơi thực 29 2.1.3 Thời gian thực .29 Vật liệu thí nghiệm .29 2.2.1 Thiết bị dụng cụ .29 2.2.2 Hóa chất 30 2.3 Phương pháp nghiên cứu 32 2.3.1 Phá vách bào tử nấm linh chi phương pháp lạnh đông kết hợp sử dụng enzyme Cellulase C20032 10% dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 33 2.3.1 Quy trình trích ly hợp chất có bào tử nấm Linh Chi 33 2.3.2 Định tính số hoạt chất có mẫu bào tử nấm Linh Chi .36 2.3.2.1 Định tính Saponin 36 2.3.2.2 Định tính protein 37 2.3.2.3 Định tính carbohydrate 38 2.3.2.4 Định tính triterpenoid 39 2.3.3 Định lượng số hoạt chất có bào tử nấm linh chi bị phá vỡ 39 2.3.3.1 Định lượng carbohydrate phương pháp Phenol – Sulfuric 39 2.3.3.2 Định lượng tổng chất béo có mẫu bào tử Linh Chi phá vỡ 40 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 Định tính hợp chất sau trích ly lỏng lỏng .42 3.1.1 Dịch trích ly lỏng lỏng mẫu không siêu âm siêu âm mốc thời gian khác 44 3.1.1.1 Định tính protein 44 3.1.1.2 Định tính saponin 45 3.1.1.3 Định tính carbohydrate 49 3.1.1.4 Định tính triterpenoid 50 ii Đồ án tốt nghiệp 3.1.2 Định lượng thành phần mẫu dịch 53 3.1.2.1 Định lượng Carbohydrate dịch trích ly mẫu không siêu âm mẫu kết hợp siêu âm mốc thời gian 1,5 phút, 2,5 phút, phút phương pháp Phenol – Sulfuric 53 3.1.2.2 Định lượng lipid mẫu không siêu âm mẫu kết hợp siêu âm mốc thời gian khác trước trích ly phương pháp Adam – Rose – Gottlieb 55 3.2 Bào tử 58 3.2.1 Định tính Saponin 58 3.2.2 Định tính Protein 59 3.2.3 Định tính Carbohydrate 60 3.2.4 Định tính Triterpenoid .61 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .63 4.1 Kết luận 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 ♦♦♦ Tài liệu tiếng Việt .64 ♦♦♦ Tài liệu tiếng Anh .64 PHỤ LỤC iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 : Đặc điểm số loại nấm linh chi Đài Loan Bảng 1.2 Thành phần dược tính nấm Linh chi 13 Bảng 1.3 Các phương pháp phá vỡ bào tử .28 Bảng 1.4 Các phương pháp trích ly 28 Bảng 3.1 Bảng thích ký hiệu hình kết 43 Bảng 3.2 thử nghiệm Biuret mẫu không siêu âm siêu âm 45 Bảng 3.3 kết luận thử nghiệm tạo bọt mẫu không siêu âm siêu âm 46 Bảng 3.5 Bảng kết luận thử nghiệm Fontan – Kaudel với pha nước mẫu không siêu âm mẫu siêu âm mốc thời gian khác 49 Bảng 3.6 Bảng kết luận thử nghiệm Molisch mẫu khơng siêu âm siêu âm (định tính carbohydrate) 49 Bảng 3.7 Bảng kết luận thử nghiệm Liebermann – Burchard mẫu không siêu âm siêu âm (định tính Triterpenoid) 51 Bảng 3.8 Bảng tổng kết thử nghiệm định tính với mẫu khơng siêu âm, siêu âm bào tử 51 Bảng 3.9 Mật độ quang dung dịch D-Glucose chuẩn 53 Bảng 3.10 Ảnh hưởng thời gian siêu âm lên hàm lượng carbohydrate .54 Bảng 3.11 Hàm lượng lipid tổng mẫu (g) 56 Bảng 3.12 bảng kết luận thử nghiệm tạo bọt Fontan – Kaudel với bào tử 59 Bảng 3.13 bảng kết luận thử nghiệm Biuret với bào tử (định tính Protein) .60 Bảng 3.14 bảng kết luận thử nghiệm Molisch với bào tử (định tính Carbohydrate) 61 iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH Hình 1.2: a) Bào tử nấm linh chi kính hiển vi phóng to 3000 lần 11 b) Bào tử nấm linh chi bị phá vỡ vách 11 Hình 1.3 Các kiểu hình bào tử đặc thù họ nấm Linh Chi 12 Hình 1.4 Cấu trúc không gian Polysaccharide nấm Linh chi 16 Hình 1.5: Cơng thức số triterpene nấm linh chi 18 Hình 1.6: Cấu trúc khơng gian 29 loại triterpenoids bào tử nấm Linh chi 20 (Bingji Ma et al (2011)) 20 Hinh 1.7: Tên 29 triterpenoids bào tử nấm Linh chi (Bingji Ma et al.(2011) Triterpenoids cô lập từ bào tử nấm Linh chi 21 Hình 2.1 Quy trình thí nghiệm tổng qt 32 Hình 2.2 Hình minh họa pha phễu chiết 34 Hình 2.3 Quy trình phá vỡ vách bào tử nấm Linh Chi phương pháp lạnh đông kết hợp enzyme nuôi cấy 36 Hình 3.2 Hai pha dịch trích ly 43 Hình 3.3 Thử nghiệm Biuret với hai lớp dịch trích ly mẫu khơng đun sơi đun sơi trước trích ly 44 Hình 3.4 Thử nghiệm tạo bọt .45 Hình 3.5 Thử nghiệm Fontan – Kaudel với pha hữu 47 Hình 3.6 Thử nghiệm Fontan – Kaudel với pha nước 48 Hình 3.7 Thử nghiệm Molisch - với hai pha mẫu không siêu siêu âm 49 Hình 3.8 Thử nghiệm Liebermann – Burchard với hai pha dịch trích ly mẫu 50 Hình 3.9 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ Glucose 53 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng thời gian siêu âm đến hàm lượng đường tổng, lipid tổng tỷ lệ phá vỡ 55 v Đồ án tốt nghiệp Hình 3.11 Quy trình sản xuất viên nang Triterpenoid từ pha hữu trích ly diethylethe 57 Hình 3.12 Thử nghiệm tạo bọt bào tử 58 Hình 3.12 Thử nghiệm Fontan – Kaudel 59 Hình 3.13 Thử nghiệm Biuret với dịch trích ly bào tử 60 Hình 3.14 Thử nghiệm Molisch với dịch trích ly bào tử 60 Hình 3.15 Thử nghiệm Liebermann – Burchard ( a) đối chứng dương, b) đối chứng âm, c) cặn dịch trích ly bào tử ) 61 vi Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Trong năm gần đây, dược liệu thiên nhiên ngày đóng vai trò quan trọng việc phòng bệnh, chữa bệnh nâng cao sức khỏe Từ lâu nấm Linh chi thảo dược quý hiếm, xem loại “Thần dược” Theo Đơng y, Linh chi có tác dụng kiện não, bảo an, cường tâm, giải độc Theo Tây y, từ Linh chi người ta bào chế thuốc chữa nhiều bệnh, đáng quan tâm bệnh tiểu đường, viêm gan, ung thư Trong năm vừa qua, phương pháp phân tích đại cho phép xác định lượng lớn hợp chất hóa học có thể, tơ bào tử nấm Linh chi như: triterpenoid, steroid, polysaccharide, saponin, chất khoáng, amino acid polysaccharide, triterpenoid xem thành phần mang nhiều hoạt tính sinh học nấm Tuy hoạt chất sinh học tìm việc phân tích, chiết xuất hoạt chất sinh học chủ yếu thực thể tơ nấm Linh chi, có nghiên cứu việc thực bào tử nấm Linh chi bào tử nấm Linh chi cấu tạo lớp vách đôi bền vững, làm giảm khả chiết xuất chất Vì việc phá vỡ vách bào tử nấm Linh chi xác định diện hợp chất hóa học có bào tử nấm Linh chi giai đoạn quan trọng Để đóng góp phần nhỏ vào việc nghiên cứu xác định hoạt chất có bào tử nấm linh chi, tơi có nghiên cứu sơ thực đồ án tốt nghiệp: “Khảo sát sơ thành phần có bào tử nấm Linh Chi phá vỡ vách enzyme siêu âm” Tình hình nghiên cứu Việc nghiên cứu thành phần hợp chất quý nấm Linh chi thực chủ yếu thể tơ nấm Linh chi Vào thập niên 70 - 80, bắt đầu trào lưu khảo cứu hóa dược học nấm Linh chi Chủ yếu Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc, Đài Loan Việt Nam Gần số phịng thí nghiệm Hoa Kỳ vùng Đơng Nam Á bắt đầu tham Đồ án tốt nghiệp 3.1.2.2 Định lượng lipid mẫu không siêu âm mẫu kết hợp siêu âm mốc thời gian khác trước trích ly phương pháp Adam – Rose – Gottlieb 100 250.00 90 80 200.00 70 60 150.00 TỔNG ĐƯỜNG TỔNG 50 40 100.00 LIPID TỔNG TLPV 30 20 50.00 10 0.00 KSA SA 1,5 SA 2,5 SA 3,5 SA 4,5 SA Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng thời gian siêu âm đến hàm lượng đường tổng, lipid tổng tỷ lệ phá vỡ Biện luận đồ thị: dựa vào đồ thị ta nhận thấy thời gian siêu âm kéo dài phút tỷ lệ phá vỡ tăng đáng kể cao thời điểm siêu âm phút Tuy nhiên thời điểm 2,5 phút trở lượng lipid giảm đột ngột đường tổng số giảm Do thời điểm phút tỷ lệ phá vỡ cao nên hiệu suất thu hồi đường tổng lipid cao so với 2,5 phút đến 4,5 phút 55 Đồ án tốt nghiệp Bảng 3.14 trình bày lượng lipid tổng có mẫu khơng siêu âm siêu âm mốc thời gian khác Sau giả sử lượng lipid tổng có mẫu khơng siêu âm 100% từ tính phần trăm lipid tổng có mẫu siêu âm nhằm so sánh ảnh hưởng cuả thời gian siêu âm lên hàm lượng lipid tổng bào tử nấm Linh Chi Bảng 3.11 Hàm lượng lipid tổng mẫu (g) Mẫu Lipid tổng Không siêu âm 27,98 ± 2,45 Siêu âm 1,5 phút 56,10 ± 3,52 Siêu âm 2,5 phút 4,83 ± 0,81 Siêu âm 3,5 phút 0,38 ± 0,19 Siêu âm 4,5 phút 0,33 ± 0,13 Siêu âm phút 7,48 ± 2,39 % Lipid tổng 100 200,47 17,26 1,37 1,19 26,74 Nhận xét: hàm lượng lipid tổng mẫu siêu âm kéo dài đến phút mẫu siêu âm 1,5 phút có hàm lượng lipid cao Từ 2,5 phút đến 4,5 phút hàm lượng lipid giảm đột ngột tăng trở lại mẫu siêu âm phút Đề nghị quy trình sản xuất viên nang chứa dầu trích ly bào tử nấm linh chi phá vỡ 56 Đồ án tốt nghiệp Cân bào tử Nước cất Lạnh đông Ly tâm 4000v/phút x 15 phút bỏ nước Phản ứng enzyme khuấy, 500C, 10 ngày Siêu âm 1,5 phút, công suất 500W, độ khuếch đại 100% Ly tâm 4000v/phút x 15 phút Diethylether phụ phẩm Trích ly lỏng lỏng Pha hữu Loại bỏ dung môi thu dầu bào tử Pha nước Phụ phẩm (chứa carbohydrate) Đóng viên nang Hình 3.11 Quy trình sản xuất viên nang Triterpenoid từ pha hữu trích ly diethylether 57 Đồ án tốt nghiệp 3.2 Bào tử Sau ly tâm phần dịch phá vỡ bào tử thu hai pha Đem phần bào tử thực trích ly lỏng rắn, sau tiến hành định tính Saponin, Protein, Carbohydrate, Triterpenoid để đưa kết luận cho việc sử dụng bào tử sau xử lý phá vỡ 3.2.1 Định tính Saponin Thử nghiệm tạo bọt thực theo mục 2.3.3.1 với phần bào tử trích ly từ cồn 960 thu kết sau Bào tử Bào tử a) b) Hình 3.12 Thử nghiệm tạo bọt bào tử ( a) ống nghiệm bắt đầu thử nghiệm, b) ống nghiệm sau 15 phút thử nghiệm ) Quan sát so sánh ống nghiệm bắt đầu thử nghiệm với ống nghiệm sau 15 phút thử nghiệm thấy bọt không bền 15 phút 58 Đồ án tốt nghiệp Thử nghiệm Fontan – Kaudel với dịch trích ly bào tử SAPONIN pH=13 SAPONIN pH=1 SAPONIN pH=13 SAPONIN pH=1 a) b) Hình 3.12 Thử nghiệm Fontan – Kaudel ( a) ống nghiệm bắt đầu thử nghiệm, b) ống nghiệm sau phút thử nghiệm ) Quan sát so sánh cột bọt ống nghiệm pH=1 pH=13 bắt đầu thử nghiệm ống pH=13 có cột bọt cao so với ống pH=1 có chiều cao cột bọt 4cm sau 15 phút thử nghiệm thấy cột bọt không bền Kết thử nghiệm tạo bọt thử nghiệm Fontan – Kaudel với dịch trích ly bào tử trình bày bảng 3.8 Bảng 3.12 bảng kết luận thử nghiệm tạo bọt Fontan – Kaudel với bào tử Thử nghiệm tạo bọt bào tử Thử nghiệm Fontan – Kaudel với bào tử (-) (-) 3.2.2 Định tính Protein Thử nghiệm Biuret định tính Protein thực theo mục 2.3.3.2 với dịch trích ly bào tử thu kết sau 59 Đồ án tốt nghiệp BIURET ĐC (-) BIURET BÀO TỬ BIURET ĐC (+) b) a) c) Hình 3.13 Thử nghiệm Biuret với dịch trích ly bào tử ( a) đối chứng âm, b) đối chứng dương, c) dịch trích ly bào tử ) Quan sát so sánh với đối chứng âm, dương Ống nghiệm chứa dịch trích ly bào tử có màu nâu đậm Đưa kết luận bảng 3.9 Bảng 3.13 bảng kết luận thử nghiệm Biuret với bào tử (định tính Protein) Đối chứng âm Đối chứng dương Bào tử (-) (+) (-) 3.2.3 Định tính Carbohydrate Thử nghiệm Molisch định tính Carbohydrate thực mục 2.3.3.3 thu kết sau MOLISCH ĐC (-) a) MOLISCH ĐC (+) b) MOLISCH BÀO TỬ c) Hình 3.14 Thử nghiệm Molisch với dịch trích ly bào tử ( a) đối chứng âm, b) đối chứng dương, c) dịch trích ly bào tử ) Quan sát ống nghiệm chứa dịch trích ly bào tử so sánh với đối chứng âm, dương 60 Đồ án tốt nghiệp Kết luận: khơng có Carbohydrate Bảng 3.14 bảng kết luận thử nghiệm Molisch với bào tử (định tính Carbohydrate) Đối chứng âm Đối chứng dương Bào tử (-) (+) (-) 3.2.4 Định tính Triterpenoid Thử nghiệm Liebermann – Burchard định tính Triterpenoid dịch trích ly bào tử thực theo mục 2.3.3.4 thu kết sau ĐC (+) ĐC (-) a) BÀO TỬ b) c) Hình 3.15 Thử nghiệm Liebermann – Burchard ( a) đối chứng dương, b) đối chứng âm, c) cặn dịch trích ly bào tử ) Quan sát lam kính mẫu cặn dịch trích ly bào tử so sánh với đối chứng âm, dương, nhận thấy bảng 3.15 Bảng 3.15 Kết luận triterpenoid dích trích ly bào tử Đối chứng dương (+) Đối chứng âm (-) Dịch trích ly bào tử (-) Sau thử nghiệm định tính với phần bào tử lại nhận thấy bào tử sau xử lý phá vỡ vách enzyme siêu âm khơng cịn hợp chất hóa học Protein, Saponin, carbohydrate, Triterpenoid Vì khơng đưa phần bào tử 61 Đồ án tốt nghiệp vào sản xuất sản phầm mà sử dụng làm phụ phế phẩm, tận dụng lượng ßglucan vách bào tử Qua thử nghiệm định lượng carbohydrate tổng lipid tổng ta nhận thấy thời gian siêu âm ảnh hưởng đến hàm lượng lipid carbohydrate tổng mức thời gian siêu âm 1,5 phút gây ảnh hưởng đến hàm lượng lipid carbohydrate mức thời gian siêu âm dài làm lượng carbohydrate lipid giảm mạnh Tuy lượng lipid carbohydrate mức siêu âm phút tang trở lại không đáng kể so với 1,5 phút từ ta kết luận nên dừng thời gian siêu âm 1,5 phút để tránh ảnh hưởng đến hàm lượng lipid carbohydrate đề tài nên khảo sát thêm thời gian siêu âm khoảng 0,5 phút đến phút để tìm mức thời gian siêu âm thích hợp cho việc thu nhận hàm lượng hoạt chất hóa học tối ưu 62 Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Trong dịch trích ly bào tử nấm linh chi sau phá vỡ kết hợp siêu âm có diện triterpenoid, carbohydrate, khơng có diện protein, saponin Phần bào tử cịn lại sau trích ly khơng chứa diện saponin, triterpenoid, carbohydrate protein Trong dịch trích ly bào tử nấm Linh Chi phá vỡ kết hợp siêu âm thời gian 1,5 phút thu lượng đường tăng 11,56% lượng lipid tổng tăng 100,47% so với không siêu âm Kéo dài thời gian siêu âm phá hủy phần lớn lipid bào tử, lipid thu cịn 26,74% so với khơng siêu âm Đề nghị quy trình sản xuất viên nang dầu bào tử nấm linh chi phá vỡ bao gồm trình tiền xử lý lạnh đơng, phản ứng enzyme sử dụng hỗn hợp enzyme C20032 10% dịch trích ly lên men thể rắn Trichoderma harzianum T2 tỉ lệ 1:1, siêu âm 1,5 phút, ly tâm thu dịch, trích ly lỏng lỏng diethyl ether thu pha hữu đóng viên nang 4.2 Kiến nghị Khảo sát thời gian siêu âm thích hợp để bảo tồn lượng lipid bào tử phá vỡ Khảo sát ngày phá vỡ để thu hàm lượng lipid tối ưu Đề nghị quy trình siêu âm thu viên nang chứa dầu bào tử phá vỡ 63 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO ♦♦♦ Tài liệu tiếng Việt 1) Lê Xuân Thám, 1996 Nấm Linh Chi nguồn dược liệu quý Việt Nam Nhà xuất Mũi Cà Mau (1996) 2) Trần Thị Huỳnh Mai Tổng quan quy trình phá vỡ bào tử nấm linh chi bước đầu nghiên cứu điều kiện nảy mầm bào tử Đồ án tốt nghiệp Kỹ sư Công nghệ Sinh học, Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh 3) Trần Thị Lệ Minh, 2011 Giáo trình Hóa Dược ứng dụng Bộ môn Công nghệ sinh học, Đại học Nông Lâm Tp.HCM 4) Nguyễn Kim Phi Phụng, Phương pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, 2007 6) Nguyễn Văn Mùi, 2001 Thực hành Hóa Sinh học Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội 7) Nguyễn Lân Dũng, 2001 Công nghệ nuôi trồng nấm Tập 2, nhà xuất Nông nghiệp, 2010 8) Nguyễn Minh Khang, 2005 Khảo s t s inh trưởng nấm L inh Chi đe n (A mau ro de rm a subresinosum, Corner) phát vùng núi Chứa Chan - Việt Nam Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sư Cơng nghệ Sinh học, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 9) GS.TS Ngô Tất Lợi, 2004 Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học 10) Lê Xuân Thám (2005), Nấm Linh Chi Ganodermataceaea Donk NXB Khoa học Kỹ thuật, ♦♦♦ Tài liệu tiếng Anh 11) T.Mizuno: Antitumor Active Substances of Mushroom Fungi, Based Science and Latest Technology on Mushroom, pp 121-135(1991), Nohson Bunka Sha, Tokyo 12) Cheng CR, Yue QX, Wu ZY, et al Cytotoxic triterpenoids from Ganoderma 64 Đồ án tốt nghiệp Lucidum Phytochemistry 2010; 71: 1579-1585 13) Ma L, Wu F, Chen RY Analysis of triterpene constituents from Ganoderma lucidum Acta Pharm Sin.2003;38:50-52 14) Hou CY, Sun YT, Yan L, et al Studies on the chemical constituents of the spores from Ganoderma Lucidum Acta Bot Sin 1988;30(1):66-70 15) De-hui Dai, Wei-lian Hu, Guang-rong Huang and Wei Li 2011 Purification and characterization of a novel extracellular chitinase from thermophilic Bacillus sp Hu1 African Journal of Biotechnology Vol 10(13), pp 2476- 2485 16) Liu GT, Bao X, Niu S, et al Some pharmacological actions of the spores of Ganoderma lucidum and the mycelium of Ganoderma capense (Lloyd) Teng cultivated by submerged fermentation Chin Med J 1979; 92: 469-500 17) Hikino H, et al Mechanisms of hypoglycemic activity of ganoderan B: a glycan of Ganoderma lucidum fruit bodies Planta Med (1989) 18) Kino, K et al., An immunomodulating protein, Ling Zhi—8(LZ—8) prevents insulitis an non—obese diabetic mice; Diabetolgia, vol 33, p 713—718 (1990) 19) ShimiZu, Akria et al.; Isolation of an Inhibitor of Platelet Aggregation from a Fungus, Ganoderma lucidum; Chem Pharm BulL, vol 33, p 3012—3015 (1985) 20) Lee, Seung Y.; Cardiovascular Effects of Mycelium Extract of Ganoderma lucidum: Inhibition of Sympathetic Outflow as a Mechanism of Its Hypotensive Action, Chem Pharm Bull vol 38, p 1359—1364 (1990) 21) Zhang, G L.; Wang, Y H.; Ni, W.; Teng, H L.; Lin, Z B Hepatoprotective role of Ganoderma lucidum polysaccharide against BCG-induced immune liver injury in mice World J Gastroenterol 2002, 8, 728-733 22) Gao, Y.; Gao, H.; Chan, E.; Tang, W.; Xu, A.; Yang, H.; Huang, M.; Lan, J.; Li, X.; Duan, W.; Xu, C.; Zhou, S Antitumor activity and underlying mechanisms of ganopoly, the refined polysaccharides extracted from Ganoderma lucidum, in mice Immunol Invest 2005, 34, 171-198 23) Thyagarajan, A.; Jiang, J.; Hopf, A.; Adamec, J.; Sliva, D Inhibition of 65 Đồ án tốt nghiệp oxidative stress-induced invasiveness of cancer cells by Ganoderma lucidum is mediated through the suppression of interleukin-8 secre-tion Int J Mol Med 2006, 18, 657-664 24) Hansen, L 1958 On the anatomy of the Danish species of Ganoderma Bot Tidsskrifft 54:333 - 352 (1958) 25) Mau JL, Lin HC, Chen CC Antioxidant properties of several medicinal mushrooms JAgric Food Chem (2001) 26) Sye WT 1991 Improvement method of extraction and high performance liquid chromatographic separation of ganoderic acid from Ganoderma Lucidum Journal of the Chinese Chemical Society, 38, pp 179 27) Lui X J.,1994 Hepatopathy and uterofunctional Bleeding mainly Treated with Ganoderma lucidum Proc 94 Inter Sym On Ganoderma Res., p58-9 Beijing, China, 1994 28) Min BS, Nakamura N, Miyashiro H, et al Triterpenes from the spores of Ganoderma Lucidum and their inhibitory activity against HIV-1 protease Chem Pharm Bull.1998;46(10):1607-1612 29) Min BS, Gao JJ, Nakamura N, et al Triterpenes from the spores of Ganoderma Lucidum and their cytotoxicity against meth-A and LLC tumor cells Chem Pharm Bull.1998;48(7):1026-1033 T Mizuno, 1994 Mushroom Science and Biotechnology, 1, 53-59(1994) 30) Chee-Keung Chung, Siu-Kan Tong External preparation for skin containing oleaginous substances extracted from Ganoderma lucidum and method of using the same, 2005 66 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC 3.1.1.1 BIURET KSA PHC 3.1.1.2 Định tính protein BIURET SA 1,5 PHC BIURET SA 2,5 PHC BIURET SA 3,5 PHC BIURET SA 3,5 PN BIURET SA 4,5 PN BIURET SA 4,5 PHC BIURET SA PHC Định tính Saponin Thử nghiệm tạo bọt hai pha dịch trích ly hai mẫu siêu âm 3,5 phút 4,5 phút SA 3,5 PN SA 3,5 PHC SA 4,5 PN SA 4,5 PHC SA 3,5 PHC SA 3,5 PN SA 4,5 PHC SA 4,5 PN Đồ án tốt nghiệp Thử nghiệm Fontan – Kaudel SA 3,5 PHC pH=13 SA 3,5 PHC pH=13 3.1.1.3 SA 3,5 PHC pH=1 SA 3,5 PHC pH=1 SA 3,5 PN pH=13 SA 3,5 PN pH=13 SA 3,5 PN pH=1 SA 3,5 PN pH=1 SA 4,5 PHC pH=13 SA 4,5 PHC pH=13 SA 4,5 PN pH=13 SA 4,5 PHC pH=1 SA 4,5 PHC pH=1 SA 4,5 PN pH=1 SA 4,5 PN pH=13 Định tính carbohydrate MOLISCH KSA PN MOLISCH SA 3,5 PHC MOLISCH SA 3,5 PN MOLISCH SA 4,5 PHC MOLISCH SA 4,5 PN SA 4,5 PN pH=1 Đồ án tốt nghiệp 3.1.1.4 Định tính Triterpenoid SA 3,5 PN SA 4,5 PHC SA 3,5 PHC SA 4,5 PN ... nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi trình lên men vi khuẩn Lactobacillus plantarum bào tử nấm Linh chi Mục đích đề tài Khảo sát sơ thành phần bào tử nấm Linh Chi phá vỡ vách enzyme siêu âm từ... góp phần nhỏ vào việc nghiên cứu xác định hoạt chất có bào tử nấm linh chi, tơi có nghiên cứu sơ thực đồ án tốt nghiệp: ? ?Khảo sát sơ thành phần có bào tử nấm Linh Chi phá vỡ vách enzyme siêu âm? ??... thành phần hóa học dịch trích ly bào tử nấm Linh Chi phá vỡ enzyme siêu âm Định tính định lượng thành phần lại bào tử nấm Linh Chi phá vỡ sau trích ly Đề nghị quy trình phá vỡ bào tử nấm Linh Chi