Nghiên cứu đặc điểm sinh học và khả năng sinh tổng hợp bacteriocin của một số chủng lactococcus phân lập từ sữa

NGUYỄN THỊ ĐÀ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI 0B - LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ SINH HỌC 2006 - 2008 Hà nội 2008 NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP BACTERIOCIN CỦA MỘT SỐ CHỦNG LACTOCOCCUS PHÂN LẬP TỪ SỮA 1B NGUYỄN THỊ ĐÀ HÀ NỘI, 2008 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP BACTERIOCIN CỦA MỘT SỐ CHỦNG LACTOCOCCUS PHÂN LẬP TỪ SỮA 04.3898 NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGUYỄN THỊ ĐÀ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ THANH BÌNH HÀ NỘI, 2008 ii LỜI CÁM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc PGS.TS Lê Thanh Bình – Phịng Các chất hoạt tính sinh học từ vi sinh vật – Viện Cơng nghệ sinh học, nhiệt tình dạy bảo, truyền đạt kinh nghiệm quý báu cho tơi suốt q trình nghiên cứu để tơi hồn thành luận văn Tôi xin cám ơn Th.S Hoa Thị Minh Tú - Phòng Các chất hoạt tính sinh học từ vi sinh vật – Viện Cơng nghệ sinh học, nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực luận văn Tơi xin chân thành cám ơn trung tâm đào tạo sau đại học, trường Đại học Bách khoa Hà Nội; Ban Lãnh Đạo viện Công nghệ sinh học – Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam tồn thể thầy giáo dạy dỗ tạo điều kiện cho thực luận văn Tôi xin gửi lời cám ơn tới tất anh chị, bạn đồng nghiệp Phịng Các chất hoạt tính sinh học từ vi sinh vật – Viện Công nghệ sinh học giúp đỡ suốt thời gian học tập nghiên cứu Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè, người thân ln ủng hộ góp ý cho suốt thời gian học tập công tác Hà Nội, ngày tháng năm 2008 Nguyễn Thị Đà iii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa……………………………………………………………… i Lời cám ơn………………………………………………………………… ii Mục lục…………………………………………………………………… iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt…………………………………… v Danh mục bảng………………………………………………………… vi Danh mục hình vẽ, đồ thị……………………………………………… viii MỞ ĐẦU………………………………………………………………… Chương - TỔNG QUAN……………………………………………… 1.1 Vi khuẩn lactic………………………………………………………… 1.1.1 Giới thiệu chung…………………………………………………… 1.1.2 Sự phát sinh loài…………………………………………………… 1.1.3 Phân loại vi khuẩn lactic 1.1.4 Ứng dụng vi khuẩn lactic……………………………………… 10 1.2 Bacteriocin…………………………………………………………… 14 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu bacteriocin………………………………… 14 1.2.2 Bacteriocin vi khuẩn lactic…………………………………… 15 Chương – VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP………………………… 34 2.1 Chủng giống môi trường………………………………………… 34 2.1.1 Chủng vi sinh vật…………………………………………………… 34 2.1.2 Môi trường…………………………………………………………… 34 2.2 Phương pháp nghiên cứu…………………………………………… 35 2.2.1 Xác định hoạt tính bacteriocin……………………………………… 35 2.2.2 Quan sát hình thái tế bào…………………………………………… 37 2.2.3 Xác định số đặc điểm sinh lý, sinh hóa ……………………… 37 iv 2.2.4 Xác định khả kháng kháng sinh nisin…………………… 39 2.2.5 Phương pháp lên men thu hồi bacteriocin dung môi……… 39 2.2.6 Xác định số đặc điểm bacteriocin………………………… 40 2.2.7 Tách chiết DNA plasmid…………………………………………… 41 2.2.8 Điện di protein gel polyacrylamide (SDS – PAGE)………… 42 Chương – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………………… 45 3.1 Nghiên cứu số đặc tính chủng………………………… 45 3.1.1 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa ……………………………… 45 3.1.2 Đặc tính kháng kháng sinh kháng nisin………………………… 47 3.1.3 Nghiên cứu nhu cầu dinh dưỡng tác động yếu tố môi trường sinh tổng hợp bacteriocin chủng………………… 54 3.2 Nghiên cứu thu hồi bacteriocin phương pháp kết tủa ethanol 72 3.3 Nghiên cứu số tính chất chế phẩm………………………… 74 3.3.1 Ảnh hưởng pH lên độ bền bacteriocin thu hồi……… 74 3.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ lên độ bền bacteriocin thu hồi… 76 3.3.3 Ảnh hưởng kết hợp nhiệt độ pH lên độ bền bacteriocin thu hồi………………………………………………………… 78 3.3.4 Phản ứng với enzyme phân hủy protein……………………… 80 3.3.5 Phân tích điện di protein gel polyacrylamid (SDS-PAGE)…… 81 Chương - KẾT LUẬN …………………….…………………………… 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO……………………………………………… 85 v DANH MỤC CÁC THUẬT NGỮ VÀ KÝ HIỆU VIẾT TẮT CHỮ VIẾT TẮT CHỮ VIẾT ĐẦY ĐỦ APS Amoni persulfate AU Activity unit – đơn vị hoạt tính bp Base pair – cặp bazơ BU Bacteriocin unit – Đơn vị bacteriocin cs Cộng DNA Deoxyribonucleic acid EDTA Ethilenediaminetetra acetic acid G- Vi khuẩn Gram âm G+ Vi khuẩn Gram dương GRAS Generally recognized as safe – coi an toàn IU International unit – Đơn vị quốc tế LAB Lactic acid bacteria – vi khuẩn lactic MIC Minimal inhibition concentration – Nồng độ ức chế tối thiểu MRS De Man - Rogosa - Shape SDS Sodiumdodecylsulfat STT Số thứ tự TE Tris - EDTA VSV Vi sinh vật vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa chủng 46 Bảng 3.2 Tính nhạy kháng sinh chủng PĐ14, BV20, PĐ2.9 49 Bảng 3.3 Số lượng tế bào chủng nghiên cứu sống sót 52 mơi trường bổ sung nisin nồng độ khác Bảng 3.4 Khả sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin 55 chủng PĐ 14, BV20 PĐ 2.9 Bảng 3.5 Động thái sinh trưởng, sinh tổng hợp bacteriocin 56 chủng Bảng 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến khả sinh 60 tổng hợp bacteriocin Bảng 3.7 Ảnh hưởng pH ban đầu đến khả sinh trưởng 64 sinh tổng hợp bacteriocin Bảng 3.8 Ảnh hưởng NaCl đến khả sinh trưởng sinh 66 tổng hợp bacteriocin chủng BV20, 2.9, PĐ14 Bảng 3.9 Khả sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin 68 chủng mơi trường có nguồn cacbon khác 10 Bảng 3.10 Ảnh hưởng hàm lượng sacharose lên sinh 70 trưởng sinh tổng hợp bacteriocin chủng 11 Bảng 3.11 Ảnh hưởng nguồn N đến sinh trưởng sinh tổng 71 hợp bacteriocin chủng 12 Bảng 3.12 Hoạt tính bacteriocin kết tủa nồng độ ethanol 72 khác 13 Bảng 3.13 Kết thu hồi sản phẩm bacteriocin phương pháp kết tủa ethanol 73 vii 14 Bảng 3.14 Ảnh hưởng pH đến độ bền hoạt tính bacteriocin 75 15 Bảng 3.15 Ảnh hưởng nhiệt độ đến độ bền bacteriocin 77 chủng 16 Bảng 3.16.Ảnh hưởng kết hợp nhiệt độ pH lên độ bền 79 bacteriocin 17 Bảng 3.17 Ảnh hưởng số enzym lên độ bền bacteriocin 80 viii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Sơ đồ phát sinh vi khuẩn lactic bao gồm số vi khuẩn hiếu khí kỵ khí tùy tiện dựa hàm lượng G+C Hình 1.2 Hai đường để lên men glucose Hình 1.3 Sơ đồ đường sinh tổng hợp lantibiotics 22 Hình 1.4 Sơ đồ đường sinh tổng hợp bacteriocin nhóm II 23 Hình Quy trình xác định hoạt tính bacteriocin phương pháp 36 khuếch tán thạch Hình 3.1 Ảnh Nhuộm G kính hiển vi Olimpus CH - độ phóng 45 đại 1000 lần Hình 3.2 Đặc điểm hình thái tế bào chủng vi khuẩn lactic chụp 45 kính hiển vi điển tử (phóng đại 10.000 lần) Hình 3.3 Kết điện di plasmid chủng nghiên cứu Hình 3.4 Đồ thị tỷ lệ phần trăm số tế bào sống sót mơi trường bổ 53 51 sung nisin nồng độ khác 10 Hình 3.5 Hoạt tính bacteriocin tế bào chủng BV20 sống sót 54 mơi trường bổ sung nisin nồng độ khác 11 Hình 3.6 Động thái sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin 57 chủng PĐ14 thời gian từ - 48h ni cấy 12 Hình 3.7 Động thái sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin 57 chủng BV20 thời gian từ - 48h ni cấy 13 Hình 3.8 Động thái sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin 58 chủng PĐ2.9 thời gian từ - 48h ni cấy 14 Hình 3.9 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến khả sinh trưởng, 60 phát triển sinh bacteriocin chủng PĐ14 15 Hình 3.10 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến khả sinh 61 ix trưởng, phát triển sinh bacteriocin chủng BV20 16 Hình 3.11 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến khả sinh 61 trưởng, phát triển sinh bacteriocin chủng PĐ2.9 17 Hình 3.12 Ảnh hưởng pH ban đầu đến khả sinh tổng hợp 63 bacteriocin chủng PĐ14 18 Hình 3.13 Ảnh hưởng pH ban đầu đến khả sinh tổng hợp 63 bacteriocin chủng BV20 19 Hình 3.14 Ảnh hưởng pH ban đầu đến khả sinh tổng hợp 64 bacteriocin chủng PĐ2.9 20 Hình 3.15 Hoạt tính bacteriocin chủng PĐ14 mơi trường 67 có bổ sung nồng độ muối khác 21 Hình 3.16 Ảnh hưởng PH đến độ bền hoạt tính bacteriocin 75 22 Hình 3.17: Ảnh hưởng nhiệt độ đến độ bền hoạt tính dịch kết 77 tủa 23 Hình 3.18 Ảnh hưởng nhiệt độ lên độ bền hoạt tính bacteriocin sản 78 phẩm kết tủa chủng PĐ14 24 Hình 3.19 Ảnh hưởng pH nhiệt độ lên độ bền hoạt tính 79 bacteriocin chủng PĐ14 25 Hình 3.20 Ảnh hưởng Enzym phân hủy protein độ bền 81 hoạt tính bacteriocin sản phẩm 26 Hình 3.21 Kết điện di SDS – PAGE gel polyacrylamide 82 82 phù hợp với nghiên cứu chung công bố nhạy cảm sản phẩm bacteriocin với enzyme phân hủy protein [33, 43, 62, 81, 86, 88] Trypsin enzym có tác dụng nhiều đến độ bền hoạt tính ba chủng PĐ14, BV20, PĐ2.9 (hình 3.20) Hình 3.20 Ảnh hưởng Enzym phân hủy protein độ bền hoạt tính bacteriocin sản phẩm Bacteriocin chủng PĐ14 chịu ảnh hưởng mạnh ba enzym trypsin, protease K α - chymotrypsin không cho thấy dấu hiệu chịu ảnh hưởng hai enzym papain bromelin (chúng giữ 100% hoạt tính) Trong đó, bacteriocin chủng BV20 nhạy cảm với hai enzym trypsin α - chymotrypsin, giữ khoảng 64% hoạt tính so với hoạt tính ban đầu xử lý với hai enzym Bacteriocin chủng PĐ2.9 lại nhạy cảm với protease K, trypsin, papain 3.3.5 Phân tích điện di protein gel polyacrylamid (SDS-PAGE) 83 Phân tích sản phẩm thu hồi phương pháp điện di gel polyacrylamide trình bày trình bày phần 2.2.8 Kết điện di trình bày hình 3.21 Kết điện di hình 3.21 cho thấy sản phẩm bacteriocin thu hồi phương pháp kết tủa ethanol ba chủng tạo vạch có kích thước gần tương đương với kích thước sản phẩm nisin chuẩn [26, 27, 31, 37, 44], ước tính kích thước sản phẩm thu khoảng 3.3kDa Để rõ sản phẩm bacteriocin chủng cần nghiên cứu sâu kDa 116 25 14.4 Bacteriocin Hình 3.21 Kết điện di SDS – PAGE gel polyacrylamide 1- Mẫu nisin chuẩn; 2, 4, – Kết điện di bacteriocin chủng PĐ14, BV20, PĐ2.9; - M – Marker 84 Chương - KẾT LUẬN Các chủng PĐ14, BV20, PĐ2.9 có đặc điểm hình thái sinh lý, sinh hóa, phổ kháng khuẩn, tính kháng kháng sinh tương đồng với lồi Lactococcus lactis cơng bố Các chủng có tế bào hình cầu, xếp đơi hay đám; khuẩn lạc nhỏ trịn, mép trơn, có màu trắng Chủng PĐ14, BV20, PĐ2.9 chủng G+, hoạt tính catalase, khơng sinh bào tử, khơng di động, khơng sinh khí Cả ba chủng sinh trưởng mơi trường có pH = 9; nồng độ NaCl 6.5%, 100C không sinh trưởng môi trường có pH = 4; pH = 5; nhiệt độ 450C Động thái sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin chủng PĐ14 tốt môi trường MRS có nguồn C saccharose với hàm lượng 25g/l; hoạt tính thu tốt khoảng thời gian nuôi cấy 14–18h 300C Chủng BV20 sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin mơi trường MRS có bổ sung saccharose với hàm lượng 20g/l, sinh trưởng sinh tổng hợp bacteriocin chủng PĐ2.9 tốt mơi trường MRS có nguồn glucoza thay saccharose với hàm lượng 15g/l Các chủng PĐ14, BV20, PĐ2.9 có khả sống sót mơi trường chọn lọc có bổ sung nisin nồng độ 600, 900, 1800, 3600, 5400 IU/ml Tỷ lệ tế bào sống sót mơi trường tỷ lệ nghịch với nồng độ nisin bổ sung vào môi trường Nồng độ ethanol thích hợp để kết tủa bacteriocin chủng PĐ14 BV20 70%; Đối với chủng PĐ2.9, nồng độ ethanol thích hợp để kết tủa thu bacteriocin 60% Khối lượng sản phẩm bacteriocin PĐ14 thu m = 0.9974g/l, hàm lượng protein kết tủa 85 thu 10.126mg/ml hoạt tính bacteriocin 6400AU/ml Bacterocin BV20 thu có hàm lượng protein 7.2406mg/ml haọt tính bacteriocin 6400AU/ml Bacteriocin PĐ2.9 thu có hàm lượng protein 8.1547mg/ml hoạt tính thu 3200AU/ml Bacteriocin chủng PĐ14, PĐ2.9 BV20 bền nhiệt, bền axit Các bacteriocin khơng hoạt tính xử lý 1210C, 20 phút hoạt động tốt môi trường có dải pH từ đến 7, bị hoạt tính mơi trường kiềm Phản ứng với enzym phân hủy protein cho thấy bacteriocin chủng PĐ14 nhạy cảm với enzym trypsin, protease K α - chymotrypsin, bacteriocin chủng BV20 nhạy cảm với hai enzym trypsin α - chymotrypsin, bacteriocin chủng PĐ2.9 lại chịu ảnh hưởng protease K, trypsin papain Kết điện di bacteriocin thu từ chủng PĐ14, BV20 chủng PĐ2.9 cho thấy bacteriocin giống có kích thước khoảng 3.3 kDa, tương đồng với kích thước nisin 86 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Lý Kim Bảng, Lê Thanh Bình, Tạ Kim Chỉnh (1988), “Ứng dụng vi khuẩn lactic việc bảo quản thức ăn xanh cho trâu bị”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Nơng nghiệp, 10, tr.455–457 Lê Thanh Bình (1997), Vi khuẩn lactic kỹ thuật gen, vấn đề triển vọng sản xuất thực phẩm, Unesco Workshop Hanoi, 20 26/10/1997, tr.1 –11 Lê Thanh Bình, Phạm Thị Ngọc Lan (1997), “Lên men vi khuẩn lactic phế thải hữu cơ, giải pháp hữu hiệu để bảo quản tái thu hồi”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 36(3), tr.13-16 Lê Thanh Bình, Phạm Thị Ngọc Lan, trần Thị Thúy, Phan Thị Khánh Hoa (2000), Sự đa dạng vi khuẩn lactic sinh tổng hợp bacteriocin, Hội nghị sinh học quốc gia, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, trang Nguyễn Việt Cường, Phan Khánh Hoa, Lê Thanh Bình (2002), “Tối ưu hóa sinh tổng hợp nisin chủng Lactococcus lactis subsp lactis 11”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 40(6), tr.24-31 Nguyễn Việt Cường, Trần Thị Thúy, Phạm Thị Ngọc Lan Lê Thanh Bình (1999), Ảnh hưởng hỗn hợp hàm lượng glucoza, pepton pH ban đầu lên sinh tổng hợp bacteriocin chủng vi khuẩn lactis Enterococcus sp Tn 143 Kỷ yếu Viện Công nghệ sinh học, TTKHTN&CNQG, tr 65-75 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (1997), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, tr.176-189, tr.224–230 Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo (1996), Vi sinh học NXB Giáo dục, tr.133-138 87 Phan Khánh Hoa, Nguyễn Việt Cường, Lê Thanh Bình (2001), “Ảnh hưởng số nguồn khoáng nitơ lên sinh tổng hợp nisin chủng Lactococcus lactis subsp lactis 11”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 39(5), tr.37-43 10 Phan Thị Khánh Hoa (2003), Nghiên cứu sinh tổng hợp nisin từ vi khuẩn Lc lactis subsp lactis 11, Luận án Tiến sĩ Kỹ thuật, Viện Công nghiệp Thực phẩm 11 Phạm Thị Ngọc Lan, Lại Thị Chí, Lê Thanh Bình (1997), Nghiên cứu tính kháng kháng sinh số chủng vi khuẩn lactic, UNESCO-National Workshop on Application of microbiology in food processing and beverage Hanoi 12 Hồ Sưởng, Lương Đức Phẩm (1996), Vi sinh vật bảo quản, chế biến thực phẩm, NXB Giáo Dục, tr.14, 41–44, 140–144, 185–288 13 Trần Linh Thước (2002), Phương pháp phân tích vi sinh vật học nước, thực phẩm mỹ phẩm, NXB Giáo dục, Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH 14 Adams M.R., Nout M.J.R (2001), Fermentation and Food Safety Aspen Publishers, Gaithersburg, Maryland 15 Bailey F.J., Hurst A (1971), “Preparation of highly active form of nisin from Streptococcus lactis, Canadian”, J of Microbiol, 17, pp.61–67 16 Batdorj B., Dalgalarrondo M., Choiset Y., Pedroche J., Métro F., Prévost H., Chobert J.M and Haertle´T (2006), “Purification and characterization of two bacteriocins produced by lactic acid bacteria isolated from Mongolian airag”, J.of Appl.Microbiol, 101, pp.837-848 17 Breukink E and Kruijff B.D (2006), Review - Lipid II as a target for antibiotics, Nature Reviews Drug Discovery Published online 10 March 2006, pp.1 – 12 88 18 Bromberg R., Moreno I., Delboni R.R., Cintra H.C and Oliveira P.T.V (2005), “Characteristics of the bacteriocin produced by Lactococcus lactis subsp cremoris CTC 204 and the effect of this compound on the mesophilic bacteria associated with raw beef”, W.J of Microbiol & Biotechnol, 21, pp.351–358 19 Bromberg R., Moreno I., Zaganini C.L., Delboni R.R., de Oliveira J (2004), “Isolation of bacteriocin-producing lactic acid bacteria from meat and meat products and its spectrum of inhibitory activity”, Braz.J.Microbiol, 35(1-2), pp.137-144 20 Bruno M.E.C., Monteville T.J ( 1993), “Common mechanistic action of bacteriocin from lactic acid bacteria”, Appl.Environ.Microbiol, 59, pp.30033010 21 Burianek L.L and Yousef A.E (2000), “Solvent extraction of bacteriocins from liquid cultures”, Let in Appl.Microbiol, 31, pp.193-197 22 Busconi M., Reggi S and Fogher C (2008), “Evaluation of biodiversity of lactic acid bacteria microbiota in the calf intestinal tracts”, Antonie van Leeuwenhoek, 94, pp.145–155 23 Cai Y (1996), Isolation and characterization of nisin-producing Lactococcus lactis subsp lactis from bean sprouts, A thesis Master of Sciences, University of Ottawa, Canada 24 Cai Y., Benno Y., Ogawa M., Ohmomo S., Kumai S And Nakase T (1998), “Influent of Lactobacillus sp from inoculant and of Weissella and Leuconostoc sp from forage crops on silage fermentation”, Appl.and Environmen.Microbiol, 64, pp.2982–2987 25 Cai Y., Ohmomo S., Ogawa M and Kumai S (1997), “Effect of NaCl– tolerant lactic acid bacteria and NaCl on the fermentation characteristics and aerobic stability of silage”, J.of Appl.Microbiol, 83, pp.307–313 89 26 Chen H and Hoover D.G (2003), “Bacteriocins and their food applications”, Comprehensive reviews in food science and food safety, 2, pp.82–100 27 Choi H.J., Cheigh C.I., Kim S.B and Pyun Y.R (2000), “Production of a nisin-like bacteriocin by Lactococcus lactis subsp lactis A164 isolated from Kimchi”, J.of Appl.Microbiol, 88, pp.563-571 28 Cleveland J., Montville T.M., Nes I.F and Chikindas M.L (2001), “Bacteriocins: safe, natural antimicrobials for food preservation”, Int J.Food Microbiol, 71, pp.1–20 29 Corroler D., Mangin I., Desmasure N., and Gueguen M (1998), “An ecological study of lactococci isolated from raw milk in the camembert cheese registered designation of origin area”, Appl.and Environ.Microbiol, 64(12), pp.4729-4735 30 Cotter P.D., Hill C and Ross P (2005), “Bacteriocins: developing innate immunity for food”, Nat Rev.Microbiol, 3, pp.777–788 31 Davidson P.M., Sofos J.N., Branen A.L (2005), Antimicrobials in food, Third Edition, CRC Press Taylor & Francis Group 32 De Vuyst L., Leroy F (2007), “Bacteriocin from lactic acid bacteria: Production, purification and food applications”, J.Mol.Microbial.Biotechnol, 13, pp.194-199 33 De Vuyst L., Callewaert R., Pot B (1996), “Characterization and antagonistic activity of Lactobacillus amylovorus DCE471 large scale isolation of its bacteriocin amylovorin L471”, Sys.Appl.Microbiol, 19,pp.9-20 34 De Vuyst L., Vandamme E.J (1992), “Influence of the carbon source on nisin production in Lactococcus lactis subsp lactis batch fermentation”, J.of General.Microbiol, 138, pp.571–578 90 35 De Vuyst L (1995), “Nutritional factors affecting nisin production by Lactococcus lactis subsp lactis NIZO 22186 in a synthetic medium”, J.of Appl.Bacteriol, 78, pp.28–33 36 De Vuyst.L., Vandamme E.J.(1994), “Nisin a lantibiotic proceduced by Lactococcus lactis subsp lactis: properties, biosynthesis, fermentation and applications, in Bacteriocins of Lactic acid bacteria, eds Vuyst D.L & Vandamme E.J ”, Blackei Academic and Professional, Glasgow, pp.151–221 37 Delves-Broughton J (2005), “Nisin as a food preservative”, Food Australia, 57, pp 525 – 527 38 Dimov S.G (2007), “a novel bacteriocin – like substance produced by Enterococcus facium 3587”, Curent Microbiology, 55, pp.323–327 39 Diop M.B., Dubois- Dauphin R., Tine E., Ngom A., Destain J., Thonart P (2007), “Bacteriocin producers from traditional food products”, Biotechnol Agron.Soc.Environ, 11(4), pp.275–281 40 Dodd M.H., Horn N., Gasson M.J (1994), Bacteriocin of lactic acid bacteria, in genetics and biotechnology of lactic acid bacteria, Blackie Academic & professional, p 211 – 251 41 Drider D., Fimland G., Héchard Y., McMullen L.M and Prévost H (2006), “The continuing story of class IIa bacteriocins”, Microbiol.Mol.Bio.Revs, 70(2), pp.564-582 42 Ennahar S., Sashihara T., Sonomoto K., Ishizaki A (2000), “Class IIa bacteriocins: Biosynthesis, structure and activity”, FEMS Microbiol.Revs, 24, pp.85–106 43 Ferchichi M., Frère J., Mabrouk K., Manai M (2001), “Lactococcin MMFII, a novel class IIa bacteriocin produced by Lactococcus lactis MMFII, isolated from a Tunisian dairy product”, FEMS Microbiol.Lets, 205, pp.49-55 91 44 Food standars Australia New Zealand Initial assessment report application A565 Nisin-extension of use as food additive August 2006 45 Garriga M., Hugas M., Aymerich T and Monfort J.M (1993), “Bacteriocinogenic activity of lactobacilli from fermentated sausages”, J.of Appl.Bacteriol, 75, pp.142–148 46 Garriga M., Pascual M., Monfort J.M and Hugas M (1998), “Selection of lactobacilli for chicken probiotic adjuncts”, J.of Appl.Microbiol, 84, pp.125132 47 Gasson M.J (1993), “Progress and potential in biotechnology of lactic acid bacteria”, FEMS Microbiol Rev, 12, pp.3 –20 48 Ghrairi T., Manai M., Berjeaud J.M and Frère J (2004), “Antilisterial activity of lactic acid bacteria isolated from rigouta, a traditional Tunisian cheese” J.of Appl.Microbiol, 97, pp.621–628 49 Harris L.J., Fleming H.P and Klaenhammer T.R (1992), “Characterization of two nisin–producing Lactococcus lactis subsp lactis strains isolated from a Commercial Sauerkraut fermentation”, Appl.and Environ.Microbiol, 58(5), pp.1477–1483 50 Hernández D., Cardell E and Zárate V (2005), “Antimicrobial activity of lactic acid bacteria isolated from Tenerife cheese: initial characterization of plantaricin TF711, a bacteriocin-like substance produced by Lactobacillus plantarum TF711”, J.of Appl.Microbiol, 99, pp.77–84 51 Hoa T.M.Tu, Nguyen Thi Da, Le Hue Anh and Le Thanh Binh (2008), “Screening Lactic Acid Bacteria Producing bacteriocins from cow’s raw milk ans fecal”, Tạp chí khoa học Công nghệ (đã duyệt đăng) 52 Jack R.W., Tagg J.R and Ray B (1995), “Bacteriocins of Gram-positive bacteria” Microbiol.Rev, 59(2), pp.171–200 92 53 Klaenhamer T.R (1993), “Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria”, FEMS Microbiol Rev, 12, pp.39–86 54 Kurzak P (1998), “Diversity of lactic acid bacteria associated with ducks”, Systerm.Appl.Microbiol, 21, pp.588–592 55 Lazdunski C.J., Geli V (2000), “Bacteriocins”, Encyclopaedia of Molecular Biology, 3, pp.1909–1914 56 Le Thanh Binh, Pham T.Ngoc Lan and Y Benno (1999), “Probiotic effect of two lactobacillus strains on chicken production”, Proceedings of International Conference on Asian Network on Microbial Research, Chiangmai, Thailand, pp: 233-239 57 Le Thanh Binh (1993), “Identification of several lactic acid bacteria isolation from Viet Nam and Italians foods”, European Conference on Biotechnology, 14–18Aug, Florence 58 Le Thanh Binh, Pham Thi Ngoc Lan (1997), “Lactic acid bacteria fermentation of by–products of fishing and fisheries processing for the source of animal feed”, Processing of NCST of Viet nam, 9, pp.101–108 59 Makarova K.S and Koonin E.V (2007), “Evolutionary genomics of Lactic Acid Bacteria”, J.of Bacteriol., 189(4), pp.1199–1208 60 Maqueda M., Sánchez-Hidalgo M., Fernández M., Montalbán-lopez M., Valdivia E & Martínez-Bueno M (2007), “Review article: Genetic features of circular bacteriocins produced by Gram-positive bacteria”, FEMS Microbiol.Rev, 32, pp.2-22 61 Mareková M., A Lauková., Skaugen M., Nes I (2007), “Isolation and characterization of a new bacteriocin, termed enterocin M, produced by environmental isolate Enterococcus Microbiol.Biotechnol , 34, pp.533–537 faecium AL41”, J.Ind 93 62 Martínez-Cuesta M.C., Buist G., Kok J., Hauge H.H., Nissen-Meyer J., Peláez C and Requena T (2000), “Biological and molecular characterization of a two-peptide lantibiotic produced by Lactococcus lactis IFPL105”, J.of Appl.Microbiol, 89, pp.249-260 63 McAuliffe O., Ross R.P., Hill C (2001), “Lantibiotics: structure, biosynthesis and mode of action”, FEMS Microbiology Rev, 25, pp.285-308 64 Mills S., McAuliffe O.E, Coffey A., Fitzgerald G.F & PaulRoss R (2006), “Plasmids of lactococci genetic accessories orgenetic necessities?”, FEMS Microbiol.Rev, 30, 243–273 65 Mitra S., Chakbartty P.K., Biswas S.R (2005), “Production and characterization of Nisin-like peptide produced by strain of Lactococcus lactis isolated from fermented milk”, Current Microbiology, 51, pp.183–187 66 Mollendorff J.W.V., Todorov S.D., Dicks L.M.T (2006), “Comparison of bacteriocins produced by lactic-acid bacteria isolated from Boza, a cerealbased fermented beverage from the Balkan Peninsula”, Current Microbiology, 53, pp.209–216 67 Nes I.E., Diep D.B., Havarstein L.S., Brurberg M.B., Eijsink V& Holo H (1996), “Biosynthesis of bacteriocins in lactic acid bacteria”, Antonie van Leeuwenhoek, 70, pp.113-128 68 Papagianni M., Avaramidis N., FilioussisG., Dasiou D and Ambrosiadis J (2006), “Determination of bacteriocin activity with bioassays out on solid and liquid substrates: assessing the factor “indicator microorganism””, Microbial Cell Factories, 10, pp.1-14 69 Parente E., Hill C (1992), “A comparition of factors affecting the production of two bacterions from lactic acid bacteria”, J.of Appl.Bacteriol, 73, pp.290–298 94 70 Park S.H., Itoh K., Fujisawa T (2003), “Characteristics and identification of enterocins produced by Enterococcus faecium JCM5804”, J.of Appl Microbiol, 95, pp.294–300 71 Ravindran A.G., Bindhumol I., Rojan J.P., Kesavan N.M (2008), “Evaluation of the probiotic characteristics of newly isolated lactic acid bacteria”, Appl.Biochem.Biotechnol, pp.1-12 72 Reunanen J (2007), Lantibiotic nisin and its detection methods, Division of Microbiology Department of Applied Chemistry and Microbiology University of Helsinki, Finland 73 Riley M.A., Chavan M.A (2007), Bacteriocins Ecology and Evolution, Springer- Verlag Berlin Heidelberg 74 Rodriguez J.M., Cintas L.M., Casaus P., Horn N., Dodd H.M., Hernandez P.E., Gasson M.J (1995), “Isolation of nisin – production Lactococcus lactis strain from dry fermented sausages”, J.Appl.Bacteriol, 78, pp.109–115 75 Salminen M.A, Deighton M.A., Benno Y., Gorbach S.L (1998), Lactic acid bacteria in health disease, in Lactic acid bacteria Microbiology and functional aspects Marcel Delker Inc, pp.211–252 76 Salminen S., Von Wright A., Ouwehand A (2004), Lactic Acid Bacteria Marcel Dekker, Inc 77 Sneath P.H.A., Mair N.S., Sharpe M.R., Holt J.G (1986), Bergey’s manual of systematic bacteriology, Williams & Wilkins, 2, pp.1043–1081, pp.1209–1221 78 Spencer J.F.T., Ragout de Spencer A.L (2001), Food Microbiology Protocols, Humana Press Totowa, New Jersey 79 Tagg J.R., Dajani A.S., Wannamarker L.W (1976), “Bacteriocin of Gram positive bacteria”, Bacteriol.Rev, 40, pp.722–756 95 80 Teuber M., Meile L., Schwarz F (1999), “Acquired antibiotic resistance in lactic acid bacteria from food”, Antonie van Leeuwenhoek, 76, pp.115–137 81 Tiwari S & Srivastava S (2008), “Purification and characterization of plantaricin LR14: a novel bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum LR/14”, Appl.Microbiol.Biotechnol, 79, pp.759–767 82 Todorov S.D., Dicks L.M.T (2005), “Optimization of Bacteriocin ST311LD Production by Enterococcus faecium ST311LD, Isolated from Spoiled Black Olives”, J.of Microbiol, 43(4), pp.370-374 83 Todorov S.D., Van Reenen C.A., Dicks L.M.T (2004), “Optimization of bacteriocin production by Lactobacillus plantarum ST13BR, a strain isolated from barley beer”, J.Gen.Appl.Microbiol, 50, pp.149–157 84 Tolonen M (2004), The formation and antimicrobial activity of nisin and plant derived bioactive components in lactic acid bacteria fermentations, Doctoral Dissertation, Agrifood Research Report 43, Finland 85 Twomey D., Ross R.P., Ryan M., Meaney B & Hill C (2002), “Lantibiotics produced by lactic acid bacteria: structure, function and applications”, Antonie van Leeuwenhoek, 82, pp.165–185 86 Vaughan E.E., Daly C., Frizgerald G.F (1992), “Identification and characterization of helveticin V–1829”, J.of Appl.Bacteriol, 73, pp.299–308 87 Verellen T.L.J., Bruggeman G., Van Reene C.A., Dicks L.M.T., Vandamme E.J (1998), “Fermentation optimization of plantaricin 423, a bacteriocin produce by Lactobacillus plantarum 423”, J.of Fermen.Bioengin, 86(2), pp.174–179 88 Villani F., Aponte M., Blaiotta G., Mauriello G., Pepe O., Moschetti G (2001), “Detection and characterization of a bacteriocin, garviecin L1-5, produced by Lactococcus garvieae isolated from raw cow’s milk”, J.of Appl.Microbiol, 90, pp.430–439 96 89 Yanagida F., Chen Y., Onda T and Shinohara T (2005), “Durancin L28 1A, a new bacteriocin from Enterococcus durans L28-1, isolated from soil”, Let.Appl.Microbiol, 40, pp.430–435 90 Zhu W.M., Liu W., Wu D.Q (2000), “Isolation and characterization of a new bacteriocin from Lactobacillus gasseri KT7”, J.Appl.Microbiol, 88, pp.877–886 ... tài: ? ?Nghiên cứu đặc điểm sinh học khả sinh tổng hợp bacteriocin số chủng Latococcus phân lập từ sữa? ??, với mục đích đặt ra: Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hố chủng Nghiên cứu hoạt... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP BACTERIOCIN CỦA MỘT SỐ CHỦNG LACTOCOCCUS PHÂN... kháng khuẩn, khả sinh tổng hợp bacteriocin Nghiên cứu đặc điểm kháng kháng sinh Nghiên cứu nhu cầu dinh dưỡng tác động số yếu tố môi trường Nghiên cứu phương pháp thu hồi sản phẩm Nghiên cứu tính