Nghiên cứu của các tác giả cho thấy nồng độ DNA phôi thai tự do trong huyểt tương thai phụ tăng tương ứng với tuổi thai và được tăng lên một cách có ý nghĩa tròng thai ky có liên qu[r]
(1)KÉT LUẬN
Nghiên cứu khả gắn phức hợp nimotuzumab'131! với tế bào A549 invitro nghiên cứu tác dụng kháng ung thư phồi không tế bào nhỏ mơ hình chuột nude đữợc ghép tế bao A549 (UTPKTBN), chúng tơi rúí sổ kết luận sau:
Ty lệ gắn: Nimotuzumab-1311 gắn bão hòa vào thụ ihể EGFR tế bào ung thu' phổi người A549 là43-47 %, mật độ tế bào 0,3 x10 7TB
Kểí phân bố chụp SPECT: Nimotuzumab- 131! tập trung nhiều máu, gan, thận, phổi 24- 48h đầu, sau 72h phức hợp nimotuzumab- 1311 tập írung mơ ung thư nhiều quan thể
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Boland w , Bebb G (2010) The emerging role of nimotuzumab in the treatment of non-small cell iung cancer Biologies, 4, 289-98
2 Rolando Perez, Moreno E., Garrido G eỉ (2011) EGFR-Targeting as a Biological Therapy: Understanding Nimotuzumab’s Clinical Effects Cancer, 3(2) r Biologies,
s DỤNG KỸ THUẬT REAL TIME PCR ĐỊNH LƯỢNG DNA PHÔI THAI TRONG HUYÉT TƯƠNG THAI PHỤ
Tên tác giả: Nguyễn T hị Phương Lan (Thạc sĩ, B ộ m ôn Y h ọ c c s J r n g Đ H D ược Hà Nội) Giáo vièn hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thanh Thuy (Bộ m ôn Sinh lý bệnh - Miễn dịch, T rường Đ ại học Y Hà Nội) PGS.TS Nguyễn Đức Hinh, TS Nguyễn Duy Ánh (Bộ m ôn s n p h ụ khoa, T rường Đ i họ c Y Hà Nội) TĨM TẮT
Việc DNA phơi thai tự huyết tương mẹ năm 1997 đă mờ khả m ới cho chần đoốn trước sinh không xâm lấn Nghiên cứu tác giả cho thấy nồng độ DNA phôi thai tự huyểt tương thai phụ tăng tương ứng với tuổi thai tăng lên cách có ý nghĩa trịng thai ky có liên quan đến: sinh non, tiền sản giật, trisomy 21, /3-thalasemie, xóa nhanh chơng sau sinh Hiện tại, chưa có bậc thang nồng độ thương mại DNA phôi thai tự huyết tương thai phụ xây dựng để s ù dụng kỹ thuật Realtime PCR, mục tiêu:i Xây dựng đường chuẩn sử dụng kỹ thuật Realtime PCR định lượng DNA phôi thai tự huyết tương thai phụ ĐĨnh lượng nồng độ DNA phôi thai tự trvng huyet tương thai phụ bình thường Định lượng nồng độ DNA phôi thai tự huyết tương thai phụ tiền sản giậtC hất liệu nghiên cứu: 5ml mâu cửa thai phụ bình thường (30 thai phụ/lần cốc thời điểm tuần: 12-14; 16-25; 31-35 30 thai phụ tiền sản giật) Phương pháp nghiên cứu: Tàch chiết DNA từ huyết tương thai phụ bình thường thai phụ tiền sản giật, tạo minigene nồng độ 1012, thiết kế primer probe đoạn gen chuẩn bị cho real time PCR, chạy PCR để kiểm tra DNA chiết tâch định lượng đường chuẩn, chạy real time PCR Kết quả:1 Đã xây dựng hồn chỉnh đường chuẩn đinh lượng DNA phơi thai tự lưu hành tuần hoàn thai phụ Đã định lượng DNA phôi thai tmng huyết tương thai phụ bình thường Đã định lượng DNA phôi thai trong huyết tương thai phụ tiến sản giật Nong độ DNA phôi thài tầng dần theo tuồi thai có ý nghĩa thống kê Bước đầu thấy nồng độ DNA phơi thai tăng có ý nghĩa d ự đốn tiền sản giật.
Từ khóa: DNẠ phơi thai tự do, Realtime PCR, huyết tương thai phụ, tiền sản giật. SUMMARY
USAGE OF REALTIME PCR IN QUANTIFYING CELL-FREE FETAL DNAIN PLASMA OF PREGNANT WOMEN
Nguyen Thi Phuong Lan (Hanoi Pharmacy University) Nguyen Thanh Thuy, Nguyen Due Hinh, Nguyen DuyAnh
(Hanoi Medical University) Qualification o f the cell-free fetal DNA in maternal plasma has potential value fo r prenatal diagnosis and monitoring a number o f maternal and fetal pathology via the noninvasive prenatal diagnosis Currently, there is no commercial concentration scale o f free-cell DNA in maternal serum, which is built to use in Realtime PCR techniques The objective o f the research: To set up a baseline fo r using Realtime PCR to quantify the cell-free fetal DNA in plasma o f pregnant women Quantify the cell-free fetal DNA in plasma o f healthy pregnant 3.
4,289-98
3 Babu K G., Prabhash K., Vaid A K et al (2014) Nimotuzumab plus chemotherapy versus chemotherapy alone in advanced non-smali-cell lung cancer: a multicenter Onco Targets Ther, vol 7; 2014 PMC406386
4 Qu Y-y, Hu S-l, Xu X-y, et at (2013) Nimotuzumab Enhances the Radiosensitivity of Cancer Cells In Vitro by Inhibiting Radiation-induced DNA Damage Repair PLoS ONE 8(8): e70727 doi:10.1371/journal.pone.0070727 Randomized, open-label Phase II study Onco Targets Ther, 7, 1051-1060
5 Nguyễn Thị Thu, Nguyễn Lĩnh Toàn, Hồ Anh Sơn cs (2014) Nghiên cứiTđiều chế phức hợp kháng thể đơn đòng Nimotuzumab gắn đồng vị xạ 1-131 dùng điều trị ung thư Y học thưc hành, 914(4), 121-125
(2)Quantify the cell-free fetal DNA in pregnant women with pre-eclampsia Subjects o f the research: 30 healthy pregnant women whose blood was taken at the time o f 12‘ 14th week, 16-25th week, 31-35th week and blood sample from 30 pregnant women with pre-eclampsia Each blood sample is 5ml Research methodology: DNA extraction, creating minigen level 12, primer and probe designing on the gene fragment prepared for Realtime PCR, using PCR fo r DNA extraction and checking the quantification o f the baseline, and operating the real time PCR, combination between cross-sectional description and study Results: the baseline fo r the cell-free fetal DNA
r ir n t ila f in o in r ir n n lẠ tịn n o f n r ọ r tn n t H /n m n h o c hesctn h f iilt a n / i n n rn n la fa H tn s o o f i ' in n a a n tify /in n o fc iffil
i / i i u U r u i i i i ^ t i t WM v » f / i f i v i i f v i i M M V w w u i i V U f i i U f i U W i M p i v i v y U i w S X f J f S t f i i i V fC lC if i i i l j r i i ì ỳ V V M f i w ( V i u i
DNA in maternal plasma in pathological cases.the concentration o f the cell-free fetal DNA in plasma o f normal pregnant women at the 11-12th week, 13-24th week, 25-38th week gradually increase with p <0.05 In pregnant women with pre-eclampsia, this concentration is much higher than that in healthy pregnant women at the same period o f pregnancy with p <0.05 Conclusion: the concentration o f the cell-free fetal DNA which increases upon gestational age has statistical significance Initially, increase o f the cell-free fetal concentration predict the pre eclampsia.
Keyw ords: Cel!-ữee fetal DNA, real time PCR, plasma o f pregnant women, pre-eclampsia. ĐẶT VÁN ĐỀ
DNA phôi thai tự lưu hành tuần hoàn thai phụ ià dấu ấn sinh học phân tử, phát nhờ nghiên cứu Lo c s 1997, việc phát DNA phôi thai tự huyết tương thai phụ mở kha cho chan đoán trước sinh khổng xâm ỉẩn Nghiên cứu tác giả cho tháy nồng độ DNA phôi thai tự huyết tương thai phụ tăng tương ứng với tuổỉ thai nịng độ DNA phơi thai tăng cao bat thường íiên quan đến biển chứng thai kỳ như: sinh non, tiền sản giật, trisomy 21, p- ỉhalasemie, xóa nhanh chóng sau sinh [4], [9] Kỹ thuật Realtime PCR khuyếch đại DNA đích mà có saò hiển thị sau chu kỳ phản ứng PCR cho phép định lượng xấc nồng độ DNA thai, viẹc xử lỷ liệu tính tốn phụ thuộc vào đường biểu diễn chuẩn (Standard curve) Hiện tại, chưa có bậc thang nồng độ thương mại DNA phôi thai tự huyết tương thai phụ xây đựng để sừ dụng kỹ thuật Realtime PCR, vậyT chúng tơi tiến hành nghiên cứu nhằm mục tiêu:
1 Xây- dựng đường chuẩn s dụng kỹ thuật Realtime PCR định luụng DNA phôi thai huyết tương thai phụ
2 Định luựng nồng độ DNA phôi thai tự trong hủyểt tương thai phụ bĩnh thường
3 ĐÍnh lượng nồng độ DNA phôi thai tự trong huyết tương thai phụ tiền sản giật.
ĐỐI TƯỢNG V À PHƯƠNG PHAP NGHIÊN c ứ u 1 Đối từợng nghiên cứu
- Chất liệù nghiên cứu: 5ml máu thai phụ lấy vào ống EDTA, ly tâm tách huyết tương bao quản -800C đến sử dụng
Nhóm chứng: 02 mẫu máu thai phụ mang thai phụ chuyển đẻ sau đẻ biết giới tính con: chọn 01 thai phụ mang thai nam 01 thai phụ mang thai nữ
Nhóm thai phụ bình thường: 30 mẫu máu tuần: 12-14; 30 mẫu 16-25 30 mẫu tuần 31- 35 Tiêu chuẩn: có thai lần đầu, tuổi 25 - 35, khơng có triệu chứng nhiễm độc thai nghén hay tiền sử bênh tật khác, tiền sử xảy thai liên tiếp hay thai iưu., khơng có ý định phá thai, có thề theo dõi
được sản phụ sinh để biểt tình trạng con, đồng ý tự nguyện tham gia nghiên cứu
Nhóm thai phụ tiền sản giật: Mẫu máu 30 thai phụ chẩn đốn tiền sản giật có triệu chứng sau trờ lên: siêu âm S/D = 2.6; RI = 0.6; vết khuyết tiền tâm trương, phức hợp tâm trương < 35% đính tâm thu; có iăng huyểt áp HATT ằ 140mmHg, HATTr > 90mmHg; có phù mức độ khác nhau; protein niệu £ 0.5 g/l mẫu nước tiểu ngẫu nhiên 0.3 g/l mẫu nước tiểu 24h Tiêu chuẩn loại trừ: đa thai, đa ối, thai dị dạng, bệnh mắc kèm: bệnh tim, bệnh thận, tăng huyết áp, đái tháo đường, basedow, bệnh gan
Thời gian tiến hành: Từ tháng 1/2013-6/2015 Nơi tiến hành: Bộ môn Sinh lý bệnh - Miễn dịch Trường Đại học Y Hà Nội, Bệnh viện Phụ sản Hà Nội, Bệnh viện Phụ sản TW, Phòng Viêm gan Virus Viện VSDTTW
2 Phương pháp nghiên cửu - Mơ tả cắt ngang có kết hợp tiến cứu
» Tiến hành tạo minigene nồng độ 1012, thiết kế primer probe, tiển hành chạy PCR để kiểm tra DNA chiết tách định lượng đường chuẩn, tiến hành chạy Realtime PCR định lượng DNA phôi thai
- Kỹ thuật sử dụng: kỹ thuật chiết tách DNA phôi thai (theo quy trình I Randen c s (2003)), kỹ thuật PCR lông, kỹ thuật Realtime PCR
Kỹ thuật Realtime PCR: Nguyên liệu: Standard cuve ổược pha loãng theo nồng độ từ 1012 đến 100, chứng ấm, chứng dương, DNA phôi thai huyết tương thai phụ cần định lượng Thành phần phan ứng:Mtx 2X, SRY-F, SRY-R, Probe, H20 Real time PCR: 3, 40 chu kỳ chu kỳ: 940C-1 \ 550C-940C-1 \ 720C-940C-1 720C-6’, 40C-a
3 X lý số liệu: Số liệu xử lý phần mềm chuyến dụng máy chạy Realtime PCR tích hợp sẵn thuật toán thống kê phần mềm SPSS 16.0
KẾT QUẢ
(3)1 Kết xây dựng đường chuẩn cho kỹ thuật Realtime PCR cho nghiên cứu - Tiến hành tạo minigene nồng độ 1012
Hình Trình tự gen đoạn gen cần quan Ảnh Ecoli có chứa plasmid TOPO tâm lấy từ ngân hàng gen Kiềm tra iạị mồi mỉnigene: chạy PCR mục đích
kiểm íra xem có DNA quan tâm minigene có phù hợp khơng, kết thu được: đoạn píasmid có mang đoạn gen cần quan tâm (rãnh ~
Sau xác định bậc thang tương đương Tiến hành PCR lồng để kiểm tra primer nồng độ chuẩn Sau thiết kế, sau điên di để kiểm íra DNA
Ảnh PCR kiềm tra xem co DNA plasmid Chú thích: M - Marker, Rãnh Nước cất, Rãnh 2,4 Chứng nữ, Rãnh Chứng nam, Rãnh 5, 6, 9,10 DNA thai phụ mang thai nữ, Rãnh 7,1 DNA thai phụ mang thai nam, Rãnh DNA có plasmid với cặp mồi Y17, Y18 mẫu chuẩn D N A 101
Kiểm tra đường chuẩn: ỉiến hành đo OD mẫu chuẩn, tính tốn nồng độ 1011 theo định luật Avogadro từ tính độ pha lỗng, xây dựng đường chuan chạy thử máy Realtime
Độ pha lỗng đường chuẩn sau: pha 1011: íấy 8,5ụl minigen gốc + 341,5 ụl H20 , pha 1010: ỉấy 30ụi 1011 + 270 Ml H20 , Pha 109: lấy 30|JỈ 1010 + 270 Ml H20 , íàm tiếp tục pha ỉoãng tởi 100
Ảnh PCR kiểm tra DNA mẫu chứng nam, chứng nữ mẫu theo bậc ỉhang nồng độ. Chú thích: M - Marker, Giếng - Chứng DNA nữ, Giếng - Nước cất, Giếng - Chứng DNA nam, Giếng - Chứng DNA thai phụ mang thai nam, Giếng -1 - mẫu chuẩn nồng độ từ 101 -108
Nhận xét: sử dụng PCR để bán định lượng đường chuẩn sử dụng cặp moi Y15, Y16 Ỷ17, Y18 để kiểm tra, cho sản pham 198bp đường chuẩn lên sản phẩm phụ thuộc vào nồng độ DNA Sau kiểm tra lại cặp mồi SRY-F SRỶ-R
Tiến hành chạy Realtime PCR: Kết sau chạy đường chuẩn cùa gen SRY mẫu chuẩn pha loãng nồng độ 101, 102,103,104, 105,106,107, 108
Hỉnh Hình ảnh phân tích đương chuẩn gen SRY Định lượng nồng độ DNA phôi thai huyểt
tương thai phụ kỹ thuật Realtime PCR từ đường chuẩn xây dựng
DNA phối thai sau chiết íách từ huyết tương thai phụ binh thường thai phụ tiền sản giật, tiến hành chạy PCR lồng với cặp mồi cua gen SRY để kiểm tra sấn phẩm sau chiết tách, sau tiến hành định lượng DNA
Bảng Nồng độ DNA phơi thai trung bình q nhóm thai phụ binh thường
Nồng độ DNA phôi thai trung binh (copy/m!)
Nồng độ DNA phôi thai dao
động (mín - max)
p2-1 p3-1 p 3-2 Quý
1(1) 574,79
60,5 5-1698,52 Quý
2(2) 1587,11
248,31 -
4838,92 <0,05 <0,05 <0,05 Quý
3(3) 2196,62
(4)Nhận xét: Nồng độ DNA trung bình nhóm thai phụ bình thường tăng dần theo quý thai kỳ với p<0,05
Bảng Nồng độ DNA phơi thai trung bình quý nhóm thai phụ tiền sản giật „
Nồng độ DNA phôi thai truna bình
(copy/mi)
- Nồng độ DNA phôi thai dao độna (min -
max)
p2-1 Quý
2(1) 4882,79 1591,45-7677,00 0,05 Quý
3(2) 28701,26 5678,57-61666,14
Nhận xét: Nong độ DNA trung bình cùa nhóm thai phụ tỉền sản giật tăng cao theo quý thai kỳ với p<0,05
Bảng So sánh nồng độ DNA phơi thai nhóm thai phụ bình thường thaỉ phụ tiền sản giật quý thai kỳ
Tuầ
Nơng độ DNA nhóm thai phụ bình thường
(copy/ml) (1)
Nông độ DNA nhổm thai phụ tiền sản giật
(copy/ml) (2) n
thai
n X
Dao động (min-max)
n X
Dao động (min- max)
p2-1
Quý 30
2196,6
742,98-6397,98 27
28701,2
5678,57 - 61666,14
< 0,05 Nhận xét: Nồng độ DNA phơi thai nhóm thai phụ tiền sản giật cao nhóm thai phụ bình thường có tuổi thai tương ứng vởi p<0,05
BÀN LUẬN
Gen đặc hiệu nhiễm sắc thể Y, SRY (Sex determining region Y) íà vùng quy định giới tính nam, gen có vị trí vùng đầu mút cánh ngắn NST Y (Yp11.3) Chúng sử dụng khác biệt để xác định DNA phơi thai tróng huyết tương thai phụ mang thai nam, chúng tơi nhân bản, trình tự từ ngân hàng gen sau sử dụng trinh tự để kiểm tra việc thiết kế mồi probe Khi thư PCR lần với cặp mồi X1X3 PCR lồng với cặp mồi X2X3 để kiểm tra gen NST X mẫu chứng DNA chiết tách từ huyết tương thai phụ tầt mẫu có sản phẩm PCR 261bp, chứng íỏ DNA chiết tách từ huyết tương thai phụ đảm bảo chất lượng cho việc phát SRY Dùng tiểp mẫu DNA cho chạy PCR để kiểm tra gen nằm NST Y cho kết PCR iần với cặp mồi Y1.5 Y1.6 300bp PCR lồng với cặp mồi Y1.7 Y1.8 198bp Các mẫu DNA chiết tách từ chửng nam binh thường từ huyết tương thai phụ sinh trai có sản phẩm với đơi mồi nảy, cịn mẫu huyết ìương lấy từ huyết tương thai phụ sinh gái DNA chứng nữ bình thường khơng Kết PCR chứng minh rang huyết tương thai phụ có mặt DNA NST Y thai Từ kết chúng tồi kiểm tra iại đoạn gen primer probe với minigene (standard curve), chủng tơi pha lỗng tính tốn đỗi từ ng/ml sang số copies/ml theo định íuật Avogadro.Kết thực phản ứng Realtime PCR gen SRY nghiên cứu cho tín hiệu tốt với: R*2 - 0,991 hiệu khuyếch đại E= 96,3%, thòa mãn tiêu chuẩn Bio-Rad (2006) (R*2 >0,98),
hiệu khuyếch đại đạt cao (90 - 105%) mức độ đồng qua íần phản ứng lặp iại [2], Vì vậy, ứng dụng phương pháp cac nghiên cứu tiểp theo
Chúng tiến hành định lượng DNA phơi thai huyết tương thai phụ bình thường kỹ thuật
P a o l f i m a D P D A> 'X + ^Ạ ?ị A H K Ị A i x w C i u i i i i w i \ J o ì í i v i U i w i f i u u d iíi c i f r y , ĩ i U ĩ i y U y u i N n
trung bình quý 1: 574,79 copy/m! (60,55-1698,52 copy/ml), quy 2: 1587,11 copy/ml (248,31-4838,92 copy/ml) quý 3: 2196,62 copy/ml (742,98-6397’98 copy/ml) Đối vơi nhóm thai phụ tiền san giật, nồng ổộ DNA trúng b)nh quý 2: 4882,79 copy/mi (1591,45-7677,00 copy/ml) quý 3: 28701,26 copy/mí (5678,57-61666,14 copy/mi) Điều chứng tỏ có DNA phơi thai tự lưu hành trona tuần hồn thai phụ có xu hướng tăng dần theo tuổi thai, đồng thời thay đổi nồng độ DNA phôi thai tự tăng cao huyết tương thai phụ tiền sản giật so với thai phụ bình thường có tuổi thai tương ứng với p<0,05
Theo Lo c s (1999), DNA phôi thai xuất huyết tương, huyết mẹ từ tháng đầu nồng độ tăng với tuổi thai (có thể giải thích bời iăng diện tfch rau thài) tăng đột ngột vào gần cuối thai kỳ, đặc biệt ià sau tuần thai thứ 32 (đó ià kết q trình chuẩn bị sinh nở) nồng độ trung bình DNA phơi thai írong huyết tương mẹ tháng ỉháng cuối tương ứng 3,4% 6,2% DNA tổng số huyết tương mẹ [7], Nhĩeu nghiên cứu trước (Smid c s 1997, Lo cs c s , 1998; Honda c s , 2002) thấy tồn mối liên quan số lượng DNA phơi thai tự tuần hồn mẹ với tuổi thai Nghiên cứu Invernizzi c s (2002) 685 thai phụ bình thường mang thai nam kết quả: nồng độ DNA phơi thai trung bình dao động 21,6-9,3 copy/mi quý 1; 36,9-19,3 copy/ml quý 79,8-54,1 copy/mí quý thai ky [5] Nghiên cứu Aí Nakib M c s (2009) định lượng nồng độ DNA phôi thai 28 thai phụ bình thường^ kểt qua: tư tuần 19 - 28 579 copy/mi (169-1203 copy/ml) từ > tuần 28 728,5 copy/ml (185 - 1831 copy /ml), nồng độ DNA tăng dần theo tuằi thai [1 ]
(5)nhóm thai phụ bình thường thai phụ tiền sản giật cao nghiên cứu tác giả điều có thể thai phụ khu vực địa lý khác, quy trình Ịỵ tâm mẫu máu khác bao gồm thể tích huyết tương thai phụ lượng DNA chiết tách lượng DNA khuếch đại va phần lớn phụ nữ mang thai Viẹí Nam có tỉnh trạng thiếu máu dẫn tới bánh rau bị phá hủy làm có lẽ góp phần !àm tăng nồng độ DNA phôi thai tự huyết tương thai phụ binh thường thai phụ tỉền sản giật đặc biệt íà tăng cao nhóm thai phụ tiền sản giật Nồng độ DNA phôi thai phù hựp với nghiên cứu cùa tác giả Zhong c s (2001) điếu kích íhLPỚc bánh rau, tình trạng thiếu máu, dinh dưỡng, chế độ ăn liên quan đến chủng tộc làm cho nồng độ DNA phôi thai người Châu Á cao người Châù Âu
Tiền sản giật bệnh lý phức tạp írong thai kỳ đặc trưng tinh trạng tăng huỹết áp xuất protein niệu từ tuần 20 cua thai kỳ trở người phụ nữ trước có huyết áp bình thường Levine RJ c s (2004) nghiến cứu 120 thai phụ bình thường 120 thai phụ tiền sản giật thấy nống độ DNA phôi thai tự tăng leri gấp 2-5 ỉan thai phụ tiền san giật tăng trươc khơi phát triệu chứng lâm sàng tiền sản giật hai thời điểm tuần thứ 17 tuần 28 thai kỳ [6] Hong Yu c s (2013) định lượng nồng đọ DNA phôi thai tự huyết tương 20 thai phụ giai đoạn sớm tiền sản giật 20 thai phụ bình thường, thai phụ mang thai nam phát gen SRY, kết cho thấy nồng độ DNA phôi thai thai phụ giai đoạn sớm cua tiền sản giật (logged) (trung vị 3,08; dao động 2,93-3,68) cao so với nhóm chứng (1,79; dao động 1,46-2,53) [3] Năm 2014, Martin A CS nghiên cứu tồng quan cho thấy 13 nghiên cứu 11 nẹhiên cứu chứng minh íhai phụ cổ nong độ DNA phơi ìhai tự tăng cao, thai phụ sau phát triển tiền sản giật, ra, kết bốn nghiên cứu chứng minh thấy nồng độ DNA phôi thai tăng cao đáng kể trước khởi phát tiền sản giật [8] Một số yếu tố nguy ổược cho làm tăng nguy phát triển tiền sản giật: bệnh mạch máu người mẹ, rối loạn tự miễn dịch, nguyên nhân di truyền, đái tháo đường, mang thai đơi, Mặc dù ngun nhân xác van chưa rõ ràng tất nguyên nhân dẫn tới ioạn chức nang kết quả: suy nuôi ỉhay đổi cấu trúc động mạch xoần giảm tưới máu thai hậu tình trạng thiếu oxy qua thai nhồi máu đồng thời giải phóng cytokin tiền viêm Theo nghiên cứu Lo CS, hầu hết phụ nữ nghiên cứu (7 số phụ nữ) không phát nồng độ DNA phôi thai iuấn hoàn sau sinh [7] Như vậy, nồng độ DNA phôi thai tự marker sinh học nhiều tiềm năog tăng nồng độ cùa có liên quan đến giai đoạn trình thai nghén tăng cao trước có triệu chứng lâm sàng tiền sản giật với tốc độ giải phóng thải trừ nhanh chóng, số lượng DNA phơi thai cung cấp tranh tồn cảnh chi tiết theo thời gian sản xuất thải trừ DNA phơi
thai, có ích cho giám sáì ỉrường hợp thai nghén bệnh lý
KẾT LUẬN
1 Đã xây dựng hoàn chỉnh đường chuẩn định lượng DNẦ phơi thai tự ÍIPU hành tuần hồn thai phụ
2 Nồng độ DNA trung bỉnh nhóm ìhai phụ binh thường
Q 1: 574,79 copy/mi (dao động khoảng 60,55-1698,52 copy/mi)
Quý 2: 1587,11 copy/mi (dao động khoảng 248,31 - 4838,92 copy/m!)
Quý 3: 2196,62 copy/m! (dao động khoảng 742,98 - 6397,98 copy/mi)
3 Nồng độ DNA trung binh nhóm thai phụ tiền sản giật
Quy 2: 4882,79 copy/ml (dao động khoảng 1591,45 - 7677,00 copy/ml)
Quý 3: 28701,26 copy/ml (dao động írong khoảng 5678,57 - 61666,14 copy/ml)
Nồng độ DNA phơi thai nhóm thai phụ tiền sản giật cao so với nhóm thai phụ bình thường có tuổi ỉhai tương ứng với p<0,05
KIẾN NGHỊ
Nếu iâm sàng siêu âm Doppler, thai phụ có dấu hiệu nguy tiền sản giật từ tuần ỉhư 12 nên kết hợp định lượng nồng độ DNÀ phôi thai huyết tương thai phụ giúp theo dõi phát sớm tiền sản giật
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Ai Nakid M, Desbrièrs R, Boneilo N, et a! (2009), Total and fetal cell free DNA analysis in maternal blood as as markers of placenta! insufficiency in intrauterine growth restriction, Fetal diagnosis and therapy, 26(1), pp.24-8
2 BioRad Laboratories (2006), Realtime PCR Application Guide
3 Hong Yu, Yanting Shen, Qinyu Ge, et al (2013), Quantification of Maternal Serum cel! free fetal DNA in early onset preeciampsia,_International Journal of Molecular Siences, 14(4), pp.7571-7582
4 Howard Cuckie (2014), Pretanal Screening using maternal markers, Journal of clinical medicine, 3, pp.504-
520 _ _
5 invernizzi p, Biondi ML, Battezzati PM, et al (2002), Presence of fetal DNA in maternal plasma decades after pregnancy, Human genetics, 110(6), pp.587-91
6 Levine RJ, Maynard S.E., Qian c., et a! (2004), Circulating angiogenic factor and the rick of pre- eclampsia, N Eng! J Med, 340, pp.672-683
7 Lo YM, Leung IN , Tein MS, et al (1999), Quantitative abnormalities of fetal DNA in maternal serum in preeclampsia, Clin Chem, 45, pp.184-8
8 Martin A, Krishna i, Badeii M and Sạmuaei A (2014), Can the quantity of celi-free fetal DNA predict preeclampsia: a systematic review, Prenatal diagnosis, 34(7), pp.685-91 _
9 Sifakis s, Koukou z and Spadidos D.A (2015), Cell free fetal DNA and pregnancy related complication (Review), Molecular Medicine Report, 11, pp.2367-72