Kết quả nghiên cứu sàng lọc cho thấy triển vọng của cây An điền nón trong quá trình tìm kiếm các thành phần có hoạt tính kháng khuẩn.. Nghiên cứu đặc điểm thực vật bằng phương.[r]
(1)Analogues with Various Substituents at the Sulfinyl Sulfur: Asymmetric Synthesis and Biological Activities J Org Chem., 2009, 74,6002-6009.
*2 H L Holiand; F M Brown; B G Larsen; M Zabic Biotransformation of organic sulfides Part Formation of chiral isothiocyanato sulfoxides and related compounds by microbial biotransformation Tetrahedron Asymmetry, 1995, ổ(7), 1569-1574
23 E L Eliei; R Hutchins; R Mebane; R L Wilier Endocyciic vs Exocyclic Attack in Nucleophiiic Displacement Reactions on Five- and Six-Membered Cyclic Onium Salts J Ory Chem., 1976, 41(6), 1052-
1057
24 T J Wenzei; J Zaia Organic-Soiuble Lanthanide Nuciear Magnetic Resonance Shift Reagents for Sulfonium and isothiouronium Salts Anal, Chem., 1987, 59,562-567
25 H Golchoubian; F Hosseinpour Effective Oxidation of Sulfides to Sulfoxides with Hydrogen Peroxide under Transition-Metal-Free Conditions ivioiecuies, 2007, 12, 304-311.
26 M H Benn and Vinod K Singh A simple, biogeneticaily modeled synthesis of 4-(methy1thio)butyỉ thiocyanate: the reaction of thiocyanaie anion with S- methy!-(1,n)-epithionium ions Can J Chem., 1986, 64, 940-942
NGHIÊN cứ u ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHÀN HÓA HỌC
THẸO ĐỊNH HƯỚNG 'h o t tín h k h n g KHUẢN CỦA LOÀI AN ĐIÈN NÓN ( H e d y o t i s p i l u l i f e r a (Pit.) T.N.Ninh)
, Nhóm nghiên cửu:
ThS Võ Quốc Hùng, ThS Nguyễn Đình Quỳnh Phú, T S Hồ Việt Đức, T S Nguyên Thị Hoài
(Khoa Dược, Đại học Y Dược Huế)
TÓM TẤT
Đặt vấn đề mục tiêu: Tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn đặt yêu cẩu cấp thiết cho việc phàt triển thuốc khàng sinh Kết nghiên cứu sàng lọc cho thấy triển vọng An điền nón q trình tìm kiếm thành phần có hoạt tính kháng khuẩn Vì vậy, để tài thực nhằm khảo sâỉ đặc điểm thực vật, thành phần hóa học hoạt tính kháng khuẩn cốc hợp chất phân lập từ An điên nón - vốn chưa
được nghiên cứu cụ thể Việt Nam giới.
Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Phần mặt đất An điền nón (Hedyotis pilulifera (Pit)
T.N.Ninh) thu h Vĩnh Linh, Quảng Trị vào tháng 08/2014 Nghiên cứu đặc điểm thực vật phương
pháp cắt nhuộm vi pbẫu thân, /á, và soi bọt Phân lập cốc hợp chểt tình khiết sử dụng phương pháp sắc ký
kết hợp Xốc định cẩu trúc qua liệu phổ, thông số vật lý, kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo Xảc định hoạt tính kháng sinh phương phàp pha loằng khay 96 giếng.
Kết - Kết luận: Đă xác định đặc điếm vi học thân lâ An điền nón Đã phân lập 01
hợp chất irìdoid ià 10-0-acetylborreríagenin (1), 05 hợp chất irídoid (2-6) 05 hợp chất tríterpene biểt (7-11) Hợp chất 7,8, 10 11 thể hiẹn hoạt tính ức chế cốc mức độ khàc đổi với chủng vi khuẩn S aureus, B subtilis M smegmatis Trong đó, hợp chất 10 cố hoạt tính mạnh chủng vi khuẩn (MIC lần lượt la 2,5; 2,5 1,25 ụg/mL).
T k h ó a : Hedyotis pilulifera, 10-0-acetylborrerìagenin, irídoid, trìterpene, hoạt tính kháng khuẩn
SUMMARY
Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh: BOTANICAL P R O PER TIES AND ANTIBACTERIAL CO NSTITU ENTS
Authors: Vo Quoc Hung, Nguyen Dinh Quynh Phu, Ho Viet Due, Nguyen Thi H oai (Faculty o f Pharmacy, Hue University o f Medicine and Pharmacy)
Background: Drug resistance has become a serious problem encouraging scientists to deveplop new antibiotics The screening o f antibacterial effect ofHedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh showed the potential o f this
plan to discover antibacterial constituents Therefore, this study was conducted to investigate botanical properties,
phytochemicals, and antibacterial activity o f H pilulifera which has not been studied y e t
Materials and method: Anal parts o f H pilulifera (Rubiaceae) were collected from Vinh Linh, Quang Tri
province in August 2014 Botanical properties were studied using microscopic methods Pure compounds were isolated by using the combination o f various chromatographic methods, structure o f isolated compounds were identified by analyzing their spectral data, physical properties, and by comparing with those in literature
Antibacterial activity o f isolated compounds was evaluated by microdilution assay.
Results & Conclusion: M icroscopic botanical properties o f H pilulifera were described One new iridoid, 10-0-
acetylborreriagenin (1), together with five known iridoid compounds (2-6), and five known triterpenes (7-11) were
isolated The result o f antibacterial activity test o f these 11 compounds show ed that compounds 7, 8, 10, and 11
possessed inhibitory activity toward s aureus, B subtilis, and M smegmatis with different strengths Among those, compound 10 possessed strong inhibitory effect toward all three tested bacteria (MIC 2.5, 2.5, 1.25 ụg/mL, respectively).
Keyw ords: Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh, 10-0-aceỉylborreriagenin, iridoids, triterpenes, antibacterial
activity.
(2)732-Đ ẬT VẮN 732-ĐỀ V À MỤC TIÊU
Trong vài thập kỷ trờ lại đây, việc đề kháng loại thuốc kháng vi sinh vật írở íhành nguy đáng báo động, làm giảm hiệu điều trị, gia ỉăncỊ phí tỉ ỉệ tử vong Do đó, việc nghiên cứu nham phát kháng sinh có hiệu điều trị cao yêu cầu cấp bách [24], Trong trình tỉm kiếm này, thiên nhiên đã, tiếp tục đối tượng đầy triển vọng với nguồn hợp chấỉ có hoạt tính sinh học vô phong phu [11 ]
Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nên có nguồn ỉàí ngun thực vật đa dạng Trong đó, Hedyotis L gồm 500 loài chi thực vật có số lượng lồi lớn họ Cà phê (Rubiaceae), biết có 66 lồi, thứ Việt Nam [3, 6], Các nghiên cứu cho thấy nhiều lồi trong chi Hedyotis L có phổ hoạt tính sinh học tương đối rộng hoạt tính chống oxy hóa, kháng viêm, bảo vệ gan, tác dụng gây độc số dòng tế bào ung thư ỉhử nghiệm [10, 12], Đáng ý hoạt tính khang khuẩn với hiệu ức chế vỉ khuẩn Gram (-) Gram (+) [10,16]
Trong q ỉrình nghiên cứu sàng lọc hoạt tính kháng sĩnh loài thuộc chi Hedyotis L , dịch chiết methanol ỉừ An điền nổn (Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Nính) thể tác dụng đáng lưu ý Tuy
nhiên nay, chưa thấy cỏ công bố đặc
điểm vi học, thành phần hóa học, tác dụng sinh học loài Việt Nam thể giới Với iý nêu trên, đề tài “N ghiên u đặc điểm th ự c v ậ t th àn h phần hóa h ọ c th e o định hư ng hoạt tín h kháng kh uẩ n c ủ a loà i A n điề n nón (Hedyotis pilu life ra (Pit.) T.N.NỈnh)" thực
nhằm góp phần phục vụ cho cơng tac bảo tồi% chuẩn hóa ngun liệu iàm sáng tỏ thành phần hóa học tác dụng kháng khuẩn dược liệu
ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIỀN c u 1 Đôi tượng nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu phần mặt đất An điền nón, mẫu thu thập huyện Vĩnh Linh, tỉnh Quảng Trị vào tháng 8 năm 2014 Tên khoa học xác định ià Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh.íhuộc họ Cà phê (Rubiaceae) Tiêu mẫu (kí hiệu VL-01) lưu giữ phòrig tiêu Viện Sinh ỉháỉ Tài nguyên Sinh vật - Viện Hàn lâm Khọa học Công nghệ Việt Nam Khoa Dược - Trương Đại học Y Dược HŨế
2 PhiPơng pháp nphiên cửu
2.1 Nghiên u v ế th ự c vật
Quan sát, chụp ảnh mô tả đặc điểm hình thái thực vật íại thực địa T hu hái, làm tiêu mẫu lưu giữ tiêu Giám định tên khoa học cùa sở phân tích đặc điểm hình thái, so sánh với tiêu !ưu trữ tài liệu phân loại thực vật [4] với hỗ trợ cùa chuyên gia phân loại thực vật Nghiên cứu cấu tẹo giải phẫu kính hiển vi sừ dụng phương pháp cắt nhuộm kép V! phẫu xanh methylene đỏ carmin, phương pháp soi bột [7]
2.2, Nghiên cứu thành phần hóa học
Tạo dịch chiết toàn phần bang phương pháp ngâm với dung mơi hữu nhiệt độ phịng Chiết xuất
phân đoạn sử đụng phương pháp chiết phân bố [2], Phân lập chẩỉ tình khiết sẳc ký cột silica gel pha thường (Silica gei 60 0,040-0,063mm (230-400 mesh ASTM), Merck); silica gel pha đảo YMC (30-50 ụm, F u ji Siiysia Chemical Ltd.); Diaion HP-20 vá Sẹphadex LH-20 (Merck) Theo dõi phân đoạn sắc ký lớp mỏng (SKLM) tráng sẵn pha thường (Merck, Kielselgeí 60 F254, 250 |jm ) pha đảo (Merck, RP C-18 F ) Phát vếí chẩt đèn tử ngoại
hai bước sóng 254 nm 366 nm dùng thuốc thừ dung dịch H2SO4 10% Xác định cấu trúc hợp chất phân lập dựa phương pháp bao gồm: phổ cộng hường từ hạt nhân (NMR) mộì
chiều (1H NMR, 13c NMR, DEPT) và' hai chiều (HMBC,
HSQC, COSY, NOESY); phổ khối iượng phân giải cao HR-ESI-MS; thông số vật lý nhiệt độ nóng chảy, độ quay cực, quang phổ tư ngoại phổ hồng ngoại
2.3 Nghiên cứu hoat tính kháng khuẩn
Hoạt tính kháng khuần đánh giá phương pháp pha loãng 6 chủng vi khuẩn
Staphylococcus aureus (NBRC 100910), Bacillus
subtilis (NBRC 13719), Mycobacterium smegmatis
(NBRC 13167), Klebsiella pneum oniae (NBRC 14940),
Escherichia coli (NBRC 102203) Pseudomonas
aeruginosa (NBRC 106052) Các chủng vi khuẩn có nguồn gốc từ ngân hàng vi khuẩn Trung tâm Tài nguyên Sinh vậí NITE, N hậỉ Bản Vi khuẩn cấy ỉrên thạch YP [chứa 1% polypeptone (Nihon Pharmaceutical, Nhật Bản), 0,2% yeast extract (Difco, Mỹ), 0,1% M g S 04.7H20 , 2% agar (Nacalai Tesque, Nhạt Bản)] sau ủ 30 ° c tròng 12 Dung địch gốc mẫu thừ pha dimethyl sulfoxide nồng độ 10 mg/mL dịch chiết, mg/mL hợp chất tinh khiết, sau pha iỗng thành nồng độ khác cho vào khay 96 giếng đâ chứa sẵn chùng vi khuẩn U moi trường YP Sau ủ qua đêm 37 °c, dung dịch 3-(4,5-dimethyiihiazol-2-yl)-2,5- dimethyltetrazolium bromide (Sigma Aldrich, Mỹ) pha isopropyl-HCI {0,5 mg/mL) thêm vào giếng ủ tiếp Giá trị nống độ ửc chế tối thiểu (MIC) đữợc xac đĩnh bời nồng đọ tháp có tác dụng ức chế sinh trưởng cua vi khuẩn kiểm định Kanamycin ampicillin (Nacalai Tesque, Nhật Bản) sư dụng !àm chất đối chứng tương ứng với đối VỚI vi khuẩn Gram (-) Gram (+) [20]
KÉT QUẢ
1 Kết nghiên cứu thực vật
1.1 Nghiên cứu vi phẫu
(3)hay tập trung thành đám Tầng phát sinh lìbe-gỗ (6) gốm 1-3 hàng tế bào nhỏ tạo thành vịng liên tục Mơ gỗ (7) xếp sat tạo thành vòng liên tục, mạch go xếp thành dãy Mô mềm ruột (8) tể bào hình trịn đa giác, thành mỏng, phần trung tâm có tế bào với kích thước lớn Tinh canxi oxai hình cầu gai (9) tập trung nhiều mô mềm vỏ, rải rác libe mô mềm ruột Trong mô mềm ruột cịn xuất tinh thề canxi oxalat hình kim (10) Đ ặc điểm vi phấu lá: Phần gân lá.B1): gân lồi, gân loi nhiều Biểu bĩ (2) hang tế bào hỉnh írứng xếp liên tục đặn mang lông che chở đa bào (1) Long che chở đa bào cấu tạo bời 2-7 tế bào, tế bào gần đầu íơng ciài nhỏ đần x ế p sát biểu bì mơ dày (3) có 3-4 hàng tế bào, tế bào hỉnh tròn đa giác, có thành dày góc, kích thước khơng Mơ mềm (4) tế bào hình đa giác trịn, thành mong, kích thước khơng đèu Phản gân chinh có
một cung libe gỗ, libe dưới, gỗ Libe (5) gồm té bào nhỏ, xếp sát nhaụ tạo thành cung lỉbe bao
bó gơ cầu tạo mạch gơ tương đối nhỏ, xếp thành hàng Phần phiến (.B2): Tế bào biểu bi có klch thưởc lớn tế bào biểu bì dưới, gồm hàng tế bào hình trứng đa giác, xếp đặn mang iơng che chở đa bào íữơng tự phần gân Biểu bì mang lơng tiết (10), lỗ khí (11) Mơ giậu (7) nằm lớp biểu bì trên, cau tạo hàng tế bao hình chữ nhật, xếp sít thẳng góc với biểu bì írên, chiếm khoảng 1/4 bề dày phiến Mô khuyết (8) cấu tạo tế bào thành mỏng, kfch thước khổng đều, kéo dai theo chiều ngang đề hở khuyet nho Tinh thể canxi oxalat (9) hình cầu gai tập trung nhiều phiến lá, mật độ nhiều mô giậu, rải rác mơ khuyềt
Hình Vi phẫu thân (hình A) vi phẫu (phần gân - Hình B1 phần phiến iá - Hình B2) An điền nón.
1.2 Nghiên u b ộ t thân iá
Tách riêng phần thân lá, nghiền thành bột mịn, soi chụp ảnh kính hiển vi đặc điểm bột Bột thân (Hình 2.A) màu nâu, khơng mùi, khơng vị Quan sát kính hiển vi nhận thấy: mảnh biểu bi (1), lông che chở đa bào (2), mảnh mô mềm tế bào thành mỏng hlrth trứng (3a) hoậc đa giác (3b), mảnh mơ mang íinh thể canxi oxalat hình cầu gai (4), bó sợi (5), mảnh mạch xoắn (6), mảnh mạch điểm (7), tinh thể canxi oxalat hình cầu gai (8) có kích thước 0,02-0,03 mm, tinh thể canxi oxalat hình kim (9) có kích thước 0,06-0,07 mm Bột (Hlnh 2.B) màu xanh, không mùi, khơng vị Soi kính hiền vi nhận thầy: mảnh biểu bì mang lơng che chở đa bào (1), bó sợi (2), mảnh mạch xoắn (3), lơng che chở đa bào (4a) nhiều đoạn lông đứt gãy (4b), mảnh biểu bì mang lo khí (5), mảnh mơ mềm gồm tế bào gần tròn thành mong (6), tinh thể canxi oxalat hình cầu gai (7) có kích thước 0,02-0,03 mm
A B
Hình M ột số đặc điềm bột thân (hình A) bột (hình B) An điền nón.
(4)-2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học
2.1 Chiết xuất phân lập
Mâu nguyên liệu rửa sạch, ỉhái nhỏ, phơi, sấy khô 0-60 ° c , sau xay thành bột ỉhô bảo quản nơi khô ỉhọáng Bột khô (1,4 kg) ngâm chiết nhiệt độ phòng với methanol (MeOH) (5 Ưlần/7 ngày X lần), gộp dịch chiết, cất thu hồi dung môi áp suất giảm, nhiệt độ -6 ° c thu cao chiết MeOH (38 g) Phân tán cao chiết L nước chiếi phân bố lan iượt với chloroform (CHCi3) (2 L X lan) ethyl acetate (EA) (2 L X 3 lần), cất thu hồi dung môi áp suất giảm thu cao chiết tương ứng HC (13 g), HE (11 g) phân đoạn nước lại HW (14 g)
Cao HC (13 g) tiến hành chiết pha rắn sử dụng silica ge! pha thường rửa giải gradient nồng độ của hỗn hợp dung môi n-hexane (He) acetone (Ac)7 với tỉ ĩệ lẩn lượt 100:0, 95:5, 90:10, 50 10 1 vả
0:100 jv /v , L hệ), thu phân đoạn từ HC1 đến HC6 Phân 'đoạn HC3 (1,9 g) tiến hành sac kỵ cộỉ silica gel pha thường với dung môi khai triển He-EA (6:1) Theo dõi trình rưa gỉải SKLM, gộp
các phân đoạn tương tự, thu phận đoạn (H C3A-HC3E) Phân đoạn HC3B (210 mg), H C3C (180 mg) va H C3E (2,1 g) tiếp tục phân tách cột pha thưởng, thu hợp chất lan lượt (11,0 mg), 11 (8,0 mg) (2,6 mg) Phân đoạn HC6 (1,5 g) sau khỉ triển khai qua cột pha thường pha
đảo thỉ thu hợp Chat (8,1 mg) 10 (4,5 mg)
Cao HW (14 g) phân tán ỉrong lượng nước tối thiểu đưa lên cột Diaion HP-20, sau rửa giải
gradient nồng độ với hệ dung môi MeOH-nươc (0:100, 25:75, 50:50, 75:25, 100:0, v/v, L hệ), thu
phân đoạn (HW 1-HW 5) Phân đoạn HW3 (2,5 g) triển khai cột pha thường, hệ rửa giải EA:MeOH cho phân đoạn (HW3A-HW 3F) Phân đoạn HW3B (470 mg) tiếp tục phân lập cột R P-C18, rửa giải
bằng hỗn hợp MeOH-nước (1:2) cho phân đoạn (HW3B1-HW3B4).' Sau tinh chế cột Sephadex LH-20 sử dụng dung môi MeOH, từ phân đoạn HW3B1 thu hợp chất (5,0 mg) Phân đoạn HW3B2 HW3B4 tiến hành sắc ký cột RP-C18 cho hợp chất theo thư tự (6,0 mg), (8,0 mg) (15,0 mg) Sau từ phân đoạn HW3D (350 mg) thu hợp chất (4,5 mg) va (5,0 mg) sau triền khai sắc kỷ cột RP-C18 với hệ MeOH-nước (1:1)
2.2 Xác định cấu trúc càc họp chất phân lập được
Dựa liệu thực nghiệm kết hợp đối chiếu với tồi ỉiệu cơng bố, cấu írúc hóa học 11 hợp chất tinh
khiết phân lập từ phân đoạn CH CỈ3 phân đoạn nước An điền nón được" khẳng định la 10 -0 -
acetylborreriagenin (1), asperuioside (2) [13], paederosỉde (3) [22], asperulosidic acid (4), daphylloside (5) £13], paederosidic acid methyl ester (6) [21], oleanic acid (7) [17], betuiinic acid (8) [15], 3-O-acetyl pomolic acid (9)
[19], rotungenic acid (10) [18] rotundic acid (11) [14] (hinh 8) Trong đó, kết qua tra cứu íàỉiíẹu gần cho thấy hợp chất chất mới, lần biết đến tự nhiên.
Hợp chất tách từ phân đoạn nước dạng bột màu không màu Phổ H R-ESI-M S hợp chất
này cho peak ion giả phân tử m /z 279,0830 [M + N a f (tỉnh tốn lý thuyết cho cơng thức C12H16Ó6Na
279,0845) cho phép thiết lập cơng thức phân íừ C 12H160 Phổ IR dải hấp thụ mạnh đạc trưng cho
nhóm OH (3356 cm '1), ester (1659 cm '1) nối đôi (2942, 2835, 1452, 1415 cm '1) Phổ u v (MeOH) g ự ĩý s ự có mặt nhóm ester (Xmax 208 nm) cấu trúc chất 1
Phổ 1H NMR tín hiệu đặc trưng proton olefin ậ ị 5,88 (m) proton nhóm methyl ỏH 2,09
(3H, s) Phân tích phổ 13c NMR HMQC diện 12 íín hiệu carbon gồm carbon carbonyl (Sc
172,47; 180,96), carbon olefin (ỏc 12 ,11; 148,47), carbon methine gắn oxy (<5c 88,23), carbon methylene gắn oxy (Sc 60,65; 62,70; 62,96), carbon methine (Sc 43,95; 46,12; 50,27) carbon acetyl methyl 20,81) Dựa vào việc phân tích chi tiếì phổ HMQC, HMBC CO SY, số liệu phổ H 13c NMR gán hoàn toàn Bảng Tương tác 1H -1H C O SY H-5 ( 3,33) H-6 (ỏH 5,40), H-6 va H-7 (ỏH
5,88), H-5 H-9 {4, ,11) tương tác HMBC íừ H-7 đến C -5 (ỏc 43,95)/C-6 (<5b 88,23)/C-8 (ổc 148,47)/C-9 (ỏc 50,27) đề nghị có mặt hợp phần cyclopentene Hơn nữa, tương tác HMBC từ H-5/H-6 đến C -1 (ổc
180,96) tương tác C O S Y H-4 (ẶJ 2,96) H-5 vịng cycíopentene ngưng tụ với vịng ỵ-lacíone C -5 C-6 Mặt khác, tương tác HMBC ỉừ H-1 (4n 3,74; 3,77) đến C-5/C-8/C-9, từ H-3 ( 3,83; 3,91) ứển C-4 (ỗc
4 ,12)/C-5/C -11, từ H -10 (4i 4,71,4 ,75) đến C-7/C-8/C-9 xác nhận ba nhóm oxymeỉhyiene lần iượt C-9, c~ 4, C-8 Sự diện nhóm acetoxy C -10 thể qua tương tác HMBC từ H -10 đến C -1 ĩỏc
172,47) Tiếp đó, hóa lập thể làm rõ phổ NOESY C ác tương tác N O ESY quan trọng H-5 vậ H-6, H-5 H-9 đề nghị proton phía so với mặi phẳng vòng ((3-face) [21] Đáng ý, H-4 có tương tốc N O ESY với H-1 khơng tương íác với H-5 chứng tỏ H-4 (Snh hướng a Nhỉn chung, dư kiện
phổ NMR hóa học lập ìhể cùa tương tự với giá trị tương ứng hợp chất borreriagenin [23] ngoại trừ
(5)Hình Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ phân đoạn chloroform phân đoạn nước phần mặt đất An điền nón
3 Kết nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn
11 hợp chất phân iập đánh giá hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn, kết cho thấy có hợp chất triterpen 7, 8, 10 11 thể hoạt tính ức chế phát triển mửc độ khác đối với chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis Mycobacterium smegmatis (Bảng 2Ị Trong số đó, bốn hợp chất có hoạt tính V! khuan s aureus I MIC lần iượt 10; 20; 2,5 10 ụg/mL) Hợp chát 8, 10 11 có tác dụng ức chế đối với B subtiìis (MIC 20; 2,5 fjg/mL) Đặc biệt, cỗ hợp chất 10 thể hoạt tính mạnh vi khuẩn M sm egmatis với giá trị MIC lần lượt 2,5 1,25 Ịjg/mỉ_
Bảng Dữ kiện phổ 1H (500 MHz)và 13c (125 Vị trí & <5ÌH(muỉt, J in Hz)
1 60,65 3,74 (dd, 11,5; 6,5)
3,77 (dd, 11,5; 4,5)
3 62,69 3,83 (dd, 11,0; 3,5)
3,91 (dd, 11,0; 4,5)
4 46,12 2,96 (m)
5 43,95 3,33 (m)
6 88,23 5.40 (brd, 7.5)
7 127,11 5,88 (m)
8 148,47
-9 50,27 3,11 (m)
10 62,70 4,71 (dd, 15,0; 2,0) 4,75 (dd, 15,0; 1,5)
11 180,96 _
12 172,47
-13 20,81 2,09 ís)
Hình Các tương tác HMBC (hình A), COSY (hình B), và NOESY (hình C) chủ yếu hợp chất
BÀN LUẬN
Dù số lượng phong phú, số ioài chi Hedyotis L nghiên cứu đặc điểm vi học hạn chế, kể đển Dạ cẩm (H capitellata Wall ex G Don [1, 5]), c ỏ lưỡi rắn (H corymbosa (Ị.) Lamk.) Bạch hoa xà thiệt thảo (H diffusa Willd.) [8] Đ ặc điểm vi học An điền nón sử dụng để phân biệt với kếí hợp đặc điểm cẩu tạo phiến gồm tế bào biểu bì lớn, mang lông che chở đa bào, mô giậu gồm iớp tế bào có tinh the canxi oxalat hình cầu gai, đặc điểm bột thân iá với ỉông che chờ đa bào tỉnh thể canxi oxaỉat hình cầu gai
Thống kê W H O cho biết, vào năm 2014 giới có khoảng 9,6 triệu người mắc bệnh lao vi khuẩn Mycobacterium tuberculosis, làm 1,5 triệu bệnh
Bảng Giá trị MIC hợp chất có tác dụng
Hợp chấỉ MIC (ucj/mL)
S aureus B subtilis M smeợmatis
7 10 2,5
8 20 20
10 2,5 2,5 1,25
11 10
Ampicillin 10 10
thuốc, chiếm 3,6% so ca nhiễm 20,2% số ca điều trị [24, 25] Tụ cầu vàng s aureus ioại vi khuẩn nguy hiểm bờỉ khả gây nhiễm khuân nhiều hỉnh thức, tính dễ thích ứng với điều kiện môi trường khác độc lực cao Đây tác nhân hàng đầu írong vấn đề nhiễm khuẩn bệnh viện gây hội chứng sốc nhiễm độc ngộ độc thực phẩm [24] Các hợp chất phân lập từ An điền nón thuộc hai nhóm chẩt iridoid (1 -6 ) triterpene (7—11) Kết thử hoạt tính kháng khuẩn cho thấy hợp chất triterpene 7, 8, 10 11 thể khả ức che mức độ khác đổi với chủng vi khuẩn
(6)-kiểm định, c ầ n ý rằng, giá trị MIC khoảng 100-1000 pg/mL xem có tác dụng ỉrong test kháng khuẩn in vitro [9] Theo ổó, hợp chất 10 (rotungenic acid) cho thấy hoạt tính mạnh chủng S aureus, B subtilis M smegmatis với giá trị MIC ià 2,5; 2,5 1,25 Ịjg/mL Đáng ý chưa thấy cơng bố hoạt tính kháng khuẩn hợp chất Hợp chất cho tác dụng ức chế mạnh M sm egm atis (MIC 2,5 ụg/mL) hoạt tỉnh đáng kể s aureus (MIC 10 Mg/mL) Hợp chất 11 thể tác dụng đáng kể đố! với S aureus B subtilis (MIC 10 ụ g lm l), hợp chất thẻ hoạt tính trung binh írên chủng vi khuẩn (MIC 20 Mg/mL chủng) Các kết qua có y nghĩa mà tinh trạng đe kháng khang sinh ngày ian rộng quy mô mức độ điều trị nhiễm khuẩn
Tác dụng kháng khuẩn đáng lưu ý hợp chất cho thấy phù hợp với kếí sàng íọc hoạt tính trước An điền nón Đỉều mở triển vọnc) nghiên cứu sâu nhằm xác định che tác dụng hợp chất phân iập, đặc biệt hợp chất 10 Đ ồng'thời, việc nghiên cứu thành phần khác từ An điền nón lồi thuộc chi Hedyotis L cần tiếp tục thời gian iới nhằm tlm kiếm hợp chất có hoạt tính kháng sinh phục vụ điều trị
KẾT LUẬN
Từ phần mặỉ đất An điền nón (Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.NỈnh), lần đặc điểm vị phâu íhân !á, đặc điểm bột thân công bố Bằng phương pháp sắc ký kết hợp phương pháp phổ, phân lạp xác định cấu trúc 11
hợp chất, gồm 01 iridoid íà 10-0- acetylborreriagenỉn (1), 05 iridoid (2 -6 ) 05 íriterpene (7-11) biết Ket khảo sát hoại tính kháng sinh hợp chất phân lập ( - Ĩ) cho thấy nhóm triterpene có hoạt tính ức chế với mức độ khác nhau, hợp chất 10 thề hoạt tính mạnh ca chủng s aureus, B subtilis M smegmatis Đây ĩà íần thành phần iridoỉd triterpene hoạt tính kháng khuẩn An điền nón công bố
TÀI LIỆU THAM KHẦO
1 Bộ môn Dược liệu (2007), Bài Giảng Dược Liệu, tập 1,2, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội
2 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học cấy thuốc, NXB Y học, Hồ Chí Minh
3 Đỗ Văn Hài, Vũ Xuân Phương, Trần Thế Bách cộng (2013), Bồ sung loài thuộc chi An điền - Hedyotis L họ Cà phê (Rubiaceae) Việt Nam, Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 5, 68-70.
4 Phạm Hoàng Hộ (2003), Cây cỏ Việt Nam, tập 3, NXB Trẻ
5 Lại Quang Long (2001), Nghiên cún thực vật, thành phần hóa học va m ột số tác dụng sinh học Dạ cầm (Hedyotis capitellata Wall Ex G Don), Luận án Tiến sĩ Dược học, Thư viện Đại học Quốc gia Víẹt Nam
6 Trần Ngọc Ninh (2005), Danh lục loài thực vật
Việt Nam, tập 3, NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
7 Thân Nguyễn Viết Thân (2003), Kiểm nghiệm dược liệu phương pháp hiển VI, tậ p 1, N X B K h o a h ọ c k ỹ
thuật, Hà Nội
8 Trần Đinh Nhã Thi, Nguyễn Thị Thu Ngân, Trương Thị Đẹp (2015), Đặc điểm vi học chi Hedyotis họ Cà phê (Rubiaceae Juss.), Hội nghị Khoa học Kỹ thuậỉ iần 32, Đại học Y dược Ho Chí Minh
9 Abreu A C-, McBain A J., Simoes M (2012), Plants as sources o f new antimicrobials and resistance- modifying agents, Natural Product Reports, 29 (9), 1007- 21
10 Ahmad R., Ali A M., Israf D A., et al (2005), Antioxidant, radicai-scavenging, anti-inflammatory, cytotoxic and antibacterial activities of meỉhanoiic extracts of some Hedyotis species, Life Sc/., 76 (17), 1953-64.
11 Bérdy J (2005), Bioacỉíve microbỉai metabolites: A personal view, J Antibiot., 58,1-26.
12 Gupta R K-, Singh R K„ Swain s R., et al. (2012), Antihepatotoxic potential of Hedyotis corymbosa against D-ga!actosamine hepatopathy in experimental rodents, Asian Pac J Trop Med., 5,1542-47.
13 Gurbuz F., Demirezer L o , Guvenalp z., e t al (2006), iridoids, flavonoids and monoterpene glycosides from Galium verum subsp verum, Turk J Chem., 30, 525- 34
14 He Y F-, Nan M L , Sun J, M „ et al (2012), Synthesis, characterization and cytotoxicity of new rotundic acid derivatives, Molecules, 7,1 278-91.
15 Hess S c , Monache F D (1999), Divergioic acid, a triỉerpene from Vochysia divergens, J Braz Chem Soc., 10(2), 104-06
16 Hussain A z., Kumaresan s (2013), Phytochemical and antimicrobial evaluation of Oldenlandia corymbosa, Asian J Plant Sci Res., (4), 155-58
17 Mahato s B „ Kundu A p (1994), 13c NMR spectra o f pentacylic triterpenoids A compilation and some salient features, Phytochemistry, 37 (6), 1517-75.
18 Nakatani M., Miyazaki Y., iwashita T., etal (1989), Triterpenes from Ilex rotunda fruits, Phytochemistry, 28 (5), 1479-82
19 Neto c c , Vaisberg A, J., Zhou B N.( e t al (2000), Cytotoxic triterpene acids from the Peruvian medicinal plant Polylepis racemosa, Planta Med., 66 (5), 483-84
20 Nisa Khoirun, Ito Takuya, Subehan, et al (2016), New acylphioroglucinol derivatives from the leaves of Baeckea frutescens, Phytochemistry Letters, 15, 42-45.
21 Quang D N., Hashimoto T., Tanaka M., e t al (2002), Iridoid glucosides from roots of Vietnamese Paederia scandens, Phytochemistry, 60 (5), 505-14.
22 Suzuki S., Hisamichi K „ Endo K (1993), NMR studies and structural assignment of paederoside, Heterocycles, 35 (2), 895-900.
23 Vieira I J c , Mathias L., Braz-Filho R., et al (1999), Iridoids from Borreria verticillata, Organic Letters, (8), 1169-71
24 World Health Organization (2014), Antimicrobial resistance: global report on surveillance, France.