Nghiên cứu định lượng atractylenolide III trong thân rễ bạch truật (atractylodes macrophala koidz) bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao bắt cặp detector dad​

dP rm ac y, KHOA Y DƯỢC VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ine an TRẦN NGỌC TUÂN M ed ic NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD Co py rig ht @ Sc ho ol of KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2019 KHOA Y DƯỢC dP rm ac y, Người thực : TRẦN NGỌC TUÂN VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD Khóa: QH2014.Y Người hướng dẫn: ed ic TS Hoàng Lê Sơn ine an KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Co py rig ht @ Sc ho ol of M PGS.TS Nguyễn Thanh Hải HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN dP rm ac y, VN U Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới Tiến sĩ Hoàng Lê Sơn – Khoa Bào chế Chế biến PGS.Tiến sĩ Nguyễn Thanh Hải – Chủ nhiệm môn Bào chế khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, Viện Dược Liệu người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực khóa luận Tôi xin cảm ơn thầy cô môn Bào chế - khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội khoa Bào chế Chế biến – Viện Dược Liệu, tạo điều kiện để thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm, Phòng ban khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tồn thể thầy giáo khoa cho kiến thức quý báu suốt năm học tập, sinh hoạt rèn luyện khoa ine an Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình bạn bè ln bên cạnh, động viên tơi lúc khó khắn q trình thực khóa luận tháng Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic Hà Nội, ngày Trần Ngọc Tuân năm 2019 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Giới hạn phát (Limit Of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit Of Quantitation) HPLC Sắc ký lỏng hiệu Chromatography) DAD Máy đo quang (Diode Array Detector) RSD Độ lệch chuẩn tương đối ACN Acetonitrile USP Dược điển Hoa Kì ICH Hội nghị quốc tế hài hồ hố thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người an ine ed ic M of ho ol Sc @ ht rig py Co (High Performance dP rm ac y, cao VN U LOD Liquid Tên bảng Bảng Số trang Hóa chất thuốc thử dùng nghiên cứu Trang thiết bị, máy móc sủ dụng nghiên cứu 16 Kết sắc ký đồ khảo sát hệ dung môi pha động với chương trình chạy đẳng dịng HPLC-DAD, bước sóng phát 220nm Kết diện tích pic lần chiết mẫu Bạch truật với Ethanol 96% phân tích HPLC-DAD 17 Các thông số đánh giá HPLC Atractylenolide III 18 Kết độ tuyến tính phương pháp HPLC định lượng Atractylenolide III với dãy nồng độ chuẩn 20 21 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu chuẩn nồng độ 26µg/ml Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu Bạch truật chiết với Ethanol 96% 22 Kết đánh giá độ thu hồi phương pháp định lượng mẫu thử thêm chuẩn Atractylenolide III 22 10 Kết xác định hàm lượng Atractylenolide III mẫu Bạch truật Việt Nam Trung Quốc 23 rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm ac y, py Co VN U DANH MỤC BẢNG BIỂU 9 DANH MỤC HÌNH ẢNH Tên hình Số trang VN U Hình Cơng thức cấu tạo số chất bạch truật Công thức cấu tạo Atractylenolide III Sắc ký đồ phân tích bước sóng 220nm - 254nm bước sóng hấp thụ cực đại Atractylenolide III 15 Sắc ký đồ HPLCđánh giá độ đặc hiệu phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu thử, mẫu thử thêm chuẩn mẫu chuẩn 28 Sắc ký đồ HPLC Atractylenolide III với nồng độ 0,065µg/ml 0,65µg/ml 19 Đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ nồng độ diện tích pic dung dịch chất chuẩn Atractylenolide III 20 Sắc ký đồ phân tích Atractylenolide III mẫu Bạch truật HPLC-DAD 24 Phổ hấp thụ UV thành phần khác mẫu Bạch truật Việt Nam 24 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm ac y, MỤC LỤC VN U MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG - TỔNG QUAN dP rm ac y, 1.1 Giới thiệu chung bạch truật 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Mô tả thực vật, phận dùng 1.1.3 Phân bố, thu hái chế biến 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dược lý .5 an 1.2 Tổng quan vị thuốc Bạch thuật ine 1.3 Vài nét hoạt chất Atractylenolide III 1.4 Các nghiên cứu định lượng Atractylenolide III bạch truật .8 ed ic CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu M 2.2 Trang thiết bị, dung mơi, hóa chất of 2.3 Phương pháp nghiên cứu 10 2.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 10 ho ol 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 10 2.3.3 Thẩm định quy trình phân tích 10 Sc 2.3.4 Phương pháp xử lý đánh giá kết 13 CHƯƠNG - KẾT QUẢ 15 @ 3.1 Xây dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III 15 ht 3.1.1 Xác định bước sóng phát chất chuẩn Atractylenolide III 15 rig 3.1.2 Xây dựng điều kiện sắc ký mẫu Bạch truật HPLC-DAD 15 Co py 3.1.3 Xác định điều kiện tối ưu hóa xử lý mẫu 17 3.1.4 Điều kiện chạy sắc ký HPLC 17 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 18 3.2.1 Tính đặc hiệu phương pháp 18 VN U 3.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng 19 3.2.3 Độ tuyến tính 19 3.2.4 Độ thích hợp hệ thống 21 dP rm ac y, 3.2.5 Độ lặp lại 21 3.2.6 Độ 22 3.3 Ứng dụng phương pháp xác định hàm lượng dược chất củ Bạch truật 23 CHƯƠNG - BÀN LUẬN 25 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 26 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an TÀI LIỆU THAM KHẢO MỞ ĐẦU VN U Bạch truật vị thuốc từ loài Atractylodes macrocephala Koidz (Họ Compossitae), có vị trí quan trọng cổ phương đơn độc Đông Á ngàn năm để điều trị số chứng bệnh đau dày, bụng dP rm ac y, trướng đầy, ung thư, chứng loãng xương béo phì Khoảng bảy mươi hợp chất xác định cấu trúc hóa học đa phần thuộc nhóm sesquiterpenoid, phenolic acid polyacetylene mối liên hệ với tác dụng lâm sàng chưa rõ ràng Cả chất tinh khiết lẫn cao dịch chiết thể tác dụng dược lý mạnh cải thiện hệ tiêu hóa thơng qua bào IEC-6, kháng số dòng tế bào ung thư gồm HepG2, LOVO, CEM, MKN-45, kích thích miễn dịch, kháng viêm, chống oxy hóa, cải thiện khả nhớ chuột Với lợi ích an lâm sàng hiệu điều trị chứng minh, Bạch truật bắt đầu di thực ine Việt Nam từ năm 1970 trồng phổ biên Lào Cai, Sơn La, Hà Giang, Hà Nội Lâm Đồng Hiện tại, nghiên cứu công bố hàm lượng dược ed ic chất có Bạch truật di thực cịn hạn chế Do đó, chúng tơi thực đề tài “Nghiên cứu định lượng Atractylenolide III thân rễ bạch truật M (Atractylodes macrophala Koidz) sắc ký lỏng hiệu cao bắt cặp - of detector DAD” với hai mục tiêu đây: Xây dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III thân rễ - ho ol Bạch truật phương pháp HPLC-DAD Ứng dụng phương pháp để định lượng hàm lượng Atractylenolide III Sc mẫu Bạch truật Việt Nam Trung Quốc @ Lựa chọn chất nghiên cứu Atractylenolide III hoạt chất thể tác dụng bảo vệ đường tiêu hóa, chống lỗng xương, cải thiện trí nhớ, kháng ht viêm mơ hình dược lý giải thích sau Hàm lượng Atractylenolide rig III thấp so với atractylenolide I II gây khó khăn trình định lượng py điều phản ảnh thực tế tác dụng cao dịch chiết Bạch truật lại tốt đơn chất riêng biệt Kiểm soát chất nhỏ có lợi ích trường hợp Co CHƯƠNG - TỔNG QUAN VN U 1.1 Giới thiệu chung bạch truật 1.1.1 Tên khoa học dP rm ac y, Bạch truật có tên khoa học Atractylodes macrocephala Koidz thuộc họ Cúc (Compossitae) [1] 1.1.2 Mô tả thực vật, phận dùng Đặc điểm: Cây thảo, sống lâu năm, có thân rễ to, mọc đất Thân thẳng, cao 0.3-0.8m, đơn độc phân nhánh phận trên, phần thân hóa gỗ Lá mọc cách, dài Lá phần thân có cuống dài, phần có cuống ngắn, gốc rộng, bọc lấy thân Phiến xẻ sâu thành thùy, thùy lớn, hình trứng tròn, an hai đầu nhọn, hai thùy bên nhỏ hơn, hình trứng mũi mác, phần gốc khơng đối xứng ine Các gần thân có phiến ngun, hình thn hình trứng mũi mác, mép có cưa Đầu lớn, phần có bắc hình xẻ sâu, hình lơng chim Bao ed ic hình chng, có bắc mỏng xếp thành hàng Lá bắc nhỏ hình trứng tam giác, to dần phía Hoa nhiều, tràng hình ống, phần màu trắng, phần M màu đỏ tím, xẻ làm thùy hình mũi mác, xoắn ngồi Năm nhị hàn liền (có of nhị bị thối hóa), nhị hình sợi dẹp Bầu thon mặt ngồi có lơng nhung, màu nâu nhạt, đoạn có lơng hình lơng chim Vịi hình màu tím nhạt đầu nhị xẻ thành ho ol thùy nơng hình đầu, mặt ngồi có lơng ngắn Quả bế, thuôn, dẹp, màu xám [2] ngà [2,10] Sc Bộ phận dùng làm thuốc: Dùng thân rễ cứng chắc, có dầu thơm nhẹ, ruột màu trắng @ 1.1.3 Phân bố, thu hái chế biến Phân bố: Bạch truật trồng chủ yếu Trung Quốc Đến năm 1970, Bạch truật ht bắt đầu di thực trồng Lào Cai, Sơn La, Hà Giang, Hà Nội rig Lâm Đồng [2,10] py Thu hái sơ chế: Cây trồng bạch truật thu hái từ cuối tháng 10 đến đầu tháng 11 Co (thường từ 8-22/11) Lúc thu hoạch, chọn ngày nắng ráo, đất khô, nhổ nhẹ nhàng Sau nhổ, lấy dao cất bỏ thân đem củ chế biến [1,10] III với mẫu bạch truật chiết với Ethanol 96% Lần Lần Khối lượng dược liệu (g) 0,2019 0,1975 0,1532 Hàm lượng Atractynolide III (%) 0,0822 TB hàm lượng (%) Lần Lần 0,1989 0,1512 dP rm ac y, Lần VN U Bảng 8: Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp định lượng Atractylenolide 0,0800 0,0789 0,0805 0,0808 0,0836 1,2691 RSD (%) Kết nhận xét: Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) 2% cho thấy phương pháp an xây dựng có độ lặp lại cao ine 3.2.6 Độ ed ic Độ đánh giá theo phương pháp trình bày Độ đánh giá qua độ thu đồ dược chất cần phân tích Atractylenolide III 98-102% theo quy định ICH độ lệch chuẩn tương đối (RSD) lần lặp lại mẫu đánh giá độ M thu hồi  2% Kết trình bày bảng of Bảng 9: Kết đánh giá độ thu hồi phương pháp định lượng mẫu thử ho ol thêm chuẩn Atractylenolide III Nồng độ Nồng độ thêm Nồng độ dược dược chất thêm chuẩn mẫu chuẩn chất thu hồi (µg/ml) (µg/ml) 19,5 rig ht @ (µg/ml) Sc Nồng độ Co py 24,2 23,9 Độ thu hồi RSD (µg/ml) (%) (%) 44,080 19,8801 101,95 44,097 19,8970 102,04 44,021 19,8209 101,65 47,711 23,5112 98,37 0,20 1,79 47,974 23,7744 22 99,48 101,86 54,204 29,9667 101,96 54,084 29,8840 101,68 54,067 29,8671 101,62 VN U 24,3452 0,19 dP rm ac y, 29,39 49,027 Kết nhận xét: Độ thu hồi trung bình phương pháp định lượng Atractylenolide III dược liệu bạch truật sắc ký lỏng hiệu cao HPLC đạt khoảng 98-102%, chứng tỏ phương pháp xây dựng có độ cao 3.3 Ứng dụng phương pháp xác định hàm lượng dược chất củ bạch an truật Phân tích hàm lượng Atractylenolide III mẫu dược liệu Việt Nam Trung ine Quốc phương pháp xây dựng Kết trình bày bảng 10 so ed ic sánh sắc ký đồ hai mẫu bạch truật Việt Nam truật Trung Quốc hình Bảng 10: Kết xác định hàm lượng Atractylenolide III mẫu bạch truật Việt Mẫu ho ol Mẫu Việt Nam of M Nam Trung Quốc Hàm lượng Atractylenolide III(%) M1 0,0628 M2 0,0822 Co py rig ht @ Sc Mẫu Trung Quốc Tên Mẫu 23 VN U dP rm ac y, B A Hình 7: Sắc ký đồ phân tích Atractylenolide III mẫu Bạch truật HPLC- ho ol of M ed ic ine an DAD A- Bạch truật Việt Nam, B- Bạch truật Trung Quốc Hình 8: Phổ hấp thụ UV thành phần khác mẫu bạch truật Việt Nam Sc Nhận xét: Dựa vào kết cho thấy bạch truật trồng Việt Nam Trung Quốc có hàm lượng Atractynolide III 0,06 0,08%, tương ứng So sánh @ phổ đồ, bạch truật Việt Nam xuất số pic khác (UV hình 8), điều cho thấy, bạch truật Việt Nam cần số nghiên cứu khác thành phần ht hóa học Điều lý giải áp dụng điều kiện chạy dược điển Hồng Kông lại Co py rig thất bại mẫu dược liệu Việt Nam 24 CHƯƠNG - BÀN LUẬN VN U Trong nghiên cứu này, phương pháp định lượng Atractylenolide III thân rễ bạch truật xây dựng thẩm định Trong đó, điều kiện pha động HPLC-DAD MeOH :H2O có tỷ lệ 43 :57 Độ xác phương pháp đạt sau dP rm ac y, thẩm định theo hướng dẫn ICH Kết áp dụng phương pháp vừa xây dựng cho thấy Atractynolide III mẫu trồng Việt Nam thấp Trung Quốc Do mẫu thu thập bị giới hạn số lượng, cần nghiên cứu với cỡ mẫu lớn để khẳng định chắn khác biệt Tuy nhiên, giá trị thu cao nhiều lần yêu cầu dược điển Hồng Kông yêu cầu 0,019% Chứng tỏ, bạch truật thu hái Việt Nam có đủ điều kiện thâm nhập thị an trường dược liệu Hồng Kông, nơi cửa ngõ giao thương bên vào Trung Quốc nhiều nơi khác giới ine Bên cạnh đó, hai phổ đồ thu thể rõ khác biệt peak phụ Điều ed ic cho thấy tiềm sinh học thành phần hóa học trồng Việt Nam chưa khám phá hết Mặt khác, điều gây khó khăn khơng thể áp dụng dược điển Hồng Kơng phân tích mẫu Bạch truật Việt Nam Phương M pháp phân tích vừa xây dựng áp dụng tốt cho đối tượng Dược liệu nguồn gốc of từ Trung quốc ho ol Từ đó, chúng tơi đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu thành phần hóa học tác dụng dược lý bạch truật Việt Nam Và nghiên cứu sau tập trung tăng số lượng mẫu để đưa giới hạn hàm lượng Atractynolide III tiêu chuẩn Co py rig ht @ Sc sở bạch truật trồng Việt Nam 25 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Hệ dung môi: ACN: nước (43: 57) - Cột sắc ký pha đảo: Supleco C-18(5µm, 250 x 4,6mm) - Thể tích tiêm mẫu: 20 µl - Bước sóng cực đại: 220 nm - Thời gian sắc ký: 30 phút dP rm ac y, - VN U Điều kiện phân tích HPLC Atractynolide III mẫu bạch truật sau: Bạch truật thu hái Việt Nam có hàm lương Atractynolide III 0,06% Trung Quốc 0,08% Phổ đồ Bạch Truật Việt Nam có quan sát thấy khác biệt Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an với Trung Quốc peak phụ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO VN U Tiếng Việt [1] Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam Bạch truật IV, Nhà xuất Y học, pp dP rm ac y, 693 - 694 [2] Bộ Khoa học công nghệ (2007), Thực vật chí Việt Nam họ Cúc tập 7, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, pp 523 – 524 [3] Trường Thụ Sinh (2012) , Trung Dươc Lâm Sàng, Nhà xuất Y học, pp 314 – 316 [4] Viện Dược Liệu (1993), Tài nguyên thuốc Việt Nam Bạch truật, Nhà xuất an Khoa học Kỹ thuật liệu, pp 360 – 382 [5] Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm (2010), Thẩm định phương pháp ine phân tích hố học vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ thuật, pp.10-59 ed ic Tiếng Anh [6] Bilal Yilmaz, Emrah Alkan (2015), “Spectrofluorometric and M Spectrofluorometric and UV Spectrofluorometric Methods for the of Determination of Flurbiprofen in Pharmaceutical Preparations”, Journal of Pharmaceutical Analysis, 4(4) ho ol [7] Bo Zhu (2018), “The traditional uses, phytochemistry, and pharmacology of Sc Atractylodes macrocephala Koidz”, Journal of ethnopharmacology [8] Brian A Bidlingmeyer (1992), Practical HPLC Methodology and Applications, @ Wiley Series in Engineering and Technology Management, pp 67 – 103 ht [9] Danilo Corradini (2016), Handbook of HPLC second edition, Chromatographic rig science series, pp 207 – 232 Co py [10] Chinese Pharmacopoeia Commission (2015), Pharmacopoeia of the peoples republic of China – English Edition(2015), Chemical Industry Press, pp 524 – 526 [11] Elsevier Science (2017), “Application of Atractylodes Macrocephala Koidz engineering, 174, pp 410 -415 [12] George Lunn, Norman R Schmuff (2000) - HPLC Methods for dP rm ac y, Pharmaceutical Analysis, Wiley-Blackwell, pp 232 – 250 VN U Extract in Methicillin - Resistant Staphylococcus Aureus”, Procedia [13] Hao Kai (2012), “Study on chemical fingerprinting of crude and processed Atractylodes macrocephala from different locations in Zhejiang province by reversed-phase high-performance liquid chromatography coupled with hierarchical cluster analysis”, Pharmacognosy magazine, 8(32) [14] Hildebert Wagner, Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal an Medicines: Thin-layer and High Performance Liquid Chromatography of ine Chinese Drugs, Springer Science & Business Media, pp 113 - 123 [15] Hson-Mou Chang(1986), Pharmacology and Applications of Chinese Materia ed ic Medica, World Scientific, pp 349 - 353 [16] Kokane Vikrant (2014), “Formulation and evaluation of topical flurbiprofen M gel using different gelling agents”, World Journal of Pharmacy and of Pharmaceutical Sciences, 3(9), pp 654 - 663 ho ol [17] Jiaju Zhou (2003), Traditional Chinese Medicines: Molecular Structures, Natural Sources and Applications, Wiley, pp 235 - 242 Sc [18] Joel K Swadesh (2000), HPLC: Practical and Industrial Applications, Second Edition CRC Press, pp 25 - 35 @ [19] Lena Ohannesian (2001), Handbook of Pharmaceutical Analysis, CRC Press, ht pp – 12 rig [20] Monika Waksmundzka-Ha nos, Joseph Sherma (2010), High Performance py Liquid Chromatography in Phytochemical Analysis, CRC Express, pp – 12 Co [21] Murray, Kermit K., et al (2013), "Definitions of terms relating to mass spectrometry (IUPAC Recommendations 2013)", Pure and Applied Chemistry, 85(7), pp 1515-1609 7th Edition vol 2, Maisonneuve, pp, 1047 – 1050 VN U [22] The Europaean Pharmacopieal Commission (2010), Pharmacopoeia Europaea [23] The government of Hong Kong Special Administrative region (2002), Hong Kong Chinese Materia Medica Standards, Chinese medicine division, pp 265 dP rm ac y, – 273 [24] Toshihiko T Hanai (2007), HPLC: A Practical Guide, Royal Society of Chemistry, pp 11 – 29 [25] United States Pharmacopoeial Convention (2010), United States Pharmacopoeia 35th Edition, United States Pharmacopeial Convention, pp 970 – 973 an [26] Xu, Shizao (2018), “UPLC-MS/MS of Atractylenolide I, Atractylenolide II, ine Atractylenolide III, and Atractyloside A in Rat Plasma after Oral Administration of Raw and Wheat Bran-Processed Atractylodis Rhizoma”, ed ic Morecules, 23(12), pp 3234 [27] Weici Tang, Gerhard Eisenbrand (2013), Chinese Drugs of Plant M Origin: Chemistry, Pharmacology, and Use in Traditional and Modern Co py rig ht @ Sc ho ol of Medicine, Springer Science & Business Media, pp.199 – 201 ... U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD Khóa: QH2014.Y... Bạch truật di thực cịn hạn chế Do đó, chúng tơi thực đề tài ? ?Nghiên cứu định lượng Atractylenolide III thân rễ bạch truật M (Atractylodes macrophala Koidz) sắc ký lỏng hiệu cao bắt cặp - of detector. .. dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III thân rễ - ho ol Bạch truật phương pháp HPLC-DAD Ứng dụng phương pháp để định lượng hàm lượng Atractylenolide III Sc mẫu Bạch truật Việt Nam Trung