Khảo sát biểu phân tử miR-141 bệnh nhân ung thư vòm họng cộng đồng người Việt Nam Lao Đức Thuận 2019 MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC BẢNG BIỂU iii DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Dịch tễ tỷ lệ mắc bệnh 1.2 Triệu chứng UTVH bệnh nguyên 1.2.1 Yếu tố môi trường 1.2.2 Yếu tố di truyền 1.2.3 Sự xâm nhiễm Epstein-Barr virus 1.3 Epigenetics ung thư vòm họng 1.3.1 microRNA: biểu ung thư vòm họng 1.3.2 Quá trình sinh tổng hợp miRNA 1.3.3 Cơ chế điều hòa miRNA 1.3.4 miRNAs biểu ung thư vòm họng 11 CHƯƠNG VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Phương pháp thu nhận mẫu nghiên cứu 14 2.2 Khai thác liệu tính chất biểu miR-141 14 2.3 Phương pháp tách chiết miRNA phát miR-141 15 2.4 Thống kê, phân tích số liệu thực nghiệm 17 CHƯƠNG CÁC NỘI DUNG ĐÃ ĐĂNG KÝ THỰC HIỆN 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ - BIỆN LUẬN 20 4.1 Đặc điểm mẫu nghiên cứu 20 4.2 Khai thác liệu – khảo sát in silico 24 4.3 Kết tách chiết miRNAs 30 KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 37 6.1 Kết luận 37 6.2 Kiến nghị 37 Trang i TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 SẢN PHẨM KHOA HỌC – ĐÀO TẠO 42 6.3 Sản phẩm khoa học 42 6.4 Sản phẩm đào tạo 42 Trang ii DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Cơ sở liệu miRNAs biểu bất thường UTVH Bảng 2.1 Bộ mồi thân cuộn sử dụng cho phát miR-141 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng Reverse Transcriptase PCR, Real-time PCR cho miR-141 Bảng 2.3 Chu trình nhiệt phản ứng Reverse Transcriptase PCR, Real-time PCR cho miR141 Bảng 3.1 Các nội dung đăng ký thực Bảng 4.1 Thông tin đặc điểm mẫu sinh thiết thu nhận phòng khám Tai Mũi Họng – Bệnh viện Chợ Rẫy, Tp HCM Bảng 4.2 Tỷ lệ dạng UTVH thống kê theo WHO, 2005 số nước giới Bảng 4.3 Khai thác liệu báo liên quan đến miR-141 Bảng 4.4 Các đặc điểm mồi StL-F StL-R Bảng 4.5 Kết tách chiết miRNAs số mẫu sinh thiết số mẫu dịch phết vịm họng Bảng 4.6 Kết Tính chất biểu miR-141 UVTH mẫu lành Bảng 4.7 Hệ thống điểm giá trị OR RR y học (Medcalc © 2018) Bảng 4.8 Giá trị trung bình Ct mẫu sinh thiết mơ UTVH giá trị 2-Ct đánh giá biểu miR-141 so với chứng nội U6snRNA Bảng 4.9 Kết thể tính tương quan miR-141 với đặc điểm lâm sàng, mẫu sinh thiết mô UTVH Trang iii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc họng vị trí khối u vịm họng Hình 1.2 Sơ đồ mơ tả bệnh ngun UTVH Hình 1.3 Cấu trúc phân tử Drosha người Hình 1.4 Cấu trúc phân tử Dicer Hình 1.5 Con đường sinh tổng hợp miRNAs Hình 1.6 miRNA đóng vai trị (a) ức chế khối u; (b) oncogene Hình 1.7 Sự bắt cặp mạch “guide” miRNA với mạch mRNA mục tiêu Hình 4.1 Cấu trúc kẹp tóc StL-miR-141 Hình 4.2 Vị trí bắt cặp mồi StL-miR-141 với trình tự has-miR-141 Hình 4.3 Kết gióng cột trình tự has-miR-141/200a/200b/200c/429 Hình 4.4 Kết kiểm tra tính bắt cặp cặp mồi StL-F, StL-R với sản phẩm khuếch đại mồi Stem-loop StL-miR-141 Hình 4.5 Kết khuếch đại gen chứng nội U6snRNA mẫu thí nghiệm Hình 4.6 Kết (A) Real-time PCR; (B) điện di phát miR-141 số mẫu đại diện UTVH (1) (6): mẫu mô sinh thiết UTVH; (7): chứng âm (nước) Trang iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT EBV: Epstein-Barr virus miRNA: microRNA NPC: Nasopharyngeal carcinoma (UTVH: Ung thư vòm họng) OR: Odds ratio: tỷ số chênh RR: relative risk: tỷ số nguy RT-PCR: Reverse transcriptase PCR Pri-miRNA: primary microRNA Trang v CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Dịch tễ tỷ lệ mắc bệnh Ung thư vòm họng (UTVH) (Nasopharyngeal carcinoma) khối u ác tính xuất phát từ biểu mơ vùng vịm họng (epithelial of nasopharynx) (Hình 1.1) UTVH loại ung thư phổ biến loại ung thư vùng đầu cổ (Mahdavifar et al., 2016) Hình 1.1 Cấu trúc họng vị trí khối u vịm họng Theo kết nghiên cứu Mahdavifar cs., (2016) thực dựa sở trích xuất liệu tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ tử vong theo độ tuổi (ASR: age-specific incidence and mortality rate) từ chương trình nghiên cứu ung thư giới (global cancer project: http://globocan.iarc.fr/Default.aspx) (Ferlay, GLOBOCAN, 2012) số phát triển người (HDI: Human development index) (Malik, 2013) từ báo cáo phát triển người (Human development report) cho thấy: (1) Tỷ lệ mắc bệnh: - 86.691 trường hợp UTVH ghi nhận vào năm 2012 Trong đó: 60.896 trường hợp ghi nhận nam giới 25.795 trường hợp ghi nhận nữ giới (Tỷ lệ mắc bệnh theo giới tính: nam/nữ = 2,36) - 8.053 trường hợp ghi nhận quốc gia có số HDI cao, 61.229 trường hợp ghi nhận quốc gia có số HDI trung bình, 8.535 trường hợp ghi nhận quốc gia có số HDI thấp Trang - Tỷ lệ mắc UTVH cao ghi nhận năm quốc gia, cụ thể 33.198 trường hợp ghi nhận Trung Quốc (Nam: 23.581 trường hợp; Nữ: 9.617 trường hợp), 13.084 trường hợp ghi nhận Indonesia (Nam: 9.355 trường hợp; Nữ: 3.729 trường hợp), 4.931 trường hợp ghi nhận Việt Nam (Nam: 3.301 trường hợp; Nữ: 1630 trường hợp), 3.947 trường hợp ghi nhận Ấn độ (Nam: 2.956 trường hợp; Nữ: 991 trường hợp), 2.030 trường hợp ghi nhận Malaysia (2) Tỷ lệ tử vong: - 50.831 trường hợp UTVH tử vong ghi nhận giới Trong đó: 35.756 trường hợp nam giới, 15.075 trường hợp nữ giới (Tỷ lệ tử vong theo giới tính: nam/nữ = 2.37) - 3.948 trường hợp tử vong ghi nhận quốc gia có số HDI cao, 3.852 trường hợp ghi nhận quốc gia có số HDI thấp, 6.105 trường hợp ghi nhận quốc gia có số HDI thấp - Tỷ lệ tử vong ghi nhận cao quốc gia: Trung Quốc với 20.404 trường hợp, Indonesia với 7.391 trường hợp, Việt Nam với 2.885 trường hợp, Ấn Độ với 2,836 trường hợp, Thái Lan với 1.114 trường hợp Tại Việt Nam, chưa có nghiên cứu thống kê đầy đủ tình hình mắc bệnh, tỷ lệ tử vong UTVH Tuy nhiên, theo kết nghiên cứu Mahdavifar cs., (2016) đề cập UTVH Việt Nam xếp thứ ba năm quốc gia có tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ tử vong cao giới Đồng thời, theo ghi nhận từ chương trình nghiên cứu ung thư giới, UTVH Việt Nam đứng thứ năm loại ung thư mắc phải, sau loại ung thư như: ung thư phổi, ung thư gan, ung thư vú, dày, đứng đầu loại ung thư vùng đầu cổ 1.2 Triệu chứng UTVH bệnh nguyên Hiện nay, chẩn đoán thường quy bao gồm: chẩn đốn hình ảnh (chụp X quang, chụp cộng hưởng từ…), giải phẫu bệnh, hóa mơ miễn dịch, … Bệnh nhân UTVH giai đoạn sớm bệnh thường khơng có triệu chứng có triệu chứng khơng rõ ràng, dễ Trang bị bỏ sót triệu chứng đa phần không đặc trưng sưng cổ, tắc nghẹn mũi, chảy máu cam, ù tai… (Sham et al., 1990; Chu et al., 2008) Bệnh phát giai đoạn cuối, làm ảnh hưởng đến khả điều trị bệnh khả sống sót bệnh nhân Do đó, việc tìm kiếm hay vài dấu chứng sinh học (biomarker) nhằm sử dụng chúng thị hỗ trợ tiên lượng, chẩn đoán sớm kể nghiên cứu thử nghiệm hình thức trị liệu ung thư nói chung UTVH nói riêng cần thiết Ba nhóm ngun nhân gây nên UTVH bao gồm: (1) Yếu tố môi trường (Environmental factors); (2) Yếu tố di truyền (Genetic factors); (3) Yếu tố nhiễm: xâm nhiễm Epstein-Barr virus (EBV) (Hildesheim, Levine, 1993; Tao, Chan, 2007; Frappier, 2012; Lao et al., 2018) (Hình 1.2) Hình 1.2 Sơ đồ mơ tả bệnh ngun UTVH (Lao et al., 2018) 1.2.1 Yếu tố môi trường Các yếu tố mơi trường, bao gồm điều kiện khí hậu, khói bụi, tình trạng nhiễm mơi trường, tập quán ăn uống, chứng minh làm tăng nguy mắc bệnh UVTH (Yu et al., 1986; Armstrong et al., 2000; Gallicchio et al., 2006) Một nghiên cứu ca chứng điển hình thực vào năm 1986 Yu cs., kết cho thấy việc cá muối (CantoneseTrang style salted fish) làm tăng nguy mắc bệnh Một nghiên cứu khác việc sử dụng thường xuyên thực phẩm bảo quan yếu tố liên quan mật thiết đến phát sinh khối u vòm họng (Gallicchio et al., 2006) Điều giải thích là: thực phẩm chứa thành phần gây ung thư nitrosamine, tiền chất nitrosamine, độc tố, … (Shao et al., 1988) Hút thuốc hay sử dụng thức uống có lượng cồn cao nguyên nhân làm tăng nguy mắc UTVH (Hildesheim, Levine, 1993) 1.2.2 Yếu tố di truyền Sự thay đổi di truyền nguyên nhân dẫn đến hình thành phát triển UTVH Yếu tố di truyền xem xét nhiều khía cạnh khác nhau: (1) Một số nghiên cứu đường ổn định nhiễm sắc thể nội người, chẳng hạn tính dị hợp tử (LOH, loss of heterozygosity) vị trí nhiễm sắc thể số 3, số 4, số 11, số 14, … hay đột biến gen sinh ung bcl-2, PIK3CA, NRAS, … hay gen ức chế khối u p53 minh chứng có liên quan đến hình thành khối u vịm họng (Lo et al., 1992; Hui et al., 1996; Cheng et al., 1997; Chan et al., 2000; Zhang et al., 2014) (2) Trong năm gần đây, tính chất đa hình (polymorphisms) gen CYP2E1, GSTM1, XRCC1, … chứng minh có liên quan đến q trình phát sinh khối u vòm họng (Cao et al., 2006; Xu et al., 2014) (3) Các tượng epigenetics, bao gồm tính chất methyl hóa, biến đổi histon, biểu microRNA, có vai trị quan trọng việc hình thành phát triển ung thư vịm họng thơng qua việc thay đổi biểu gen liên quan đến chức tăng sinh tế bào, apoptosis, biệt hóa, xâm lấn di cư RASSF1A, p16/INK4A, p14/ARF, Blu, E-cadherin, microRNA-141, microRNA-29c, … (Lo et al., 2002; Li et al., 2011; Dai et al., 2016; Spence et al., 2016; Lao et al., 2018) 1.2.3 Sự xâm nhiễm Epstein-Barr virus Song song với yếu tố môi trường, yếu tố di truyền, xâm nhiễm Epstein-Barr virus (EBV) nguyên dẫn đến UTVH (Niedobitek et al., 1996; Niedobitek, 2000; RaabTraub, 2002) Các nghiên cứu huyết học khẳng định EBV diện hầu hết bệnh nhân UTVH Điều đáng lưu ý năm gần đây, khẳng định Trang so với cấu trúc (B) Do đó, trình tự mồi StL-miR-141 mơ dạng cấu trúc tiền thân miRNA (pre-miRNA) Về khả bắt cặp mồi StL-miR-141, vị trí đầu 3’: trình tự 3’TCTACC5’ bắt cặp đặc hiệu với Nu trình tự has-miR-141 5’AGAUGG3’ (phần đóng khung màu đỏ, hình 4.2) Hình 4.2 Vị trí bắt cặp mồi StL-miR-141 với trình tự has-miR-141 Mồi StL-miR-141 sử dụng để bắt cặp với miR-141 chuyển miR-141 thành cDNA nhờ phản ứng RT-PCR Nhờ tác dụng enzyme Reverse Transciptase, vị trí kéo dài đầu 3’ mồi StL-miR-141, phần kéo dài thể Nu màu xanh, hình 4.2 Kết trình chuyển đổi tạo thành sản phẩm có trình tự sau: 3’ATTGTGACAGACCATTTCTACCCAGCATAGGTCACGCTTATGGAGCCT GGGACGTGACCTATGCTG5’ (Ghi chú: màu xanh: vị trí kéo dài; màu đen: trình tự mồi StL-miR-141; phần đóng khung màu đỏ: vị trí trình tự đầu 3’ đặc hiệu với has-miR141) Tính đặc hiệu mồi StL-miR-141 tiến hành kiểm tra với trình tự miRNAs có độ tương đồng với has-miR-141 như: has-miR-200a, has-miR-200b, has-miR-200c, hasmiR-429 Các trình tự trưởng thành has-miR-200a, has-miR-200b, has-miR-200c, hasmiR-429 thu nhận từ ngân hàng miRNAs với mã số truy cập là: MIMAT0001620, MIMAT0004571, MIMAT0004657 MIMAT0001536 Các trình tự thu nhận tiến hành gióng cột với trình tự has-miR-141, kết gióng cột thể hình hình 4.3 Trang 28 Hình 4.3 Kết gióng cột trình tự has-miR-141/200a/200b/200c/429 Kết gióng cột (hình 4.3) cho thấy, trình tự khơng có tương đồng, đặc biệt vị trí Nu (phần đóng khung màu đỏ) Điều chứng minh Nu đầu 3’ 3’TCTACC5’ bắt cặp đặc hiệu với Nu trình tự has-miR-141 5’AGAUGG3’ Hay nói cách khác, StL-miR-141 đặc hiệu, chuyên biệt với has-miR-141 Trình tự mồi StL-F StL-R phân tích đặc điểm vật lý chương trình IDT Oligoanalyzer (https://sg.idtdna.com/calc/analyzer) Kết phân tích thể bảng 4.4 Bảng 4.4 Các đặc điểm mồi StL-F StL-R Tên mồi L %GC Tm (1) (2) StL-F 21 47.6 % 54.3 0.50 -3.61 (3) -6.21 StL-R 19 52.6 % 54.4 0.46 -6.30 Ghi chú: L (bp): chiều dài; %GC (%): phần trăm GC; Tm (oC): nhiệt độ nóng chảy; lượng ΔG hình thành (Kcal.mole-1) (1) cấu trúc kẹp tóc (Hair spin); (2) Cấu trúc tự bắt cặp (Self-dimer); (3) Cấu trúc dị bắt cặp (Hetero-dimer) Dựa kết phân tích, tiêu vật lý bao gồm chiều dài, phần trăm GC, nhiệt độ nóng chảy lượng tự hình thành cấu trúc thứ cấp đạt so với quy định Sản phẩm khuếch đại cặp mồi StL-F StL-R sản phẩm khuếch đại mồi Stem-loop 71 bps (Hình 4.4) Trang 29 Hình 4.4 Kết kiểm tra tính bắt cặp cặp mồi StL-F, StL-R với sản phẩm khuếch đại mồi Stem-loop StL-miR-141 Ngoài ra, độ đặc hiệu cặp mồi StL-F, StL-R tiến hành kiểm tra thơng qua chương trình BLAST (NCBI: http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), kết kiểm tra khơng có tương đồng với trình tự sở liệu Genbank sử dụng cặp mồi để khuếch đại Hay nói cách khác, cặp mồi StL-F, StL-R đặc hiệu với sản phẩm khuếch đại mồi Stem-loop StL-miR-141 Như vậy, hệ thống mồi StL-miR-141, StL-F, StL-R hoàn toàn đặc hiệu ứng dụng việc phát diện miR-141 mẫu ung thư vòm họng 4.3 Kết tách chiết miRNAs Tất 93 mẫu sinh thiết UTVH 100 mẫu dịch phết tế bào vòm họng (mẫu lành) tiến hành tách chiết miRNAs theo hướng dẫn kit mirVana™miRNA Isolation Kit (#Cat.AM1560, Thermo Fisher Sciencetific) Trong báo cáo này, chúng tơi trình bày đại diện kết tách chiết số mẫu thể bảng 4.5 Bảng 4.5 Kết tách chiết miRNAs số mẫu sinh thiết số mẫu dịch phết vòm họng Mẫu (1) (2) (3) (4) Mẫu (1) (2) (3) (4) N1 1,26 0,61 2,05 41,45 P1 1,57 0,78 2,01 51,78 N2 1,43 0,74 1,94 47,03 P2 1,03 0,52 1,97 33,86 N3 1,30 0,70 1,86 42,97 P3 1,29 0,65 1,98 42,64 N4 1,63 0,90 1,81 53,76 P4 1,32 0,71 1,86 43,66 Trang 30 N5 1,78 0,96 1,87 58,87 P5 1,65 0,83 1,97 54,29 N6 1,85 1,00 1,85 60,89 P6 1,72 0,87 1,98 56,79 N7 1,82 0,90 2,03 60,09 P7 1,66 0,79 2,09 54,68 N8 1,89 0,90 2,10 62,34 P8 1,87 0,91 2,04 61,55 N9 1,58 0,81 1,94 52,07 P9 1,85 0,92 2,01 61,18 N10 1,99 1,09 1,82 65,57 P10 1,76 0,88 2,00 58,15 N11 2,16 1,02 2,12 71,35 P11 1,54 0,81 1,91 50,89 N12 1,97 0,99 1,98 64,85 P12 1,87 0,89 2,10 61,78 N13 1,85 0,89 2,07 60,89 P13 1,54 0,71 2,17 50,92 N14 1,63 0,90 1,81 53,92 P14 1,65 0,90 1,84 54,58 N15 1,76 0,89 1,99 58,15 P15 1,78 0,91 1,96 58,81 N16 1,81 0,92 1,98 59,80 P16 1,92 0,99 1,94 63,39 N17 1,35 0,71 1,89 44,39 P17 1,76 0,92 1,91 58,15 N18 1,60 0,81 1,97 52,73 P18 1,79 0,78 2,29 59,07 N20 1,87 0,93 2,02 61,78 P19 1,47 0,73 2,02 48,41 N21 1,98 0,92 2,16 65,41 P20 1,60 0,90 1,78 52,73 Ghi chú: (1): A260; (2): A280; (3) A260/A280; (4) C (μg/ml); N: mẫu mô sinh thiết UTVH; P: dịch phết vòm họng (mẫu lành) Trang 31 Theo hướng dẫn nhà sản xuất, độ tinh mẫu miRNAs đánh giá dựa tỷ lệ A260/A280 Giá trị mong đợi tỷ số nằm khoảng [1,8 – 2.,1] Dựa kết giá trị OD thể bảng 3.5 cho thấy: tỷ số A260/A280 mẫu thực nghiệm nằm khoảng 1.8 ≤ A260/A280 ≤ 2.1, điều chứng tỏ mẫu tách chiết đạt độ tinh cao sử dụng cho thí nghiệm phân tích sau Khảo sát biểu miR-141 mẫu UTVH mẫu dịch phết vòm họng người Việt Nam Tổng số miRNA mẫu sinh thiết UTVH mẫu dịch phết vòm họng tách chiết kit mirVanaTMmiRNA Isolation Kit (Ambion, Life Technology) Việc kiểm tra biểu miR-141 thực với mồi thân cuộn Chứng nội cho phản ứng sử dụng U6snRNA Kết kiểm tra chứng nội mẫu thí nghiệm thể hình 4.5 (A) (B) Hình 4.5 Kết khuếch đại gen chứng nội U6snRNA mẫu thí nghiệm (A) chu kỳ khuếch đại; (B) Đường cong nóng chảy gen U6snRNA Dựa kết phân tích, chu kỳ ngưỡng U6snRNA mẫu sinh thiết UTVH mẫu lành là: 29,41 ± 1,56; 30,11 ± 1,61 Đồng thời, không ghi nhận khác biệt có ý nghĩa giá trị trung bình giá trị chu kỳ ngưỡng U6snRNA mẫu sinh thiết UTVH mẫu lành (p = 0,53) Do đó, chúng tơi sử dụng U6snRNA làm chứng nội để tính tốn biểu miR-141 mẫu thí nghiệm Kết khuếch đại gene miR-141 thể hình 4.6, hình 4.7 Trang 32 (A) (B) Hình 4.6 Kết (A) Real-time PCR; (B) điện di phát miR-141 số mẫu đại diện UTVH (1) (6): mẫu mô sinh thiết UTVH; (7): chứng âm (nước) Kết khảo sát tính chất biểu miR-141 thể Bảng 4.6 Bảng 4.6 Kết Tính chất biểu miR-141 UVTH mẫu lành miR-141 Bệnh P(%) N(%) 63 30 (n = 93) (67,74) Lành (n = 100) (32,26) 37 63 (37,00) (63,00) p < 0,0001 OR 3,58 95% CI 1,97 – 6,48 p < 0,0001 Trang 33 RR 1,95 95% CI 1,40 – 2,72 p = 0,0001 Dựa kết khảo sát, tần số biểu miR-141 mẫu bệnh cao so với mẫu lành, chênh lệch có chặt chẽ (p < 0,0001) Giá trị OR = 3,58 cho thấy nhóm có biểu miR-141 với nguy mắc bệnh (UTVH) cao gấp 3,58 lần so với nhóm khơng có biểu miR-141 chênh lệch đáng tin cậy (p < 0,0001) Giá trị RR = 1,95 nhóm có biểu miR-141 cao gấp 1,95 lần so với nhóm khơng có biểu miR141 khác biệt có ý nghĩa (p < 0,0001) Hay nói cách khác, giá trị OR RR lớn cho ý nghĩa khả mắc bệnh UVTH có biểu miR-141 (Ghi chú: Quy ước hệ thống điểm giá trị kappa AUC thể bảng 4.7) Bảng 4.7 Hệ thống điểm giá trị OR RR y học (Medcalc © 2018) Giá trị OR Điểm >1 Giá trị RR Ý nghĩa Điểm Khả mắc bệnh cao khả không mắc bệnh >1 Khả mắc bệnh khả =1 không mắc bệnh Ý nghĩa Yếu tố phơi nhiễm làm tăng khả mắc bệnh Khơng có mối liên hệ =1 yếu tố phơi nhiễm khả mắc bệnh 0,05) Tính chất biểu miR-141 có tương quan chặt chẽ với giai đoạn bệnh, cụ thể tăng biểu cao giai đoạn IV với 44,09% (41/93 mẫu) (đối với miR-141) 40,86% (38/93 mẫu) (đối với miR-214) Sự tương quan ghi nhận cơng trình nghiên cứu Liu et al (2016), Liu et al (2018), Deng et al (2013) Trang 36 KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 6.1 Kết luận Qua trình thực đề tài, số kết luận rút sau: - Các nội dung nghiên cứu thực tốt, bám sát đề cương nghiên cứu phê duyệt - Các sản phẩm dạng III (công bố báo) đạt mức tiêu đăng ký (6 thuộc tạp chí ISI) thuộc tạp chí nước nằm danh mục tính điểm HĐCDGSNN) - Các sản phẩm dạng IV (đào tạo Sau đại học) tiến hành tốt, học viên nghiên cứu sinh tham gia nghiên cứu, hoàn chỉnh luận văn, chuẩn bị trình Hội đồng sở đào tạo (dự kiến: trước tháng 9/2019) Một số kết luận mặt khoa học rút sau: - Hai phân tử miR-141, miR-214 có tính chất biểu cao mẫu sinh thiết mô UTVH so với mẫu dịch phết lành Cụ thể: miR-141, miR-214 có biểu mẫu bệnh (sinh thiết mô UTVH) cao 3,27 4,82 lần so với mẫu lành - Sự biểu miR-141, miR-214 có tương quan ý nghĩa với giai đoạn bệnh, cụ thể với giai đoạn bệnh nặng (giai đoạn 4) - Khi phân tích đồng thời biểu hai phân tử miR-141 miR214 (RPI ≥ 0,5) làm tăng giá trị OR, RR, nghĩa làm tăng nguy mắc bệnh UTVH Đồng thời, giá trị RPI có tương quan với giai đoạn bệnh Sự tương quan có ý nghĩa mặt thống kê - Các phân tử microRNA-141, microRNA-214 hoạt động oncogenic, có tính chất tăng biểu ung thư vịm họng, người bệnh Việt Nam 6.2 Kiến nghị - - Tiếp tục công bố kết nghiên cứu tạp chí/hội thảo chuyên ngành - - Tiếp tục phát triển nghiên cứu, tập trung vào loại mẫu không xâm lấn dịch phết tế bào vòm họng, thu nhận từ bệnh nhân nghi ngờ mắc UTVH, UTVH Trang 37 giai đoạn sớm (I II) nhằm củng cố nhóm liệu phân tử này; tiến tới ứng dụng việc chế tạo kít xét nghiệm hay dịch vụ khoa học thử nghiệm phương pháp chẩn đoán hay điều trị dựa tính chất biểu miRNA Trang 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO Alajez NM, Shi W, Hui AB, Bruce J, Lenarduzzi M, Ito E, Yue S, O'Sullivan B, Liu FF Enhancer of Zeste homolog (EZH2) is overexpressed in recurrent nasopharyngeal carcinoma and is regulated by miR-26a, miR-101, and miR-98 Cell Death Dis 2010; 1:e85 Armstrong RW, Imrey PB, Lye MS, Armstrong MJ, Yu MC, Sani S Nasopharyngeal carcinoma in Malaysian Chinese: occupational exposures to particles, formaldehyde and heat Int J Epidemiol 2000;29(6):991-8 Bruce JP, Liu FF MicroRNAs in nasopharyngeal carcinoma Chin J Cancer 2014; 33(11):539-544 Cai X, Hagedorn CH, Cullen BR (2004) Human microRNAs are processed from capped, polyadenylated transcripts that can also function as mRNAs RNA, 10(12): 1957-1966 Cao Y, Miao XP Huang, MY, Deng L, Hu LF, Ernberg I, Zeng YX, Lin DX, Shao JY (2006), Polymorphisms of XRCC1 genes and risk of nasopharyngeal carcinoma in the Cantonese population BMC Cancer, 6, pp 167 Chan AS, To KF, Lo KW, Mak KF, Pak W, Chiu B., Tse GM, Ding M, Li X, Lee JC, Huang DP (2000), High frequency of chromosome 3p deletion in histologically normal nasopharyngeal epithelia from southern Chinese Cancer Research, 60(19), pp 5365-70 Lee Y, Ahn C, Han J, Choi H, Kim J, Yim J, Lee J, Provost P, Rådmark O, Kim S, Kim VN (2003) The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing Nature 425(6956):415-419 Lo KW, Mok CH, Huang DP, Liu YX, Choi PH, Lee JC, Tsao SW (1992), p53 mutation in human nasopharyngeal carcinomas Anticancer Research, 12(6B), pp 1957-63 Raab-Traub N Epstein-Barr virus in the pathogenesis of NPC Semin Cancer Biol 2002, 12(6):431-41 Trang 39 Sengupta S, den Boon JA, Chen IH, Newton MA, Stanhope SA, Cheng YJ, Chen CJ, Hildesheim A, Sugden B, Ahlquist P MicroRNA 29c is down-regulated in nasopharyngeal carcinomas, up-regulating mRNAs encoding extracellular matrix proteins Proc Natl Acad Sci U S A 2008; 105:5874–5878 Sham JS, Poon YF, Wei WI, Choy D (1990) Nasopharyngeal carcinoma in young patients Cancer 65, 2606-10 Shao YM, Poirier S, Ohshima H, Malaveille C, Zeng Y, de Thé G, Bartsch H (1988), Epstein-Barr virus activation in Raji cells by extracts of preserved food from high risk areas for nasopharyngeal carcinoma Carcinogenesis, 9(8), pp 1455-7 Spence T, Bruce J, Yip KW, Liu FF MicroRNAs in nasopharyngeal carcinoma Chin Clin Oncol 2016; 5(2):17 Sun J, Lu H, Wang X, Jin H (2013) MicroRNAs in Hepatocellular Carcinoma: Regulation, Function, and Clinical Implications The Scientific World Journal 2013:1-14 Tao Q, Chan AT (2007) Nasopharyngeal carcinoma: molecular pathogenesis and therapeutic developments Expert Rev Mol Med 9(12), 1-24 Wightman B, Ha I, Ruvkun G (1993) Posttranscriptional regulation of the heterochronic gene lin-14 by lin-4 mediates temporal pattern formation in C elegans Cell., 75(5): 855862 Wong TS, Man OY, Tsang CM, et al (2010) MicroRNA let-7 suppresses nasopharyngeal carcinoma cells proliferation through downregulating c-Myc expression J Cancer Res Clin Oncol 137(3), 415-22 Xia H, Ng SS, Jiang S, Cheung WK, Sze J, Bian XW, Kung HF, Lin MC miR-200amediated downregulation of ZEB2 and CTNNB1 differentially inhibits nasopharyngeal carcinoma cell growth, migration and invasion Biochem Biophys Res Commun 2010; 391(1):535-541 Trang 40 Xu L, Yang M, Zhao T, Jin H, Xu Z, Li M, Chen H The polymorphism of CYP2E1 Rsa I/Pst I gene and susceptibility to respiratory system cancer: a systematic review and metaanalysis of 34 studies Medicine (Baltimore) 2014; 93(27):e178 Yu MC, Ho JH, Lai SH, Henderson BE Cantonese-style salted fish as a cause of nasopharyngeal carcinoma: report of a case-control study in Hong Kong Cancer Res 1986; 46(2):956-61 Zen K, Zhang CY (2012) Circulating microRNAs: A novel class of biomarkers to diagnose and monitor human cancers, Medicinal Research Reviews, 32(2): 326-348 Zhang JX, Qian D, Wang FW, Liao DZ, Wei JH, Tong ZT, Fu J, Huang XX, Liao YJ, Deng HX, Zeng YX, Xie D, Mai SJ MicroRNA-29c enhances the sensitivities of human nasopharyngeal carcinoma to cisplatin-based chemotherapy and radiotherapy Cancer Lett 2013; 329(1):91–98 Zhang L, Deng T, Li X, et al (2010) microRNA-141 is involved in a nasopharyngeal carcinoma-related genes network Carcinogenesis 31(4), 559-66 Zhang ZC, Fu S, Wang F, Wang HY, Zeng YX, Shao JY Oncogene mutational profile in nasopharyngeal carcinoma Onco Targets Ther 2014; 7:457-467 Zhu X, Wang Y, Sun Y, Zheng J, Zhu D Mir-155 up-regulation by lmp1 DNA contributes to increased nasopharyngeal carcinoma cell proliferation and migration Eur Arch Otorhinolaryngol 2014;271: 1939–45 Trang 41 SẢN PHẨM KHOA HỌC – ĐÀO TẠO 6.3 Sản phẩm khoa học Nhóm nghiên cứu cơng bố cơng trình sau: Thuan Duc Lao, Thuy Huyen Ai Le (2019) Development of stem-loop real-time PCR technique for miRNA-141 expression analysis in Vietnamese Nasopharyngeal carcinoma Kuwait Medical Journal (In press) (ISI/SCIe) Lao Duc Thuan, Nguyen Van Truong, Nguyen Hoang Chuong, Nguyen Trong Minh, Nguyen Huu Dung, Le Huyen Ai Thuy (2018) MiR-141 is up-regulated in the biopsy sample of Vietnamese nasopharyngeal carcinoma patients Brazilian Oral Research, 32(e126):1-7 (ISI/SCIe) Lao Duc Thuan, Danh Hoang Nguyen, Thuy Ai Huyen Le (2018) Study of miR-141 and its potential targeted mRNA PTEN expression in Nasopharyngeal carcinoma: from in silico to initial experiment analysis Asian J Pharmaceutical Research & Health Care, 10(3):1-9 (ISI/eSCI) Thuan Duc Lao, Phuong Kim Truong, Thuy Ai Huyen Le (2018) miRNA-141 as the biomarker for human cancers Asian J Pharmaceutical Research & Health Care, 10(2): 4249 (ISI/eSCI) 6.4 Sản phẩm đào tạo sinh viên bảo vệ thành cơng khóa luận tốt nghiệp (năm 2019): sinh viên nguyễn hoàng danh (MSSV: 1553010019) Tên đề tài: khảo sát tính chất biểu microrna-141 tính đa hình gene rpms1 bệnh nhân ung thư vòm họng Việt Nam Trang 42 ... cứu ung thư giới, UTVH Việt Nam đứng thứ năm loại ung thư mắc phải, sau loại ung thư như: ung thư phổi, ung thư gan, ung thư vú, dày, đứng đầu loại ung thư vùng đầu cổ 1.2 Triệu chứng UTVH bệnh. .. đến ức chế khởi đầu dịch mã hay ức chế phiên mã Cuối phân tử mRNA phân hủy theo đường exosome Xrn1p (Bruce, Liu, 2014) 1.3.4 miRNAs biểu ung thư vòm họng Các liệu miRNA ung thư vòm họng công bố... tin thêm miR-141 miR-214, hai micro RNA lựa chọn nghiên cứu MiR-141, số lượng cơng trình nghiên cứu vai trị miR-141 ung thư vòm họng hạn chế, đặc biệt chức miRNA bệnh sinh ung thư vòm họng Điển