Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm khảo sát sự biểu hiện của gene quy định thụ thể glucocorticoids trong viêm mũi xoang mạn có polyp mũi. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 KHẢO SÁT SỰ BIỂU HIỆN CỦA GENE QUY ĐỊNH THỤ THỂ GLUCOCORTICOIDS TRONG VIÊM MŨI XOANG MẠN CÓ POLYP MŨI Nguyễn Nam Hà*, Nguyễn Thị Ngọc Dung**, Huỳnh Khắc Cường**, Phạm Hùng Vân*** TÓM TẮT Đặt vấn đề mục tiêu: Glucocorticoids (GC) nhóm thuốc hiệu điều trị bệnh lý viêm Tuy nhiên, viêm mũi xoang mạn (VMXM) có polyp mũi, số polyp mũi đáp ứng với GC Sự đáp ứng GC cho có liên quan đến số lượng chất lượng Thụ thể Glucocorticoids alpha (hGRα)trong mô polyp mũi Do chúng tơi khảo sát biều gene hGRα bệnh nhân VMXM có polyp mũi Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu phân tích cắt ngang, từ tháng đến tháng 11/ 2013 Đối tượng nghiên cứu 27 bệnh nhân VMXM có polyp mũi thuộc nhóm bệnh 15 bệnh nhân chỉnh hình phức hợp hàm gò má thuộc nhóm chứng Các bệnh nhân nhóm bệnh sinh thiết polyp trước sau đợt điều trị GC tuần Chúng tôithực xét nghiệm phân tích mRNA biểu hGRαgene mơ polyp mũi mô chứng qua kỹ thuật RT-PCR Kết quả: mRNA biểu hGRα gene(chỉ số hGRα mRNA/ β-actin mRNA)trong mô polyp mũi cao mô chứng 2,84 lần, có ý nghĩa thống kê Trongnhóm bệnh, nhóm đáp ứng với GC có số mRNA cao giảm xuống sau điều trị GC, nhóm khơng đáp ứng với GC tăng cao sau điều trị GC Kết luận: hGRα mRNA mô polyp mũi cao mơ chứng Chỉ số hGRα mRNAtrong mơ polyp mũicó thể thông số đánh giá đáp ứng với với GC điều trị VMXM có polyp mũi Từ khóa: gene quy định thụ thể glucocorticoids, VMXM có polyp mũi ABSTRACT THE EXPRESSION OF hGRα GENE IN CHRONIC RHINOSINUSITIS WITH NASAL POLYPS Nguyen Nam Ha, Nguyen Thi Ngoc Dung, Huynh Khac Cuong, Pham Hung Van * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 18 - 22 Introduction and aim: Glucocorticoids (GC) are one of the most potent medications in the treatment of inflammatory disorders However, in chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP), some polyps respond poorly with GC The respond is referred to quantity and quality of Human Glucocorticoids Receptor Alpha (hGRα) in polyp tissue Therefore, we a study about the expression of hGRα gene in CRSwNP patients Methods: Cross- sectional study, from Mar to Nov 2013 Study group includes 27 patients of CRSwNP; control group includes 15 patients of zygoma- maxillary complex reduction Study group was performed biopsies before and after a 3-week GC course We analyze mRNA of hGRα gene in polyp and control tissues by RT-PCR Results: mRNA of hGRα gene (using hGRα mRNA/ β-actin mRNA index) in polyp tissues are 2.84 fold higher than in control tissues, statistically meaningful Within polyp group, GC-sensitive patients have a decreased quantity of hGRα mRNA after treatment whereas GC-insensitive patients still have high quantity of thermo after treatment Conclusion: hGRα mRNA in polyp tissues is higher than in control tissues It can be used as an index for prognosis of the respond to GC in treatment of CRSwNP * Bộ môn TMH, Trường ĐHYK PNT ***Bộ môn Vi Sinh, ĐHYD TPHCM Tác giả liên lạc: ThS Bs Nguyễn Nam Hà 18 ** Bộ môn TMH, ĐHYD TPHCM ĐT: 0913927432 Email: hanguyennambs@gmail.com Chuyên Đề Tai Mũi Họng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học Keywords: GR gene, CRSwNP ĐẶT VẤN ĐỀ shock protein (hsp90), nhiều phận phụ Glucocorticoids (GCs) thuốc hiệu điều trị bệnh lý viêm(1).Trong bệnh lý viêm mũi xoang mạn, có nhiều nghiên cứu vai trò glucocorticoids điều trị(3) khác Khi Glucocorticoids gắn với receptor, phức Lund VJ cs., 2002, khảo sát có đối chứng 167 bệnh nhân viêm mũi xoang mạn triệu chứng dai dẳng sau hai tuần điều trị kháng sinh Nghiên cứu khẳng định có cải thiện có ý nghĩa triệu chứng, thơng khí mũi khách quan chất lượng sống nhóm trị liệu Steroids chỗ đơn so với giả dược sau 20 tuần(6) chỉnh gene mục tiêu Phức hợp nhị Ngô Văn Công Huỳnh Khắc Cường, 2009, nhận thấy Budesonide có tác dụng ngăn ngừa tái phát polyp mũi xoang sau phẫu thuật Tỉ lệ tái phát polyp mũi sau tháng nhóm dùng Budesonide giảm 4,9% so với nhóm chứng 40%(7) trạng thiếu số lượng chất lượng hGRα(5) Mặc dù hầu hết đáp ứng với điều trị, số bệnh nhân phản ứng viêm dai dẳng dù điều trị liều cao glucocorticoids Bởi đề kháng glucocorticoids gây khó khăn việc điều trị bệnh nhân này, chế tượng nên tìm hiểu mức độ phân tử để có kế hoạch điều trị thích hợp(5) dịch Nghiên cứu nêu lên có gia tăng Tác dụng Glucocorticoids mơ đích hợp multiprotein phân tách, giải phóng hGRα hGRα di chuyển vào nhân, hình thành phức hợp nhị phânhGRα gắn với thành phần đáp ứng glucocorticoids vùng điều phânhGRα tương tác với yếu tố chép bảngây chép gene mục tiêu(2,8) Leung cs., 2003, thực nghiên cứu bệnh nhân hen phế quản điều trị với glucocorticoids Nhóm nghiên cứu nhận thấy đề kháng với glucocorticoids với tình Kang cs, 2000, tìm thấy hGRα có mặt chủ yếu tế bào biểu mô tế bào viêm thấm nhập lớp niêm niêm mạc mũi phương pháp nhuộm hóa mơ miễn hGR protein, gia tăng xảy tế bào biểu mô tế bào viêm thấm nhập lớp niêm(4) Trong thực tế lâm sàng, nhận thấy bệnh nhân viêm mũi xoang mạn có polyp mũi đáp ứng khác nhauvới điều trị thực qua Thụ thể Glucocorticoids glucocorticoids Do đó, chúng tơi khảo sát alpha (hGRα) hGRα thuộc gia đình thụ thể biều chất glucocorticoids alpha bệnh nhân có nhân steroid bao gồm: gene quy định thụ thể mineralocorticoids, hormone tuyến giáp, retinoic ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU acid, vitamin D hGRα có chức Đối tượng yếu tố chép q trình điều chỉnh mơ tế bào Khi tế bào chưa tiếp xúc với 27 bệnh nhân viêm mũi xoang mạn có polyp mũi (nhóm bệnh) 15 bệnh nhân chỉnh hình phức hợp hàm gò má sau chấn thương (nhóm chứng) Glucocorticoids, hGRα nằm tế bào chất Thiết kế nghiên cứu biểu gene liên quan đến phản ứng viêm hGRα biểu hầu hết phần phức hợp multiprotein lớn Nghiên cứu phân tích cắt ngang Phức hợp bao gồm hGRα, hai phân tử heat Chuyên Đề Tai Mũi Họng 19 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Thời gian Tháng 3/2013 - tháng 11/2013 Tiến hành nghiên cứu Lấy mẫu mô polyp mũi BN không uống/xịt mũi glucocorticoids tuần trước lấy mẫu Sinh thiết trước điều trị: Sinh thiết polyp mũi phòng khám forcep thru-cut Lấy mẫu mô polyp bao gồm lớp niêm mạc lớp niêm Điều trị glucocorticoids tuần: Methylprednisolone: tuần đầu: 32mg tuần thứ 2: 16mg tuần thứ 3: 8mg Fluticasone: ngày xịt mũi lần, lần nhát/ bên, tuần Mẫu mô niêm mạc khe mũi vùng lấy bỏ để đặt bóng sonde Foley vào xoang hàm Mẫu mơ chia phần: cố định formone 10%, cố định dung dịch RNAlater Xử lý mẫu mô polyp mơ nhóm chứng Khơng cho bội nhiễm Cố định mẫu mô formone 10% 24 giờ, chuyển khoa GPB để làm phôi paraffin Phôi paraffin cắt trải lên lame, nhuộm HE để xác định GPB đánh giá đáp ứng điều trị Cố định mẫu mô dung dịch RNALater để thực xét nghiệm phân tích mRNA biểu gene quy định thụ thể glucocorticoids mô polyp mũi mô Sinh thiết sau điều trị glucocorticoids tuần: chứng qua kỹ thuật RT-PCR Trường hợp polyp nhỏ lại (giảm độ): Sinh Kỹ thuật RT-PCR định lượng hGRα mRNA: Qua bước sau thiết polyp mũi phòng khám forcep thru-cut Trường hợp polyp khơng nhỏ lại (không giảm độ): phẫu thuật nội soi mũi xoang theo mRNA gene hGRα gene β- lactin (yếu tố so sánh chuẩn) phân tách điện di gel agarose có chứa chất biến tính phương pháp Stamberger- Kennedy, đuổi theo mRNA chuyển lên màng lai bệnh tích polyp, lấy bỏ tận chân polyp kéo mRNA cố định màng lai với mẫu PTNS thru-cut, làm hố mổ dao cắt hút Mẫu mô chia phần: cố định dò cóđánh dấu phóng xạ Các phân tử lai phát nhờ kỹ thuật phóng xạ tự ghi formone 10%, cố định dung dịch Đọc kết phần mềm chuyên biệt RNAlater Thu thập xử lý số liệu: Lấy mẫu mơ nhóm chứng Các số liệu phân tích phần mềm Bệnh nhân vỡ phức hợp hàm- gò má có định phẫu thuật nắn chỉnh hàm- gò má SPSS Version 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) Sự khác biệt tỉ lệ hGRαmRNAđược đánh giá phép kiểm Wilcoson Spearman 20 Chuyên Đề Tai Mũi Họng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học KẾT QUẢ- BÀN LUẬN Bảng Kết Nhóm bệnh n = 27 Trước điều trị - Chỉ số hGRα mRNA/ β-actin mRNA Nhóm đáp ứng điều trị - Số BN chuyển độ polyp - Chỉ số hGRα mRNA/ β-actin mRNA Nhóm khơng đáp ứng điều trị - Số BN không chuyển độ polyp - Chỉ số hGRα mRNA/ β-actin mRNA Trước điều trị Nhóm bệnh có số biểu gene hGRα (chỉ số hGRα mRNA/ β-actin mRNA) tương đối cao (M= 0,668) Chỉ số cao gấp 2,84 lần so với nhóm chứng (M=0,235) Kết tương tự Webster cs, 2001 số biểu gene hGRα bệnh nhân polyp mũi cao gấp lần bình thường(10) Webster cs., 2001 cho bệnh nhân viêm mũi xoang mạn có polyp mũi có hoạt động mạnh cytokine gây viêm mô viêm IL-1, IL-4, TNF, Các cytokine gây tăng điều chỉnh gene hGRα Rosenwasser cs., 2001, báo cáo có liên quan đề kháng glucocorticoids IL-4 hen phế quản Tác giả cho tăng sản xuất IL-4 đột biến trình tự DNA gây trình đề kháng glucocorticoids(9) Sau điều trị Số bệnh nhân đáp ứng điều trị 17, chiếm 62,9% Chì số hGRα mRNA / β-actinmRNA trung bình sau điều trị trở gần với giá trị trung bình nhóm chứng(M= 0,246 so với M= 0,235 nhóm chứng) Số bệnh nhân không đáp ứng điều trị 10, chiếm 57,1% Chì số hGRα mRNA/ β-actin mRNA trung bình sau điều trị cao (M= 0,547 so với M= 0,668 trước điều trị) Cả nhóm bệnh nhân sử dụng loại, liều glucocorticoids tuần, biểu hoạt động genehGRα cao nhóm đề Chun Đề Tai Mũi Họng Nhóm chứng n’ = 15 0,668 17 (62,9%) 0,246 Chỉ số hGRα mRNA/ β-actin mRNA: 0,235 10 (57,1%) 0,547 kháng glucocorticoids Điều nói lên tượng viêm không giảm, dai dẳng làm tăng chép gene hGRα nhóm Sự khác biểu gene gợi ý chì số hGRα mRNAcó thể dùng để sơ đánh giá đáp ứng với điều trị glucocorticoids polyp mũi Về kỹ thuật xác định biểu gene hGRα Kỹ thuật RT-PCR định lượng kỹ thuật tương đối xác việc xác định phân tích biểu hoạt động gene Hiện đa số phòng xét nghiệm sinh học phân tử trang bị máy theo kỹ thuật Ngoài ra, giá thành xét nghiệm số hGRα mRNA theo kỹ thuật giảm công nghệ ngày phổ thông, mở khả nhiều bệnh nhân định xét nghiệm KẾT LUẬN hGRαmRNA mô polyp mũi cao mô chứng Chỉ số mRNA biểu gene quy định thụ thể glucocorticoids mơ polyp mũi thông số đánh giá đáp ứng với với glucocorticoids điều trị viêm mũi xoang mạn có polyp mũi TÀI LIỆU THAM KHẢO Bernard P.S, (2006) The Pharmacologic Basis of Therapeutics, Mc Graw- Hill Cato A, Wade E (1996) Molecular mechanisms of antiinflammatory action of glucocorticoids Bioessays;18: 371-8 Huỳnh Khắc Cường (2006), Cập nhật chẩn đoán điều trị Bệnh lý mũi xoang, Nhà xuất Y học, tp.HCM, 21 Nghiên cứu Y học 22 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Kang JM, Cho JH, Won YS, Kim SS, Cgang HS, Yonn HR (2000) Expression of glucocorticoid receptor in nasal polyps and nasal mucosa Korean J Otolaryngol;43: 731-6 Leung DY, Bloom JW (2003) Update on glucocorticoid action and resistance.J Allergy Clin Immunol;111: 3-22 Lund VJ, Black JH, Szabó LZ (2004), Efficacy and tolerability of budesonide aqueous nasal spray in chronic rhinosinusitis patients Rhinology.;42(2): 57 Ngô Văn Công, Nguyễn Đình Bảng, Huỳnh Khắc Cường, (2009) Hiệu ngăn ngừa tái phát polyp mũi xoang sau phẫu thuật nội soi steroids xịt liều cao, Y học Tp HCM, tập 13, phụ 1, Oakley RH, Jewell CM, Yudt MR, Bofetiado DM, Cidlowski JA (1999) The dominant negative activity of the human glucocorticoid receptor beta isoform Specificity and mechanisms of action.J Biol Chem;274: 27857-66 10 Rosenwasser L, Klemm JD, Klemm DJ, Drazen JM, Burchard EG, Leung DYM (2001) Association of asthmatic steroid insensitivity with an IL-4 gene promoter polymorphism J Allergy Clin Immunol;107: S235 Webster JC, Oakley RH, Jewell CM, Cidlowski JA (2001) Proin-flammatory cytokines regulate human glucocorticoid receptor gene expression and lead to the accumulation of the dominant negative beta isoform: a mechanism for the generation of glucocorticoid resistance Proc Natl Acad Sci USA;98: 6865-70 Ngày nhận báo: 30/11/2013 Ngày phản biện nhận xét báo: 16/12/3013 Ngày báo đăng: 10/01/2014 Chuyên Đề Tai Mũi Họng ... nhân viêm mũi xoang mạn có polyp mũi đáp ứng khác nhauvới điều trị thực qua Thụ thể Glucocorticoids glucocorticoids Do đó, chúng tơi khảo sát alpha (hGRα) hGRα thuộc gia đình thụ thể biều chất glucocorticoids. .. cs, 2001 số biểu gene hGRα bệnh nhân polyp mũi cao gấp lần bình thường(10) Webster cs., 2001 cho bệnh nhân viêm mũi xoang mạn có polyp mũi có hoạt động mạnh cytokine gây viêm mô viêm IL-1, IL-4,... nhân định xét nghiệm KẾT LUẬN hGRαmRNA mô polyp mũi cao mô chứng Chỉ số mRNA biểu gene quy định thụ thể glucocorticoids mô polyp mũi thơng số đánh giá đáp ứng với với glucocorticoids điều trị viêm