Xác định đồng thời dư lượng kháng sinh nhóm phenicol trong một số loại thực phẩm tươi sống trên địa bàn hà nội bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC MS MS)

Luận văn thạc sĩ Hóa học ́ ĐAỊ HOCC̣ QC GIA HÀNÔỊ TRƯỜNG ĐAỊ HOCC̣ KHOA HOCC̣ TỰNHIÊN - Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) LUÂṆ VĂN THACC̣ SĨKHOA HOCC̣ Hà Nội – 12/2011 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học ́ ĐAỊ HOCC̣ QC GIA HÀNƠỊ TRƯỜNG ĐAỊ HOCC̣ KHOA HOCC̣ TỰNHIÊN - Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) Chun ngành: Hóa phân tích Mã sớ: 604429 LUÂṆ VĂN THACC̣ SĨKHOA HOCC̣ Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS Nguyễn Xuân Trung Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH, BIỂU ĐỒ MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN 12 1.1 Kháng sinh vấn đề liên quan 12 1.1.1 Khái niệm phân loại kháng sinh 12 1.1.1.1 Khái niệm kháng sinh 12 1.1.1.2 Phân loại thuốc kháng sinh [7] 12 1.1.2 Các vấn đề có liên quan đến tồn dƣ kháng sinh sản phẩm có nguồn gốc từ động vật 17 1.1.2.1 Tồn dƣ kháng sinh 17 1.1.2.2 Tình hình tồn dƣ kháng sinh [7] 18 1.1.2.3 Nguyên nhân tồn dƣ kháng sinh thực phẩm 20 1.1.2.5 Tình hình quản lý sử dụng kháng sinh [7] 21 1.2 Nhóm kháng sinh phenicol [9, 12, 14] 22 1.2.1 Nguồn gốc 22 1.2.2 Phân loại: Cấu tạo đặc tính 23 1.2.2.1 Chloramphenicol (C11H12 Cl2 N2O5)(CAP) 23 1.2.2.2 Thiamphenicol : (C12H15Cl2NO5S) (TAP) 27 1.2.2.3 Florfenicol: (C12H14ClFNO4S) (FF) 27 1.2.3 Giới hạn tồn dƣ cho phép đới với nhóm Phenicol 28 1.3 Một số phƣơng pháp phân tích cơng cụ phân tích tồn dƣ kháng sinh 30 1.3.1 Phƣơng pháp tách làm giàu 30 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích 31 1.3.2.1 Phƣơng pháp sinh hóa 31 1.3.2.2 Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ phân tử 32 1.3.2.3 Phƣơng pháp Sắc ký lỏng hiệu cao 33 1.3.2.4 Phƣơng pháp sắc ký khối phổ 34 1.3.2.4.1 Nguyên tắc hoạt động HPLC 36 1.3.2.4.2 Pha tĩnh HPLC [11] 36 1.3.2.4.3 Pha động HPLC [11] 37 1.3.2.4.5 Detector HPLC [11, 15] 38 1.3.2.5 Detector khối phổ (Mass Spectrometry) [15, 17] 38 Chƣơng : NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Đối tƣợng nội dung nghiên cứu 42 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 42 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 42 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học 2.2 Phƣơng tiện nghiên cứu 43 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ 43 2.2.1.1 Thiết bị 43 2.2.1.2 Dụng cụ 43 2.2.2 Dung mơi, hóa chất 44 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 45 2.3.1 Lựa chọn mẫu cho khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu sơ 45 2.3.2 Phƣơng pháp khảo sát điều kiện tách chiết mẫu 46 2.3.3 Tới ƣu hóa điều kiện chạy sắc ký 48 2.3.3.1 Điều kiện phân tích LC-MS 48 2.3.3.2 Phân tích định tính định lƣợng LC-MS/MS 49 2.4 Phƣơng pháp đánh giá [16] 49 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu thực nghiệm 50 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 3.1 Tối ƣu điều kiện xác định Phenicol thiết bị LC/MS/MS 51 3.1.1 Tối ƣu điều kiện chạy detector khối phổ (MS) 51 3.1.2 Pha tĩnh 54 3.1.3 Khảo sát hệ pha động chƣơng trình gradient 54 a/ Thành phần pha động 54 b/Tỉ lệ pha động 59 c/ Chƣơng trình Gradient 63 d/ Tớc độ dịng pha động 65 3.2 Đánh giá phƣơng pháp 68 3.2.1 Khoảng tuyến tính lập đƣờng chuẩn 68 3.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp 70 3.2.3 Độ xác phép đo 72 3.2.4 Độ lặp lại độ thu hồi 73 3.3 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 76 3.3.1 Lựa chọn mẫu cho khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu sơ 76 3.3.2 Khảo sát dung môi tách chiết ban đầu làm giàu sơ 77 3.3.4 Khảo sát loại cột chiết 79 3.3.5 Khảo sát thể tích rửa giải 80 3.4 Phân tích mẫu thực tế 82 Chƣơng 4: KẾT LUẬN 85 TÀI LIỆU THAM KHẢO 86 PHỤ LỤC Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học ACN CAP CV FF GC-MS HPLC KPH LC-MS LOD LOQ MRL MDL SD TAP VSATTP Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Giới hạn tồn dƣ cho phép lớn nhất(MRL) đối với Florfenicol số nƣớc 29 Bảng 2.1 Đặc điểm lý hóa sớ loại dung môi 47 Bảng 3.1 Điều kiện chạy nguồn ion hóa ESI 51 Bảng 3.2 Kết bắn phá ion mẹ 52 Bảng 3.3 Kết tối ƣu tự động điều kiện chạy MS/MS .52 Bảng 3.4 Các thông số tối ƣu cho phân tích định tính định lƣợng CAP FF MS/MS 53 Bảng 3.5 Kết qả khảo sát thành phần pha động 58 Bảng 3.6 Kết khảo sát tỉ lệ pha động 62 Bảng 3.7 Chƣơng trình gradient tới ƣu cho pha động phân tích CAP FF 64 Bảng 3.9 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ Phenicol 69 Bảng 3.10 Sai số độ lặp lại phép đo nồng độ khác 73 Bảng 3.11 Độ lặp lại độ thu hồi phƣơng pháp mức nồng độ 75 khác 75 Bảng 3.12 Một số thành phần đới tƣợng mẫu phân tích .76 Bảng 3.13 Kết khảo sát dung môi tách chiết ban đầu .78 Bảng 3.14 Kết khảo sát với hai loại cột chiết pha rắn 79 Bảng 3.15 Kết khảo sát mức thể tích rửa giải chiết pha rắn 80 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học DANH MỤC HÌNH VẼ, BIỂU ĐỒ Hình 1.1 Sơ đồ thiết bị lỏng khối phổ (LC/MS) 27 Hình 1.2 Kĩ thuật ESI bắn phá với chế độ ion dƣơng 30 Hình 1.3 Kĩ thuật APCI bắn phá với chế độ ion dƣơng 31 Hình 3.1 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha độngkhảo sát MeOH – CH3COOH 0,1% 47 Hình 3.2 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát MeOH – H2O 48 Hình 3.3 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát MeOH – CH3COONH4 0,1% 48 Hình 3.4 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát ACN – H20 49 Hình 3.5 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát ACN – CH3COOH 0,1% 49 Hình 3.6 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát ACN – CH3COONH4 0,1% 49 Hình 3.7 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 30:70 (v/v) 51 Hình 3.8 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 50:50 (v/v) 52 Hình 3.9 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 60:40 (v/v) 52 Hình 3.10 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 70:30 (v/v) 53 Hình 3.11 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 80:20 (v/v) 53 Hình 3.12 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 90:10 (v/v) 54 Hình 3.13 Sắc đồ mảnh ion định lƣợng FF CAP (lần lƣợt theo thứ tự từ trái sang phải) chạy chƣơng trình gradient bảng 3.7 57 Hình 3.14 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tốc độ dòng 0,2mL/phút58 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học Hình 3.15 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tớc độ dịng 0,3mL/phút58 Hình 3.16 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tớc độ dịng 0,4mL/phút58 Hình 3.17 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tớc độ dịng 0,5mL/phút59 Hình 3.18 Sắc đồ hai mảnh định lƣợngcủa CAP FF thêm chuẩn mẫu trắng phƣơng pháp với nồng độ 0,03 ng/ml 63 Hình 3.19 Tƣơng quan hiệu suất thu hồi với dung môi tách chiết 70 Hình 3.20 Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi vào thể tích rửa giải chiết pha rắn 73 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học MỞ ĐẦU Hiện nay, mức sống ngƣời dân bƣớc đƣợc nâng cao thì vệ sinh an toàn thực phẩm trở thành vấn đề đƣợc quan tâm toàn xã hội Đặc biệt, Việt Nam gia nhập WTO thì thách thức to lớn Vệ sinh an tồn thực phẩm khơng rào cản khắc nghiệt đới với hàng hóa xuất mà làm giảm sức cạnh tranh thị trƣờng tiêu thụ nội địa Trong khoảng 10 năm trở lại đây, ngành nghề chăn nuôi đƣợc mở rộng, suất sản lƣợng sản phẩm chăn nuôi ngày cao, góp phần đáng kể vào việc cung cấp nguyên liệu cho xuất nhƣ thị trƣờng nội địa, tạo cơng ăn việc làm, xóa đói giảm nghèo nâng cao mức sống cho ngƣời dân Tuy nhiên, phát triển mang tính tự phát, phân tán nhỏ lẻ, thiếu qui hoạch kiểm sốt mơi trƣờng đã làm cho dịch bệnh diễn biến ngày phức tạp Trong điều kiện đó, với thiếu hiểu biết, ý thức cộng đồng nên ngƣời chăn ni coi hóa chất th́c thú y giải pháp để tăng suất sản lƣợng Điều đó, đồng nghĩa với việc hóa chất thuốc thú y đƣợc sử dụng thƣờng xuyên Trên thực tế điều tra cho thấy việc sử dụng kháng sinh không nguyên tắc, lạm dụng mức chăn nuôi nuôi trồng thủy sản tiếp diễn (Phạm Kim Đăng, 2007, 2011) Việc lạm dụng, sử dụng bất hợp pháp sử dụng sai nguyên tắc th́c thú y nói chung kháng sinh nói riêng chăn ni ni trồng thủy sản gây tƣợng nhờn thuốc gây tồn dƣ sản phẩm ảnh hƣởng xấu đến sức khỏe cộng đồng, môi trƣờng nhƣ hiệu điều trị bệnh Để tăng cƣờng kiểm soát dƣ lƣợng, nƣớc phát triển đã có qui định chặt chẽ kiểm soát nghiêm ngặt Chẳng hạn, EU đã ban hành định số 2377/90 EC đƣợc thay định 37/2010 quy định giới hạn tồn dƣ cho phép thuốc thú y sản phẩm động vật (CE, 1990; 2010), theo sản phẩm có nguồn gớc từ động vật phải đƣợc kiểm soát tuân thủ quy trình thị số 96/23 EC (EU, 1996) 10 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học Những năm gần đây, vệ sinh an toàn thực phẩm chủ đề đƣợc Chính phủ, bộ, ngành liên quan đặc biệt quan tâm vấn đề nóng đƣợc đƣa chất vấn thảo luận kỳ họp Q́c hội gần Chính vì thế, ngành liên quan đã liên tục hoàn thiện ban hành quy định nhiều thị để hƣớng dẫn kiểm sốt dƣ lƣợng, định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005, số 26/2005/QĐ – BTS ngày 18/8/2005 Bộ thủy sản (nay Nông nghiệp Phát triển nông thôn, gần thông tƣ 69/2010/TTBNNPTNT ngày 6/12/2010 liên quan đến danh mục hóa chất kháng sinh cấm hạn chế sử dụng chăn nuôi nuôi trồng thủy sản Tồn dƣ tới đa hóa chất, th́c thú y, độc tớ thực phẩm đã đƣợc Bộ Y tế quy định định N 46/2007/QĐ-BYT ngày 19/12/2007 [1, 2, 3, 4] Để kiểm sốt dƣ lƣợng hóa chất nói chung kháng sinh nói riêng, đã có nhiều phƣơng pháp phân tích đƣợc khuyến cáo sử dụng Nhƣng với đặc điểm ƣu việt độ xác nên phƣơng pháp phân tích sắc ký khới phổ (GC-MS, LC-MS) đƣợc coi phƣơng pháp phân tích khẳng định, có giá trị pháp lý để phát định lƣợng nồng độ chất tồn dƣ, đặc biêt đới với nhóm chất cấm cần đƣợc kiểm sốt lƣợng vết hay siêu vết Tuy nhiên, tích chất phức tạp, tính đặc hiệu phƣơng pháp nên việc ứng dụng, vận hành ổn định giá thành phân tích ln thách thức đới với ngƣời làm cơng tác phân tích Để giảm thiểu chi phí phân tích xu hƣớng chung nƣớc phát triển chuẩn hóa phƣơng pháp phân tích có khả phát định lƣơng đồng thời nhiều chất lần phân tích Vì vậy, để góp phần nâng cao lực phân tích chiến lƣợc kiểm soát dƣ lƣợng kháng sinh nƣớc ta, việc nghiên cứu tới ƣu chuẩn hóa phƣơng pháp phân tích nói chung phƣơng pháp khẳng định lý hóa nói riêng nhƣ phƣơng pháp sắc ký lỏng khới phổ cần thiết Xuất phát từ thực tế đó, đề tài đƣợc thực nhằm tới ƣu hóa phƣơng pháp sắc ký lỏng khới phổ LC/MS/MS có khả xác định đồng thời hai chất nhóm Phenicol (Chloramphenicol Florfenicol) tồn dƣ số thực phẩm tƣơi sớng đƣợc bán thị trƣờng Hà Nội 11 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học FF (10ppb) 4ml CAP (0,75ppb) FF (7,5ppb) Kết mối tƣơng quan thể tích rửa giải hiệu su diễn đồ thị sau: Sự phụ thuộc 100 90 hồi (%) 80 70 thu 50 suất 60 40 hiệu 30 20 10 0 Hình 3.20 Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi vào thể tích rửa giải chiết pha rắn Nhƣ từ 3ml hiệu suất thu hồi đã ổn định tƣơng đới cao, vì chúng tơi chọn thể tích rửa giải cho phƣơng pháp 3ml Từ bƣớc khảo sát trên, lựa chọn điều kiện tối ƣu, chúng tơi đƣa quy trình phân tích đồng thời CAP FF nhƣ sơ đồ sau: 81 Luận văn thạc sĩ Hóa học Cân 10g mẫu/ ớng ly tâm 50ml Đồng Lắc vortex phút Ly tâm 6000v/phút (5 phút) Gạn lớp vào bình cô quay 100ml, quay tới cạn 40 C Hịa cắn 12 ml CH3COONH4 4% Loại béo ml n-hexan, chiết lặp hai lần Qua cột chiết pha rắn C18 3.4 Phân tích mẫu thực tế LC/MS/MS Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học Sau nghiên cứu tới ƣu phƣơng pháp phân tích Để củng cớ với đối tƣợng tôm, thịt gà, thịt lợn; tiến hành sƣu tầm mẫu trắng (là mẫu từ động vật nuôi nguồn thức ăn không bổ sung nhóm kháng sinh này), phân tích lặp lần thu đƣợc độ thu hồi mẫu đảm bảo khả định lƣợng phƣơng pháp: Độ thu hồi trung bình mẫu trắng thịt lợn, gà, tôm mức nồng độ 1ppb cao 80% Chúng thu thập tiếp khoảng 22 mẫu thịt đƣợc bán chợ quận huyện Long Biên, Gia Lâm, Hồng Mai, Đơng Anh khoảng thời gian tháng 8, năm 2011 Tiến hành xử lý mẫu nhƣ chƣơng đã đề cập, sử dụng phƣơng pháp nghiên cứu, thu đƣợc kết phân tích theo bảng sau: 83 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học Trong sớ 22 mẫu khảo sát thì phát thấy 6/22 mẫu dƣơng tính với Chloramphenicol nồng độ định lƣợng đƣợc không cao 0,02 đến 0,46ng/g mẫu; 3/22 mẫu dƣơng tính với FF đặc biệt mẫu DAL6 có hàm lƣợng FF cao vƣợt giới hạn tồn dƣ cho phép EU Các mẫu khác mức thêm chuẩn 1ng/ml lớn 80% 84 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học Chƣơng 4: KẾT LUẬN Trên sở kết thực nghiệm đã nghiên cứu để xác định dƣ lƣợng kháng sinh nhóm phenicol số loại thịt làm thực phẩm phổ biến phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ, đã thu đƣợc kết sau: Nghiên cứu tối ƣu hóa đƣợc điều kiện chạy sắc ký lỏng khối phổ nhƣ: pha động, cột sắc ký, detector Nghiên cứu đánh giá đƣợc khoảng tuyến tính, giới hạn phát giới hạn định lƣợng Chloramphenicol Florfenicol, độ lặp lại độ thu hồi phƣơng pháp Nghiên cứu đƣa điều kiện để tách chiết CAP FF số loại thịt làm thực phẩm Đƣa quy trình phân tích xác định đồng thời tồn dƣ kháng sinh CAP FF số loại thực phẩm tƣơi sống phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ Tiến hành phân tích 22 mẫu thịt mẫu trắng đối chứng địa bàn Hà Nội, xác định độ thu hồi mẫu khác Từ kết thu đƣợc chúng tơi nhận thấy áp dụng phân tích tồn dƣ kháng sinh nhóm phenicol với độ tin cậy cao Đây phƣơng pháp có nhiều ƣu điểm phân tích đồng thời nhóm phenicol chi phí cho phân tích cịn cao Nếu có thể, tơi mong tiếp tục nghiên cứu xác định đồng thời hai chất cịn lại (ít phổ biến hơn) thuộc nhóm phenicol 85 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tiếng Việt Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2009), Quyết định số 15/2009/TT- BNN ngày 17 tháng năm 2009, Cấm sớ hóa chất, kháng sinh nhập khẩu, sản xuất, kinh doanh sử dụng thuốc thú y Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2010), Thông tƣ 69/2010/TT- BNNPTNT ngày 03 tháng 12 năm 2010 Danh mục thuốc thú y, chế phẩm sinh học, vi sinh vật, hóa chất dùng thú y thủy sản đƣợc phép lƣu hành Việt Nam Bộ Thủy sản (2006), Công điện Bộ trƣởng Bộ thủy sản số: 01/BTS-VP, ngày 12 tháng năm 2006 Bộ Y tế (2007), Quyết định số 03/2002QD-BTS, Quy chế quản lý th́c thú y hóa chất sử dụng nuôi trồng thủy sản Phạm Kim Đăng, Marie-Louise Sippo, Guy Degand, Caroline Douny, Guy Maghuin-Rogister (2007), “Chuẩn hóa phƣơng pháp sàng lọc định tính kiểm sốt tồn dƣ kháng sinh thực phẩm có nguồn gốc động vật theo quy định số 2002/657/EC (bài tổng hợp)“, Tạp chí KHKT Nơng nghiệp, ĐHNN I, tập V, số 1/2007, tr.24-30 Phạm Kim Đăng, Guy Degand, Phạm Hồng Ngân, Guy Maghuin-Rogister, Marie-Louise Scippo (2008), “Ứng dụng phƣơng pháp ELISA để phân tích tồn dƣ kháng sinh nhóm quynolone tôm số tỉnh ven biển khu vực phía Bắc“ Tạp chí Khoa học Phát triển, ĐHNN HN, tập VI, số 3/2008; tr.261-267 Phạm Kim Đăng (2011), Nghiên cứu ứng dụng phương pháp vi sinh vật phát dư lượng số nhóm kháng sinh tôm, Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ cấp bộ, Hà Nội Nguyễn Minh Đức (2006), Sắc ký lỏng hiệu cao số ứng dụng vào kiểm nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu hợp chất tự nhiên, NXB Y học, Thành phớ Hồ Chí Minh Phạm Khắc Hiếu, Lê Thị Ngọc Diệp (1997), Giáo trình dược lý học, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 86 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học 10 Phạm Khắc Hiếu, Lê Thị Ngọc Diệp (1999), Dược lý học thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 11 Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2003), Giáo trình mơn học Hóa học phân tích (phần Các phương pháp phân tích cơng cụ), Khoa Hóa học – Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN, Hà Nội 12 Hồng Tích Huyền, Đào Văn Phán, Nguyễn Trọng Thơng (2001), Giáo trình dược lý học, NXB Y học, Hà Nội 13 Nguyễn Văn Kiệm, Phạm Kim Đăng (2009), “Ảnh hƣởng thức ăn công nghiệp đến tăng trọng, chất lƣợng, tồn dƣ kim loại nặng kháng sinh thịt lợn“, Tạp chí khoa học phát triển, ĐHNNHN, Tập VII, Số 4/2009; tr 476 – 483 14 Trƣơng Công Quyền (1972), Sơ lược kháng sinh, Phòng nghiên cứu kháng sinh trƣờng Đại học Dƣợc khoa, tr.2-5 15 Nguyễn Văn Ri (2009), Giáo trình mơn học Các phương pháp tách, Khoa Hóa học – Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN, Hà Nội 16 Tạ Thị Thảo (2010), Giáo trình mơn học Thống kê hóa phân tích, Khoa Hóa học – Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN, Hà Nội 17 Phạm Hùng Việt (2005), Sắc ký khí – Cơ sở lý thuyết khả ứng dụng, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội B Tiếng Anh 18 Barbara K Neuhaus, Jeffrey A Hurlbut and Walter Hammack (2002), “LC/MS/MS Analysis of Chloramphenicol in Shrimp”, FDA/ORA/DFS, No 4290 19 Bogaerts, R., Wolf, F (1980) “A standardized method for the detection of residues of antibacterial substances in fresh meat – A report of the working group of the Scientific Veterinary Commission of the European Communities concerning a proposal for a common microbiological method, the so-called EEC four-plate method”, Fleischwirtschaft, 1980, 60, pp 667-669 87 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học 20 Chukwuenweniwe J Eboka, Johnson Smart and Sunday A Adelusi (2003), “An alternative colorimetric method for the determination of chloramphenicol”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, December 2003, 2(2), pp 215-221 21 Cooper, A D., Tarbin, J A., Farrington, W H H., Shearer, G (1998) “Effects of extraction and spiking procedures on the determination of incurred residues of oxytetracycline in cattle kidney”, Food Additives and Contaminants, 15, pp 645-650 22 Fuad Al-Rimawi and Maher Kharoaf (2011), “Analysis of chloramphenicol and its related Compound 2-Amino-1-(4-nitrophenyl)propane-1,3-diol by ReversedPhase High-Performance Liquid Chromatography with UV-Detection”, Chromatography Research International, Vol 2011, Acticle ID 482308 23 James S Stuart, Heidi S Rupp and Jeffery A Hurlbut (2003), “LC/MS/MS Analysis of Chloramphenicol in Crawfish Meat”, FDA/ORA/DFS, No 4303 24 Koenen-Dierick, K., Okerman, L., Zutter, L.D., Degroodt, J M., Hoof, J.V., Srebrnik, S (1995), “A one-plate microbiological screening test for antibiotic residue testing in kidney tissue and meat: an alternative to the EEC four-plate method?”, Food Additives and Contaminants, 1995, 12, pp 77-82 25 Limian Zhao, Carol Haney Ball (2004), Determination of Chloramphenicol, Florfenicol, and Thiamphenicol in Honey Using Agilent SampliQ OPT Solid-Phase Extraction Cartridges and Liquid Chromatography – Tandem Mass Spectrometry, Applycation note, Agilent Technologies, USA 26 Maximum Residue Limit, http ://www.mrldatabase.com 27 MS/MS, Http://www.appliedbiosystems.com/service/training/ 28 Myllyniemi, A.L., Rintala, R., Backman, C., Niemi, A (1999), “Microbiological and chemical identification of antimicrobial drugs in kidney and muscle samples of bovine cattle and pigs”, Food additives & Contaminants, 16, 339-351 29 Phenicols, http://en.wikipedia.org 88 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học 30 Rebecca S Nicolich, Eduardo Werneck-Barroso, Marlice A Sípoli Marques (2006), “Food safety evaluation: Detection and confirmation of chloramphenicol in milk by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry”, Analytica Chimica Acta, 565, pp 97-102 31 Robert L Thies and Lawrence J.Fischer (1978), “High Performance Liquid- Chromatographic Assay for Chloramphenicol in Biological Fluids”, Clinical Chemistry, 24(5), pp 778-781 89 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học PHỤ LỤC Sắc đồ chạy dung mơi phân tích số mẫu thực tế Sắc đồ mảnh định tính định lượng CAP FF chạy dung môi MeOH Sắc đồ mảnh định tính định lượng CAP FF chạy mẫu trắng hóa chất (reagent blank) 90 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học Sắc đồ mảnh định tính định lƣợng CAP FF chạy mẫu cá trắng Sắc đồ phân tích mẫu thịt lợn DAL6 (dương tính FF) 91 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học Sắc đồ phân tích mẫu tơm SHN12 (dƣơng tính FF ) Sắc đồ phân tích mẫu tơm SHN8 (dƣơng tính CAP) 92 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học 93 Vũ Thị Ngân ... - Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/ MS/ MS) Chun ngành:... thiết bị lỏng khối phổ (LC/ MS) 1.3.2.4.1 Nguyên tắc hoạt động HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao bao gồm nhiều phƣơng pháp có đặc thù riêng, sắc ký lỏng pha liên kết, sắc ký phân bố lỏng- lỏng sắc ký trao... đề tài nghiên cứu phƣơng pháp xác định đồng thời hai chất nhóm Phenicol (Chloramphenicol Florfenicol) đới tƣợng nêu phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ LC /MS/ MS 2.1.2 Nội dung nghiên cứu  Khảo