Phân Lập Vi Khuẩn Escherichia Coli K88, K99, 987P Và Thử Độ Nhạy Của Vi Khuẩn Đối Với Kháng Sinh

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG TRẦN THỊ DIỄM CHÂU PHÂN LẬP VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI K88, K99, 987P VÀ THỬ ĐỘ NHẠY CỦA VI KHUẨN ĐỐI VỚI KHÁNG SINH TỪ PHÂN HEO CON THEO MẸ BỊ TIÊU CHẢY TẠI MỘT SỐ HUYỆN THUỘC TỈNH TRÀ VINH Luận văn tốt nghiệp Ngành: BÁC SĨ THÚ Y Cần Thơ, 2010 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp Ngành: BÁC SĨ THÚ Y Tên đề tài: PHÂN LẬP VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI K88, K99, 987P VÀ THỬ ĐỘ NHẠY CỦA VI KHUẨN ĐỐI VỚI KHÁNG SINH TỪ PHÂN HEO CON THEO MẸ BỊ TIÊU CHẢY TẠI MỘT SỐ HUYỆN THUỘC TỈNH TRÀ VINH Sinh viên thực hiện: Trần Thị Diễm Châu MSSV: 3064570 Lớp: Thú Y K32 Giáo viên hướng dẫn: Th.S Nguyễn Thu Tâm Cần Thơ, 2010 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: Phân lập vi khuẩn Escherichia coli K88, K99, 987P thử độ nhạy vi khuẩn kháng sinh từ phân heo theo mẹ bị tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Trà Vinh Do sinh viên: Trần Thị Diễm Châu thực phòng vi trùng miễn dịch Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ từ tháng năm 2010 đến tháng 11 năm 2010 Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2011 Duyệt Bộ Môn Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2011 Duyệt Giáo viên hướng dẫn Nguyễn Thu Tâm Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2011 Duyệt Khoa Nông Nghiệp & SHƯD ii LỜI CẢM TẠ  Trong thời gian học tập rèn luyện mái trường Đại học Cần Thơ, Thầy Cô người dành bao tâm huyết cho nghiệp trồng người, trang bị hành trang quý báu để vững bước vào đời Hôm ước mơ thành thật, với phấn đấu thân, tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Trong suốt trình học tập thời gian thực đề tài, nhận giúp đỡ nhiều người Trong giây phút đây, nói ngồi lời biết ơn chân thành đến người quan tâm, lo lắng giúp đỡ suốt thời gian qua Xin chân thành cảm ơn: Cô Nguyễn Thu Tâm – người hết lịng bảo, động viên tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Thầy Đỗ Trung Giã động viên bảo suốt năm dài đại học Qúy Thầy Cô Bộ môn Thú Y, Bộ môn Chăn Ni tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho suốt năm tháng qua Cha mẹ – người nuôi nấng, dạy dỗ đặt niềm tin, hy vọng vào tơi để tơi có ngày hơm Chị em – người động viên, an ủi, ln bên cạnh tơi lúc khó khăn Các bạn lớp động viên, chia giúp đỡ suốt thời gian học tập thực đề tài Chân thành cảm ơn! iii MỤC LỤC Trang Trang tựa i Trang duyệt ii Lời cảm tạ iii Mục lục iv Bảng chữ viết tắt vii Danh mục sơ đồ - hình viii Danh mục bảng – biểu đồ ix Tóm lược x Chương 1: ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 2: CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Đặc điểm sinh lý heo 2.1.1 Chức thần kinh điều tiết nhiệt chưa hoàn chỉnh 2.1.2 Bộ máy tiêu hóa phát triển chưa hồn chỉnh 2.1.3 Hệ vi sinh vật đường ruột heo 2.2 Vi khuẩn E coli 2.2.1 Lịch sử nghiên cứu 2.2.2 Đặc điểm vi khuẩn E coli 2.2.3 Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn E coli 2.2.4 Độc tố vi khuẩn 2.2.5 Sức đề kháng vi khuẩn 2.2.6 Khả gây bệnh 2.3 Bệnh tiêu chảy E coli heo 10 2.3.1 Điều kiện xuất mầm bệnh 10 2.3.2 Cơ chế gây bệnh tiêu chảy 11 2.3.3 Dấu hiệu lâm sàng 11 iv 2.3.4 Bệnh tích 12 2.3.5 Chẩn đoán 12 2.3.6 Phòng bệnh 13 2.3.7 Điều trị 13 2.4 Kháng sinh 14 2.5 Tình hình nghiên cứu nước 14 2.5.1 Tình hình nghiên cứu nước 14 2.5.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 15 Chương 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 16 3.1 Thời gian, địa điểm đối tượng nghiên cứu 16 3.1.1 Thời gian địa điểm thực 16 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 16 3.2 Nội dung nghiên cứu 16 3.3 Phương tiện nghiên cứu 16 3.3.1 Dụng cụ trang thiết bị thí nghiệm 16 3.3.2 Hóa chất, mơi trường sinh phẩm 16 3.3.3 Kháng sinh 17 3.4 Phương pháp tiến hành thí nghiệm 17 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu 17 3.4.2 Phương pháp nuôi cấy phân lập 17 3.4.3 Phương pháp kiểm tra đặc tính sinh hóa 19 3.4.4 Phương pháp định danh phản ứng huyết học 20 3.4.5 Phương pháp làm kháng sinh đồ 21 3.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 22 Chương 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 23 4.1 Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn E coli phân heo tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Trà Vinh 23 v 4.2 Kết định danh chủng E coli phản ứng huyết học 23 4.3 Kết phân bố chủng E coli K88, K99, 987P theo ngày tuổi 25 4.4 Kết nhiễm ghép chủng E coli K88, K99, 987P phân lập 26 4.5 Kết kiểm tra nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn E coliphân lập 27 4.6 Kết kiểm tra tính đa kháng vi khuẩn E coli với loại kháng sinh 29 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 30 5.1 Kết luận 30 5.2 Đề nghị 30 Tài liệu tham khảo 31 Phụ chương 34 vi BẢNG CHỮ VIẾT TẮT EPEC: Enteropathogenic E coli ETEC: Enterotoxigenic E coli EIEC: Enteroinvasive E coli VTEC: Verocytotoxin E coli EHEC: Enterohemorrhagic E coli CFU: Colony Forming Unit vii DANH MỤC SƠ ĐỒ - HÌNH Trang Danh mục sơ đồ Sơ đồ Quy trình phân lập vi khuẩn E coli 18 Sơ đồ Định danh chủng vi khuẩn E coli K88, K99, 987P phản ứng huyết học 21 Danh mục hình Hình Vi khuẩn E coli kính hiển vi điện tử Hình Cấu tạo tế bào vi khuẩn E coli Hình Khuẩn lạc E coli môi trường MC 19 Hình Kết sinh hóa vi khuẩn E coli 20 Hình Kháng sinh đồ chủng E coli phân lập 28 viii DANH MỤC BẢNG – BIỂU ĐỒ Trang Danh mục bảng Bảng Đặc tính sinh hóa vi khuẩn E coli 20 Bảng Bảng tiêu chuẩn đường kính vịng vơ khuẩn kháng sinh 22 Bảng Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn E coli phân heo theo mẹ bị tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Trà Vinh 23 Bảng Kết định danh chủng K88, K99, 987P vi khuẩn E coli phân lập 24 Bảng Sự phân bố chủng E coli K88, K99, 987P theo ngày tuổi 25 Bảng Kết nhiễm ghép chủng E coli K88, K99, 987P heo theo mẹ bị tiêu chảy 26 Bảng Kết kiểm tra tính nhạy cảm vi khuẩn E coli kháng sinh 27 Bảng Kết kiểm tra tính đa kháng vi khuẩn E coli loại kháng sinh 29 Danh mục biểu đồ Biểu đồ Tỷ lệ phân bố chủng K88, K99, 987P heo theo mẹ bị tiêu chảy 24 Biểu đồ Tỷ lệ phân bố chủng K88, K99, 987P theo ngày tuổi 25 Biểu đồ Kháng sinh đồ vi khuẩn E coli loại kháng sinh 28 ix Chương KẾT QUẢ THẢO LUẬN 4.1 Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn E coli phân heo tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Trà Vinh Chúng tiến hành nuôi cấy phân lập vi khuẩn E coli 81 mẫu phân heo theo mẹ bị tiêu chảy Các vi khuẩn E coli phân lập có hình dạng đặc trưng Trên mơi trường MC khuẩn lạc E coli có màu hồng nhạt, to, trịn đều, mặt khuẩn lạc lồi Kết nuôi cấy phân lập trình bày bảng Bảng Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn E coli phân heo theo mẹ bị tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Trà Vinh Số mẫu phân lập Tỷ lệ (%) (mẫu) Số mẫu E coli dương tính (mẫu) 81 81 100 Mẫu Tổng Kết bảng cho thấy có 81/81 mẫu dương tính với vi khuẩn E coli chiếm tỷ lệ 100% Kết cho thấy vi khuẩn E coli diện đường ruột heo Tỷ lệ cao so với kết nghiên cứu Phạm Quốc Vương (2002) tỷ lệ nhiễm E coli phân heo tiêu chảy 87,50% Sự khác biệt phương thức chăn nuôi thời điểm lấy mẫu khác Phương thức chăn nuôi chủ yếu chăn nuôi nông hộ nhỏ lẻ nên điều kiện vệ sinh chăm sóc kém, heo khơng úm tốt, chuồng ẩm ướt từ làm giảm sức đề kháng heo Thêm vào thời điểm lấy mẫu vào mùa mưa, thời tiết thay đổi nên heo dễ bị bệnh hơn, heo Kết phù hợp với nhận định Fairbrother (1992) E coli vi khuẩn sống bình thường đường ruột heo, chúng gây bệnh đủ số lượng độc tố, sức đề kháng vật chủ suy yếu biến đổi bất lợi ngoại cảnh tác động lên heo bị lạnh úm khơng tốt, chuồng ẩm ướt, vệ sinh chăm sóc 4.2 Kết định danh chủng E coli phản ứng huyết học Từ 81 mẫu E coli phân lập tiến hành định danh xác định chủng K88, K99, 987P phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính với kháng thể chuẩn Kết trình bày bảng 23 Bảng Kết định danh chủng K88, K99, 987P vi khuẩn E coli phân lập Chủng E coli Số mẫu dương tính K88 K99 987P với E coli Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng Tỷ lệ (%) 81 27 33,33 14 17,28 11 13,58 Tỷ lệ (%) 35 33.33 30 25 17.28 20 13.58 15 10 K88 K99 987P Chủng E coli Biểu đồ Tỷ lệ phân bố chủng K88, K99, 987P heo theo mẹ bị tiêu chảy Kết bảng biểu đồ cho thấy K88, K99, 987P chủng phổ biến gây bệnh tiêu chảy heo Trong K88 chiếm tỷ lệ cao 33,33%, K99 chiếm tỷ lệ 17,28% thấp chủng 987P với tỷ lệ 13,58% Kết phù hợp với nghiên cứu Moon (1990) chủng E coli thường xuyên gây bệnh tiêu chảy cho heo sơ sinh K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6) F41 Theo kết trình bày bảng cho thấy K88 xuất phổ biến K99 987P Điều phù hợp với nghiên cứu nhiều tác giả (Phạm Thế Sơn ctv, 2008; Cù Hữu Phú ctv, 2001) E coli gây bệnh heo tiêu chảy chủ yếu mang kháng nguyên bám dính F4 (K88) Trong khác với nghiên cứu Phạm Quốc Vương (2002), K99 phát phổ biến K88 hay 987P Kết 24 cho thấy lưu hành chủng ETEC heo tiêu chảy phân bố thay đổi theo vùng địa lý (Blood ctv,1990) 4.3 Kết phân bố chủng E coli K88, K99, 987P theo ngày tuổi Kết phân bố chủng K88, K99, 987P heo tiêu chảy theo ngày tuổi trình bày bảng Bảng Sự phân bố chủng E coli K88, K99, 987P theo ngày tuổi Chủng E coli Ngày tuổi Số mẫu kiểm tra K88 K99 987P Số lượng mẫu Tỷ lệ (%) Số lượng mẫu Tỷ lệ (%) Số lượng mẫu Tỷ lệ (%) Tổng Tỷ lệ (%) 1–7 12 41,67a 8,33 a 16,67 a 66,67 a – 14 11 36,36a 0,00 a 9,09 a 45,45 a 15 – 21 35 10 28,57a 20,00 a 14,29 a 22 62,86 a > 21 23 34,78a 26,09 a 13,04 a 17 73,91 a Tổng 81 27 33,33 14 17,28 11 13,58 52 64,19 26.09 14.29 13.04 8.33 20 9.09 25 20 16.67 35 30 15 34.78 28.57 45 40 36.36 Tỷ lệ (%) 41.67 Ghi chú: Các giá trị cột có chữ số mũ giống khác khơng có ý nghĩa thống kê 10 1–7 – 14 K88 15 – 21 K99 >21 Ngày tuổi 987P Biểu đồ Tỷ lệ phân bố chủng E coli K88, K99, 987P theo ngày tuổi 25 Kết bảng cho thấy tỷ lệ phân bố chủng E coli K88, K99, 987P nhóm tuổi khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Mặc dù vậy, giai đoạn tuổi khác E coli K88 tác nhân chủ yếu gây bệnh tiêu chảy cho heo Ở giai đoạn – ngày tuổi, chủng K88 chiếm tỷ lệ 41,67% cao nhiều so với chủng K99 (8,33%), chủng E coli 987P chiếm tỷ lệ cao (16,67%) Giai đoạn – 14 ngày tuổi chúng tơi khơng xác định chủng vi khuẩn E coli K99 nào, chủng K88 chiếm tỷ lệ cao 36,36% Khác với hai giai đoạn trên, giai đoạn 15 – 21 ngày tuổi 21 ngày tuổi có số mẫu dương tính với K99 cao số mẫu dương tính với 987P với tỷ lệ 20% 26,09% Tuy nhiên, hai giai đoạn chủng K88 chiếm ưu với tỷ lệ 28,57% 34,78% Kết bảng biểu đồ cho thấy chủng E coli K88, K99, 987P tác nhân gây bệnh tiêu chảy heo giai đoạn 21 ngày tuổi cao (73,91%), giai đoạn heo sơ sinh – ngày tuổi chiếm tỷ lệ cao (66,67%) Kết khác với nghiên cứu Phạm Quốc Vương (2002) chủng K88, K99, 987P gây bệnh tiêu chảy heo giai đoạn sơ sinh thường xuyên giai đoạn khác Sự khác biệt giai đoạn 21 ngày tuổi, giai đoạn heo chuẩn bị cai sữa nên có thay đổi đột ngột thức ăn môi trường sống nên heo dễ bị stress tạo điều kiện cho vi khuẩn E coli công gây bệnh Điều phù hợp với nhận định Đào Trọng Đạt ctv (1999) cho vi khuẩn E coli loại vi khuẩn thường xuyên cư trú đường ruột người động vật, ngoại cảnh không thuận lợi E coli công sinh sản nhanh gây cân hệ vi sinh vật đường ruột gây bệnh 4.4 Kết nhiễm ghép chủng E coli K88, K99, 987P phân lập Kết nhiễm ghép chủng E coli K88, K99, 987P heo theo mẹ bị tiêu chảy trình bày bảng Bảng Kết nhiễm ghép chủng E coli K88, K99, 987P heo theo mẹ bị tiêu chảy Nhiễm ghép K88 + K99 K88 + 987P K99+ 987P K88 + K99+ 987P Tổng Số mẫu 14 Tỷ lệ (%) 42,86 28,57 21,43 7,14 100 26 Qua bảng cho thấy nhiễm ghép K88 K99 cao (chiếm 42,86%) thấp nhiễm ghép chủng K88, K99 987P (chiếm 7,14%) Kết cho thấy K88 K99 nguyên nhân quan trọng gây bệnh tiêu chảy cho heo Kết phù hợp với nghiên cứu Fairbrother (1992) nhiều chủng ETEC phân lập nhiều yếu tố bám dính lúc 4.5 Kết kiểm tra nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập Chúng tiến hành thực kháng sinh đồ 37 mẫu dương tính với chủng E coli K88, K99, 987P Kết trình bày bảng Bảng Kết kiểm tra tính nhạy cảm vi khuẩn E coli kháng sinh Kháng Kháng sinh Tổng số (mẫu) Amoxicillin/ clavulanic acid (Ac) Trung gian Nhạy Số mẫu (mẫu) Tỷ lệ (%) Số mẫu (mẫu) Tỷ lệ (%) Số mẫu (mẫu) Tỷ lệ (%) 37 25 67,57 10,81 21,62 Cephalexin (Cp) 37 16 43,24 20 54,05 2,71 Imipenem (Im) 37 0,00 2,71 36 97,29 Tetracycline (Te) 37 35 94,58 0,00 5,42 Ciprofloxacin (Ci) 37 24,32 15 40,54 13 35,14 Enrofloxacin (Enr) 37 14 37,84 13,51 18 48,65 Theo kết bảng biểu đồ chủng E coli phâp lập có tỷ lệ kháng thuốc cao Trong cao Tetracycline (94,58%), Amoxicillin/clavulanic acid (67,57%) Kết phù hợp với nghiên cứu Võ Thành Thìn ctv (2010) cho vi khuẩn E coli kháng lại với nhiều loại kháng sinh với tỷ lệ đề kháng cao, vi khuẩn kháng gần tuyệt Oxacilin (99,46%), tiếp đến Tetracycline (94,57%) 27 10 0 48.65 37.84 13.51 5.42 20 2.71 30 10.81 40 21.62 50 40.54 35.14 60 24.32 70 2.71 80 43.24 54.05 90 67.57 100 94.58 97.29 Tỷ lệ (%) Ac Cp Im Kháng Te Trung gian Ci Enr Kháng sinh Nhạy Biểu đồ Kháng sinh đồ vi khuẩn E coli loại kháng sinh Kết bảng cho thấy E coli có độ nhạy cảm trung bình với kháng sinh Cephalexin (54,05%) Điều cho thấy E coli tiếp xúc với Cephalexin thực tế Các chủng E coli phân lập mẫn cảm với kháng sinh Imipenem (97,29%), Enrofloxacin (48,65%) Ciprofloxacin (35,14%) Như vậy, sử dụng kháng sinh để điều trị bệnh tiêu chảy heo E coli Tuy nhiên, kháng sinh Imipenem kháng sinh hệ mới, có hoạt tính mạnh phổ kháng khuẩn rộng, dùng điều trị bệnh vi khuẩn Gram (+) Gram (-) Hiện nay, kháng sinh khuyến cáo dùng để điều trị số bệnh nhiễm khuẩn tiêu chảy nặng người (Võ Thành Thìn ctv, 2010) Hình Kháng sinh đồ chủng E coli phân lập 28 4.6 Kết kiểm tra tính đa kháng vi khuẩn E coli loại kháng sinh Kết kiểm tra tính đa kháng với loại kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập trình bày bảng Bảng Kết kiểm tra tính đa kháng vi khuẩn E coli loại kháng sinh Số loại kháng sinh bị E coli kháng (loại) Số lượng mẫu Tỷ lệ (%) 10 34,48 11 37,93 6,90 20,69 Tổng 29 100,00 Kết bảng cho thấy, E coli phân lập kháng đồng thời với nhiều loại kháng sinh lúc Trong đó, vi khuẩn E coli kháng với loại kháng sinh phổ biến (chiếm 37,93%) kháng với loại kháng sinh (chiếm 6,9%) Qua bảng cho thấy có 20,69% E coli đề kháng với loại kháng sinh, tỷ lệ cao Hiện tượng kháng thuốc loại kháng sinh dùng để bổ sung vào thức ăn sử dụng để điều trị thời gian dài Kết phù hợp với nghiên cứu Cù Hữu Phú ctv (2001) cho tượng kháng lúc với loại kháng sinh phổ biến 29 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua thời gian thực đề tài “Phân lập vi khuẩn Escherichia coli K88, K99, 987P thử độ nhạy vi khuẩn kháng sinh từ phân heo theo mẹ bị tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Trà Vinh” rút số kết luận sau Vi khuẩn E coli nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy heo trầm trọng thường xuyên Tỷ lệ nhiễm E coli đàn heo tiêu chảy tỉnh Trà Vinh 100% Tỷ lệ nhiễm E coli phân heo theo mẹ bị tiêu chảy giai đoạn tuổi khác Các chủng E coli K88, K99, 987P gây bệnh tiêu chảy heo theo mẹ với tỷ lệ 33,33%, 17,28% 13,58% Tỷ lệ nhiễm ghép K88 K99 cao (42,86%) thấp nhiễm ghép chủng K88, K99 987P (7,14%) Vi khuẩn E coli có tỷ lệ kháng thuốc cao với loại kháng sinh Tetracycline (94,58%), Amoxicillin/clavulanic acid (67,57%) mẫn cảm với kháng sinh Imipenem (97,29%), Enrofloxacin (48,65%) Ciprofloxacin (35,14%) E coli đa kháng với loại kháng sinh phổ biến (37,93%) 5.2 Đề nghị Hiện tượng đề kháng với kháng sinh loại mầm bệnh phổ biến nên cần thường xuyên kiểm tra nhạy cảm đề kháng kháng sinh để áp dụng hiệu vào công tác điều trị Bên cạnh việc sử dụng kháng sinh Enrofloxacin Ciprofloxacin để điều trị bệnh tiêu chảy heo E coli khuyến cáo nên sử dụng Imipenem để điều trị bệnh cho kết tốt Khuyến khích chăn ni khơng phụ thuộc vào kháng sinh giám sát việc vệ sinh phịng bệnh chăn ni việc tiêm phòng đầy đủ loại vaccin 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Đỗ Ngọc Thúy, Nguyễn Xuân Hiên, Âu Xuân Tuấn, Văn Thị Hường, Đào Thị Hảo Vũ Ngọc Qúy, 2001 Kết điều tra tình hình tiêu chảy lợn theo mẹ số trại lợn miền Bắc Việt Nam, xác định tỷ lệ kháng kháng sinh yếu tố gây bệnh chủng E coli phân lập Báo cáo khoa học chăn nuôi thú y, phần thú y NXB Nông Nghiệp Hà Nội Trang 106 – 118 Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ Huỳnh Văn Khang, 1999 Bệnh lợn nái lợn NXB Nông Nghiệp Hà Nội Trang 57 – 82 Đào Trọng Đạt, 1996 Bệnh lợn ỉa cứt trắng NXB Nông thôn Hồ Thị Việt Thu, 2006 Giáo trình Bệnh truyền nhiễm gia súc gia cầm Khoa Nông Nghiệp SHƯD Trường Đại học Cần Thơ Lê Văn Tạo, 2006 Bệnh vi khuẩn Escherichia Coli gây lợn Khoa học kỹ thuật Thú Y Tập XIII – Số 3, 2006 Trang 75 – 84 Lê Văn Tạo ctv, 1993 Nghiên cứu chế tạo vaccine E coli uống phòng bệnh phân trắng lợn Tạp chí Nơng Nghiệp Cơng nghiệp thực phẩm Số 9, 1993 Trang 324 – 325 Lý Thị Liên Khai, Phạm Quốc Vương, Hideki Kobayashi, Trần Thị Phận, Châu Bá Lộc, Seishi Yamasaki Toshiaki Taniguchi, 2003 Phân lập, định danh điều trị bệnh tiêu chảy cho heo gây Enterotoxigenic Escherichia coli K88, K99, 987P tỉnh Cần Thơ Tạp chí khoa học Đại học Cần Thơ Chuyên ngành: Chăn nuôi & Thú Y Trang 124 – 129 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương, 1997 Vi sinh vật Thú Y NXB Nông Nghiệp Trang 80 – 85 Nguyễn Thị Kim Ngân, 2007 Sử dụng bột xuân hoa phòng tiêu chảy heo theo mẹ Luận văn tốt nghiệp Khoa Nông nghiệp SHƯD Trường Đại học Cần Thơ 10 Nguyễn Vĩnh Phước, 1977 Vi sinh vật học Thú Y Tập NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp 11 Phạm Hùng Vân, 2002 Cẩm nang Các kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng dùng cho phịng thí nghiệm bệnh viện Bộ Y tế Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Trang 79 12 Phạm Khắc Hiếu, Lê Thị Ngọc Diệp, 1997 Dược lý học Thú Y NXB Nông Nghiệp Hà Nội 31 13 Phạm Quốc Vương, 2002 Nuôi cấy, phân lập, định danh kiểm tra tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn Escherichia Coli gây bệnh tiêu chảy heo theo mẹ tỉnh Cần Thơ Luận văn tốt nghiệp Khoa Nông nghiệp SHƯD Trường Đại học Cần Thơ 14 Phạm Thế Sơn, Lê Văn Tạo, Cù Hữu Phú Phạm Khắc Hiếu, 2008 Đặc tính vi khuẩn E coli, Salmonella spp Cl perfringens gây bệnh lợn tiêu chảy Khoa học kỹ thuật Thú Y Tập XV Số 1, 2008 Trang 73 – 77 15 Trần Cẩm Vân, 2001 Giáo trình vi sinh vật học môi trường NXB Đại học quốc gia Hà Nội Trang 126 – 129 16 Trần Cừ, 1972 Cơ sở sinh lý nuôi dưỡng lợn NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội 17 Trần Linh Thước, 2003 Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm NXB Giáo dục 18 Trần Thị Phận, 2004 Bài giảng Vi sinh vật học Thú Y Khoa Nông nghiệp SHƯD Trường Đại học Cần Thơ Trang 16 – 18 19 Trịnh Quang Tuyên, Lê Văn Tạo, Cù Hữu Phú, Phạm Thị Thanh Hoa, 2003 Xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli gây bệnh tiêu chảy cho lợn trại chăn nuôi lợn tập trung miền Bắc Việt Nam Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nơng thôn Số 7, 2003 Trang 859 – 860 20 Vũ Khắc Hùng M Pilipcinec, 2003 Nghiên cứu so sánh yếu tố độc lực chủng E coli phân lập từ lợn bị tiêu chảy Cộng hịa Slovakia Báo cáo khoa học chăn ni thú y, phần thú y NXB Nông Nghiệp Hà Nội Trang 45 – 59 21 Võ Thành Thìn, Lê Đình Hải, Vũ Khắc Hùng, 2010 Khả kháng kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập từ lợn mắc bệnh tiêu chảy Khoa học kỹ thuật Thú Y Tập XVII Số 5, 2010 Trang – 10 Tài liệu tiếng Anh Blood, D C et al 1990 Veterinary medicine, a text book of the diseases of cattle, sheep, pigs, goats, and horse Seventhed Bailliere Tindal, London, England Fairbrother, J M and Gyles, C L 2006 Escherichia Coli infections Diseases of swine 9th Edition, p: 639 – 652 Fairbrother, J M 1992 Enteric colibacillosis Chapter 39: Escherichia Coli infections Diseases of swine 7th Edition, p: 489 – 497 Moon, H W., 1990 Colinization factor antigen of enterotogenic Escherichia Coli in animals Current topics in Microbiology and Immunology 151: 147 – 165 32 Nagy, B., Fekete, P Z., 1999 Enterotoxigenic E coli (ETEC) in farm animal, Vet Res 30, 259 – 284 Orskov, I., and Orskov, F 1983 Serology of Escherichia Coli fimbriae Prog Allergy 33: 80 – 105 Web: 1.http://www.impeqn.org.vn/impeqn/vn/portal/InfoDetail.jsp?area=58&cat=1101&ID=2761 (Viện sốt rét ký sinh trùng – côn trùng Quy Nhơn) http://greengroup.com.vn/eng/index.php?act=hoidapdetail&nid=2&id=102 http://duocthu.com/browse_categories.php?id=i/imipenem/ 33 PHỤ CHƯƠNG Xử lý số liệu 1.1 So sánh phân bố chủng E coli K88 theo ngày tuổi Ngày tuổi 1-7 – 14 15 – 21 > 21 Số mẫu (-) Số mẫu (+) 7 25 10 15 Tổng số 12 11 35 23 Chi-Square Test: - 7, - 14, 15 - 21, > 21 Expected counts are printed below observed counts - 7 8.00 - 14 7.33 15 - 21 25 23.33 > 21 15 15.33 Total 54 4.00 3.67 10 11.67 7.67 27 Total 12 11 35 23 81 Chi-Sq = 0.125 + 0.015 + 0.250 + 0.030 + DF = 3, P-Value = 0.850 0.119 + 0.238 + 0.007 + 0.014 = 0.799 1.2 So sánh phân bố chủng E coli K99 theo ngày tuổi Ngày tuổi 1-7 – 14 15 – 21 > 21 Số mẫu (-) Số mẫu (+) 11 11 28 17 Tổng số 12 11 35 23 Chi-Square Test: - 7, - 14, 15 - 21, > 21 Expected counts are printed below observed counts - 11 9.93 - 14 11 9.10 15 - 21 28 28.95 > 21 17 19.02 Total 67 2.07 1.90 6.05 3.98 14 Total 12 11 35 23 81 34 Chi-Sq = 0.116 + 0.397 + 0.556 + 1.901 + DF = 3, P-Value = 0.222 0.031 + 0.149 + 0.215 + 1.031 = 4.398 1.3 So sánh phân bố chủng E coli 987P theo ngày tuổi Ngày tuổi 1-7 – 14 15 – 21 > 21 Số mẫu (-) Số mẫu (+) 10 10 30 20 Tổng số 12 11 35 23 Chi-Square Test: - 7, - 14, 15 - 21, > 21 Expected counts are printed below observed counts - 10 10.37 - 14 10 9.51 15 - 21 30 30.25 > 21 20 19.88 Total 70 2 1.63 1.49 4.75 3.12 11 Total 12 11 35 23 81 Chi-Sq = 0.013 + 0.026 + 0.084 + 0.163 + DF = 3, P-Value = 0.959 0.002 + 0.013 + 0.001 + 0.005 = 0.307 1.4 So sánh phân bố chủng E coli K88, K99, 987P theo ngày tuổi Ngày tuổi 1–7 – 14 15 – 21 > 21 K88 10 K99 987P Tổng số 22 17 Chi-Square Test: - 7, - 14, 15 - 21, > 21 Expected counts are printed below observed counts 1 - - 14 15 - 21 10 > 21 35 Total 27 4.15 2.60 11.42 8.83 2.15 1.35 5.92 4.58 14 1.69 1.06 4.65 3.60 11 Total 22 17 52 Chi-Sq = 0.172 0.618 0.056 DF = 6, P-Value + 0.759 + + 1.346 + + 0.003 + = 0.680 0.177 + 0.196 + 0.026 + 0.077 + 0.442 + 0.099 = 3.972 Bảng điều tra tình hình chăn ni Điều tra phương pháp ghi nhận đưa câu hỏi theo bảng sau Mẫu số: ………… Địa chỉ: ……………………………………… Ngày lấy mẫu: ……………………………… Đối tượng lấy mẫu: ……………… ngày tuổi Tổng số heo nái: …………………………… Tổng số đàn heo con: ……………………… Tổng số heo con: …………………………… Số đàn heo tiêu chảy: …………………… Tổng số heo tiêu chảy: ………………… Tỷ lệ tiêu chảy đàn: …………………% * Mô tả mẫu phân: Màu phân: ……………… Mùi: …………… Dạng phân: Sệt Nước Khác……… Thời gian tiêu chảy: ……………………… Điều trị: Có Nếu có điều trị: Loại kháng sinh điều trị ………………… Không Các thuốc bổ trợ khác ………………… Thời gian điều trị ……………………… 36 * Tình hình chăn ni thời điểm lấy mẫu Lồng úm: Thức ăn: Khô Đọng nước Ẩm ướt Che chắn: Có Khơng Bóng đèn: Có Khơng Bao lót nền: Có Khơng hỗn hợp: Mới Cũ Tự trộn: Mới Cũ Hôn mê Xù lông Gầy ốm Sốt Lạnh Bỏ ăn Phù mắt Khác ………… * Tình trạng heo Trà Vinh, ngày … tháng … năm… Người điều tra 37 ... NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp Ngành: BÁC SĨ THÚ Y Tên đề tài: PHÂN LẬP VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI K88, K99, 987P VÀ THỬ ĐỘ NHẠY CỦA VI KHUẨN ĐỐI VỚI KHÁNG SINH TỪ PHÂN HEO CON... tài: Phân lập vi khuẩn Escherichia coli K88, K99, 987P thử độ nhạy vi khuẩn kháng sinh từ phân heo theo mẹ bị tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Trà Vinh Do sinh vi? ?n: Trần Thị Diễm Châu thực phòng vi. .. chủng E coli K88, K99, 987P phân lập 26 4.5 Kết kiểm tra nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn E coliphân lập 27 4.6 Kết kiểm tra tính đa kháng vi khuẩn E coli với loại kháng sinh