KHẢO SÁT ĐỘ NHIỄM KHUẨN VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E. COLI TRONG THỰC PHẨM TẠI VIỆN PASTEUR TP. HỒ CHÍ MINH

Header Page of 185 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Trần Thị Thùy Giang KHẢO SÁT ĐỘ NHIỄM KHUẨN VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI TRONG THỰC PHẨM TẠI VIỆN PASTEUR TP HỒ CHÍ MINH LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – 2014 Footer Page of 185 Header Page of 185 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Trần Thị Thùy Giang KHẢO SÁT ĐỘ NHIỄM KHUẨN VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI TRONG THỰC PHẨM TẠI VIỆN PASTEUR TP HỒ CHÍ MINH Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 01 07 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS CAO HỮU NGHĨA Thành phố Hồ Chí Minh – 2014 Footer Page of 185 Header Page of 185 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Footer Page of 185 Header Page of 185 LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành với giúp đỡ quý báu từ Thầy Cô, Anh Chị, bạn Xin gửi lời cảm ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc đến: TS.BS CAO HỮU NGHĨA – người trực tiếp hướng dẫn khoa học – tận tâm hướng dẫn, giúp đỡ suốt thời gian thực luận văn Ban giám hiệu trường Đại học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi cho việc học tập nghiên cứu Quý Thầy Cô trường Đại Học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh, PGS.TS Cao Minh Nga tận tình dạy dỗ, truyền đạt kiến thức cho suốt thời gian học trường ThS Phẩm Minh Thu quan tâm, tận tình bảo, hướng dẫn tơi suốt thời gian thực luận văn ThS Nguyễn Thị Nguyệt, ThS Vũ Lê Ngọc Lan, Cơ, Anh Chị phịng Vi sinh Thực Phẩm, Vi sinh Bệnh Phẩm khoa LAM nhiệt tình dạy bảo tạo điều kiện giúp tơi hồn thành luận văn Các bạn sinh viên thực tập Gia đình hết lịng u thương, quan tâm, động viên điểm tựa vững cho Tác giả Footer Page of 185 Header Page of 185 MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt i Danh mục bảng iv Danh mục hình – sơ đồ v MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nhiệm vụ đề tài Đối tượng phạm vi nghiên cứu Thời gian địa điểm thực đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Thực trạng vấn đề ngộ độc thực phẩm giới nước 1.1.1 Khái niệm ngộ độc thực phẩm 1.1.2 Nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm 1.1.3 Triệu chứng ngộ độc thực phẩm 1.1.4 Thực trạng vấn đề ngộ độc thực phẩm giới Việt Nam 1.2 Những vi sinh vật gây bệnh thực phẩm thường gặp 1.3 Đặc điểm sinh học bệnh học E coli 11 1.3.1 Đặc tính phân loại 11 1.3.2 Đặc tính gây bệnh 13 1.3.3 Các phương pháp phát E coli thực phẩm nước uống 14 1.3.4 Mức độ kháng kháng sinh 17 1.3.4.1 Trên giới 17 1.3.4.2 Tại Việt Nam 18 1.4 Sự đề kháng kháng sinh 20 1.4.1 Kháng sinh 20 Footer Page of 185 Header Page of 185 1.4.1.1 Khái niệm 20 1.4.1.2 Phân loại 20 1.4.1.3 Cơ chế tác động kháng sinh 23 1.4.2 Sự đề kháng kháng sinh vi khuẩn 26 1.4.2.1 Hình thức đề kháng kháng sinh 26 1.4.2.3 Cơ chế lan truyền gene đề kháng kháng sinh .30 1.4.3 Một số biện pháp hạn chế nguy kháng kháng sinh 30 1.5 Tổng quan gene mã hóa β-lactamase 31 1.5.1 Khái niệm 31 1.5.2 Phân loại 31 1.5.3 Đặc tính enzyme beta-lactamase vi khuẩn Gram âm 34 1.5.4 Phương pháp phát beta-lactamase 34 1.6 Tổng quan gene kháng kháng sinh nhóm Tetracycline 35 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 36 2.2 Đối tượng nghiên cứu 36 2.2.1 Đối tượng .36 2.2.2 Cỡ mẫu 37 2.3 Phương pháp nghiên cứu 37 2.3.1 Vật liệu 37 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu .38 2.3.2.1 Phương pháp lấy mẫu 40 2.3.2.2 Phương pháp phát định lượng E coli thực phẩm 41 2.3.2.3 Phương pháp phát định lượng E coli nước 43 2.3.2.4 Định danh E coli 45 2.3.2.5 Giữ chủng 50 2.3.2.6 Làm kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby – Bauer 50 2.2.5 Sàng lọc chủng E coli sinh men β- lactamse đĩa Nitrocefin .52 Chương KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 57 3.1 Tỷ lệ nhiễm khuẩn E coli thực phẩm 57 Footer Page of 185 Header Page of 185 3.2 Khảo sát mức độ kháng kháng sinh vi khuẩn E coli 61 3.3 Tỷ lệ vi khuẩn E coli có khả tạo men beta-lactamase 64 3.4 Một số gene kháng kháng sinh phát vi khuẩn E coli 65 3.4.1 Gene blaTEM–186 67 3.4.2 Gene blaSHV–12 69 3.4.3 Gene tetA .71 3.4.4 Gene tetB .73 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 PHỤ LỤC Footer Page of 185 Header Page of 185 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid deoxyribonucleic AM Ampicillin AMC Amoxicillin/clavulanic acid AN Amikacin ATCC American Type Culture Collection – Ngân hàng chủng Mỹ BGBL Brilliant Green Bile Lactose BHI Brain Heart Infusion CAZ Ceftazidime CFU Colony – Forming Unit – đơn vị khuẩn lạc CIP Ciprofloxacin CLSI Clinical and Laboratory Standards – Viện tiêu chuẩn thí nghiệm lâm sàng CN Cephalexin CS Colistin DA Desoxycholate Agar EC Escherichia coli Broth E coli Escherichia coli EDTA Ethylene diamin tetraacetic acid EHEC Enterohemorrhagic E coli EMB Eosin Methylene Blue Agar EIEC Enteroinvavise E coli Footer Page of 185 Header Page of 185 EPEC Enterophathogenic E coli EP Nước muối sinh lý vô trùng ESBL Extended Spectrum Beta Lactamase – β-lactamase phổ rộng ETEC Enteroxigenic E coli FT Nitrofurantoin GMN Gentamicine IMViC Indol, Methyl Red, Voges Proskauer, Citrate I Trung gian (Intermediate) ISO Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế (International Organization for Standardization) IMP Imipenem KIA Môi trường Kligler Iron Agar LB Môi trường Luria Broth LT Heat labile toxin MEC Mecillinam MH Mueller – Hinton MHA Mueller – Hinton Agar MPN Most Probable Number (Phương pháp số có xác suất cao nhất) NCBI National Center for Biotechnology Information (Trung Tâm Thông Tin Công Nghệ Sinh Học) NDM New Delhi metallo-β-lactamase NET Netilmicin PCA Plate Count Agar Footer Page of 185 Header Page 10 of 185 PCR Polymerase Chain Reaction – phản ứng khuếch đại chuỗi PIP Piperacillin R Kháng (Resistant) S Nhạy (Susceptible) ST Heat stable toxin SXT Trimethoprim – sulfamethoxazole TBE Tris – acetic base EDTA TBX Tryptone Bile X-Gluc (TBX) Agar TCC Triphenyl Tetrazolium Chloride TCVS Tiêu chuẩn vi sinh TE Tetracycline TE Tris – HCl – EDTA TLS Tryptose Lauryl Sulphate TSA Trypticase soy agar VTEC Verocytocin – producing E coli Footer Page 10 of 185 Header Page 105 of 185 (**) Nước giải khát TSVSVHK 10 có cồn E coli Khơng có S aureus Khơng có Streptococci faecal Khơng có P.aeruginosa Khơng có Cl.perfringens Khơng có Nước giải khát TSVSVHK 102 khơng cồn Coliforms 10 E coli Khơng có S aureus Khơng có Streptococci faecal Khơng có P.aeruginosa Khơng có TSBTNM-M 10 Cl.perfringens Khơng có Nước khống TSVSVHK Giới hạn GMP đóng chai Coliforms Khơng có Streptococci faecal Khơng có P.aeruginosa Khơng có Cl.perfringens Khơng có (**) Tính 250ml nước khống đóng chai Quy định giới hạn cho phép vi sinh vật kem nước đá TT SẢN PHẨM LOẠI VI SINH VẬT GIỚI HẠN VI SINH VẬT (trong 1g hay 1ml thực phẩm) (*) Kem, nước đá Footer Page 105 of 185 TSVSVHK 5.104 Coliforms 102 E coli Khơng có S aureus 10 Header Page 106 of 185 Salmonella Khơng có Cl.perfringens 10 (*) Tính 25g 25ml Salmonella Quy định giới hạn cho phép vi sinh vật đồ hộp TT SẢN PHẨM LOẠI VI SINH VẬT GIỚI HẠN VI SINH VẬT (trong 1g hay 1ml thực phẩm) Sản phẩm chế E coli Khơng có biến từ thịt, cá S aureus Khơng có đóng hộp, rau Cl.perfringens Khơng có đóng hộp Cl botulinums Khơng có TSBTNM-M Khơng có Quy định giới hạn cho phép vi sinh vật dầu, mỡ TT SẢN PHẨM LOẠI VI SINH VẬT GIỚI HẠN VI SINH VẬT (trong 1g hay 1ml thực phẩm) (*) Dầu mỡ TSVSVHK Khơng có Coliforms 103 E coli S aureus Khơng có Salmonella Khơng có TSBTNM-M Khơng có (*)Tính 25g 25ml Salmonella Footer Page 106 of 185 Header Page 107 of 185 10 PHỤ LỤC Phương pháp nhuộm Gram a Chuẩn bị thuốc nhuộm: - Thuốc tím gentian - Dung dịch lugol - Thuốc nhuộm Fucsin kiềm b Cách nhuộm Dàn tiêu để khô tự nhiên Cố định tiêu phiến kính cách hơ cao lửa đèn cồn, kiểm tra độ nóng (nhẹ vừa phải mu bàn tay) Chú ý: nóng quá, hơ lâu, vi khuẩn biến dạng Đổ thuốc tím gentian lên tiêu bản, để phút, rửa nước Đổ dung dịch lugol lên tiêu bản, để phút, đổ Tẩy màu cồn 900 hỗn hợp Aceton + cồn 900 (tỷ lệ 1:1) tới bạc màu Rửa qua nước Đổ thuốc nhuộm Fucsin lên tiêu bản, để phút Rửa qua nước Thấm giấy để khô không khí c Đọc kết Vi khuẩn Gram dương: màu tím (tím gentian) Vi khuẩn Gram âm: màu đỏ (đỏ Fucsin) Footer Page 107 of 185 Header Page 11 108 of 185 PHỤ LỤC Kiểu hình đề kháng kháng sinh 60 chủng E coli phân lập từ thực phẩm nước uống SID Thực Phẩm 337NT 138NT 24 45 20 54NT 43T 02NT 10N 137NT 25 44 23 18S 26 132N 132NT 75NT 32NT 05N 73 55 43T Nước sinh hoạt Nước giếng Gà rô ti Gà hấp cải bẹ xanh Sữa tươi Bắp cải luộc Nước giếng Thịt Nước giếng khoan Nước máy qua lọc Nước giếng Nấm bào ngư chiên xả Thịt Canh bầu Cá đông lạnh Cải xào Nước uống Nước sinh hoạt Nước sinh hoạt Nước máy Nước uống Gà quay Cá mú phi lê Thịt Footer Page 108 of 185 AM S R R R S I S R S S R R R I S R R R R R R R R R AMC S S R S S S S S S S S R S I S S S S S S S S I S FT S S R S S R S S S S S S S S S S S S S S S S S S CS S S S S S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S CN S S R S S R S S I S S R S I S S S S S I S S I S MEC S I S S S R S S R S S S S S S S S I S S S S R S CAZ S S S S S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S SXT R R R R R R R R R R R R R R S S S R R R R R R R NET S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S GMN10 R R S R S R S R S S S R I S S S S R R R I I R I PIP S R R I S S S I S S I S I S S I I R I I R R R I AKN S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S CIP R S S S S S S S S S S S S S S S S S S S R R S S TE R R R R S S I R S R R S R S S R R R R R R R R S Header Page 12 109 of 185 37T 35 315N 03S 54NT 55N 07NT 136NT 166NT 279NT 368N 64 235NT 66 65 335NT 317NT 55 56 345NT 365N 51 54 53 318NT 80 27S Thịt Nước sâm Nước uống Cá đông lạnh Nước giếng Nước uống Nước giếng Nước giếng Nước sinh hoạt Nước sinh hoạt Nước uống Cá mắt ngọc Nước sinh hoạt Nhái đồng Ghẹ sữa Nước uống Nước sinh hoạt Vè cá basa Chánh Hưng Cá Chánh Hưng Nước sinh hoạt Nước uống Chân gà Thái Bình Dương Heo Huỳnh Thành Gà góc tư Thái Bình Dương Nước uống Khô cá dứa Cá đông lạnh Footer Page 109 of 185 R R S S S R S R R R S R S R R S S R S S S I R S S S R S S S S S S S R R S S S S S S S R S S S S S R S S S S S R R S S S S S S S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S S R S S S S S S S S S S S I R R S S S S S S S S S S S S S S S I S S S R R S S S S S S I S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S R R S R S S S R S R R R S R R S R S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S R S S S S S S I S I S R S R R S S S S S S I S S S S I S I I R I I S R I S S S S S S S I S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S R S I R R S R R R S R S R R S R S S S S S S S S S S I S S S S S S S R S S I S S S R S R I S R R R S S S S S S S S R I S S R R S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S R S S I S S I S S I S S S S S S S S R S S Header Page 13 110 of 185 50S 40S 100 93 41S 84 Sữa tiệt trùng Thịt heo Cá đông lạnh Phô mai Cá đông lạnh Trứng gà Coopmark Sữa bị tươi Cá đơng lạnh Salat sau sơ chế ăn sống Footer Page 110 of 185 I R S S S R R S R S S S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S I R S S S S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S S S R S S R S S S S S S S S S S R S S S R S S S S I S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S R R S S S S S S R Header Page 111 of 185 14 PHỤ LỤC Tiêu chuẩn đọc kết đường kính vùng ức chế E coli theo CLSI (phiên cập nhật lần thứ 24, năm 2014) Kháng sinh Kí hiệu Hàm lượng Giới hạn đường kính vùng ức chế (mm) (μg) S I R Cotrimoxazol SXT 1,25/23.75 ≥ 16 11 - 15 ≤ 10 Ampicillin AM 10 ≥ 17 14 - 16 ≤ 13 Tetracycline TE 30 ≥ 15 12 - 14 ≤ 11 Gentamicin GMN10 10 ≥ 15 13 - 14 ≤ 12 Piperacillin PIP 100 ≥ 15 18 - 20 ≤ 17 Cephalexine CN 30 ≥ 17 14 - 18 ≤ 13 AMC 20/10 ≥ 18 14 - 17 ≤ 13 Nitrofurantoin FT 300 ≥ 17 15 - 16 ≤ 14 Mecillinam MEC 10 ≥ 15 12 - 14 ≤ 11 Ciprofloxacin CIP ≥ 21 16 - 20 ≤ 15 Colistin CS 10 ≥ 11 11 ≤ 10 Ceftazidime CAZ 30 ≥ 21 18 - 20 ≤ 17 Netilmicin NET 30 ≥ 15 13 - 14 ≤ 12 Amikacin AKN 30 ≥ 17 15 - 16 ≤ 14 Amoxicillin/ clavulanic acid Footer Page 111 of 185 Header Page 112 of 185 15 PHỤ LỤC Kết kháng sinh đồ 28 chủng tách chiết DNA để tiến hành PCR S I R Tỷ Tỷ Tỷ Số Số lệ lệ lệ lượng lượng (%) (%) (%) STT Kháng sinh Kí hiệu N Số lượng Cotrimoxazol SXT 28 10 35,7 0 18 64,3 Ampicillin AM 28 25 0 21 75 Tetracycline TE 28 18 35,7 0 18 64,3 Gentamicin GMN10 28 13 46,4 14,3 11 39.3 Piperacillin PIP 28 11 39,2 12 43,3 17,9 Cephalexine CN 28 20 71,4 10,7 17,9 Amoxicillin/ clavulanic acid AMC 28 21 75 7,1 17,6 Nitrofurantoin FT 28 24 85,7 0 14,3 Mecillinam MEC 28 23 82,2 0 17,8 10 Ciprofloxacin CIP 28 24 85,7 0 14,3 11 Colistin CS 28 26 92,7 3,6 3,6 12 Ceftazidime CAZ 28 26 92,7 3,6 3,6 13 Netilmicin NET 28 27 96,4 3,6 0 14 Amikacin AKN 28 27 96,4 3,6 0 Footer Page 112 of 185 Header Page 113 of 185 16 PHỤ LỤC Thành phần môi trường sử dụng Tryptic Soya Agar (TSA) Dùng để phục hồi giữ giống vi sinh vật, thành phần gồm: Trypticase peptone 15g Phytone peptone 5g NaCl 5g Agar 15g Nước cất 1000ml Đun để hịa tan mơi trường, phân phối 5ml vào ống nghiệm, hấp 1210C vòng 15 phút, pH sau khử trùng 7,3, sau để nguội khoảng 50 – 600C để thạch nghiêng Môi trường Eosin Methylene Blue Lactose Agar (EMB): môi trường dùng để phân lập E coli Peptone 10g Lactose 5g Sucrose 5g KH2PO4 2g Eosin 0,4g Methyl blue 0,065g Agar 13,5g Nước cất 1000ml Đun sơi để hịa tan agar bình chứa, hấp khử trùng 1210C vòng 15 phút, phân phối vào đĩa petri khoảng 10ml, pH sau khử trùng 7,2 Môi trường Brilliant Green Bile Lactose Broth (canh BGBL): Dùng để tăng sinh chọn lọc E coli, thành phần môi trường gồm: Footer Page 113 of 185 Header Page 114 of 185 17 Peptone 10g Latose 10g Mật bò 20g Brilliant green 0,0133g Nước cất 1000ml Hòa tan peptone vào lactose vào 500ml nước cất, mật bò vào khoảng 200ml brilliant green vào khoảng 100ml nước cất Trộn dung dịch để đạt thể tích cuối lít, chỉnh pH mơi trường khoảng 7,4 phân phối 10ml vào ống nghiệm có chứa ống Durham Hấp 1210C 15 phút, pH sau khử trùng 7,2 sử dụng ống nghiệm khơng có bọt khí bên ống Durham Mơi trường thử nghiệm sinh hóa: - Simmons Citrate: dùng để thử nghiệm khả sử dụng citrate vi sinh vật, thành phần gồm: Sodium citrate 2g NaCl 5g K2HPO4 41g NH4H2PO4 41g MgSO4 0,2g Bromothymol blue 0,08g Agar 15g Nước cất 1000ml Đây môi trường thạch nghiêng nên phải pha cốc, đun cho tan hết agar, phân phối vào ống nghiệm khoảng 7ml, đậy nắp, hấp 1210C 15 phút, pH sau khử trùng 6,9 - Trypton water (canh trypton): dùng để thử nghiệm khả sinh indol, thành phần gồm: Footer Page 114 of 185 Header Page 115 of 185 18 Tryptone trypticase 20g NaCl 5g Nước cất 1000ml Đây môi trường lỏng pha cốc, phân phối vào ống nghiệm 5ml, hấp 1210C 15 phút, pH sau khử trùng 7,3 - Môi trường Methyl Red Vosger – Proskauer (MR - VP): sử dụng để thử phản ứng Methyl Red Vosger Proskauer, sử dụng hai loại môi trường sau: Môi trường gồm thành phần sau: Buffered peptone water 7g Glucose 5g K2HPO4 5g Nước cất 1000ml Môi trường gồm thành phần sau: Casein Pancreatic Digest 3,5g Peptid digest of animal tissue 3,5g Dextrose 5g Potassium phosphate 5g Nước cất 1000ml Hòa tan thành phần vào nước làm nóng nhẹ cần Phân phối 10ml vào ống nghiệm, hấp 1210C 15 phút, pH sau khử trùng 7,1 - Thuốc thử Kovacs Footer Page 115 of 185 p – Dimethylaminobenzalhehyde (p - DMABA) 10g Isoamyl alcohol 150ml HCl đậm đặc 50ml Header Page 116 of 185 19 Hịa tan p - DMABA dung mơi, bổ sung khuấy phần nhỏ HCl đủ lượng, thuốc thử chứa chai màu tối tránh ánh sáng 40C Có thay isoamyl alcohol amyl alcohol butanol - Thuốc thử Methyl Red Methyl Red 0,1g Ethanol 95% 300ml Nước cất (đủ) 500ml Hòa tan Methyl Red vào 300ml ethanol Thêm nước cất vào cho đủ thể tích 500ml Mơi trường làm kháng sinh đồ MHA (MUELLER - HINTON AGAR ) Dùng việc kiểm tra nhạy kháng sinh khoanh giấy khuếch tán Thành phần (W/v): - 30,0% beef infusion - 1,75% casein hydrolysate - 0,15% starch - 1,7% agar pH trung tính 250C Mơi trường canh EC Broth (Canh EC): Trypticase or tryptose 20g Muối mật 1,5g Lactose 5g K2HPO4 4g KH2PO4 1,5g NaCl 5g Nước cất 1g Rót mơi trường vào ống nghiệm có chứa ống Durham Hấp 1210C 15 phút, pH 6,9 ± 0,2 Footer Page 116 of 185 Header Page 117 of 185 20 Môi trường Lauryl Sulphate Broth LSB (canh Lauryl Sulphate) Tryptose 20g Lactose 5g Sodium chloride 5g K2HPO4 2,75g KH2PO4 2,75g Lauryl Sulphate 0,1g Nước cất 1g Hấp 1210C 15 phút, pH 6,8 ± 0,2 Môi trường Tryptone Bile X-Gluc (TBX) Agar (g/l) Tryptone (Enzymatic Digest of Casein) 20 g/l Bile Salts No.3 1,5 g/l Agar 14 g/l 5-broma-4-chloro-3-indoyl-beta-D-glucuronide (X-GLUC) 0,075 g/l 35.6 g Tryptone Bile X-Gluc (TBX) Agar + 1000 ml nước cất, gia nhiệt, khuấy đến tan hoàn toàn Hấp khử trùng 1210C 15 phút Làm lạnh 44 - 470C, đổ đĩa petri vô trùng, pH cuối 7,2 Footer Page 117 of 185 Header Page 118 of 185 Footer Page 118 of 185 21 Header Page 119 of 185 Footer Page 119 of 185 22 ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Trần Thị Thùy Giang KHẢO SÁT ĐỘ NHIỄM KHUẨN VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI TRONG THỰC PHẨM TẠI VI? ??N PASTEUR TP HỒ CHÍ MINH. .. trên, thực đề tài nghiên cứu: ? ?Khảo sát độ nhiễm khuẩn khả kháng kháng sinh vi khuẩn E coli thực phẩm vi? ??n Pasteur TP Hồ Chí Minh? ?? Mục tiêu đề tài Xác định khả nhiễm khuẩn E coli thực phẩm khả kháng. .. kháng kháng sinh vi khuẩn E coli Nhiệm vụ đề tài - Xác định tình trạng nhiễm khuẩn E coli thực phẩm - Đánh giá mức độ kháng kháng sinh vi khuẩn E coli thực phẩm - Xác định tỷ lệ chủng E coli có khả