XÁC ĐỊNH các yếu tố độc lực của các CHỦNG ESCHERICHIA COLI k88, k99, 987p gây BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO CON THEO mẹ và SAU CAI sữa tại TỈNH AN GIANG, bến TRE, VĨNH LONG và THÀNH PHỐ cần THƠ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG -oOo- HUỲNH TẤN LỘC XÁC ĐỊNH CÁC YẾU TỐ ĐỘC LỰC CỦA CÁC CHỦNG ESCHERICHIA COLI K88, K99, 987P GÂY BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO CON THEO MẸ VÀ SAU CAI SỮA TẠI TỈNH AN GIANG, BẾN TRE, VĨNH LONG VÀ THÀNH PHỐ CẦN THƠ Luận văn tốt nghiệp Ngành: THÚ Y Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG -oOo- Luận văn tốt nghiệp Ngành: THÚ Y Tên đề tài: XÁC ĐỊNH CÁC YẾU TỐ ĐỘC LỰC CỦA CÁC CHỦNG ESCHERICHIA COLI K88, K99, 987P GÂY BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO CON THEO MẸ VÀ SAU CAI SỮA TẠI TỈNH AN GIANG, BẾN TRE, VĨNH LONG VÀ THÀNH PHỐ CẦN THƠ Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS LÝ THỊ LIÊN KHAI HUỲNH TẤN LỘC MSSV: 3082866 LỚP: THÚ Y K34 Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: “Xác định yếu độc lực chủng Escherichia coli K88, K99, 987P gây bệnh tiêu chảy heo theo mẹ sau cai sữa tỉnh An Giang, Bến Tre, Vĩnh Long Thành phố Cần Thơ” sinh viên Huỳnh Tấn Lộc, thực phịng thí nghiệm vi sinh, khoa Thú Y, trường Đại Học Nông nghiệp Cơng nghệ Tokyo, Nhật Bản phịng thí nghiệm vệ sinh thực phẩm, Bộ môn Thú Y, khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ, từ tháng 10/2012 đến tháng 4/2013 Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2013 Duyệt Bộ Môn Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2013 Giáo viên hướng dẫn Lý Thị Liên Khai Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2013 Duyệt Khoa Nông Nghiệp SHƯD i LỜI CẢM ƠN  Trong suốt trình học tập Trường Đại Học Cần Thơ, q thầy dìu dắt, ân cần truyền đạt tri thức vô giá cho chúng tơi, tri thức hành trang cho vững bước vào đời Hôm nay, ước mơ thành thật, với phấn đấu thân, tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Trong suốt trình học tập thời gian thực đề tài, nhận giúp đỡ nhiều người Trong giây phút đây, tơi khơng biết nói ngồi lời cảm ơn chân thành đến người quan tâm, lo lắng giúp đỡ suốt thời gian qua Sự dạy dỗ, động viên lo lắng cha mẹ người thân gia đình nguồn động lực thúc đẩy tơi nổ lực phấn đấu Trong tận đáy lịng xin chân thành cám ơn người thân yêu kính dâng lên cha mẹ lịng biết ơn sâu sắc, người dành trọn đời cho tơi cất bước đến trường Tơi muốn gửi đến lịng biết ơn vô hạn ghi nhớ công ơn Cơ Lý Thị Liên Khai, người hết lịng bảo, khun răn, giúp đỡ động viên tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Xin gửi lời chân thành đến quý Thầy Cô Bộ môn Thú y Bộ mơn Chăn ni hết lịng truyền đạt kinh nghiệm kiến thức quý báo cho rèn luyện, học tập tốt suốt thời gian học Đại học Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến chị Nguyễn Thị Hạnh Chi, giúp đỡ tơi q trình làm đề tài Xin cám ơn anh chị Cao học Thú y K18 K19 giúp đỡ trình thực đề tài Cám ơn tất bạn bè lớp Thú y K34, em sinh viên Thú y K35 học việc phòng thí nghiệm động viên, giúp đỡ chia vui buồn với suốt thời gian học Đại học thực đề tài Tôi không quên kỷ niệm vui buồn bên người suốt năm học vừa qua Cuối xin kính chúc người thật nhiều sức khỏe, hạnh phúc thành công! Huỳnh Tấn Lộc ii MỤC LỤC Trang bìa Trang tựa Trang duyệt i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh sách bảng vi Danh sách sơ đồ vii Danh sách biểu đồ viii Danh sách hình ix Danh sách chữ viết tắt x Tóm lược xi Chương 1: ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 2: CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước vi khuẩn E coli gây bệnh tiêu chảy heo 2.1.1 Tình hình nghiên cứu nước 2.1.2 Tình hình nghiên cứu nước 2.2 Đặc điểm sinh lý heo 2.2.1 Chức thần kinh điều tiết nhiệt 2.2.2 Bộ máy tiêu hoá 2.2.3 Thay đổi máy tiêu hóa cai sữa 2.2.4 Hệ vi sinh vật đường ruột heo 2.3 Những nguyên nhân gây tiêu chảy heo 2.3.1 Tiêu chảy vi khuẩn 2.3.2 Tiêu chảy virus iii 2.3.3 Tiêu chảy ký sinh trùng 10 2.3.4 Tiêu chảy ảnh hưởng môi trường 10 2.4 Tổng quan vi khuẩn Escherichia coli 11 2.4.1 Lịch sử nghiên cứu 11 2.4.2 Đặc điểm vi khuẩn E coli 13 2.4.3 Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn E coli 14 2.4.4 Độc tố vi khuẩn 17 2.4.5 Sức đề kháng vi khuẩn 23 2.4.6 Khả gây bệnh 23 2.5 Bệnh tiêu chảy vi khuẩn E coli heo 25 2.5.1 Điều kiện xuất bệnh 25 2.5.2 Cơ chế gây bệnh tiêu chảy 26 2.5.3 Triệu chứng bệnh tích 27 2.5.4 Chẩn đoán chẩn đoán phân biệt 28 2.5.5 Điều trị phòng bệnh 30 Chương 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 32 3.1 Thời gian, địa điểm đối tượng nghiên cứu 32 3.1.1 Thời gian địa điểm thực 32 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 32 3.1.3 Động vật thí nghiệm 32 3.2 Phương tiện nghiên cứu 32 3.2.1 Dụng cụ trang thiết bị thí nghiệm 32 3.2.2 Hóa chất, mơi trường 32 3.3 Phương pháp tiến hành thí nghiệm 33 iv 3.3.1 Phương pháp định danh chủng vi khuẩn E coli phản ứng huyết học 33 3.3.2 Phương pháp PCR xác định độc tố ruột vi khuẩn ETEC gây tiêu chảy cho heo theo mẹ sau cai sữa 34 3.3.3 Phương pháp xác định độc lực chủng E coli phân lập chuột bạch 38 3.3.4 Các tiêu theo dõi 39 3.4 Phương pháp xử lý số liệu 39 Chương 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 40 4.1 Kết định danh chủng E coli K88, K99, 987 heo trước sau cai sữa 40 4.2 Kết xác định độc tố vi khuẩn ETEC gây tiêu chảy heo 41 4.3 Kết kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn ETEC phân lập chuột bạch 49 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 57 5.1 Kết luận 57 5.2 Đề nghị 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ CHƯƠNG 65 v DANH SÁCH BẢNG STT Tựa bảng Trang Mối liên quan kháng nguyên O vi khuẩn E coli đối tượng gây bệnh 17 Sự tương quan kháng nguyên khả sinh độc tố vi khuẩn E coli 18 Một số đặc tính loại độc tố LT ST vi khuẩn E coli 19 Một số yếu tố độc lực vi khuẩn E coli gây bệnh tiêu chảy heo 25 Trình tự nucleotide cặp mồi chu trình nhiệt phản ứng PCR xác định số yếu tố độc lực vi khuẩn E coli 36 Hổn hợp nhiên liệu (master mix) phản ứng PCR xác định số yếu tố độc lực vi khuẩn E coli gây tiêu chảy heo 37 Kết định danh chủng E coli K88, K99, 987P heo tiêu chảy 40 Kết xác định độc tố vi khuẩn E coli theo chủng K88, K99, 987P 47 Kết theo dõi khả gây tiêu chảy tỉ lệ chết chuột bạch sau tiêm chủng vi khuẩn ETEC 50 10 Kết kiểm tra độc lực chuột bạch qua độc tố vi khuẩn E coli 53 11 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn ETEC theo chủng K88, K99, 987P chuột bạch 54 vi DANH SÁCH SƠ ĐỒ Sơ đồ Tựa sơ đồ Định danh chủng E coli phản ứng huyết học vii Trang 34 DANH SÁCH BIỂU ĐỒ Biểu đồ Tựa biểu đồ Trang Khả sinh độc tố ruột STa, STb, LT chủng vi khuẩn ETEC 42 viii ... Học Cần Thơ, tiến hành thực đề tài ? ?Xác định yếu độc lực chủng Escherichia coli K88, K99, 987P gây bệnh tiêu chảy heo theo mẹ sau cai sữa tỉnh An Giang, Bến Tre, Vĩnh Long Thành phố Cần Thơ? ??... khuẩn E coli gây tiêu chảy heo 37 Kết định danh chủng E coli K88, K99, 987P heo tiêu chảy 40 Kết xác định độc tố vi khuẩn E coli theo chủng K88, K99, 987P 47 Kết theo dõi khả gây tiêu chảy tỉ... Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: ? ?Xác định yếu độc lực chủng Escherichia coli K88, K99, 987P gây bệnh tiêu chảy heo theo mẹ sau cai