Bài viết tiến hành thu thập 103 mẫu lợn con tiêu chảy tại 6 tỉnh phía Bắc để nghiên cứu mức độ tổn thương đại thể và vi thể của bệnh do Rotavirus gây ra. Từ đó nghiên cứu các đặc điểm bệnh lý ở lợn con tiêu chảy do Rotavirus.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ Ở LN CON TIÊU CHẢY DO ROTAVIRUS Đào Lê Anh, Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Thị Hạnh, Nguyễn Thị Thu Hằng, Nguyễn Thị Hoa, Nguyễn Thị Ngọc, Lê Văn Hùng Học viện Nông nghiệp Việt Nam TÓM TẮT Đã thu thập 103 mẫu lợn tiêu chảy tỉnh phía Bắc để nghiên cứu mức độ tổn thương đại thể vi thể bệnh Rotavirus gây Kết nghiên cứu kỹ thuật RT-PCR cho thấy có 14 mẫu dương tính với Rotavirus khơng có đồng nhiễm với số tác nhân virus, vi khuẩn khác Thống kê triệu chứng lâm sàng lợn tiêu chảy Rotavirus cho thấy triệu chứng tập trung hệ tiêu hóa, cụ thể tiêu chảy (100%); phân vàng trắng có lẫn cặn sữa, có bọt khí (85,71%) Ngồi ra, lợn mắc bệnh cịn có biểu ủ rũ, mệt mỏi, lười vận động, uống nhiều nước, bỏ ăn, giảm ăn, lợn hốc hác gầy còm Tổn thương đại thể chủ yếu xảy ruột non, thành ruột mỏng, căng ra, ruột chứa cặn sữa khơng tiêu (90100%) Bệnh tích vi thể tập trung ruột Tổn thương vi thể chủ yếu xảy đỉnh lông nhung ruột (100%), lông nhung cùn, teo dần nên làm giảm khả tiêu hóa, hấp thu chất dinh dưỡng Trên đoạn ruột non, tổn thương vi thể nặng đoạn tá tràng không tràng với biểu sung huyết, thâm nhiễm tế bào viêm lơng nhung bị ăn mịn hầu hết mẫu nghiên cứu Từ khóa: Lợn con, Rotavirus, bệnh tích đại thể vi thể Some pathological characteristics of the piglets suffering with diarrhea caused by Rotavirus Dao Le Anh, Nguyen Thi Lan, Nguyen Thi Hanh, Nguyen Thi Thu Hang, Nguyen Thi Hoa, Nguyen Thi Ngoc, Le Van Hung SUMMARY A total of 103 diarrheal piglet samples were collected in Northern provinces, Viet Nam for study on the pathology caused by rotavirus The results of RT-PCR technique showed that 14 samples were positive with rotavirus and co-infection with other virus and bacteria was not found The clinical symptoms of the piglets suffering with diarrhea by rotavirus were detected mainly in the digestive system, the severe symptom was diarrhea (100%); yellow or white feces with milk residues (85.71%) In addition, the rotavirus infected pigs presented several clinic signs, such as: moodiness, tiredness, drinking plenty of water, loss appetite and decline The necropsy result of the rotavirus infected piglets indicated that the lesions were mainly occurred in the small intestine, such as the intestinal wall was thin, stretched, containing milk residue (90-100%) The histological lesions were mainly occurred on top of the intestinal villi (100%), it was blunt, gradually disappeared, thus reduced digestibility, nutrition absorption The lesions in the intestine segments were heavier than that on the duodenum and jejunum with the manifestations of congestive, inflammatory, infiltrated cells and corrosive villi in most of the studied samples Keywords: Piglet, Rotavirus, gross and histological lesions 21 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 I ĐẶT VẤN ĐỀ Tiêu chảy lợn vấn đề nghiêm trọng gây thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi Rotavirus số nguyên nhân chủ yếu gây tiêu chảy cấp lợn trẻ em, cho tác nhân có khả truyền lây động vật người (Nguyễn Tuấn Anh cs, 2007) Rotavirus thuộc họ Reoviridae chia thành nhóm (group) khác nhau, bao gồm nhóm A, B, C, D, E Trong nhóm Rotavirus nhóm A quan trọng nguy hiểm lưu hành tỷ lệ gây bệnh tiêu chảy cấp tính cao người gia súc Genome Rotavirus mang vật liệu di truyền đoạn phân tử RNA, gồm 11 phân đoạn mã hóa cho protein cấu trúc (structural protein) protein không cấu trúc (nonstructural protein) Do genome Rotavirus có cấu trúc phân đoạn nên có tái tổ hợp gen chủng Rotavirus với chúng nhiễm vào tế bào tạo chủng/biến chủng virus Rotavirus nhóm A chia thành genotype khác dựa vào loại protein glycoprotein (G) protease-sensitive (P) nằm lớp vỏ protein bao bọc lõi virus Ít có 23 loại genotype G 31 loại genotype P ghi nhận giới Các G P genotype khơng ngừng tìm thấy thời gian gần đây, nói lên tính đa dạng Rotavirus tự nhiên Trên giới, nghiên cứu biến đổi bệnh lý Rotavirus gây cho quan trọng góp phần tạo móng cho việc thiết lập chẩn đoán bệnh, nghiên cứu thực từ lâu (Janke B.H et al., 1987; Johannsen U et al., 1976) Ở Việt Nam, có nhiều nghiên cứu đề cập đến có mặt vai trị Rotavirus trường hợp lợn tiêu chảy, nhiên tính đến thời điểm này, chưa có nghiên cứu mô bệnh học liên quan đến tiêu chảy lợn Rotavirus gây Mục tiêu nghiên cứu tìm hiểu đặc điểm bệnh lý lợn tiêu chảy Rotavirus nhằm đánh giá thương tổn bệnh Rotavirus lợn mức độ đại 22 thể vi thể, từ cung cấp thơng tin cho chẩn đốn lâm sàng giải thích ngun nhân lợn bị bệnh giảm hấp thu tiêu hóa II NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu - Xác định số đặc điểm triệu chứng lợn tiêu chảy Rotavirus - Bệnh tích đại thể lợn tiêu chảy Rotavirus - Biến đổi vi thể số tổ chức nội tạng lợn tiêu chảy Rotavirus 2.2 Nguyên liệu - Động vật lấy mẫu bệnh phẩm: Lợn nghi mắc Rotavirus (0-28 ngày tuổi) - Dụng cụ, hóa chất: Các dụng cụ, hóa chất, trang thiết bị Phịng thí nghiệm trọng điểm CNSH Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Hệ thống làm tiêu vi thể, kính hiển vi điện tử, máy PCR 2.3 Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp quan sát: quan sát triệu chứng lâm sàng lợn, chụp ảnh, ghi chép số liệu cá thể toàn đàn - Phương pháp mổ khám: Lợn bệnh cố định bàn mổ khay mổ, mổ khám theo trình tự từ xuống dưới, bộc lộ tất khí quan để quan sát tìm biến đổi bệnh tích đại thể - Phương pháp làm nhuộm tiêu vi thể: mẫu bệnh phẩm có biến đổi đại thể sử dụng cho nghiên cứu vi thể Phương pháp làm tiêu vi thể theo quy trình tẩm đúc parafin, nhuộm Haematoxilin Eosin (HE) - Phương pháp RT-PCR Tách chiết ARN Tiến hành tách chiết ARN tổng số theo hướng dẫn Kít tách chiết ARN Ambion KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Cụ thể bước tiến hành sau: Mẫu bệnh phẩm phân giải 600 µl dung dịch LB-buffer, dùng chày nghiền mẫu, nghiền dung dịch phân giải hoàn toàn Bổ sung 600µl cồn 70% Chuyển tồn huyễn dịch sang cột lọc Kit, sau rửa cột lọc hai lần đệm rửa Wash Buffer I, Wash Buffer II cung cấp kèm theo Kit Cuối ARN thu 100 μl nước tinh khiết (kèm theo Kit) DNA bảo quản −20°C phân tích Phản ứng RT-PCR Mẫu ARN sau tách chiết tiến hành phản ứng RT-PCR theo Kit Invitrogen Cặp mồi sử dụng nghiên cứu để nhân đoạn gen VP6 bao gồm : Rota - set1 F (Forward primer): 5’-AAA GAT GCT AGG GAC AAA ATT G- 3’ Rota - set1 R (Reverse primer): 5’-TTC AGA TTG TGG AGC TAT TCC A-3’ Chu kì nhiệt phản ứng RT-PCR sau: 450C - 45 phút, 94ºC - phút, 35 chu kỳ (94ºC - 30 giây, 45ºC - 1phút, 72ºC - 1phút), 72ºC - 10 phút cuối giữ sản phẩm 4ºC Điện di thạch đọc kết sản phẩm RT-PCR Sản phẩm RT-PCR điện di thạch 1,2% dung dịch đệm TBE1X thời gian 35 phút hiệu điện 100V Đọc kết điện di tia UV bước sóng 254nm III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tỷ lệ nhiễm Rotavirus lợn từ 0-28 ngày tuổi số tỉnh phía Bắc Bảng Tỷ lệ nhiễm Rotavirus lợn từ - 28 ngày tuổi số tỉnh phía Bắc STT Địa điểm Kết phản ứng RT-PCR Số mẫu xét nghiệm Số mẫu dương tính Tỷ lệ (%) Hưng Yên 21 23,81 Hà Nam 18 16,67 Bắc Giang 17 11,76 Hải Dương 16 31,25 Bắc Ninh 15 0 Nam Định 16 6,25 Tổng 103 16 15,53 Hình Kết quả chạy điện di sản phẩm phản ứng RT-PCR phát Rotavirus M: thang chuẩn Marker (100bp); giếng 1-5: mẫu ruột, phân lợn nghi nhiễm Rotavirus; giếng 6: đối chứng âm; giếng 7: đối chứng dương (chủng virus Rota vacxin) 23 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Trong quá trình nghiên cứu, chúng tiến hành thu thập các mẫu phân lợn tiêu chảy từ số trang trại lợn phía Bắc Việt Nam, tiến hành phản ứng RT-PCR xét nghiệm phát Rotavirus, chúng thu được kết quả theo bảng Qua bảng cho thấy kết phản ứng RTPCR phát 16 mẫu lợn từ - 28 ngày tuổi dương tính với Rotavirus, chiếm tỷ̉ lệ 15,53% Số mẫu lợn dương tính với Rotavirus phát 5/6 tỉnh phía Bắc gồm Hưng Yên, Hà Nam, Bắc Giang, Hải Dương Nam Định Không phát mẫu dương tính với Rotavirus tỉnh Bắc Ninh Như vậy, Rotavirus gây bệnh cho lợn lưu hành rộng rãi khu vực phía Bắc nước ta Trên giới có nhiều kỹ thuật chẩn đốn bệnh Rotavirus lợn phân lập virus, test thử nhanh, RT-PCR, RT-qPCR, kỹ thuật RTPCR sử dụng phổ biến phịng thí nghiệm để xác định tỷ lệ nhiễm Rotavirus lợn Bằng kỹ thuật Canada, nghiên cứu thu thập 96 mẫu lợn 24 ngày tuổi lò mổ từ 2005-2007 xác định tỷ lệ lợn nhiễm Rotavirus 8,3% (Martel et al., 2013) Cùng giai đoạn đó, kỹ thuật RT-PCR, xác định tỷ lệ nhiễm 6,5% với Rotavirus đối tượng lợn 28-63 ngày tuổi Ireland 2007 (Collins et al., 2010) Ở Việt Nam, nghiên cứu Phạm Hồng Anh cs (2014) công bố tỷ lệ nhiễm Rotavirus nhóm A 32,7% từ mẫu lợn khỏe mạnh lợn tiêu chảy tỉnh đồng sông Mekong Kết tỷ lệ nhiễm Rotavirus lợn thấp hơn, số lượng mẫu thu thập cịn nên chưa phản ánh đầy đủ tỷ lệ lưu hành Rotavirus đàn lợn Ngoài chẩn đốn có mặt Rotavirus, tất mẫu bệnh phẩm xác định có mặt virus TGE, virus PED, virus PRRS, vi khuẩn E.coli, Salmonella, Clostridium Coccidiosis Kết chẩn đoán cho thấy có 14/16 mẫu cho kết âm tính với virus TGE, PED, vi khuẩn E.coli, Salmonella Coccidiosis (số liệu khơng trình bày báo này) Lựa chọn 14 mẫu dương tính với Rotavirus để thực nghiên cứu Kết tỷ lệ nhiễm Rotavirus cho thấy có diện cao virus mơi trường, đồng thời chúng cịn tồn lâu môi trường (phân, dụng cụ, trang thiết bị chăn nuôi…) Đây yếu tố nguy lan truyền bệnh cần quan tâm có ảnh hưởng đến sức khỏe người, đặc biệt trẻ em Ngồi gây bệnh lợn, Rotavirus cịn ngun nhân gây tiêu chảy cấp loài chẳng hạn người, chuột, bò, cừu Sự truyền lây tự nhiên người động vật xảy đường truyền lây chủ yếu từ nguồn nước phân động vật gây nhiễm 3.2 Triệu chứng lâm sàng lợn nhiễm Rotavirus Thông qua kết quả phản ứng RT-PCR phát mẫu dương tính với Rotavirus, chúng tiến hành quan sát biểu hiện lâm sàng của lợn tiêu chảy nhiễm Rotavirus Các triệu chứng lâm sàng lợn đã được chúng theo dõi, quan sát, ghi chép lại thông tin qua các chủ hộ Kết quả được thể hiện bảng Bảng Triệu chứng lâm sàng lợn tiêu chảy Rotavirus STT Số lợn biểu (n = 14) Tỷ lệ (%) Ủ rũ, mệt mỏi, lười vận động 13 92,86 Uống nhiều nước 57,14 Phân vàng trắng, có lẫn cặn sữa, có bọt khí 12 85,71 Nơn mửa 21,43 Lười bú, bỏ ăn, giảm ăn 12 85,71 Lợn hốc hác, gầy còm 12 85,71 Tiêu chảy 14 100 24 Chỉ tiêu theo dõi KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Nghiên cứu triệu chứng lâm sàng của lợn tiêu chảy Rotavirus, chúng thấy bệnh diễn biến ở thể cấp tính Triệu chứng lâm sàng của lợn thay đổi phụ thuộc vào lứa tuổi, trạng thái miễn dịch của lợn con, cũng điều kiện quản lý chăm sóc của từng trại mà diễn biến lâm sàng của bệnh có thể giảm dần hoặc nghiêm trọng và dẫn đến tử vong Triệu chứng lâm sàng của bệnh bao gồm: ủ rũ, mệt mỏi, lười vận động, uống nhiều nước, tiêu chảy, phân vàng trắng có lẫn cặn sữa, có bọt khí, lười bú, bỏ ăn, giảm ăn, lợn hốc hác, gầy cịm Trong đó, triệu chứng lợn ủ rũ, mệt mỏi, bỏ ăn, giảm ăn, gầy còm chiếm tỷ lệ 85,71-92,86% số theo dõi Lợn tiêu chảy chiếm 100% tổng số quan sát, nước nhiều, vật có biểu khát nước uống nhiều nước Lợn uống nhiều nước chiếm 57,14% Một số lợn có biểu nơn (21,43%) Lợn mắc bệnh làm cho trình hấp thu chất bị cản trở, nhu động ruột tăng lên, khả tiêu hóa bị hạn chế, sữa thức ăn thừa ruột non khơng tiêu hóa, thời gian chúng lên men yếm khí sinh hơi, phân vật có lẫn cặn sữa, có bọt khí Lợn có phân vàng, hoặc trắng, có lẫn cặn sữa, có bọt khí chiếm 85,71% Rotavirus chịu khoảng pH 3,0 - 9,0, nhờ chúng có khả chống chịu với pH thấp dày (pH 2,5 - 3,5) pH cao ruột non (6,0 - 7,5) Rotavirus tập trung chủ yếu lông nhung ruột non Chúng tái tạo chủ yếu tế bào chất của tế bào biểu mô lông nhung ruột non (Buller Moxley, 1988) và các tế bào biểu mô manh tràng hoặc đại tràng (Collins et al., 1989; Theil et al., 1978; Ward et al., 1996b), chúng phá huỷ tế bào biểu mô bề mặt lông nhung Kết hoạt động tiêu hóa, vận chuyển chất dinh dưỡng, chất điện giải tế bào biểu mô bề mặt lơng nhung bị đình trệ, giảm khả hấp thu chất dinh dưỡng Nước chất điện giải tích tụ lịng ruột cộng với chất dinh dưỡng hay sữa khơng tiêu hóa làm tăng áp lực thẩm thấu lòng ruột Áp lực kéo nước mơ bào vào lịng ruột làm dịch thể tích tụ xoang ruột, kích thích vào thụ quan thần kinh cục bộ, tăng nhu động ruột sinh tiêu chảy làm thể mệt mỏi dẫn đến chán ăn, bỏ ăn 3.3 Xác định tổn thương đại thể lợn tiêu chảy Rotavirus Tiến hành mổ khám lợn bị tiêu chảy Rotavirus (có kết quả xét nghiệm dương tính với Rotavirus RT-PCR) để quan sát, kiểm tra bệnh tích đại thể thu thập mẫu bệnh phẩm làm tiêu vi thể Bệnh tích đại thể quan thể bảng Bảng Các tổn thương đại thể lợn tiêu chảy Rotavirus (n=14) Bệnh tích Số biểu Tỷ lệ (%) 14 100 Hạch ruột sưng, thủy thũng 42,86 Thành ruột mỏng 11 78,57 Ruột non căng phồng 11 78,57 Viêm dày-ruột 42,86 Niêm mạc ruột bị bào mịn, bong tróc 57,14 Có sữa dày, ruột non Quan sát bệnh tích lợn mổ khám, chúng tơi nhận thấy bệnh tích chủ yếu tập trung ruột non, cụ thể tượng có sữa dày ruột (100%), ruột non căng phồng, thành ruột mỏng (78,57%) niêm mạc ruột bị bong tróc, bị bào mịn (57,14%) Ngồi bệnh tích kể trên, lợn cịn có tượng hạch ruột sưng, thủy thũng viêm dày-ruột chiếm 42,86% 25 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Hình Lợn bị tiêu chảy Hình Phổi viêm nhẹ Hình Thận có vùng sung huyết Chúng tiến hành so sánh với bệnh khác gây tiêu chảy lợn con: Theo bảng so sánh bệnh gây tiêu chảy lợn virus PED, TGE Rotavirus có triệu chứng, bệnh tích giống nên thực tế lâm sàng dễ dàng chẩn đốn nhầm bệnh với Vì để phân biệt bệnh cần phải dùng phương pháp chẩn đốn 26 Hình Dạ dày căng phồng Hình Hạch màng treo ruột sưng Hình Thành ruột mỏng, căng phồng phịng thí nghiệm RT-PCR để xác định nhanh xác nguyên nhân gây bệnh có biện pháp xử lý kịp thời giảm thiệt hại bệnh gây đàn lợn Trên thực tế, lợn mắc Rotavirus bị nhiễm kế phát virus vi khuẩn bệnh trở nên trầm trọng tỷ lệ chết tăng lên (Johannsen U., 1976) KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 TT Tên bệnh Tác nhân gây bệnh Bệnh tích đại thể đường tiêu hóa Tài liệu tham khảo PED Virus PED Ruột căng phồng, đầy dịch màu vàng, chứa cục sữa chưa tiêu Thành ruột mỏng suốt lơng nhung bị bào mòn, xuất huyết, chứa nhiều chất lỏng thối, hạch ruột sưng, thủy thũng, đặc biệt không tràng hồi tràng TGE Virus TGE Bệnh tiêu chảy E.coli Vi khuẩn E.coli Lợn tiêu chảy phân nhiều nước, phân màu Nguyễn vàng xanh, lổn nhổn, mùi khó chịu Như Thanh cs Lợn tiêu chảy phân có màu trắng, ruột bị (2001) sung huyết xuất huyết Phó thương hàn Vi khuẩn Salmonella Lợn tiêu chảy phân lỏng sống, màu vàng bột cám màu xám, da xuất đám tụ máu, gan có điểm hoại tử áp se Bệnh tiêu chảy Clostridium Vi khuẩn Clostridium Lợn tiêu chảy máu, phân có lẫn bọt khí, có bệnh tích ruột non, xuất huyết máu đỏ tươi Hồng lỵ Vi khuẩn Brachyspira Lợn tiêu chảy phân có lẫn máu tươi, màng niêm mạc dịch nhầy viêm ruột già, manh tràng, trực tràng 3.4 Xác định tổn thương vi thể lợn tiêu chảy Rotavirus Nguyễn Tất Toàn cs (2012) Tiêu hóa ruột non chiếm vị trí vơ quan trọng việc hấp thu chất dinh dưỡng thể Ruột non nơi chất dinh dưỡng thức ăn phân giải đến sản phẩm cuối để thể hấp thu dễ dàng Ruột quan bị ảnh hưởng quan bị tác động Rotavirus xâm nhập Chúng đánh giá mức độ thương tổn đoạn ruột Rotavirus, kết tổng hợp bảng Tất 14 cá thể lợn xét nghiệm dương tính với Rotavirus, thu thập mẫu bảo quản mẫu bệnh phẩm dung dịch formalin 10% thời gian tuần để làm tiêu vi thể Tiến hành đúc block, block cắt, nhuộm tiêu bản, sau soi kính hiển vi đọc kết bệnh tích vi thể Đánh giá bệnh tích vi thể: Nếu block có tiêu có bệnh tích trở lên coi dương tính Bảng Kết tổn thương vi thể đoạn ruột lợn tiêu chảy Rotavirus Tổn thương vi thể (n = 14) TT Cơ quan Sung huyết Xuất huyết Hoại tử tế bào Thối hóa tế bào Thâm nhiễm tế bào Lơng nhung bị ăn mịn Tăng sinh nang lympho (+) % (+) % (+) % (+) % (+) % (+) % (+) % Tá tràng 64,2 57,1 21,4 14 100 14 100 13 92,8 13 92,8 Không tràng 13 92,8 42,8 10 71,4 14 100 14 100 14 100 14 100 Hồi tràng 42,8 35,7 57,1 13 92,8 12 85,8 64,2 10 71,4 Kết tràng 21,4 14,2 42,8 11 78,5 11 78,5 21,4 64,2 Ghi chú: n: số mẫu nghiên cứu; (+): số mẫu dương tính 27 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Qua bảng nhận thấy biến đổi cấu trúc ruột diễn mạnh tá tràng không tràng ruột non, biến đổi sung huyết, thâm nhiễm tế bào viêm lông nhung bị biến đổi xảy nhiều, chiếm tỷ lệ 80% số mẫu, khơng tràng nơi diễn q trình tiêu hóa hấp thu mạnh, đồng thời nơi dễ bị tổn thương Khi quan sát tiêu vi thể ruột cho thấy tỷ lệ lông nhung bị teo dần tá tràng, không tràng cao, 92,8% 100%, hồi tràng kết tràng có biến đổi cấu trúc lơng nhung thấp 21,4 – 64,2% Bề mặt niêm mạc ruột non có nhiều “nếp gấp” Trên nếp nhăn lại có nhiều nhung mao (mỗi cm2 có 2500 nhung mao) làm tăng bề mặt hấp thu ruột non lên 20-25 lần Diện tích tiếp xúc nhung mao lợn 28 m2 Đoạn tá tràng ruột non có nhiều nhung mao so với đoạn ruột khác Càng gần ruột già, số lượng lông nhung ruột giảm dần Bề mặt lông nhung bao phủ lớp biểu mô mỏng Mỗi tế bào biểu mơ lại có vơ số vi nhung (3000 vi nhung tế bào) làm tăng bề mặt hấp thu lơng nhung lên 30 lần, từ bề mặt hấp thu ruột non tăng lên lớn (Trần Sáng Tạo, 2012) Như vậy, lợn bị tiêu chảy Rotavirus, ruột non có tổn thương nghiêm trọng, đặc biệt lớp lông nhung ảnh hưởng đến khả hấp thu chất dinh dưỡng, hậu dẫn đến tượng cịi cọc, chậm lớn chí gây tử vong Quan sát kính hiển vi, chúng tơi cịn nhận thấy thâm nhiễm tế bào viêm vị trí ruột Chúng bắt gặp tượng hoại tử tế bào, nhiều phần khơng tràng (71,4%) Ngồi cịn có tượng tăng sinh tế bào lympho đoạn ruột non (71,4 - 100%) Bên cạnh nghiên cứu biến đổi vi thể ruột chúng tơi nghiên cứu 14 mẫu quan hạch ruột, gan, phổi, thận Kết ghi lại bảng Bảng Tổn thương vi thể số quan khác lợn tiêu chảy Rotavirus Tổn thương vi thể (n = 14) TT Cơ quan Sung huyết Xuất huyết Hoại tử tế bào Thối hóa tế bào n (+) % n (+) % n (+) % n (+) Thâm nhiễm tế bào viêm % n (+) % Phổi 42,9 14,3 14,3 7,1 21,4 Hạch ruột 10 71,4 21,4 7,1 21,4 35,7 Gan 42,9 21,4 7,1 14,3 28,6 Thận 35,7 28,6 14,3 7,1 14,3 Ghi chú: n: số mẫu nghiên cứu, n (+): số mẫu dương tính Qua bảng 5, thấy tổn thương vi thể hạch ruột, gan, thận, phổi sau: - Hạch ruột ruột, quan chịu tác động tương đối sớm bị ảnh hưởng lớn nhất, bên cạnh hạch cịn tham gia vào q trình đáp ứng miễn dịch nên biến đổi bệnh lý hạch ruột thường bị sớm Do mà hạch ruột có q trình biến đổi bệnh lý trầm trọng hơn, 28 tượng sung huyết (71,4%), thối hóa tế bào thâm nhiễm tế bào viêm (chiếm 21,435,7%) - Gan: tổn thương tập trung vào thối hóa tế bào thâm nhiễm tế bào viêm, tượng thâm nhiễm tế bào viêm chiếm 28,6%, chủ yếu tế bào dạng lympho, tổ chức bào, đại thực bào thoái hóa tế bào chiếm 14,3% KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Hình Niêm mạc ruột mỏng, lơng nhung ngắn dính lại với nhau, HE, 100x Hình 10 Phổi sung huyết thâm nhiễm tế bào viêm, HE, 200x - Phổi: sung huyết chiếm 42,9%, thâm nhiễm tế bào viêm chiếm 21,4% - Thận: khác với gan, thâm nhiễm tế bào viêm chiếm 14,3% Ở kẽ thận cịn có biến đổi xuất huyết chiếm 28,6%, mạch quản bị tổn thương nên gây tượng sung huyết chiếm 35,7%, vi trường thấy mạch quản giãn rộng, lòng mạch quản chứa hồng cầu IV KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu đạt được, rút số kết luận sau: Đã phát 16 mẫu/103 mẫu lợn dương tính với Rotavirus, chiếm tỷ lệ 15,53% Trong 14 mẫu dương tính với Rotavirus mà không đồng nhiễm tác nhân gây bệnh khác thực đánh giá mức độ thương tổn bệnh lý Triệu chứng lâm sàng lợn tiêu chảy Hình Ruột, số lơng nhung bị hoại tử phần đỉnh, HE, 400x Hình 11 Gan sung huyết, số vùng có thâm nhiễm nhẹ tế bào lympho, HE, 200x Rotavirus tập trung hệ tiêu hóa, nặng biểu tiêu chảy chiếm 100%; phân vàng trắng có lẫn cặn sữa, có bọt khí chiếm 84% tổng số theo dõi Ngoài lợn mắc bệnh cịn biểu ủ rũ, mệt mỏi, lười vận đợng, uống nhiều nước, bỏ ăn, giảm ăn, lợn hốc hác gầy còm Tổn thương đại thể lợn tiêu chảy Rotavirus chủ yếu xảy ruột non, thành ruột mỏng, căng ra, ruột chứa cặn sữa không tiêu (90-100%) Tổn thương vi thể lợn tiêu chảy Rotavirus chủ yếu xảy đỉnh lông nhung làm lông nhung cùn, teo dần làm giảm khả tiêu hóa, hấp thu chất dinh dưỡng lợn Trên đoạn ruột non, tổn thương vi thể nặng đoạn tá tràng không tràng với biểu sung huyết, thâm nhiễm tế bào viêm lơng nhung bị ăn mịn hầu hết mẫu nghiên cứu 29 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 TÀI LIỆU THAM KHẢO Buller CR, Moxley RA., 1988 Natural infection of porcine ileal dome M cells with rotavirus and enteric adenovirus Vet Pathol 25:516-517 Collins JE, Benfield DA, Duimstra JR., 1989 Comparative virulence of two porcine groupA rotavirus isolates in gnotobiotic pigs Am J Vet Res 50:827-835 Collins P.J., Martella V., Buonavoglia C., O’Shea H., 2010 Identification of a G2like porcine rotavirus bearing a novel VP4 type, P[32] Veterinary Research;41(5):73 Johannsen U.,1976 Pathology and pathogenesis of coli dysentery and coli diarrhea in suckling piglets, Studies on the experimental induction of disease through the intragastric administration of coli-enterotoxin, Arch Exp Veterinarmed, 30(5), 709-25 Kapikian AZ, Hoshino Y, Chanock RA., 2001 Rotaviruses, In Fields Virology DM Kinipe, PM Howley, eds, Philadelphia: Lippincott-Raven and Wilkins Publishers, pp 1787–1834 Nguyễn Tất Tồn, Nguyễn Đình Qt, Trịnh Thị Thanh Huyền, Đỗ Tiến Duy, Trần Thị Dân, Nguyễn Thị Phước Ninh Nguyễn Thị Thu, 2012 Phát virus gây tiêu chảy cấp (PED) heo tỉnh miền Đông Nam Bộ Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y pp 26-30 Tuan Anh Nguyen, Pattara Khamrin, Quang Duy Trinh, Tung Gia Phan, Le Duc Pham, Le Phuc Hoang, Kim Trong Hoang, Fumihiro Yagyu, Shoko Okitsu, Hiroshi Ushijima, 2007 Sequence analysis of Viet Namese P[6] rotavirus strains suggests evidence of interspecies transmission J Medical Virology Vol 79.86-98 30 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương, 2001 Giáo trình vi sinh vật thú y Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội Martel-Paradis O., Laurin M.-A., Martella V., Sohal J.S., L’Homme Y, 2013 Fulllength genome analysis of G2, G9 and G11 porcine group A rotaviruses. Veterinary Microbiology. 62:94–102 10 Lâm Thị Thu Hương Đường Chi Mai, 2011 Tỷ lệ nhiễm Rotavirus Escherichia coli K88 heo tiêu chảy Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y Tập XVIII - số 6, trang 15-26 11 Pham Hong Anh, Juan J Carrique-Mas, Nguyen Van Cuong, Ngo Thi Hoa, Nguyet Lam Anh, Do Tien Duy, Vo Be Hien, Phan Vu Tra My, Maia A Rabaa, Jeremy Farrar, Stephen Baker and Juliet E Bryant, 2014 The prevalence and genetic diversity of group A rotaviruses on pig farms in the Mekong Delta region of Viet Nam Vet Microbiol 170(3-4): 258–265 12 Theil KW, Bohl EH, Cross RF, Kohler EM, Agnes AG., 1978 Pathogenesis of porcine rotaviral infection in experimentally inoculated gnotobiotic pigs Am J Vet Res 39:213-220 13 Trần Sáng Tạo, 2012 Giáo trình sinh lý động vật, Nhà xuất Đại học Huế 14 Ward LA, Rosen BI, Yuan L, Saif LJ., 1996 Pathogenesis of an attenuated and a virulent strain of group A human rotavirus in neonatal gnotobiotic pigs J Gen Virol 77:1431-1441 Ngày nhận 24-12-2018 Ngày phản biện 15-2-2019 Ngày đăng 1-5-2019 ... liên quan đến tiêu chảy lợn Rotavirus gây Mục tiêu nghiên cứu tìm hiểu đặc điểm bệnh lý lợn tiêu chảy Rotavirus nhằm đánh giá thương tổn bệnh Rotavirus lợn mức độ đại 22 thể vi thể, từ cung cấp thơng... nhân lợn bị bệnh giảm hấp thu tiêu hóa II NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu - Xác định số đặc điểm triệu chứng lợn tiêu chảy Rotavirus - Bệnh tích đại thể lợn. .. sánh với bệnh khác gây tiêu chảy lợn con: Theo bảng so sánh bệnh gây tiêu chảy lợn virus PED, TGE Rotavirus có triệu chứng, bệnh tích giống nên thực tế lâm sàng dễ dàng chẩn đoán nhầm bệnh với