1. Trang chủ
  2. » Nông - Lâm - Ngư

Phân lập thành phần hóa học hướng tác dụng chống oxi hóa trong lá cây Lá đắng (Vernonia amygdalina Delile, Asteraceae)

8 63 0

Đang tải... (xem toàn văn)

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 8
Dung lượng 1,12 MB

Nội dung

3kg Lá đắng (Vernonia amygdalina Del.) được chiết xuất với cồn 96% sau đó lắc phân bố thu được 3 phân đoạn: PE, CHCl3 và EtOAc. Chi Vernonia, có khoảng 1.000 loài, được tìm thấy chủ yếu ở vùng nhiệt đới, trong đó Vernonia amygdalina Delile là loài được sử dụng nhiều nhất, với đặc tính dễ thích nghi và phát triển nhanh.

44 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số Phân lập thành phần hóa học hướng tác dụng chống oxi hóa Lá đắng (Vernonia amygdalina Delile, Asteraceae) Bùi Hoàng Minh*, Dương Thị Ngọc Huyền, Nguyễn Thị Mơ, Trịnh Công Thái Khoa Dược, Đại Học Nguyễn Tất Thành * bhminh@ntt.edu.vn Tóm tắt 3kg Lá đắng (Vernonia amygdalina Del.) chiết xuất với cồn 96% sau lắc phân bố thu phân đoạn: PE, CHCl3 EtOAc; thơng qua sàng lọc khả chống oxi hóa (Folin-Ciocalteu thử nghiệm DPPH), phân đoạn EtOAc lựa chọn làm đối tượng nghiên cứu 20g phân đoạn EtOAc thông qua kĩ thuật sắc kí, tinh chế phân lập xác định cấu trúc chất V1 (300mg – Cynarosid) , V2 (30mg – Luteolin) V3 (41,3mg Cosmosiin) Cả chất phân lập có khả chống oxi hóa tốt mơ hình DPPH Trong V1 V2 có tác dụng dọn gốc tự DPPH mạnh chứng dương Rutin (IC50 = 9,47µM) với IC50 ln lt l 5,8àM v 4,8àM đ 2020 Journal of Science and Technology - NTTU Đặt vấn đề Chi Vernonia, có khoảng 1.000 lồi, tìm thấy chủ yếu vùng nhiệt đới, Vernonia amygdalina Delile lồi sử dụng nhiều nhất, với đặc tính dễ thích nghi phát triển nhanh Có nhiều cơng trình nghiên cứu chứng minh tác dụng dược lí có giá trị V amygdalina trị sốt rét, giúp hạ đường huyết đặc biệt chống oxi hóa, bảo vệ gan giải độc tế bào[1,4] Điều đáng mừng thời gian gần đây, V amygdalina trồng thích ứng tốt với điều kiện thổ nhưỡng nước ta biết đến với tên gọi Lá đắng - với nhiều tác dụng chữa bệnh dễ dàng sử dụng cách uống trà Mặc dù có nhiều nghiên cứu V amygdalina giới Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu định hướng phân lập thành phần hóa học có khả chống oxi hóa lồi Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu Lá Lá đắng thu hái thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 01/2019 Mẫu dược liệu định danh thông qua khảo sát thực vật học so sánh với tài liệu chuyên ngành Bộ môn Dược liệu, Khoa Dược, ĐH Nguyễn Tất Thành Mẫu sấy khơ sau xay nhỏ thành bột có kích cỡ phù hợp với thí nghiệm Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận 05.01.2020 Được duyệt 04.03.2020 Công bố 30.03.2020 Từ khóa Vernonia amygdalina, Folin-Ciocalteu, DPPH, Cynarosid, Luteolin, Cosmosiin 2.2 Phương pháp nghiên cứu Chiết xuất phân lập - Chiết xuất Dược liệu ngấm kiệt với cồn 96% sau thu hồi cao cồn Sau đó, cao cồn phân tán MeOH 20% lắc phân bố với ether dầu hỏa (PE), chloroform (CHCl3), ethyl acetat (EtOAc) cô áp suất giảm, thu cao phân đoạn tương ứng Các phân đoạn đánh giá tác dụng chống oxi hóa thơng qua thử nghiệm Folin-Ciocalteu qt gốc tự DPPH - Đánh giá tác dụng sinh học + Thử nghiệm Folin Ciocalteu Nguyên tắc chung dựa khử tungstate/molybdate thuốc thử Folin - Ciocalteu hợp chất phenol môi trường kiềm tạo sản phẩm có màu xanh dương Đo độ hấp thu bước sóng cực đại sản phẩm thu Cường độ màu tỉ lệ với nồng độ polyphenol bị oxi hóa, từ xác định hàm lượng polyphenol có mẫu Hàm lượng polyphenol mẫu qui mg acid gallic/g[6] + Mơ hình quét gốc tự DPPH DPPH gốc tự có màu tím cho hấp thu cực đại bước sóng 517nm Dưới tác động chất chống oxi hóa, DPPH chuyển sang màu vàng Việc xác định vết vàng mỏng nhúng với thuốc thử DPPH đo độ hấp thu bước sóng 517nm giúp xác định hoạt tính chống oxi hóa mẫu thử Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số Đồng thời, mẫu thử pha thành giai mẫu với nồng độ khác nhau, từ xây dựng đường tuyến tính y = ax + b để xác định giá trị IC50[3] - Phân lập Sử dụng kĩ thuật sắc kí cột (quá tải, cổ điển,…) kết tinh phân đoạn dung mơi thích hợp để thu chất tinh khiết Xác định cấu trúc Dựa vào liệu phổ NMR đo với kĩ thuật 1-D, 2-D (1H-, 13C-, DEPT, HSQC, HMBC, COSY) Mẫu hịa tan dung mơi thích hợp MeOD, DMSO với chất chuẩn nội TMS; thực máy ADVANCE 500 (Bruker) phịng cấu trúc, Viện Hóa học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, số 18 Hồng Quốc Việt, Hà Nội Độ dời hóa học tính theo thang δ (ppm) với δTMS = 0,00 45 Bảng Kết đương lượng acid galic phân đoạn Đương lượng acid gallic mg/g Cồn 231,25 PE 181,25 CHCl3 259,375 EtOAc 314,065 Nhận xét: qua thử nghiệm, phân đoạn EtOAc cho hàm lượng polyphenol cao -Mơ hình DPPH STT Mẫu cao Kết bàn luận 3.1 Khảo sát sơ thành phần hóa thực vật Kết khảo sát sơ hóa thực vật (Bảng 1) cho thấy, Lá đắng (Vernonia amygdalina Del.) có nhiều alkaloid, caroten, saponin; ngồi cịn có polyphenol, triterpen có flavonoid Bảng Kết khảo sát hóa thực vật Lá đắng Nhóm Dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết hợp chất ether cồn 96% nước Caroteen ++ Alkaloid ++ ++ Triterpen +/++ Polyphenol + Flavonoid +/Saponin ++ ++ Ghi chú: (-) Âm tính, (+/-) Nghi ngờ, (+) Có ít, (++) Có nhiều, (+++) Có nhiều 3.2 Nghiên cứu hóa học hướng tác dụng chống oxi hóa Chiết xuất Từ 3kg khô, thông qua kĩ thuật ngấm kiệt lắc phân bố với dung môi có độ phân cực tăng dần, thu phân đoạn có độ phân cực khác Kết thu 30g phân đoạn PE, 15g phân đoạn CHCl3 20g phân đoạn EtOAc Từ phân đoạn thu được, tiến hành đánh giá hàm lượng polyphenol toàn phần hoạt tính chống oxi hóa mơ hình DPPH để lựa chọn đối tượng nghiên cứu Đánh giá phân đoạn hướng chống oxi hóa - Định lượng polyphenol toàn phần Dựa vào đường chuẩn thiết lập với chứng dương acid gallic, kết đương lượng acid gallic tương ứng với mẫu cao trình bày Bảng Hình Kết hoạt tính chống oxi hóa mơ hình DPPH phân đoạn Nhận xét: có phân đoạn EtOAc có hoạt tính chống oxi hóa bảng mỏng nồng độ thử nghiệm 1000µg/ml 500µg/ml Kết luận: qua thử nghiệm trên, phân đoạn EtOAc (20g) lựa chọn làm đối tượng nghiên cứu đề tài hướng phân lập hoạt chất có hoạt tính chống oxi hóa 3.3 Phân lập 3.3.1 Phân đoạn EtOAc Phân đoạn EtOAc (20g) phân tách thành phân đoạn đơn giản kĩ thuật sắc kí cột tải với thông số sau: - Cột thủy tinh trung tính, thành dày, kích thước cột 8cm x 50cm, rửa sạch, sấy khô - Pha tĩnh: 200g Silica gel, cỡ hạt trung bình (40 - 63μm) - Nhồi cột khơ, có bơm hút chân khơng cho ổn định, - Mẫu: 20g phân đoạn EtOAc, nạp mẫu khô - Pha động: Chạy gradient với dung môi n-Hex, tăng dần tỉ lệ n-Hex-CHCl3 đến 1:9 tăng đến 100% CHCl3 ; sau dùng hệ CHCl3-MeOH, tăng dần tỉ lệ MeOH, cuối 100% MeOH Kết quả: Từ 20g cao phân đoạn EtOAc, sắc kí cột tải thu phân đoạn khác Tiếp tục để bay tự nhiên có phân đoạn có tủa kết tinh màu vàng nâu, phân đoạn khác dạng dầu dạng rắn Các phân đoạn đánh giá hoạt tính chống oxi hóa mỏng với DPPH để định hướng phân đoạn phân tách Đánh giá hoạt tính chống oxi hóa phân đoạn từ phân đoạn EtOAc: Đại học Nguyễn Tất Thành 46 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số Hình Kết đánh giá hoạt tính chống oxi hóa phân đoạn từ cột sắc kí phân đoạn EtOAc Nhận xét: Phần lớn phân đoạn có hoạt tính chống oxi hóa tốt so với phân đoạn EtOAc Trong đó, phân đoạn có hoạt tính chống oxi hóa tốt nhất, cho khả dọn gốc tự mỏng nồng độ thấp thử nghiệm 62,5µg/ml Ngồi ra, phân đoạn 3, 5, có khả chống oxi hóa tốt 3.3.2 Phân đoạn Từ 256,8mg kết tủa màu vàng nâu phân đoạn 5, sau tinh chế qua cột Sephadex LH-20 kết hợp với kết tinh phân đoạn với MeOH, thu 30mg bột vi tinh thể V2 màu vàng tươi 3.3.3 Phân đoạn Phân đoạn (2,2g) phân tách thành phân đoạn đơn giản kĩ thuật sắc kí cột cổ điển với thơng số sau: -Cột thủy tinh trung tính, thành dày, kích thước cột 3cm x 60cm, rửa sạch, sấy khô; -Pha tĩnh: 120g Silica gel, cỡ hạt mịn (15-40μm); -Nhồi cột hỗn dịch; -Mẫu: 2,2g phân đoạn 8, nạp mẫu khô; -Pha động: Chạy isocratic với dung môi EtOAc bão hòa nước Kết quả: Từ 2,2g phân đoạn 8, sắc kí cột cổ điển thu phân đoạn khác (8.18.9) Từ phân đoạn 8.2, sau tinh chế qua cột Sephadex LH-20 kết hợp với kết tinh phân đoạn với MeOH, thu 41,3mg bột vi tinh thể V3 màu vàng tươi 3.3.4 Phân đoạn Từ 510,5mg kết tủa màu vàng thu từ phân đoạn 9, sau rửa nhiều lần với n-hexan, EtOAC, MeOH lạnh phễu thủy tinh xốp tái kết tinh MeOH thu 300mg bột vi tinh thể V1 màu vàng xanh 3.4 Xác định cấu trúc chất phân lập 3.4.1 Chất V1 V1 (300mg) thu dạng bột vi tinh thể màu vàng xanh, tan MeOH, khó tan EtOAc, không tan n-Hexan, CHCl3 V1 tắt quang UV 254nm, 365nm, phản ứng với thuốc thử FeCl3, vết cho màu vàng phun thuốc thử Vanilin – sulfuric Đại học Nguyễn Tất Thành Bảng Bảng liệu phổ NMR V1 H + HSQC HMBC (nH, δppm, J) (H  Cn ) CIV 181,9 C 164,5 IV CIV 162,9 CIV 161,1 CIV 156,9 CIV 149,9 4’ CIV 145,8 3’ CIV 121,4 1’ 7,44 dd (1H; =CH119,1 113,5; 149,9 6’ 7,5Hz, 2,0Hz) 6,91 d 121,4; 145,8; =CH115,9 5’ (1H; 8,5Hz) 149,9 119,1; 145,8; =CH113,5 7,41 s (1H) 2’ 164,5 CIV 105,3 10 105,3; 121,4; =CH103,2 6,73 s (1H) 164,5; 181,9 5,07 d 99,9 162,9 1’’ O-CH-O (1H; 7,5Hz) 6,44 d 94,7; 105,3; =CH99,5 (1H; 2,0Hz) 161,1; 162,9 99,5; 105,3; 6,78 d =CH94,7 156,9; 162,9; (1H; 2,0Hz) 181,9 77,2 5’’ =CH76,4 3’’ =CH=CH73,1 2’’ 69,6 4’’ =CH60,6 6’’ -CH2-O - OH 12,97 s (1H) Trên phổ 13 C NMR xuất 21 tín hiệu Carbon, có 15 tín hiệu Carbon cộng hưởng vùng từ trường thấp (δC 99,5-181,9) đặc trưng cho flavon với nhóm OR tín hiệu Carbon cịn lại cộng hưởng vùng δC 60,6 – 94,7 đặc trưng đường hexose Trong vùng 60 C DEPT 13 C δppm) Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 47 - 80ppm có cộng hưởng carbon (77,2ppm; 76,4ppm; 73,1ppm; 69,6ppm; 60,6ppm), đồng thời có tín hiệu carbon δC 99,9 carbon anomer nên O-glycosid Cấu trúc flavon V1 xác nhận chuyển dịch hóa học carbon carbonyl với δC 181,9 diện carbon =CH- gán cho C3 với δC 103,2 δH 6,73 (1H, s) Trong nhóm oxi V1, nhóm dành cho C5 C7 - vị trí thường gặp flavonoid; nhóm cịn lại vịng B cho vị trí C3‟ C4‟ Sự diện nhóm oxi C3‟ C4‟ cịn chứng minh khơng có tín hiệu carbon đối xứng phổ 13C NMR V1, lại có proton carbon thơm =CH- [δC 115,9 , δH 6,91 (1H, d)]; δC 119,1 , δH 7,44 (1H, dd)] có J= 7,5 Hz ghép ortho proton thơm =CH- [δC 119,1, δH 7,44 (1H, dd); δC 113,5, δH 7,41 (1H, s)] có J = Hz đặc trưng cho ghép meta proton thơm Hằng số ghép lại khoảng 2Hz đặc trưng cho ghép meta thuộc proton C6 [δC 99,5, δH 6,44 (1H, d)] C8 [δC 94,7, δH 6,78 (1H, d)] Như phần aglycon V1 xác định luteolin Vị trí gắn phần đường vào aglycon xác định C7 dựa vào tương tác quan sát phổ HMBC proton anomer [δC 5,07 (1H; 7,5 Hz)] carbon aglycon (δC 162,9) thông qua so sánh với giá trị tương ứng chất công bố, phần đường V1 xác định glucose (Bảng 4) Như vậy, cấu trúc V1 xác định luteolin-7-O-β-glucopyranosid (cynarosid) CTPT: C21H20O11 (PTK: 448 đvC) Hình Cấu trúc hóa học tương tác hóa học V1 Cấu trúc khẳng định so sánh với phổ 13C NMR 1H NMR với Cynarosid công bố trước đây[7], kết so sánh trình bày Bảng Bảng Bảng so sánh liệu phổ NMR V1 Cynarosid STT 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 1’’ 2’’ V1 (500 MHz, DMSO-d6) C H δppm) δppm) 164,5 103,2 6,73 s (1H) 181,9 161,1 99,5 6,44 d (1H; Hz) 162,9 94,7 6,78 d (1H; 2Hz) 156,9 105,3 121,4 113,5 7,41 s (1H) 145,8 149,9 115,9 6,91 d (1H; 8,5 Hz) 119,1 7,44 dd (1H; 7,5 Hz; Hz) 99,9 5,07 d (1H, 2Hz) 73,1 13 Cynarosid (300 MHz, DMSO-d6) 13 C H δppm) δppm) 164,4 103,1 6,74 s (1H) 181,8 161,1 99,5 6,44 d (1H; 2,1 Hz) 162,9 94,7 6,78 d (1H; 2,1 Hz) 156,9 105,3 121,3 113,5 7,42 d (1H; 1,8 Hz) 145,7 149,9 115,9 6,90 d (1H; 8,1 Hz) 119,1 7,44 dd (2H; 8,1Hz; 1,8 Hz) 99,9 5,08 d (1H; 7,2 Hz) 73,1 Đại học Nguyễn Tất Thành 48 Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ 76,4 69,6 77,1 60,9 - 76,3 69,5 77,1 60,6 - 3.4.2 Chất V2 V2 (30mg) thu dạng bột vi tinh thể màu vàng tươi, tan tốt MeOH, tan EtOAc, không tan nHexan V2 tắt quang UV 254nm, 365nm, cho màu xanh đen với thuốc thử FeCl3, vết cho màu vàng nhúng thuốc thử VS Bảng Bảng số liệu phổ NMR V2 13 C DEPT C δppm) H + HSQC (nH, δppm, J) HMBC (H  Cn ) CIV 181,6 CIV 164,1 CIV 163,8 CIV 161,4 CIV 157,2 CIV 149,7 CIV 145,7 CIV 121,4 =CH118,9 7,39 dd (1H; 7,5 Hz) 113,3; 149,7; 163,8 =CH115,9 6,89 d (1H; 8,5 Hz) 121,4; 145,7; 149,7 =CH113,3 7,42 d (1H; Hz) 118,9; 145,7; 149,7; 163,8 CIV 103,6 =CH102,8 6,65 s (1H) 103,6; 121,4; 163,8; 181,6 =CH98,8 6,19 d (1H; Hz) 93,8; 103,6 =CH93,8 6,44 d (1H; Hz) 98,8; 103,6; 157,2; 164,1 - OH 12,96 s (1H) 13 Trên phổ C NMR xuất 15 tín hiệu carbon đặc trưng khơng có tín hiệu carbon đối xứng phổ 13 cho flavonoid với nhóm -OR Cấu trúc flavon C NMR V2, lại có proton carbon V2 xác nhận chuyển dịch hóa học carbon thơm =CH- [δC 115,9, δH 6,89 (1H, d)]; δC 118,9, δH 7,39 carbonyl với δC 181,6 diện carbon =CH(1H, dd)] có J= 7,5Hz ghép ortho proton thơm gán cho C3 với δC 102,8 δH 6,65 (1H, s) thông qua =CH- [δC 118,9, δH 7,39 (1H, dd); δC 113,3, δH 7,42 (1H, tương tác quan sát thấy phổ HMBC H3 nhìn thấy d] có J = 2,0Hz đặc trưng cho ghép meta proton C4 Trong nhóm oxi V2, nhóm dành cho C5 thơm Hằng số ghép lại khoảng 2,0Hz đặc trưng cho C7 - vị trí thường gặp flavonoid; nhóm cịn lại ghép meta thuộc proton C6 [δC 98,8, δH 6,19 (1H, vòng B cho vị trí C3‟ C4‟ Sự d)] C8 [δC 93,8, δH 6,44 (1H, d)] Như V2 xác diện nhóm oxi C3‟ C4‟ chứng minh định luteolin 4’ 3’ 1’ 6’ 5’ 2’ 10 CTPT: C15H10O6 (PTK: 286,32 đvC) Hình Cấu trúc hóa học tương tác phổ HMBC V2 Cấu trúc khẳng định so sánh với phổ 13C NMR 1H NMR Luteolin công bố trước đây[2], kết so sánh trình bày Bảng Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 49 Bảng Bảng so sánh liệu NMR V2 Luteolin 13 STT C δppm) 163,3 102,8 181,6 161,4 98,8 164,1 93,8 157,2 103,6 121,4 113,3 145,7 149,7 115,9 118,9 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 5- OH V2 (500 MHz, DMSO-d6) H δppm) 6,65 s (1H) 6,19 d (1H; 2Hz) 6,44 d (1H; 2Hz) 7,42 d (1H; 2Hz) 6,89 d (1H; 8,5Hz) 7,39 dd (1H; 7,5Hz) 12,96 s (1H) Kết so sánh phổ đồ V2 Luteolin gần trùng khớp nên khẳng định biện giải cấu trúc V2 3.4.3 Chất V3 V3 (41,3mg) thu dạng bột vi tinh thể màu vàng tươi, tan tốt MeOH, tan EtOAc, không tan n-Hexan V3 tắt quang UV 254nm, 365nm, cho màu xanh đen với thuốc thử FeCl3, vết cho màu vàng nhúng thuốc thử VS Bảng Bảng số liệu phổ NMR V3 13 C DEPT CIV C δppm) 182,0 H + HSQC (nH, δppm, J) - HMBC (H  Cn ) - 4’ 3’, 5’ 2’, 6’ 1’ 10 CIV CIV CIV CIV CIV 164,2 162,9 161,1 156,9 161.3 =CH- 116,0 =CH- 128,6 CIV CIV 121,0 105,3 6,94 d (2H, 9,0Hz) 7,95 d (2H, 9,0Hz) - 161,3; 128,6; 121,0; 116,0 164,2; 161,3; 128,6; 116,0 182,0; 164,2; 121,0; 105,3 =CH- 103,1 6,86 s (1H) 1’’ OCH-O 99,9 =CH- 99,5 5,07 (1H; 7,5Hz) 6,44 d (1H; 2,0 Hz) 162,9 162,9; 161,1; 121,0; 105,3 Luteolin (500 MHz, DMSO-d6)] C H δppm) δppm) 163,6 102,7 6,68 s (1H) 181,2 160,7 98,6 6,21 d (1H; 2Hz) 163,6 93,8 6,47 d (1H; 2Hz) 157,0 103,4 121,3 112,9 7,40 d (1H; 2Hz) 145,2 149,1 115,7 6,90 d (1H; 9,0Hz) 118,8 7,41 dd (1H; 9,2Hz) 12,93 s (1H) 13 77,1 76,4 73,1 69,6 6,83 d (1H; 2,5Hz) - 162,9; 156,9; 105,3; 99,5 - 60,6 - - =CH- 94,8 5’’ 3’’ 2’’ 4’’ =CH=CH=CH=CH-CH2O 6’’ 161,3; 105,3; 99,5 -OH 10,37 s (1H) 13 Trên phổ Carbon C-NMR xuất 21 tín hiệu carbon (2 tín hiệu đối xứng), có 15 tín hiệu carbon đặc trưng cho cấu trúc flavonoid với nhóm -OR, tín hiệu carbon cịn lại đặc trưng cho đường hexose Trong vùng 60-80ppm xuất tín hiệu carbon δC 77,1; 76,4; 73,1; 69,5; 60,6 tín hiệu carbon anome δC 99,9 nên O-glycosid Cấu trúc flavon V3 xác định dựa vào tín hiệu carbon carbonyl δC 182,0 với diện carbon =CH- gán cho C3 δc 103,1 δH 6,86 (1H, s) Ngoài ra, phổ 13C-NMR cịn cho tín hiệu cao bất thường δC 116,0 δC 128,6 đặc trưng cho cấu trúc vòng B đối xứng nhóm vị trí C4‟ Trong nhóm oxi, nhóm gán cho C5 C7 – vị trí thường gặp flavonoid, nhóm cịn lại gán cho vịng B vị trí C4‟ Hằng số ghép cịn lại với J = đặc trưng cho ghép meta thuộc proton C6 [δC 99,5, δH 6,44 (1H, d, 2,0Hz)] C8 [ δc 94,8, δH 6,83 (1H, d, 2,5Hz)] Vị trí gắn phần đường vào aglycon xác định C7 dựa vào tương tác quan sát - OH 12,97 s (1H) Đại học Nguyễn Tất Thành 50 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số phổ HMBC proton anomer [δC 5,06 (1H; d; 7,5Hz)] carbon aglycon δC 162,9 thông qua so sánh với giá trị tương ứng chất công bố, phần đường V1 xác định glucose Như vậy, cấu trúc V3 xác định Apigenin-7-O-β-Dglucose (Cosmosiin) CTPT: C21H20O10 (PTK: 432,38) Hình Cấu trúc số tương tác phổ V3 Cấu trúc khẳng định so sánh với phổ 13C NMR Cosmosiin công bố trước đây[5] Kết trình bày Bảng Bảng Kết so sánh liệu phổ NMR V3 Cosmosiin STT 10 V3 (125 MHz, DMSOd6) 13 C δppm) 164,2 103,1 182,0 161,1 99,5 162,9 94,8 156,9 105,3 Cosmosiin (DMSO-d6) 13 C δppm) 164,2 103,0 181,7 161,5 99,4 162,8 94,9 156,8 105,4 3.5 Xác định hoạt tính chống oxi hóa chất phân lập được: Thực nghiệm tiến hành phương pháp đo quang, với chứng dương Rutin Kết thể qua Bảng 10 Bảng 10 Giá trị IC50 (mM) mơ hình DPPH chất thử nghiệm Mẫu thử V1 V2 V3 Rutin IC50 (µg/ml 2,6 1,38 17,8 5,78 IC50 (µM) 5,8 4,8 41,2 9,47 Nhận xét: V2 cho khả dọn gốc tự tốt cho giá trị IC50 ½ so với Rutin, V V3 cho khả chống oxi hóa so với chất lại Đại học Nguyễn Tất Thành STT 1‟ 2‟; 6‟ 3‟; 5‟ 4‟ 1‟‟ 2‟‟ 3‟‟ 4‟‟ 5‟‟ 6‟‟ V3 (125 MHz, DMSOd6) 13 C δppm) 121,0 128,6 116,0 161,3 99,9 73,1 76,4 69,5 77,1 60,6 Cosmosiin (DMSOd6) 13 C δppm) 120,9 128,3 115,9 161,0 100,1 73,1 76,5 69,9 77,2 60,8 Kết luận kiến nghị 4.1 Kết luận Như vậy, đề tài “Phân lập thành phần hóa học hướng tác dụng chống oxi hóa Lá đắng (Vernonia amygdalina Delile, Asteraceae) thu kết sau: + Sơ thành phần hóa thực vật lá đắng (Vernonia amygdalina Delile, Asteraceae) cho kết diện nhóm hoạt chất: alkaloid, saponin, polyphenol, triterpen flavonoid + Sàng lọc hoạt tính chống oxi hóa phân đoạn phương pháp Folin-Ciocalteu thử nghiệm DPPH Kết cho thấy phân đoạn EtOAc phân đoạn tiềm phân lập chất có khả chống oxi hóa + Từ phân đoạn EtOAc, thơng qua kĩ thuật sắc kí cột, phân tách thành phân đoạn đơn giản Trong có phân đoạn  có hoạt tính chống oxi hóa, đặc biệt Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số + Thông qua kĩ thuật kết tinh phân đoạn kết hợp sắc kí cột Sephadex LH-20, phân lập định danh 300mg V1 (Cynarosid) 30 mg V (Luteolin) từ phân đoạn + Bên cạnh đó, đề tài tiến hành phân tách phân đoạn phân lập 41,3mg V3, xác định cấu trúc Cosmosiin + Các chất phân lập đánh giá hoạt tính chống oxi hóa thơng qua việc xác định giá trị IC50 Kết cho thấy chất có hoạt tính chống oxi hóa tốt, đặc biệt V1 V2 có tác dụng dọn gốc tự DPPH mạnh 51 chứng dương Rutin (IC50 = 9,47µM) với IC50 5,8µM 4,8µM 4.2 Kiến nghị Đề tài tiếp tục tiến hành phân lập chất chống oxi hóa từ phân đoạn tiềm lại: 3, 4, khảo sát thêm mơ hình chống oxi hóa khác Lời cám ơn Nghiên cứu tài trợ Quĩ NTTU, theo hợp đồng số 2019.01.58, thuộc đề tài nghiên cứu khoa học phát triển công nghệ cấp sở năm học 2018-2019 Tài liệu tham khảo Arhoghro E M, Ekpo K E, Anosike E O, Ibeh G O, (2009), "Effect of aqueous extract of bitter leaf (Vernonia amygdalina Del.) on Carbon Tetrachloride (CCl4) onduced liver damage in Albino Wistar rats", European Journal of Scientific Research, 26 (1), pp 122-130 E.O Iwalewa, C.O Adewunmi, N.O.A Omisore, O.A Adebanji, et al, (2005), "Pro- and Antioxidant Effects and Cytoprotective Potentials of Nine Edible Vegetables in Southwest Nigeria", Journal of Medicinal Food, (4), pp 539-544 Kulisic T., Radonic A., Katalinic V and Milos M (2004), "Use of different methods for testing antioxidative activity of oregano essential oil", Food chemistry, 85 (4), pp 633-640 Mbang A Owolabi, Smith I Jaja, Oyenike O Oyekanmi, Opeyemi J Olatunji, (2008), "Evaluation of the Antioxidant Activity and Lipid Peroxidation of the Leaves of Vernonia amygdalina", Journal of Complementary and Integrative Medicine, (1) Nawwar M A., El-Mousallamy A M., Barakat H H., Buddrus J and Linscheid M (1989), “Flavonoid lactates from leaves of Marrubium vulgare”, Phytochemistry, 28 (11), pp 3201-3206 Singleton, V L., Orthofer, R., & Lamuela-Raventós, R M (1999), “Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of folin-ciocalteu reagent”, In Methods in enzymology, 299, pp 152-178 Wang M., Simon J.E., Aviles I.F., He K., et al, (2003), "Analysis of antioxidative phenolic compounds in artichoke (Cynara scolymus L.)", J Agric Food Chem, 51(3), pp 601-608 Bioassay-guided isolation of antioxidants from the leaves of Vernonia amygdalina delile, asteraceae Bui Hoang Minh*, Duong Thi Ngọc Huyen, Nguyen Thi Mo, Trinh Cong Thai Faculty of Pharmacy, Nguyen Tat Thanh University * bhminh@ntt.edu.vn Abstract 3kg air-dried leaves of Vernonia amygdalina was extracted with 96% ethanol to yield 517g extract, which succesively portioned with solvents to obtain 30 g PE, 15g CHCl3 and 20 g EtOAc Through bioassay-guided of antioxidant activity, EtOAc fraction was chosen to the next steps 20g EtOAc fraction was seperated by column chromatography and was purified by crystalization to obtain compounds: V1 (300mg), V2 (30 mg) and V3 (41,3mg) which were characterized as Cynarosid, Luteolin and Cosmosiin respectively All isolated compounds possessed antioxidant activity meanwhile V and V2 had the stronger antioxidant effect than standard (Rutin, IC50 = 9,47µM) with the IC50 = 5,8 µM and 4,8µM Keywords Vernonia amygdalina, Folin-Ciocalteu, DPPH, Cynarosid, Luteolin, Cosmosiin Đại học Nguyễn Tất Thành ... tài ? ?Phân lập thành phần hóa học hướng tác dụng chống oxi hóa Lá đắng (Vernonia amygdalina Delile, Asteraceae) thu kết sau: + Sơ thành phần hóa thực vật lá đắng (Vernonia amygdalina Delile, Asteraceae). .. tính chống oxi hóa phân đoạn từ cột sắc kí phân đoạn EtOAc Nhận xét: Phần lớn phân đoạn có hoạt tính chống oxi hóa tốt so với phân đoạn EtOAc Trong đó, phân đoạn có hoạt tính chống oxi hóa tốt... chọn làm đối tượng nghiên cứu đề tài hướng phân lập hoạt chất có hoạt tính chống oxi hóa 3.3 Phân lập 3.3.1 Phân đoạn EtOAc Phân đoạn EtOAc (20g) phân tách thành phân đoạn đơn giản kĩ thuật sắc kí

Ngày đăng: 06/11/2020, 01:36

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN