Hóa sinh Phân lập các hợp chất chính có tác dụng chống oxi hóa trong lá chùm ngây (Moringa oleifera lam.)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN SALIHAH LỜI CÁM ƠN Luận văn hoàn thành, nhận nhiều giúp đỡ nhiều tập thể cá nhân Tôi xin gửi lời cám ơn chân thành đến: ∗ PGS TS Trần Công Luận, người thầy tận tình hướng dẫn, định hướng, động viên, giúp đỡ suốt trình thực đề tài ∗ Tập thể thầy cô Bộ môn Sinh hóa trường Đại học Khoa học Tự PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT CHÍNH CÓ TÁC DỤNG CHỐNG OXI HÓA TRONG LÁ CHÙM NGÂY (MORINGA OLEIFERA LAM.) Nhiên TP HCM tận tình dạy dỗ, truyền đạt kiến thức tản quý báu cho ∗ Các thầy cô, anh chị bạn Trung tâm Sâm Dược liệu TP HCM giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi môi trường làm việc vui vẻ thời gian thực đề tài Chuyên ngành: Hóa Sinh Mã số: 60 42 30 ∗ Thầy Lương Văn Thanh, chị Lê Thị Thao, chị Thái Thị Cẩm Nguyệt anh chị, bạn bè đồng nghiệp trường THPH Thủ Thiêm động viên, hỗ trợ vật chất lẫn tinh thần, giúp đỡ suốt thời gian học Cao học ∗ Anh Văn Đức Thịnh bạn học viên lớp Hóa sinh K18 chia LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA SINH buồn vui, cổ vũ tinh thần cho lúc gặp khó khăn ∗ Cám ơn gia đình động lực cho phấn đấu bước đường Xin chân thành cảm ơn! Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Công Luận Salihah Tp Hồ Chí Minh, tháng 09 năm 2011 Tp HCM, tháng 09 năm 2011 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.18: Giá trị IC50 cao cồn tổng cao phân đoạn Bảng 3.19: Kết phân đoạn thu từ sắc ký nhanh – cột khô Bảng 1.1: Hàm lượng dinh dưỡng Chùm Ngây Moringa oleifera Lam Bảng 1.2: Các chất chống oxy hóa chế tác dụng Bảng 2.1: Quy trình dựng đường chuẩn acid gallic Bảng 2.2: Nồng độ cao phân đoạn đem định lượng Bảng 2.3: Thông số sắc ký cột cổ điển Bảng 2.4: Dãy nồng độ phân đoạn cao đem thử hoạt tính quét gốc tự DPPH Bảng 2.5: Quy trình thử hoạt tính quét gốc tự DPPH Bảng 2.6: Quy trình thử lực khử Bảng 2.7: Quy trình thử hoạt tính quét gốc hydroxyl tự Bảng 3.1: Kết giảm khối lượng sấy khô Bảng 3.2: Tỷ lệ cọng chét Bảng 3.3: Độ ẩm bột dược liệu Bảng 3.4: Độ tro toàn phần Bảng 3.5: Độ tro không tan HCl Bảng 3.6: Kết phân tích sơ hóa thực vật Chùm Ngây Bảng 3.7: Hiệu suất thu cao toàn phần từ Chùm Ngây Bảng 3.8: Kết thu cao phân đoạn phương pháp chiết lỏng – lỏng Bảng 3.9: Kết định tính hóa học cao phân đoạn Bảng 3.10: Mối tương quan hàm lượng acid gallic giá trị OD758nm Bảng 3.11: Hàm lượng phenolic tổng cao tổng cồn cao phân đoạn Bảng 3.12: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH cao cồn tổng Bảng 3.13: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH cao eter Bảng 3.14: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH cao cloroform Bảng 3.15: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH cao etyl acetat Bảng 3.16: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH cao nước Bảng 3.17: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH vitamin C Bảng 3.20: Các phân đoạn thu từ sắc ký cột cổ điển Bảng 3.21: Thông số phổ 1H (500 MHz, DMSO) 13C-NMR (125 MHz, DMSO) chất I đối chiếu với vitexin Bảng 3.22: Thông số phổ 1H (500 MHz, DMSO) 13C-NMR (125 MHz, DMSO) chất II đối chiếu với isoquercitrin Bảng 3.23: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH vitexin Bảng 3.24: Thông số thử hoạt tính quét gốc tự DPPH isoquercitrin Bảng 3.25: Giá trị IC50 khả quét gốc tự vitexin isoquercitrin Bảng 3.26: Năng lực khử vitexin isoquercitrin Bảng 3.27: Hoạt tính quét gốc hydroxyl tự vitexin isoquercitrin Bảng 3.28: Giá trị IC50 khả quét gốc hydroxyl tự vitexin isoquercitrin DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 3.23: Hoạt tính quét gốc tự DPPH vitexin Hình 1.1: Chùm Ngây Moringa oleifera Lam Hình 3.24: Hoạt tính quét gốc tự DPPH isoquercitrin Hình 2.1: Quy trình chiết xuất cao phân đoạn từ Chùm Ngây tươi Hình 3.25: Giá trị IC50 hoạt tính quét gốc tự DPPH vitexin Hình 3.1: Quy trình chiết cao cồn tổng thu cao phân đoạn từ Chùm Ngây isoquercitrin so với vitamin C Hình 3.2: Đường chuẩn acid gallic Hình 3.26: Năng lực khử vitexin, isoquercitrin vitamin C Hình 3.3: Sắc ký lớp mỏng cao tổng cao phân đoạn (hệ 1) Hình 3.27: Hoạt tính quét gốc hydroxyl tự vitexin isoquercitrin Hình 3.4: Sắc ký lớp mỏng cao tổng cao phân đoạn (hệ 2) Hình 3.28: Giá trị IC50 khả quét gốc hydroxyl tự Hình 3.5: Hoạt tính quét gốc tự DPPH cao cồn tổng Hình 3.6: Hoạt tính quét gốc tự DPPH cao eter Hình 3.7: Hoạt tính quét gốc tự DPPH cao cloroform Hình 3.8: Hoạt tính quét gốc tự DPPH cao etyl acetat Hình 3.9: Hoạt tính quét gốc tự DPPH cao nước Hình 3.10: Hoạt tính quét gốc tự DPPH vitamin C Hình 3.11: Giá trị IC50 hoạt tính quét gốc tự DPPH cao cồn tổng cao phân đoạn Hình 3.12: Sắc ký lớp mỏng phân đoạn etyl acetat hệ Hình 3.13: Sắc ký lớp mỏng phân đoạn C1, C2 từ sắc ký nhanh – cột khô (hệ 1) Hình 3.14: Sắc ký lớp mỏng phân đoạn E1, E2, E3, E4 từ sắc ký nhanh – cột khô, (hệ 1) Hình 3.15: Sắc ký lớp mỏng phân đoạn EM từ sắc ký nhanh – cột khô (hệ 1) Hình 3.16: Sắc ký lớp mỏng phân đoạn thu từ sắc ký cột cổ điển (hệ 1) Hình 3.17: Sắc ký lớp mỏng chất I (hệ 1) Hình 3.18: Sắc ký lớp mỏng chất I (hệ cloroform – metanol – nước 65 : 35 : 10, lớp dưới) Hình 3.19: Kết tinh hình kim màu vàng chất II Hình 3.20: Sắc ký lớp mỏng chất II (hệ 1) Hình 3.21: Sắc ký lớp mỏng chất II (hệ cloroform – metanol : 1) Hình 3.22: Công thức cấu tạo chất I chất II DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CHCl3: Cloroform DPPH: 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl MỞ ĐẦU Cuộc sống mang nhiều yếu tố bất lợi sức khỏe người, ngày người đối mặt với nhiều bệnh nguy hiểm Hầu EtOAc: Etyl acetat 90% nguyên nhân bệnh tật hay lão hóa sớm trực tiếp hay gián tiếp EtOH: Etanol gốc tự Các gốc tự tích lũy nhiều thể công mô, nội tạng GAE: Gallic acid equivalent – đương lượng acid gallic thể gây bệnh tật Các bệnh chứng tác động chất oxy hóa HTCO: Hoạt tính chống oxi hóa ngày nhiều: tiểu đường, xơ vữa động mạch, đục nhân mắt, cao huyết áp, ung MeOH: Metanol thư… Chất chống oxy hóa có khả ngăn chặn tổn hại trình oxy SKC: Sắc ký cột hóa gây gốc tự nên ngăn chặn xuất bệnh tật, lão hóa SKLM: Sắc ký lớp mỏng Do chất chống oxy hóa có vai trò quan trọng thiếu phác đồ điều trị liệu pháp dự phòng bệnh thoái hóa ác tính Vì thời gian gần đây, chất chống oxy hóa có nguồn gốc tự nhiên ngày thu hút nhiều quan tâm Bên cạnh đó, Chùm Ngây (Moringa oleifera Lam.) loài quan tâm hoạt tính chống oxy hóa Nhiều công trình nghiên cứu giới thực nhằm làm rõ hoạt tính Chùm Ngây Trong đó, Việt Nam, nghiên cứu đối tượng bắt đầu mang tính khảo sát sơ nét thành phần hóa học Một vài nghiên cứu dược lý hoạt tính chống oxy hóa Chùm Ngây thực Tuy nhiên, chưa nghiên cứu nước chuyên sâu thành phần hóa học Chùm Ngây, cụ thể xác định chế hóa học khả chống oxy hóa Chùm Ngây Để tìm hiểu sâu khả chống oxy Chùm Ngây, nhằm sử dụng loài hiệu hơn, góp phần cho mục đích phát triển Chùm Ngây loại thuốc hay thực phẩm chức chống oxy hóa, thực đề tài “Phân lập hợp có tác dụng chống oxy hóa Chùm Ngây (Moringa oleifera L.)” Đề tài thực gồm nội dung sau: - Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu - Phân lập hợp chất có Chùm Ngây Dự kiến kết quả: phân lập hợp chất Chùm Ngây - CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Chùm Ngây: 1.1.1 Danh pháp phân loại: Xác định cấu trúc chất phân lập thông qua phương pháp phổ Dự kiến kết quả: xác định cấu trúc hóa học hợp chất Chùm ngây, hay gọi Chùm ngây cải ngựa, có tên khoa học Moringa oleifera Lam., nằm hệ thống phân loại sau [50]: Chùm Ngây - Thử hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập Nhằm mục đích phân lập hoạt chất có khả chống oxy hóa có Chùm Ngây Giới: Thực vật (Plantea) Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Sổ (Dilleniidae) Bộ: Màn (Capparales) Họ: Chùm ngây (Moringaceae) Chi: Chùm ngây (Moringa Adans.) Loài: Chùm ngây cải ngựa (Moriga oleifera Lam.) Chi Chùm ngây (Moringa) chi họ Chùm ngây (Moringaceae) Chi có 13 loài, tất số chúng thân gỗ sinh sống khu vực nhiệt đới cận nhiệt đới Loài phổ biến Chùm ngây Moringa oleifera Lam Loài trồng nhiều nơi khu vực nhiệt đới, loài chi Moringa có mặt Việt Nam [2] 1.1.2 Hình thái học: Cây nhỏ hay nhỡ, cao – 10m Vỏ dày, có khía rãnh Thân non có lông Lá kép, mọc so le, lần lông chim, dài 30 – 60 cm, có – đôi chét hình trứng, mọc đối Cụm hoa mọc thành chùy kẽ lá; bắc hình chỉ; hoa màu trắng, giống hoa họ Đậu; đài có hình thuôn, uốn cong; tràng có cánh hình thìa; nhị 5, nhị có lông gốc, bầu thượng, ô, có lông Cây hoa vào tháng – Quả nang treo, có thiết diện tam giác, dài 25 – 30 cm hay hơn, mở làm 1.1.3 Sinh thái học phân bố: Chùm ngây loài nhiệt đới cận nhiệt đới, thích hợp với đất cát khô mảnh; hạt có cạnh có màu trắng, dạng màng [2] có khả chịu hạn hán Theo số báo cáo chi Chùm Ngây chịu nhiệt độ từ 18,7 – 28,5oC pH khoảng 4,5 – [6] Cây có nguồn gốc Tây Bắc Ấn Độ, sau đưa vào trồng rộng rãi Ấn Độ, Hy Lạp, Philippin, Thái Lan, Malaysia, Pakistan, Singapore, Cuba, Nigeria Hiện tồn quần thể Chùm ngây mọc hoang cận Hymalaya, từ vùng Chenab đến phía đông Sarda (Ấn Độ) [2] Ngoài ra, người ta tìm thấy Chùm Ngây phân bố châu Phi, Madagascar Ở nước ta, mọc hoang trồng tỉnh phía Nam từ Đà Nẵng, Nha Trang, Phan Thiết vào đến Kiên Giang đảo Phú Quốc [2] 1.1.4 Thành phần hóa học: (a) Rễ Chùm Ngây (b) Chứa hợp chất glucosinolat như: 4-(α-L-rhamnosyloxy) benzyl glucosinolat (khoảng 1%), sau chịu tác động enzym myrosinase cho 4(α-L-rhamnosyloxy) benzylisothiocyanat, glucotropaeolin (khoảng 0.05%) benzylisothiocyanat [16] Nhựa Chùm Ngây (Gôm) Gôm chiết từ vỏ có chứa arabinose, galactose, acid glucuronic vết rhamnose Từ gôm, chất leucoanthocyanin chiết xác định leucodelphinidin , galactopyranosyl, glucopyranosid [50] Lá Chùm Ngây (c) (d) Hình 1.1: (a): Chùm ngây Moringa oleifera Lam Và phận (b), hoa (c), (d) Chứa hợp chất thuộc nhóm flavonoid phenolic kaempferol 3-O- α -rhamnosid, kaempferol, syringic acid, gallic acid, rutin, quercetin 3-O-β- glucosid Các flavonol glycosid xác định thuộc nhóm kaempferid nối kết với rhamnosid hay glucosid [39] Hoa Chùm Ngây Hoa chứa polysaccharid dùng làm chất phụ gia kỹ nghệ dược phẩm [50] 10 P (mg) 110 70 204 11 K (mg) 259 259 1324 12 Cu (mg) 3,1 1,1 0,054 13 Fe (mg) 5,3 7,0 28,2 Hạt chứa glucosinolat rễ, lên đến 9% sau hạt 14 S (g) 137 137 870 khử chất béo Các acid loại phenol carboxylic 1- β - D - glucosyl 2, dimethyl 15 Oxalic acid (mg) 10 101 1,6 benzoat Ngoài hạt chứa chất béo (33 – 38%) dùng dầu ăn kỹ 16 Vitamin A - β Caroten (mg) 0,11 6,8 1,6 nghệ hương liệu, thành phần gồm acid béo acid oleic (60 – 70 %), 17 Vitamin B - cholin (mg) 423 423 - acid palmitic (3 – 12 %), acid stearic ( – 12 %) acid béo khác acid 18 Vitamin B1 - thiamin (mg) 0,05 0,21 2,64 Hạt Chùm ngây behenic, acid eicosanoic acid lignoceric [1] Chùm ngây mặt hàng thực phẩm quan trọng, ý đến 1.1.5 Công dụng phận dùng: Rễ Chùm Ngây nguồn dinh dưỡng tự nhiên vùng nhiệt đới Lá Chùm ngây giàu β-caroten, protein, vitamin C, calcium, kali dồi chất chống oxi hóa tự nhiên acid Rễ có vị đắng, xem loại thuốc bổ cho thể phổi, điều kinh, long đàm, lợi tiểu nhẹ Ở Nicaragua, nước sắc rễ dùng chữa bệnh phù thủng ascorbic, flavonoids, phenolic carotenoid [36] Kết phân tích hàm lượng dinh dưỡng quả, tươi bột khô Dịch rễ dùng để điều trị chứng mẩn ngứa dị ứng Trong rễ hạt, có chất kháng sinh pterygospermin [13] Chùm Ngây tóm tắt bảng 1.1 [13] Pakistan dùng vỏ rễ dùng sắc lấy nước trị đau răng, đau tai Hay rễ tươi Bảng 1.1: Hàm lượng dinh dưỡng Chùm Ngây Moringa oleifera Lam STT THÀNH PHẦN DINH TRÁI DƯỠNG/100gr TƯƠI 01 Nước % 02 Calori LÁ TƯƠI non dùng trị nóng sốt, phong thấp, gout, sưng gan lách Vỏ thân Chùm Ngây BỘT LÁ KHÔ Vỏ dùng điều trị chứng thiếu vitamin C, dùng trị tiêu chảy 86,9 % 75,0 % 7,5 % 26 92 205 đau bụng có kinh, sâu răng, làm thuốc thoa trị hói tóc, chữa đau cổ họng (dùng chung với hoa nghệ, hạt tiêu đen), trị tiểu máu, trị thổ tả [17] 03 Protein (g) 2,5 6,7 27,1 04 Chất béo (g) 0,1 1,7 2,3 05 Carbohydrat (g) 3,7 13,4 38,2 06 Chất xơ (g) 4,8 0,9 19,2 07 Chất khoáng (g) 2,0 2,3 _ 08 Ca (mg) 30 440 2003 09 Mg (mg) 24 25 368 Ở Ấn Độ, người ta hay dùng vỏ thân chùm ngây để trị nóng sốt, đau bao tử, Vỏ người dân Campuchia dùng làm thuốc cho phụ nữ sau sinh đẻ uống nước chóng lại sức Vỏ thân Thái Lan dùng làm thuốc thông Hay người dân Pakistan dùng vỏ thân để phá thai cách đưa vào tử cung, gây giãn nở Nhựa có công dụng giảm đau, chống sưng tấy Lá Chùm Ngây Lá dùng uống để điều trị chứng hạ huyết áp vò xát vào vùng thái dương để trị chứng nhức đầu Lá dùng để điều trị vết cắt da, vết trầy xướt, sưng tấy, mẩn ngứa hay dấu hiệu lão hóa da Dịch chiết từ có tác dụng chống nhiễm trùng da Nó dùng để điều khiển lượng đường máu trường hợp bị bệnh tiểu đường Dịch chiết từ có thêm nước cà-rốt thức uống lợi tiểu [6] Bột làm từ tươi có khả cung cấp lượng làm cho lượng tăng gấp bội dùng thường xuyên Lá dùng chữa sốt, viêm phế quản, viêm nhiễm mắt tai, viêm màng cơ, diệt giun sán làm thuốc tẩy xổ Sản phụ ăn làm tăng tiết sữa Ở Philippines định dùng chống thiếu máu, chứa lượng sắt cao [7] Dùng giã nát đắp lên vết thương bị sưng, nhọt; trộn với mật ong để đắp lên bên mắt trị mắt sưng đỏ Ở Pakistan dùng giả nát đắp lên vết thương, trị sưng nhọt, đắp bọng dịch hoàn để trị sưng Hoa Chùm Ngây Hoa Chùm Ngây Ấn Độ dùng làm thuốc bổ, lợi tiểu Quả, hạt Chùm Ngây Quả dùng trị bệnh đau gan tỳ, đau khớp, uốn ván chứng liệt Ấn Độ dùng Chùm Ngây giã kỹ với gừng Justicia gendarussa làm thuốc đắp trị gẫy xương Hạt điều trị bệnh viêm dày Dầu hạt dùng để điều trị nấm da Trường Đại học San Carlos Guatemala tìm loại kháng sinh có tác dụng neomycin có khả bảo vệ da khỏi viêm nhiễm Staphylococcus aureus Loại kháng sinh hỗn hợp kháng khuẩn nấm có tên pterygospermin, danh pháp hóa học glucosinolat alpha-L-rhamnosyloxy benzyl isothiocyanat [40] Nhiều nơi giới dùng bột nghiền từ hạt để khử trùng nước sông, nước sông mùa lũ có tổng số trực trùng Escherichia coli lên tới 1.600 18.000 / 100 ml, xử lý bột hạt Chùm Ngây vài đồng hồ giảm xuống - 200 / 100 ml Hạt dùng trị chứng trướng bụng, khó tiêu có tác dụng giảm đau Ở Philippines, chúng xem bạn thân bà mẹ có tác dụng làm lợi sữa 1.2 Tình hình nghiên cứu Chùm Ngây 1.2.1 Trên giới: Hoạt tính kháng nấm gây bệnh Nghiên cứu Institute of Bioagricultural Sciences, Academia Sinica, Đài Bắc (Đài Loan) ghi nhận dịch chiết từ hạt Chùm Ngây etanol có hoạt tính diệt nấm gây bệnh loại Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophyte , Epidermophyton floccosum Microsporum canis Rễ Chùm Ngây có hoạt tính kháng khuẩn chứa nhiều hợp chất kháng khuẩn Yếu tố kháng vi sinh vật pterygospermin, có hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm mạnh Phức hợp tương tự, liên quan đến hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm tìm thấy hoa Dịch chiết rễ có hoạt tính chống vi sinh vật có mặt hợp chất 4- α-L-rhamnosyloxybenzyl isothiocyanat Aglycon deoxy-niazimicin [N-benzyl, S-ethyl thioformat] phân lập từ phân đoạn cloroform dịch chiết etanol vỏ rễ liên quan đến hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm [20] Tác dụng Chùm Ngây cholesterol lipid máu Nghiên cứu Đại học Baroda, Kalabhavan, Gujarat (Ấn Độ) hoạt tính thông số lipid Chùm Ngây, thử thỏ, ghi nhận: Thỏ cho ăn Chùm Ngây (200mg/kg ngày) hay uống lovastatin (6mg/kg/ngày) trộn hỗn hợp thực phẩm có tính cách tạo cholesterol cao, thử nghiệm kéo dài 120 ngày Kết cho thấy Chùm Ngây lovastatin có tác dụng làm hạ cholesterol, phospholipid, triglycerid, VLDL (very low density lipoprotein), LDL (low density lipoprotein) hạ tỷ số cholesterol/phospholipid máu so với thỏ nhóm đối chứng [40] 10 11 Metyl phydroxybenzoat β-sitosterol Chùm Ngây chống viêm loét bảo vệ gan chuột Dịch chiết nước có hoạt tính nghiên cứu chứng minh có hoạt tính làm giảm huyết áp [44] Rễ, lá, hoa, chất chống viêm loét cho thấy phức hợp chống viêm loét phổ biến gôm, dịch chiết nước hạt Chùm Ngây có hoạt tính lợi tiểu, phức hợp loài Cũng có nghiên cứu công bố rễ Chùm Ngây có hoạt tính bảo vệ có tính lợi tiểu có khả đóng vai trò bổ sung cho hoạt tính hạ huyết áp gan Dịch chiết nước dịch chiết cồn hoa Chùm Ngây có hoạt tính bảo vệ loài [27] gan đáng kể, có mặt quercetin, loại flavonoid phổ biến với Dịch chiết thô Chùm Ngây có hoạt tính làm giảm đáng kể cholesterol huyết chuột thí nghiệm có chế độ ăn giàu chất béo Được cho hoạt tính bảo vệ gan [28] Các chất gây đột biến gen từ hạt Chùm Ngây rang chín có mặt thành phần hóa học β-sitosterol Quả Chùm Ngây làm giảm bớt Một số hợp chất chất gây đột biến gen tìm thấy cholesterol, phospholipid, triglycerid, LDL, VLDL, làm giảm số lipid gây hạt Chùm ngây rang chín: Các chất quan trọng xác định (α xơ vữa động mạch, giảm lipid gan, tim, động mạch chủ thỏ bị tăng Lrhamnosyloxy) phenylacetonitril; cholesterol huyết làm gia tăng tiết cholesterol qua phân [6] hydroxyphenyl-acetamid [6] Các hoạt tính chống co thắt bảo vệ gan 4-hydroxyphenylacetonitril 4- Khả ngừa thai rễ Chùm Ngây Dịch chiết nước nóng hoa, lá, rễ, hạt, vỏ thân Chùm Ngây Nghiên cứu Đại học Jiwaji, Gwalior (Ấn Độ) hoạt tính kháng nghiên cứu Trung Tâm Nghiên cứu Kỹ Thuật (CEMAT) Guatamala City estrogen, ngừa thai nước chiết từ rễ Chùm Ngây ghi nhận chuột bị cắt hoạt tính dược học, thử chuột Hoạt tính chống co giật chứng minh buồng trứng, cho uống nước chiết, có gia tăng trọng lượng tử cung thử nghiệm chuột cô lập, hoạt tính chống sưng thử chân chuột bị Khi cho chuột uống nước chiết chung với estradiol dipropionat gây phù carrageenan tác dụng lợi tiểu lượng nước tiểu thu (EDP) có tiếp nối tụt giảm trọng lượng tử cung so sánh với gia chuột nuôi nhốt lồng Nước trích từ hạt cho thấy tác động ức chế rõ tăng trọng lượng cho chuột uống riêng EDP Trong thử nghiệm co giật gây acetylcholin liều ED50= 65.6 mg/ml môi trường; tác động ức deciduoma liều cao 600mg/kg có tác động gây rối loạn tạo deciduoma chế phụ gây carrageenan định 1000mg/kg hoạt tính lợi tiểu nơi 50 % số chuột thử Tác dụng ngừa thai rễ Chùm Ngây cho 1000 mg/kg nhiều yếu tố phối hợp Những nghiên cứu tính dược lý Chùm Ngây tiến hành rộng rãi, cho thấy thành phần dịch chiết cồn có hoạt tính chống co thắt, Hoạt tính kháng khuẩn hạt Chùm Ngây - (α-L-Rhamnosyloxy)benzyl isothiocyanat xác định có hoạt thông qua việc phong tỏa kênh calci Hoạt tính chống co thắt dịch chiết cồn tính kháng sinh mạnh hoạt chất trích từ hạt Chùm Ngây (trong hạt Chùm Ngây có mặt hợp chất 4-[α-[L-rhamnosyloxy] benzyl]-o-metyl Chùm Ngây có benzyl isothiocyanat) Hợp chất ức chế tăng trưởng thiocarbamat [27] Đây sở để lý giải Chùm Ngây dùng để chữa nhiều vi khuẩn nấm gây bệnh Nồng độ tối thiểu để ức chế Bacillus bệnh tiêu chảy y học dân gian Ngoài ra, hoạt tính chống co thắt từ subtilis 56 micromol/l để ức chế Mycobacterium phlei 40 micromol/l thành phần khác sở dược lý để loài sử dụng điều [16] Dịch ép vỏ thân thể hoạt tính kháng Staphylococcus aureus Dịch trị rối loạn nhu động ruột Dịch chiết metanol Chùm Ngây thể hoạt tính ép tươi ức chế sinh trưởng Pseudomonas aeruginosa 12 13 Staphylococcus aureus [20] thái vi học, đặc điểm bột dược liệu Chùm Ngây Ngoài ra, công trình định lượng flavonoid toàn phần Hoạt tính kháng khối u ung thư có Chùm Ngây mọc Tp Hồ Chí Minh Đồng Nai, Makonnen cộng phát Chùm Ngây có tiềm chống khối non già Từ đó, rút mối tương quan hàm lượng u Hợp chất o- etyl- 4- [α-L-rhamnosyloxy] benzyl carbamat với [α-L- flavonoid với nơi mọc, cụ thể hàm lượng flavonoid gia rhamnosyloxy]- benzyl isothiocyanat, niazimicin 3- O- [6′- O- oleoyl- α- D- tăng cường độ chiếu sang vào (cường độ tia UV) tăng hàm glucopyranosyl]- β-sitosterol khảo sát hoạt tính chống khối u, sử dụng mô lượng flavonoid non cao già [6] hình phân tích in vitro [29] Kết cho thấy chúng có hiệu ức chế đáng kể virus Epstein – Bar Niazimicin đề nghị chất có hiệu lực ngăn ngừa - Một nghiên cứu khác Trung tâm phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Tp HCM, 2010, đánh giá thành phần hóa học Chùm tác nhân hóa học gây ung thư Dịch chiết hạt Chùm Ngây nhận Ngây khác tùy theo phận tùy theo nơi mọc thấy có hoạt tính chuyển hóa chất gây ung thư gan, chống oxi hóa kháng khối u da chuột thí nghiệm [14] Trước đó, công trình nghiên cứu Chùm Ngây nước chủ yếu 1.2.2 Tại Việt Nam: Trong năm gần đây, Việt Nam bắt đầu có nghiên cứu tập trung vào đối tượng Chùm Ngây, chủ yếu nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học, tác dụng dược lý, nhằm có biện pháp nghiên cứu, chế biến sử dụng hiệu đối tượng Trong số đó, số công trình nghiên cứu bật công bố: - tài liệu thực vật thuốc Võ Văn Chi Phạm Hoàng Hộ Những nghiên cứu khác mang tính nhỏ lẻ chưa quan tâm [1],[2] 1.3 Gốc tự chất chống oxy hóa: 1.3.1 Gốc tự do: Khái niệm gốc tự (Free Radical-FR) đề xướng lần Đại học Y dược Tp HCM, 2011, có công trình nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa bảo vệ gan dạng cao chiết từ Chùm Ngây Kết nghiên cứu cho thấy, cao Chùm Ngây trồng Việt Nam có khả chống oxy hóa bảo vệ gan Khả thể rõ dịch chiết Chùm Ngây cồn 60% liều 0,2g/kg Nhận định rút dựa nghiên cứu MDA, GSH, AST, ALT - hướng vào khảo sát đặc điểm hình thái học thực vật, hệ thống phân loại thực vật thống kê công dụng dân gian Chùm Ngây Trong số đó, tiêu biểu Trung tâm Sâm Dược liệu Tp Hồ Chí Minh (2010) khảo sát Chùm Ngây có nhóm hợp chất là: chất béo, tinh dầu, carotenoid, triterpenoid, coumarin, flavonoid, tannin, acid hữu Đồng thời, tác giả khảo sát ghi nhận đặc điểm hình năm 1954, bác sĩ Denham Harman, đại học Berkeley- Califonia, đưa luận thuyết chế tích tuổi (Free Radical Theory of Aging) Gốc tự phân tử có mang điện tử đơn lẻ quỹ đạo vòng Các điện tử đơn lẻ có xu hướng nhận thêm điện tử để trở trạng thái cân hóa học Do đó, gốc tự có thuộc tính đặc biệt quan trọng có khả oxy hóa cao Gốc tự nguồn gốc nội sinh hay ngoại sinh: - Gốc tự nội sinh gốc tự thường xuyên sinh thể sinh vật thông qua chuỗi chuyển hóa biến dưỡng, hoạt động thực bào bạch cầu, phản ứng viêm mô tổn 150 160 170 180 ppm 14 13 12 11 10 90 100 110 120 130 6.8542 6.8484 6.8361 6.4047 6.4006 6.2035 6.1994 1.20 2.61 2.28 3.5924 3.5708 3.3260 3.2698 3.2368 3.0936 2.5073 2.5037 2.5000 2.4964 2.4927 4.1896 80 0.99 70 5.4575 5.4426 5.2211 4.9984 4.8917 60 1.04 0.99 0.98 1.22 1.00 1.01 1.08 7.5868 7.5811 7.5770 7.5687 7.5642 12.6214 50 2.05 1.03 ppm 30 40 CHAT 2-DMSO-1H 140 40.0206 39.8539 39.7801 39.6870 39.5200 39.3529 39.1859 39.0190 60.9724 77.4235 76.4944 74.0639 69.9414 93.4236 103.9514 100.9644 98.5818 121.5151 121.1474 116.1872 115.1521 133.3504 144.7212 148.3712 156.2739 156.1599 164.0307 161.1891 177.3905 CHAT 2-DMSO-13C ppm NAME EXPNO PROCNO Date_ Time INSTRUM PROBHD PULPROG TD SOLVENT NS DS SWH FIDRES AQ RG DW DE TE D0 D1 D13 D16 IN0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.5 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 usec usec K sec sec sec sec sec ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM1 SINE.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec ND0 TD 128 SFO1 500.133 MHz FIDRES 52.163410 Hz SW 13.350 ppm FnMODE QF SI 1024 SF 500.1300000 MHz WDW SINE SSB LB 0.00 Hz GB PC 1.00 SI 1024 MC2 QF SF 500.1300000 MHz WDW SINE SSB LB 0.00 Hz GB 5.0 190 Hz Hz sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P0 11.50 usec P1 11.50 usec PL1 1.00 dB PL1W 17.15925598 W SFO1 500.1330069 MHz 4.0 200 CHAT2−DMSO 20110810 0.58 spect mm PABBO BB− cosygpqf 2048 DMSO 64 16 6684.492 3.263912 0.1532404 64 74.800 6.50 300.0 0.00000300 1.20000005 0.00000400 0.00020000 0.00014975 ppm HMBCGP ppm 30 40 50 CHAT2−DMSO DEPT90 60 70 80 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 90 DEPT135 100 110 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 120 ppm 130 140 150 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 160 170 180 190 200 210 14 13 12 11 10 ppm 140 150 160 170 ppm 180 14 13 90 100 110 120 130 12 11 10 1.07 1.09 1.23 2.06 1.12 1.03 3.8622 3.8438 3.8249 3.5416 3.5304 3.5185 3.3805 3.3629 3.3038 2.5035 2.5000 2.4965 4.9504 4.9303 4.7041 4.6847 4.5591 6.2712 80 1.00 70 6.9017 6.8848 6.7675 60 2.03 0.98 8.0301 8.0132 13.1569 50 1.71 1.01 ppm 30 40 CHAT 1-DMSO-1H 40.0155 39.9432 39.8491 39.6824 39.5156 39.3487 39.1819 39.0151 61.2607 73.3089 70.8152 70.5423 81.7123 78.6154 104.5505 103.9635 102.3651 98.0826 115.7265 121.5378 128.8100 163.8494 162.4942 161.0285 160.3192 155.9047 181.9651 CHAT 1-DMSO-13C ppm NAME EXPNO PROCNO Date_ Time INSTRUM PROBHD PULPROG TD SOLVENT NS DS SWH FIDRES AQ RG DW DE TE D0 D1 D13 D16 IN0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.5 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 usec usec K sec sec sec sec sec ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM1 SINE.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec ND0 TD 128 SFO1 500.133 MHz FIDRES 52.163410 Hz SW 13.350 ppm FnMODE QF SI 1024 SF 500.1300000 MHz WDW SINE SSB LB 0.00 Hz GB PC 1.00 SI 1024 MC2 QF SF 500.1300000 MHz WDW SINE SSB LB 0.00 Hz GB 6.0 190 Hz Hz sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P0 11.50 usec P1 11.50 usec PL1 1.00 dB PL1W 17.15925598 W SFO1 500.1330069 MHz 5.0 200 CHAT1−DMSO 20110809 5.04 spect mm PABBO BB− cosygpqf 2048 DMSO 32 16 6684.492 3.263912 0.1532404 64 74.800 6.50 300.0 0.00000300 1.20000005 0.00000400 0.00020000 0.00014975 ppm CHAT1−DMSO−HMBC ppm 30 40 50 60 CHAT1−DMSO DEPT90 70 80 90 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm DEPT135 100 110 120 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 130 ppm 140 150 160 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 170 180 190 200 210 220 14 13 12 11 10 ppm CHAT1−DMSO−HMBC ppm ppm 95 30 100 40 105 50 110 115 60 120 70 125 80 130 90 135 100 140 110 145 150 120 155 130 160 140 165 150 170 160 175 170 180 180 185 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 ppm ppm 14 13 12 11 10 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 40.0206 39.8539 39.7801 39.6870 39.5200 39.3529 39.1859 39.0190 60.9724 77.4235 76.4944 74.0639 69.9414 93.4236 103.9514 100.9644 98.5818 121.5151 121.1474 116.1872 115.1521 133.3504 144.7212 148.3712 156.2739 156.1599 164.0307 161.1891 177.3905 3.5924 3.5708 3.3260 3.2698 3.2368 3.0936 2.5073 2.5037 2.5000 2.4964 2.4927 4.1896 0.99 1.20 2.61 2.28 5.4575 5.4426 5.2211 4.9984 4.8917 6.8542 6.8484 6.8361 6.4047 6.4006 6.2035 6.1994 7.5868 7.5811 7.5770 7.5687 7.5642 12.6214 1.04 0.99 0.98 1.22 1.00 1.01 1.08 2.05 1.03 CHAT 2-DMSO-1H CHAT 2-DMSO-13C 50 40 30 20 10 CHAT2−DMSO DEPT90 ppm NAME EXPNO PROCNO Date_ Time INSTRUM PROBHD PULPROG TD SOLVENT NS DS SWH FIDRES AQ RG DW DE TE D0 D1 D13 D16 IN0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 CHAT2−DMSO 20110810 0.58 spect mm PABBO BB− cosygpqf 2048 DMSO 64 16 6684.492 3.263912 0.1532404 64 74.800 6.50 300.0 0.00000300 1.20000005 0.00000400 0.00020000 0.00014975 170 Hz Hz sec usec usec K sec sec sec sec sec 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm DEPT135 ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P0 11.50 usec P1 11.50 usec PL1 1.00 dB PL1W 17.15925598 W SFO1 500.1330069 MHz 4.0 4.5 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM1 SINE.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec ND0 TD 128 SFO1 500.133 MHz FIDRES 52.163410 Hz SW 13.350 ppm FnMODE QF SI 1024 SF 500.1300000 MHz WDW SINE SSB LB 0.00 Hz GB PC 1.00 SI 1024 MC2 QF SF 500.1300000 MHz WDW SINE SSB LB 0.00 Hz GB 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 ppm HMBCGP ppm ppm 30 30 40 40 50 50 60 60 70 80 70 90 80 100 90 110 100 120 110 130 140 120 150 130 160 140 170 150 180 160 190 170 200 210 14 13 12 11 10 ppm 180 ppm MỤC LỤC 2.2.1 Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu 23 Lời cảm ơn 2.2.1.1 Xác định độ ẩm bột dược liệu 23 Mục lục 2.2.1.2 Xác định độ tro toàn phần 23 Danh mục từ viết tắt 2.2.1.3 Xác định độ tro không tan acid chloric 24 Danh mục bảng biểu 2.2.1.4 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 24 Danh mục hình ảnh 2.2.2 Phương pháp chiết xuất dược liệu thu phân đoạn cao 25 Mở đầu 2.2.2.1 Chiết xuất cao toàn phần 25 Chương 1: Tổng quan tài liệu 2.2.2.2Chiết cao phân đoạn từ cao toàn phần 26 1.1 Tổng quan Chùm Ngây 2.2.3 Khảo sát cao phân đoạn 26 1.1.1 Danh pháp phân loại 2.2.3.1 Định tính cao phân đoạn phương pháp hóa học 27 1.1.2 Hình thái học 2.2.3.2 Sắc ký lớp mỏng 30 1.1.3 Sinh thái học phân bố 2.2.3.3Phương pháp định lượng phenolic tổng 31 1.1.4 Thành phần hóa học 2.2.4 Phân lập hợp chất chống oxi hóa 33 1.1.5 Công dụng phận dùng 2.2.4.1 Xác định thành phần có hoạt tính chống oxi hóa phương pháp sắc 1.2 Tình hình nghiên cứu Chùm Ngây ký lớp mỏng 33 1.2.1 Trên giới 2.2.4.2 Sắc ký cột nhanh – cột khô 34 1.2.2 Tại Việt Nam 12 2.2.4.3 Sắc ký cột cổ điển 35 1.3 Gốc tự chất chống oxi hóa 13 2.2.5 Đánh giá hoạt tính chống oxi hóa 36 1.3.1 Gốc tự 13 2.2.5.1 Phương pháp quét gốc tự DPPH 36 1.3.2 Chất chống oxi hóa 14 2.2.5.2 Phương pháp xác định lực khử 38 1.4 Tổng quan hợp chất flavonoid 16 2.2.5.3 pháp thử hoạt tính quét gốc hydrxyl tự 39 1.4.1 Sơ lược hợp chất thứ cấp flavonoid 16 Chương 3: Kết - Biện luận 42 1.4.1 Chiết xuất flavonoid 19 3.1 Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu 42 Chương 2: Vật liệu – Phương pháp 22 3.1.1 Xác định độ tinh khiết nguyên liệu 42 2.1 Vật liệu 22 3.1.2 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 43 2.1.1 Nguyên liệu 22 3.2 Chiết xuất dược liệu thu cao phân đoạn 44 2.1.2 Dung môi, hóa chất 22 3.2.1 Kết chiết xuất cao toàn phần 44 2.1.3 Thiết bị 22 3.2.2 Kết chiết cao phân đoạn 45 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 3.3 Kết khảo sát cao phân đoạn 47 88   3.3.1 Kết định tính hóa học cao phân đoạn 47 3.3.2 Kết định lượng phenolic 48 3.3.3 Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn tổng cao phân đoạn 50 3.3.4 Kết sàng lọc hoạt tính chống oxi hóa cao phân đoạn 53 3.4 Phân lập hợp chất 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bích cộng (1999), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 458-460 3.4.1 Xác định thành phần có hoạt tính chống oxi hóa phương pháp sắc ký [2] Võ Văn Chi (1999), Tự điển thuốc Việt Nam, NXB Y học lớp mỏng 62 [3] Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ (2000), Bài giảng chiết xuất dược liệu, Trường ĐH Y 3.4.2 Sắc ký nhanh – cột khô (Dry – column flash chromatography) 65 dược TPHCM 3.4.3 Sắc ký cột cổ điển 68 [4] Nguyễn Thị Hiền (2010), Nghiên cứu khả kháng oxy hóa phân 3.5 Xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết 72 đoạn cao chiết từ trà xanh (Camellia sinensis), Luận văn thạc sĩ Sinh học, 3.6 Tái đánh giá hoạt tính chống oxi hóa hợp chất phân lập 76 3.6.1 Hoạt tính quét gốc tự DPPH 76 3.6.2 Khảo sát lực khử 80 3.6.3 Khảo sát hoạt tính quét gốc hydroxyl tự 82 Chương 4: Kết luận – Đề nghị 86 4.1 Kết luận 86 4.1.1 Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu 86 4.1.2 Quy trình chiết xuất dược liệu thu cao phân đoạn 86 4.1.3 Định lượng phenolic tổng khảo sát hoạt tính chống oxi hóa phân đoạn 86 4.1.4 Phân lập hợp chất có hoạt tính chống oxi hóa 86 4.1.5 Tái đánh giá hoạt tính chống oxi hóa chất phân lập 87 4.2 Đề nghị 87 Tài liệu tham khảo 88 Phụ lục trường Đại học Khoa hoc Tự nhiên TP Hồ Chí Minh [5] Trần Hùng (2006), Phương pháp nghiên cứu Dược liệu, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh [6] Lê Văn Huấn (2010), Tìm hiểu hàm lượng Flavonoid Chùm ngây Moringa oleifera Lam., Khóa luận tốt nghiệp cử nhân sinh học, trường Đại học Khoa học tự nhiên TP Hồ Chí Minh [7] Trần Việt Hưng, Võ Duy Huấn (1998), Cây thực phẩm thuốc Chùm ngây, Báo thuốc sức khỏe, số 337, trang 18 [8] Nguyễn Thị Thu Hương (2010), Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa theo hướng bảo vệ gan nấm Linh chi đỏ Ganoderma lucidum, Tạp chí Y học TP.HCM, tập 14 số 2, tr.131-132 [9] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại Học Quốc Gia TP.HCM [10] Ngô Văn Thu (1998), Bài giảng dược liệu Tập 1, Bộ Y tế Bộ Giáo dục Đào tạo, trang 86 – 92 Tài liệu tiếng nước 89   90   [11] Ali K Atoui, Abdelhak M., George B., Panagiotis K (2005), Tea and Herbal [19] Dangi S Y., Jolly C I., Narayanan (2002), Antihypertensive activity of the infusion: Their antioxidant activity and phenolic profile, Food Chemistry, 89, total alkaloids from the leave of Moringa oleifera, Pharm Biol, 40, pp 144 – pp 27 – 36 148 [12] Amado N G., Cerqueira D M., Menezes F S., da Silva J F., Neto V M., Abreu J G (2009), Isoquercitrin isolated from Hyptis fasciculata reduces glioblastoma cell proliferation and changes beta-catenin cellular localization, Anticancer Drugs, 20 (7) [20] Das B R., P A Kurup, P L Narashima Rao, A S Ramaswamy (1957), Antibacterial activity and chemical structure of compounds related to pterygospermin, India J Med Res, 45, pp 191 – 196 [21] Deepralard K., Kazuko Kawanishi, Masataka Moriyasu, Thitima P., Rutt [13] Anwar F., Latif S., Ashraf M., Gilani A H (2007), Moringa oliefera: a food plant with multiple medicinal uses, Phytother Res., 21, pp 17-25 Suttisri (2009), Flavonoid glycosides from the leave of Uvaria rufa with advanced glycation end – products inhibitory activity, Thai J Pharm Sci., 33, [14] Bharali R., Tabassum J., Azad M R (2003), Chemomodulatory effect of pp 84 – 90 Moringa oleifera Lam on hepatic carcinogen metabolizing enzymes, [22] Deng S., Deng Z., Fan Y., Li J., Xiong D., Liu R (2009), Isolation and antioxidant parameters and skin papillomagenesis in mice, Asia Pacific J purification of three flavonoid glycosides from the leaves of Nelumbo nucifera Cancer, 4, pp 131 – 139 (Lotus) by high-speed counter-current chromatography, J Chromatogr B Analyt [15] Bhattarai H D., Babita P., Soon Gyu Hong, Hong Kum Lee, Joung Han Yim (2008), Thin layer chromatography analysis of antioxidant constituents of lichens from Antarctica, Journal of Natural Medicine, 62, pp 481 – 484 Technol Biomed Life Sci, 877 (24) [23] Duarte J., Perez-Palencia R., Varqas F., Ocete M A., Zarzuelo A., Tamarqo J (2001), Antihypertensive effects of the flavonoid quercetin in spontaneously [16] Caceres A B., Cabrera, O Mollinedo, Imendia A (1991), Preliminary hypertensive rats, Br J Pharmacol, 24, pp 117 – 133 screening of antimicrobial activity of Moringa oleifera”, J Ethnopharmacol, 33, [24] Duarte J., Francisco P (2001), Natural Products Chemistry, 25, pp 565 – 603 pp 213 – 216 [25] Eward R and Gatehouse J A (1999), Secondary metabolism in plant [17] Costa - Lotufo L V., Mahmud T H K., Arjumand A., Diego V W., Paula C J., Claudia P (2005), Studies of the anticancer potential of plants used in Bangladeshi folk medicine, Journal of Ethnopharmacology, 99, pp 21-30 vitro and ex vitro antioxidant properties, hypolipidaemic and antitherosclerotic activities of water extract of Moringa oleifera Lam leave, Journal of Ethnopharmacology, 119, pp 439 – 436 – 218 [26] Faizi S., Siddiqui B S., Saleem R., Aftab K., Gilani A H (1994), Isolation and [18] Pilaipark Chumark, Panya K., Yupin S., Srichan P., Noppawan M (2008), The in biochemistry and molecular biology, John Wiley and Sons New York, 2, pp 193 structure elucidation of new nitrile and mustard oil glycosides from Moringa oleifera and their effect on blood pressure, Journal of Natural Product, 57 (9), pp 1256-1261 91   92   [27] Faizi S., Siddiqui B S., Saleem R., Aftab K., Gilani A H (1995), Fully [36] P Sudhir Kumar, Debasis M., Goutam G., Chandra S Panda (2010), Medicinal acetylated carbamate and hypotensive thiocarbamate glycosides from Moringa uses and pharmacological properties of Moringa oleifera, International Journal oleifera, Phytochemistry, 38 (4), pp 957-963 [28] Gilani A H., Janbaz K H., Shah B H (1997), Quercetin exhibits hepatoprotective activity in rats, Biochem Soc Trans, pp 25 – 85 [29] Guevara A., Varqas C., Sakurai H., Fujiwara Y., Hashimoto K., Maoka T., Kozuka M., Ito Y., Tokuda H., Nishino H (1999), An antitumor promoter from Moringa oleifera Lam., Mutation Research, 440, pp 181-188 [30] Harborne J B., Tomas – Barberan F A (1991), Ecological Chemistry and Biochemistry of Plant Terpenoid, Oxford Science Publication, pp 159 – 208 [31] He D., Huang Y., Amatjan A., Dongyu Gu, Yi Yang, Haji A A., Yoichiro Ito of Phytomedicine, 2, pp 210 – 216 [37] Lagnika L., Weniger B., Vonthron-Senecheaub C., A Sanni (2009), Antiprotozoal activities of compounds isolated from Croton lobatus L., Afr J Infect Dis., 3(1), pp – [38] Li TR, Yang ZY, Wang BD (2007), Synthesis, characterization and antioxidant of naringenin schiff base and its Cu (II), Ni(II), Zn (II) complexes, Chem Pharm Bull, 55, pp 26 – 28 [39] Manguro L O A., Lemmen P (2007), Phenolic of Moringa oleifera leave, Natural Product Research, 21 (1), pp 56-68 (2010), Separation and purification of Flavonoids from Black Currant Leaves by [40] Mehta L K., Balaraman R., Amin A H., Bafna P A., Gulati O D (2003), High – Speed Countercurrent Chromatography and Preparative HPLC, Effect of fruit of Moringa oleifera on lipid profile of normal and Chromatogr Relat Technol, 33, pp 615 – 628 hypercholesterolaemic rabbits, Journal of Ethnopharmacology, 86, pp 19 – [32] Bo Jiang, Hongyan Zhang, Changjian Liu, Yanying Wang, Shengdi Fan (2009), Extraction of water – solube polysaccharide and antioxidant activity from Ginkgo biloba leaves, Med Chem Res [33] Jianping Liu, Xing J., Fei Y (2008), Green tea (Camellia sinensis) and cancer prevention: a systematic review of randomized trials and epidemiological studies, Chinese Medicine, 13 [34] Jung S H., Kim B J., Lee E H., Osborne N N (2010), Isoquercitrin is the most effective antioxidant in the plant Thuja orientalis and able to counteract oxidative-induced damage to a transformed cell line (RGC-5 cells), Neurochem Int., 55 (7) [35] Kim H Y., Moon B H., Lee H J., Choi D H (2004), Flavonol glycosides from the leaves of Eucommia ulmoides O with glycation inhibitory activity, J Ethnopharmacol, 93, pp 227 – 230 195 [41] Nikkon F., Zahangir Alam Saud, M Habibur Rahman, Md Ekramul Haque (2003), In vitro antimicrobial activity of the compound isolated from chloroform extract of Moringa oleifera Lam., Pak J Biol Sci, 22, pp 1888 – 1890 [42] Pal S K., Pulok K Mukherjee, B P Saha (1995), Studies on the antiulcer activity of Moringa oleifera leaf extract on gastric ulcer models in rats, Phytother Res, 9, pp 463 – 465 [43] Ping-Hsien Chuang, Lee C W., Chou J Y., Muruqan M., Sheih B J., Chen H M (2005), Anti-fungal activity of crude extracts and essential oil of Moringa oleifera Lam., Bioresource Technology 98, pp 232 – 236 93   94   [44] Rajanandh M G., Kavitha J (2010), Quantitative Estimation of β-Sitosterol, [53] Zhou Y J, Liu Y E., Cao J Zeng G., Shen C.,Li Y., Zhou M., Chen Y (2009), Total Phenolic and Flavonoid Compounds in the Leaves of Moringa oleifera, Vitexins, Nature-Derived Lignan Compounds, Induce Apoptosis and Suppress International Journal of PharmTech Research, (2), pp 1409 – 1414 Tumor Growth, Clin Cancer Res, 15(16),5161–9 [45] Ramachandran C., K V Peter, P K Gopalakrishnan (1980), Drumstick [54] Zucolotto S M., Carize F., Flavio H R., Freddy A Ramos, Leonardo C., (Moringa oleifera): A Multipurpose Indian Vegetable, Economic botany, 34, pp Carmenza D., Eloir P S (2011), Analysis of C – glycosyl Flavonoids from 277 – 283 South American Passiflora Species by HPLC-DAD and HPLC-MS, Phytochem [46] Sabale V (2008), Moringa oleifera (Drumstik): An overview, Pharmacognosy review, (4), pp – 13 [47] Shanker K., Gupta M M., Srivastava S K., Bawankule D U., Pal A., Khanuja S P S (2006), Determination of bioactive nitrile glycoside(s) in drumstick (Moringa oleifera) by reverse phase HPLC, Food Chemistry, 105, pp 376-382 [48] Siddhuraju P., Becker K (2003), Antioxidant properties of various solvent extracts of total phenolic constituents from three different agroclimate origins of drumstik tree (Moringa oleifera Lam.) leaves, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 51, pp 2144-2155 [49] Singh A., Samir M., Ravi S (2008), Anti – inflammatory and Analgesic Agents from Indian Medicinal Plants, International Journal of Integrative Biology [50] Vidya Sabale (2008), Moringa oleifera (Drumstick): An overview, Pharmacognosy review, (4), pp – 13 [51] Williams B L., Simon H Wender (1952), The isolation and identification of quercetin and isoquercitrin from grapes (Vitis vinifera), J Am Chern Soc 74:4372 [52] Zhou X., Peng J., Guorong Fan (2005), Isolation and purification of flavonoid glycosides from Trollius ledebouri using high-speed counter-current chromatography by stepwise increasing the flow-rate of the mobile phase, J Chromatoqr A., 1092 (2), 216 – 221 Anal, 10 [...]... sát các đặc điểm hóa học quan trọng Liebermann và hoạt tính sinh học trên các phân đoạn cao thu được Nhằm định hướng cho việc Burchard phân lập các hợp chất có hoạt tính chống oxy hóa trong lá Chùm Ngây, chúng tôi Steroid- tiến hành khảo sát các phân đoạn cao Mỗi phân đoạn cao sẽ được tiến hành xác triperpenoid Rosenthaler Salkowski Đỏ đậm – xanh – xanh tím định các nhóm hợp chất chính có mặt trong phân. .. eter chiếm khối lượng cao nhất trong các cao phân đoạn thu được Cao cloroform có khối lượng nhỏ nhất cho thấy các chất có độ phân cực gần với độ phân cực của cloroform chiếm hàm lượng thấp trong lá Chùm Ngây 46  47      Lá Chùm ngây tươi 10 kg 3.3 Kết quả khảo sát các cao phân đoạn 3.3.1 Kết quả định tính hóa học các cao phân đoạn Bảng 3.9: Kết quả định tính hóa học các cao phân đoạn Chiết cồn 96% Tỉ... tắt quay trình theo sơ đồ trong hình 2.1 Các phân đoạn cao thu được sẽ được khảo sát các thành phần hóa học và thử hoạt tính chống oxi hóa nhằm chọn ra phân đoạn có tiềm năng cao nhất Phân đoạn này sẽ tiếp tục được phân tích để xác định và tách chiết ra các hợp chất có hoạt tính chống oxi hóa 2.2.3 Khảo sát các cao phân đoạn 2.2.3.1 Định tính bằng phương pháp hóa học cao phân đoạn Dịch lắc eter Dịch... đoạn etyl acetat lá Chùm Ngây Giá trị IC50 của phân đoạn etyl acetat chỉ cao gần 2 lần so với chứng dương vitamin C, điều này chứng tỏ các hợp chất trong phân đoạn này có hoạt tính chống oxy hóa rất cao Hình 3.11: Giá trị IC50 về hoạt tính quét gốc tự do DPPH của cao cồn tổng và các cao phân đoạn 62    63    3.4 Phân lập các hợp chất 3.4.1 Xác định các thành phần có hoạt tính chống oxy hóa bằng phương... mức bằng nước cất đế 10ml Để yên trong tối 2h m: khối lượng cao đem định lượng (mg) f(A): phương trình đường chuẩn X: độ ẩm cao (%) 2.2.4 Phân lập các hợp chất chống oxi hóa 2.2.4.1 Xác định các thành phần có hoạt tính chống oxi hóa bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng Sau khi khảo sát các phân đoạn cao, xác định được phân đoạn có tiềm năng Đo OD758 nm chống oxi hóa cao nhất Phân đoạn cao được chọn sẽ được... hóa yếu Tương tự với phân đoạn nước, chứa chủ yếu là các đường khử, polyuronic Có thể xem hai phân đoạn này không có hoạt tính chống oxy hóa - Như vậy etyl acetat là phân đoạn chủ đạo quyết định hoạt tính chống oxy hóa của cao tổng Hoạt tính chống oxy hóa ở lá Chùm Ngây liên quan trực tiếp đến nhóm hợp chất phenolic Nhóm phenolic là thành phần chủ đạo và quy định hoạt tính chống oxy hóa trong cao phân. .. thể được sinh ra do bức xạ mặt trời, tia X; sinh ra trong quá trình hụt bất kỳ thành phần nào đều có thể gây giảm trạng thái chống oxy hóa toàn chế biến thực phẩm như chiên, nướng, cũng có trong thành phần phần của rượu bia, thuốc lá; hay có trong các chế phẩm hóa học như Các chất chống oxy hóa gồm 2 loại: chất chống oxy hóa có bản chất thuốc xịt côn trùng… Các gốc tự do này thường đa dạng và phức enzym... khảo sát các phân đoạn cao, kết quả cho thấy phân đoạn etyl acetat là phân đoạn có chứa nhiều hợp chất phenolic nhất, và có hoạt tính chống oxy hóa mạnh nhất trong các phân đoạn được khảo sát Kết quả sắc ký lớp mỏng cũng cho thấy có nhiều vết chất tập trung trong phân đoạn này Đối với phân đoạn cloroform, kết quả định lượng cho thấy phân đoạn cũng chứa nhiều hợp chất phenolic, tuy nhiên hoạt tính chống. .. oxy hóa lại thấp hơn so với phân đoạn etyl acetat Mặt khác, khối lượng cao etyl acetat thu được sau khi lắc phân đoạn cũng chiếm ưu thế hơn so với cao cloroform Vì vậy, chúng tôi tập trung vào phân đoạn etyl acetat để thu nhận các hợp chất có hoạt tính chống oxy hóa chính trong là Chùm Ngây Để định hướng cho việc phân lập các hợp chất chống oxy hóa, chúng tôi tiến hành kỹ thuật sắc ký lớp mỏng sử dụng. .. tính chống oxy hóa yếu - Vết Rf = 0,1 cũng cho hoạt tính chống oxy hóa mạnh vì chiếm hàm lượng nhiều Nhìn chung, các chất có hoạt tính chống oxy hóa tập trung trong phân đoạn EtOAc chủ yếu là các hợp chất phenolic 3.4.2 Sắc ký nhanh – cột khô (Dry – column flash chromatography) Từ kết quả xác định các thành phần có hoạt tính chống oxy hóa trong phân đoạn etyl acetat, có thể nhận thấy các chất mục tiêu