tương ứng) Tiếp theo chất chiết loài Areca catechu L (hạt), Crinum asiaticum Donn (lá) Crinum latifolium L (lá) có hoạt tính ức chế AChE từ 70 - 75% Hoạt độ ức chế AChE từ 50 - 60% có loài, gồm Coptis sinensis Franch (thân rễ); Rheum officinale Bâillon (rễ), ũnamomum cassia L (vỏ thân), Uncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks, (thân móc); Angelica dahurica Benth (rễ), root of Cassia tora L (rễ) Các mẫu lại có hoạt độ ức chế AChE nhỏ 50% Tuy nhiên nổng độ 0,5 m g/ ml, có thêm dịch chiết có hoạt độ ức chê' từ 70 - 75%, bao gổm: Piper lolotL, (toàn cây) Piper betle L (toàn cây), Elsholtĩiơ cristata VVilld (toàn cây), and Perillơ ừutescens (L.) Britton (toàn cây); Paeoniơ lactiflora Pall, (toàn cây), Polygonum cuspidatum Siebold & Zucc (thân rễ) Citrus deliosa Tenero (rễ) sínica Diels, Stephơnia dielsiana YC Wu công bố có hoạt tính ức chê' AChE Trước đây, loài thuộc chi Stephania L thử hoạt tính ức chế AChE, gổm loài Stephania suberosa Forman (2003); loài s venosa (Blume) Spreng (2001) loài s tetrandra s Moore (1997) [5], dược liệu có hoạt tính ức chế AChE lớn 70% có thành phần hóa học nhóm chấtalcaloid Đây lần đẩu chất chiết từ củ loài Stephania Kết lụận 38 mẫu chất chiết methanol dược liệu lựa chọn từ thuốc an thắn, ích trí thử tác dụng ức chê' AChE in vitro phương pháp đo quang Ellman nồng độ 0,1 mg/m l, chất chiết từ củ loài Stephania sínica Diels, Stephania dielsiana YC Wu có hoạt tính ức chê' AChE cao (85,02 80,6% tương ứng) TÀI LIỆU THAM KHẢO V Terry et al (2003), 'The Cholinergic Hypothesis of Age and Alzheimer's Disease-Related Cognitive Deficits: Recent Challenges and Their Implications for Novel Drug Development", The journal o f pharmacology and experimental therapeutics, Vol 306, No 3, pp 821-827 BỘ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nxb Y học, Hà Nội, Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nxb.Y học, Hà Nội Ilkay Orhan (2003), "Acetylcholinesterase inhibitors from natural resources"J Pharm Scl, 28,51-58 Kornkanok Ingkaninan et al (2003), "Screening for acetylcholinesterase inhibitory activity in plants used in Thai traditional rejuvenating and neurotonic remedies", Journal o f Ethnopharmơcology, Vol 89, pp 261-264 ĐỖ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học kỹ thuật Nghiên cứu thành phẩn hóa học theo định hướng tác dụng hạ đường huyết tliân Ý dĩ (Coixlachrỳma-ịobi L Poaceae) Nguyễn Quỳnh Chi*, Đỗ Văn Khái**, Nguyễn Thị Thu Hằng*, Nguyễn Thị Đông**, Phùng Thanh Hương* * Trường Đại học DượcHà Mội ** Trường Cao đẵng DượcHải Dương SUMMARY; Six compounds were isolated from the m ost active fraction (chloroform fraction) o f the Coix lachryrnal-jobi L stem The compounds were identified as stigmast-4-en-3-one, (i-sitosterol, stigmasterol, 4-hydroxybenzaldehyd and a d d isovơnilic by using com bination o f MS and NMR spectroscopy This is the first time these compounds are reported as the constituents ofC oix lachrym al-jobi L stem Từ k h ó a : acid isovanilic, Coix lachryma-jobi, (E)-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl) acrylate, 4-hydroxybenzaldehyd, ^-sitosterol, stigmast4-en-3-one, stigmasterol, hạ glucose huyết, Ỷdĩ Đặt vấn đề Ý dĩ m ột loài cỏ thường mọc hoang nơi ẩm mát vùng núi nước ta Ý dĩ thường thu hái chủ yếu để lấy hạt, phận khác, đặc biệt thân thường sử dụng Bên cạnh hạt Ý dĩ từ lâu sử dụng phổ biến vừa làm thực phẩm, vừa làm thuốc, m ột số nghiên cứu gần cho thấy phần thân có tác dụng hạ đường huyết rõ rệt chuột nhắt trắng gây đái tháo đường streptozocin Kết nghiên cứu cho thấy thân Ý dĩ m ột nguồn dược liệu có tiềm năng, đồng thời xác định số phân đoạn, phân đoạn chất chiết cloroform phân đoạn có tác dụng hạ đường huyết mạnh [8 ], Trong báo này, trình bày kết phân lập xác định cấu trúc m ột số hợp chất từ phân đoạn cloroform thân Ý dĩ Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu Thân Ý dĩ thu hái Đông Anh - Hà Nội vào tháng 10 năm 2009 Mẫu Bùi Hổng Quang - Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật định tên khoa học Coix lachryma-jobi L, họ Lúa (Poaceae) (Tiêu số VAT 5, lưu Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật) Dược liệu làm sạch, cất nhỏ, phơi, sấy khô Phương pháp nghiên cứu Phương pháp chiết xuất: dược liệu chiết xuất phương pháp ngâm lạnh với ethanol 80° Phân đoạn cloroform thu từ dịch chiết toàn phần phương pháp chiết lỏng - lỏng Phân lập chốt: sử dụng kỹ thuật sắc ký cột với chất nhồi cột silicagel kích thước hạt 40 - 60 |am (Merck), sắc ký lớp mỏng chế hóa phương pháp kết tinh iại Xác định câu trúc: cấu trúc hóa học chất phân lập xác định phổ khối (MS) đo máy 5989-MS phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) đo máy Bruker 500 MHz Viện hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Kết nghiên cứu Chiết xuất phân đoạn dịch chiết cloroform thân Ý dĩ Thân Ý dĩ (2 kg) chiết phương pháp ngâm lạnh với dung môi ethanol 80°, lẩn ngâm 48 giờ, lặp lại lần Gộp dịch chiết, cất thu hổi dung môi áp suất giảm, thu hỗn dịch đậm đặc Dịch chiết toàn phẩn sau loại chlorophyl m ột số tạp chất khác n-hexan chiết cloroform Gộp dịch chiết cloroform, loại nước 140 Nghiên CỨU duợc Thòng tlnthuổc SỐ4/2011 natri sulfat khan, cất thu hổi dung môi áp suất giảm thu 5,97 g cắn (0,33%) cắn cloroform sử dụng để nghiên cứu vể thành phần hóa học Phân lập chất từ phân đoạn cloroform Cắn cloroform phân tách sắc ký cột với chất nhồi cột silicagel, hệ dung môi rửa giải hỗn hợp dung môi n-hexan ethỵl acetat với tỷ lệ thay đổi từ n-hexan - ethylacetat (9:1) đến (1:1) Kiểm tra phân đoạn thu sắc ký lớp mỏng, quan sát mỏng ánh sáng tử ngoại hai bước sóng A = 254 n m , A = 366 nm sau phun thuốc thử vanilin/H^SO^ đặc, hơ nóng Kết thu 20 phân đoạn, phân đoạn 3,4, ,9,16 lựa chọn để tiếp tục tinh chế Các phân đoạn loại tạp phân tách tiếp kỹ thuật sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng chế hóa phương pháp kết tinh lại, thu lán lượt chất tinh khiết k ý h iệ u H ,H ,H ,H H ' Xác định cấu trúc chất phân lập Chất H I : Tinh thể hình kim màu vàng nhạt Phổ khối lượng HI cho pic ion phân tử [M+H]+ = 413 đơn vị khối, tương ứng với công thức phân tử Căn vào liệu phổ cộng hưởng từ 'HNMR, qua so sánh với liệu phổ công bố [1] cho phép sơ nhận dạng HI stigmast-4-en3 -o n e l 'H-NMR (500 MHz, CDCI3 ) õ (ppm) : 0,71 (3H, s, H-1 ) ; 0,82 (3H, d, J = Hz, H-27) ; 0,84 {3H, d, J = Hz, H-26) ; 0,85 (3H, t, J = 7,5 Hz, H-29) ; 0,92 (3H, d, J = Hz, H-21 ) ; 1,18 (3H, s, H-19) ; 5,73 (1H, s, H-4) Chất H2:Tinh thể hình kim màu trắng H2 dương tính với phản ứng Liebermann chứng tỏ H2 có cấu trúc steroid Sắc ký đổ H2, sau khai triển với hệ dung môi có độ phân cực khác cho m ột vết chất có màu tím sau phun thuốc thử vanilin/HjSO^ đặc hơ nóng Phổ 'H-NMR cho thấy chất H2 m ột hỗn hợp chất có khung cacbon tương tự với tỷ lệ 1:1 Kết hợp với liệu phổ '^C-NMR, so sánh với liệu phổ công bố [4,6] cho phép kết luận H2 hỗn hợp Ị3-sitosterol 2_và stigmasterol Dữ liệu phổ p-sitosterol ’ H-NMR (500 MHz, CDCI3 ) õ (ppm) : 0,70 (3H, s, H-18) ; 0,93 (3H, d, J = 6,4 Hz, H-21 ) ; 1,05 (3H, s, H-19) ; 3,54 (1H, m, H-3) ; 5,38 (1H, d, J = Hz, H-6 ) '3C-NMR (125 MHz, CDCụ õ (ppm) : 11,9 (C-18) ; 12,1 (C-29) ; 18,8 (C-21 ) ; 19,0 (C-27) ; 19,4 (C-19, C-26) ; 21,1 (C-11) ; 23,1 (C-28) ; 24,3 (C-15) ; 26,1 (C-23) ; 28,3 (C-16) ; 29,1 (C-25) ; 31,5 (C-7) ; 31,7 (C-2) ; 31,9 (C-8 ) ; 138,3 (C-22) ; 36,2 (C-20) ; 36,5 (C-10) ; 37,3 (C-1 ) ; 39,7 (C-12) ; 42,2 (C-4) ; 42,3 (C-13) ; 45,8 (C-24) ; 50,1 (C-9) ; 56,0 (C-17) ; 56,8 (C-14) ; 71,8 (C-3) ; 121,7 (C-6 ) ; 140,8 (C-5) Dữ liệu phổ stigmasterol ’ H-NMR (500 MHz, CDCI3 ) õ (ppm) : 0,70 (3H, s, H-18) ; 0,93 (3 H, d, J = 6,4 Hz, H-21 ) ; 1,05 (3 H, s, H-19) ; 3,54 (1 H, m, H-3) ; 5,03 (1 H, dd, J = 15 Hz ; 6,5 Hz, H-23) ; 5,18 (1 H, dd, J = 15 Hz ; 6,5 Hz, H-22) ; 5,38 (1 H, d,J = 4Hz, H-6 ) '^C-NMR (125 MHz, CDCI3 ) Ỗ (ppm) : 12,3 (C-18) ; 12,1 (C-29) ; 21,1 (C-26) ; 21,2 (C-27) ; 19,4 (C-19) ; 21,2 (C -n , C-21) ; 26,1 (C-28) ; 24,4 (C-15) ; 129,3 (C-23) ; 28,9 (C-16) ; 33,7 (C-25) ; 31,5 (C-7) ; 31,7 (C-2) ; 31,9 (C-8 ) ; 138,3 (C-22) ; 36,5 (C-10) ; 37,3 (C-1) ; 39,8 (C-12) ; 40,5 (C-20) ; 42,2 (C-4) ; 42,3 (C-13) ; 51,2 (C-24) ; 50,1 (C-9) ; 56,9 (C-14, C-17) ; 71,8 (C-3) ; 121,7 (C-6);140,8(C-5) Chất H3: Tinh thể hình kim không màu Phổ khối lượng H3 có pic ion phân tử [M+H]+ = 193 đơn vị khối, tương ứng với công thức phân tử Các dử liệu phổ 'H-NMR, '^C-NMR phổ hai chiểu HMBC cho phép kết luận H4 (E)-ethyl-3(4-hydroxỵphenyl) acrỵlat 1H-NMR (500 MHz, CDCI3 ) Ö (ppm) : 1,33 (3H, t, -CH3 ) ; 4,26 (2H, q, -CH;, 6,30 (1H, d, J = 16 Hz, H-2) ; 6,85 (2H, dd, J = 8,5 Hz ; Hz, H-3', H-5') ; 7,42 (2H, dd, J = 8,5 Hz ; Hz, H-2', H-6 ') ; 7,63 (1H, d, J = 16 Hz, H-2) ’ ^C-NMR (125 MHz, CDCI3 ) (ppm) : 14,3 (-CH3 ) ; 60.5 ( -c h ; ; 115,5 (C-2) ; 115,9 (C-3', C-5') ; 127,1 (C-1 ') ; 129,9 (C-2', C-6 ') ; 144,5 (C-3) ; 157,9 (C-4') ; 167,7 (C-1) _ Chất H4: Bột vô định hình màu trắng Phổ khối lượng H4 có pic ion phân tử [M+H]+ = 123 đơn vị khối, tương ứng với công thức phân tửC^H^O^ Các liệu phổ 'H-NMR phổ '^C-NMR cho phép kết luận H4 4-hydroxybenzaldehyd ’ H-NMR (500 MHz, CDCI3 ) ỗ (ppm) : 6,47 (IH , s, -OH) ; 6,98 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3, H-5) ; 7,82 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2, H-6 ) ; 9,86 (1H, s, -CHO) ’ ^C-NMR (125 MHz, CDCI3 ) (ppm) : 116,0 (C-3, C-5) ; 129,8 (C-1) ; 132,5 (C-2, C-6 ) ; 161,7 (C-4) ; 191,2 (-CHO) Chất H5: Tinh thể hình kim không màu Phổ khối lượng H5 có pic ion phân tử [M+H]+ = 169 đơn vị khối, tương ứng với công thức phân tử CjjHgO^ Các liệu phổ 'H-NMR, '^C-NMR phổ hai chiểu HMBC cho phép kết luận H5 acid 3-hydroxỵ-4methoxybenzoic ^H-NMR (500 MHz, CDCI3 ) ỗ (ppm); 3,81 (3H, s, -0 CH3 ) ; 6,72 (1H, dd, J = 8,5 Hz ; 2,5 Hz, H-6 ) ; 6,84 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2) ; 6,96 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5) ; 8,58 (1H, br s, -COOH) ” C-NMR (125 MHz, CDCụ ỗ (ppm) : 56,0 (-OCH3 ) ; 97,6 (C-5) ; 109,6 (C-2) ; 109,9 (C-6 ) ; 122,6 (C-1 ) ; 144,6 (C-3) ; 155,7 (-COOH) ; 156,2 (C-4) COOH stigm asterol tfinh Công thức clìốt phân lập từtháncổyỸ ( E ) -e th y l- - (4 -h y d ro x y p h e n y l) a c ry la t acid isovanilic Bàn luận Việc nghiên cứu thành phẩn hóa học thân Ý dĩ tiến hành theo định hướng tác dụng hạ glucose huyết Từ phân đoạn cloroform phân đoạn có tác dụng hạ glucose huyết mạnh nhất, phân lập xác định cấu trúc phytosterol (P-sitosterol, stigmasterol stigmast4-en-3-one), ester ((E)-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl) acrylat), acid thơm (acid isovanilic) aldehyd thơm (4-hydroxybenzaldehyd).Trongđóp-sitosterol stigmasterol phân lập dạng hỗn hợp Hai phytosterol khác có mặt liên kết đôi vị trí 22 - 23 stigmasterol Do có cấu trúc tương tự nên hai chất khó phân lập dạng tinh khiết [2] Bốn chất lại đểu hợp chất lần phân lập từ Ý dĩ Trong số chất phân lập, ba phytosterol đểu công bố tác dụng hạ đường huyết mô hình thực nghiệm Stigmast4-en-3-one có tác dụng hạ glucose huyết chó bình thường có tác dụng ức chế tăng glucose huyết test dung nạp glucose chó Hợp chất làm chậm hấp thu glucose, chê' tác dụng tương tự acarbose m ột chất ức chê' enzym a-glucosidase [1 ] Stigmasterol có tác dụng hạ glucose huyết thời làm tăng nồng độ insulin huyết tương chuột bình thường [7], p-sitosterol có tác dụng tương tự làm hạ glucose huyết làm tăng nồng độ insulin huyết tương chuột bình thường chuột tăng glucose huyết [5], p-sitosterol xác định có tác dụng ứcchếenzym a-amylase [3], Như tác dụng hạ đường huyết phân đoạn dịch chiết cloroform thân Ý dĩ thành phần phytosterol định Kết luận Từ phân đoạn chloroform phân đoạn có tác dụng hạ glucose huyết thân Ý dĩ phân lập xác định cấu trúc hợp chất : p-sitosterol, stigmasterol, stigmast-4-en-3-one, (E)ethỵl-3-(4-hydroxyphenyl) acrylate, acid isovanilíc 4-hydroxybenzaldehyd Đây hợp chất lần công bố có thân Ý dĩ TÀI LIỆU THAM KHẢO Alexander-Lindo R.L., Morrison E.Y.A., Nair M.G (2004), “Hypoglycemic effect o f stigmast-4-en-3-one and its corresponding alcohol from the bark of Anacardium occidentale (Cashew)", Phytotherapy Research, 18, pp 403 - 407 Fieser L.F., Fieser M (1962), Organic Chemistry 3"^ Ed ,w ú e y New York, pp 250-353 Fred - Jaiyesimi A.A., Wilkins M.R., Abo K.A (2009), "Hypoglyceamic and amylase inhibitory activities o f leaves o f Spondias mombin Linn", African Journal o f Medicine and Medical Sciences, 38 (4), pp 343-349 Huang L., Cao Y., Xu H., Chen G (2011), "Separation and purification of ergosterol and stigmasterol in Anoectochilusroxburghii(\Na\\) Lindl by high-speed counter-currentchrom atography", Journal o f separation science, 34, pp 385-392 Ivorra M.D., D'Ocon M.P., Paya M„ Villar A (1988), "Antihyperglycemic and insulin-releasing effects o f beta-sitosterol 3-beta-Dglucoside and its aglycone, beta-sitosterol", Archives Internationles de Pharmacodynamie et de Therapie, 295, pp.224-231 Nguyễn Thị Tuyết Nhung (2010), Tiếp tục nghiên cứu thành phán hóa học Xích nam ( ũerodendrum japonicum (Thunb.) Sweet, Verbenaceae, Khóa luận tố t nghiệp dược sỹ, Trường Đại học Dược Hà Nội Panda s., Jafri M., Kar A., Meheta B.K (2009), 'Thyroid inhibitory, antiperoxydative and hypoglycemic effects o f stigmasterol isolated from Butea monosperma", Fitoterapia, 80(2), pp 123 - 126 Phạm Văn Năm (2010), Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết phân đoạn sỹ, Trường Đại học Dược Hà Nội 142 Nghỉèn CỨU dưọc Thống tin thuoc ^Sỗ 4/2011 dịch chiết thân Ýd ị Khóa luận tố t nghiệp dược ... luận Việc nghiên cứu thành phẩn hóa học thân Ý dĩ tiến hành theo định hướng tác dụng hạ glucose huyết Từ phân đoạn cloroform phân đoạn có tác dụng hạ glucose huyết mạnh nhất, phân lập xác định cấu... định có tác dụng ứcchếenzym a-amylase [3], Như tác dụng hạ đường huyết phân đoạn dịch chiết cloroform thân Ý dĩ thành phần phytosterol định Kết luận Từ phân đoạn chloroform phân đoạn có tác dụng. .. vừa làm thuốc, m ột số nghiên cứu gần cho thấy phần thân có tác dụng hạ đường huyết rõ rệt chuột nhắt trắng gây đái tháo đường streptozocin Kết nghiên cứu cho thấy thân Ý dĩ m ột nguồn dược liệu