Đề tài này được thực hiện với mục đích tìm hiểu tác dụng chống oxi hóa, ức chế XO của cao chiết từ Diệp hạ châu và râu mèo trên chuột nhắt trắng. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
e (XO) có tác dụng xúc tác phản ứng oxi hóa xanthin thành uric acid, đồng thời hình thành gốc tự Ta sử dụng phương pháp trắc quang để khảo sát khả ức chế enzym XO mẫu thử thông qua mật độ quang sản phẩm acid uric hình thành Acid uric có bước sóng hấp thu cực đại 290nm Chất có khả ức chế XO cao ức chế hình thành uric acid, mật độ quang đo giảm Quy trình thử hoạt tính ức chế xanthin oxidasetheo bảng sau: Mẫu trắng tiến hành tương tự thay enzym mẫu thử đệm Mẫu chứng có dịch enzym khơng có mẫu thử mà thay đệm Sử dụng allopurinol làm chất đối chứng dương Đo mật độ quang bước sóng 290 nm liên tục phút 30 phút tính từ lúc cho xanthin vào cuvet Khả chống oxi hóa hợp chất tính dựa phần trăm ức chế (%I) xác định theo công thức: I% = (1 – Ac/As) x 100 Với: Ac giá trị mật độ quang dung dịch khơng có mẫu thử (control) As giá trị mật độ quang dung dịch có chứa mẫu thử (sample) 172 Mỗi nồng độ tiến hành lần, ứng với nồng độ ta tính giá trị phần trăm ức chế (%I) Lấy trung bình giá trị % I từ ta xác định giá trị phần trăm ức chế ứng với nồng độ khảo sát Mỗi mẫu thử pha thành bốn nồng độ khác nhau: 100;50;25;10μM Nếu hoạt tính mẫu thử ức chế 50%ở 10 μM thử tiếp nồng độ nhỏ 5;2;1;0,5;0,2μM để tìm giá trị IC50 Giá trị IC50 μg/ml (nồng độ có khả ức chế 50%) mẫu tính dựa đồ thị hồi quy tương quan nồng độ (Cpư) khả ức chế (I%) Khả ức chế peroxi hóa lipid.(2, 1) Xác định khả ức chế peroxi hóa lipid mẫu nghiên cứu qua việc xác định hàm lượng MDA, sản phẩm q trình peroxi hóa lipid màng tế bào MDA có khả phản ứng với acid thiobarbituric để tạo thành phức hợp trimethin có đỉnh hấp thu cực đại λ = 532 nm 0,1ml mẫu thử nồng độ thử nghiệm cho phản ứng với 0,5 ml dịch đồng thể não đệm phosphate 50 mM vừa đủ ml Ủ hỗn hợp phản ứng 370C 15 phút dừng phản ứng ml acid tricloacetic 10% Sau ly tâm lấy dịch cho phản ứng với ml acid thiobarbituric 0,8% 15 phút nhiệt độ 1000C Làm lạnh tiến hành đo quang bước sóng λ = 532 nm Trolox (Calbiochem Ltd Co.), đồng phân vitamin E dùng làm chất đối chiếu Cơng thức tính phần trăm (%) hoạt tính chống oxi hóa (HTCO): (ODC − ODT ) × 100 ODC HTCO (%) = ODC: Mật độ quang mẫu đối chứng (DMSO) ODT: Mật độ quang mẫu thử Các số liệu kết thử nghiệm biểu thị trị số trung bình lần đo khác Cách tính IC50: Vẽ đồ thị biểu diễn tỷ lệ % Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học khả dập tắt gốc tự chất cần thử nghiệm phần mềm Excel Từ đồ thị, nội suy giá trị nồng độ dập tắt gốc tự IC50 cách tính phương trình hồi quy tuyến tính có dạng y = ax + b y = 50 để suy IC50 KẾT QUẢ Phương pháp xử lý số liệu thống kê thực nghiệm Thuốc đối chiếu allopurinol có khả ức chế XO nồng độ thấp cho kết IC50 = 0,063 μg/ml Cả công thức phối hợp thể tác dụng ức chế XO, thứ tự khả ức chế giảm dần là: 4DHC:1RM >3DHC:1RM > 2DHC:1RM > 1DHC:2RM > 1DHC:3RM > 2DHC:5RM > 1DHC:4RM > 1DHC:1RM Trong đó, cơng thức phối hợp 4DHC:1RM, 3DHC:1RM, 2DHC:1RM có khả ức chế XO mạnh cao độc vị Diệp hạ châu cao độc vị Râu mèo Dùng phần mềm Stata 10.0 để tính giá trị thống kê mơ tả: số trung bình, độ lệch chuẩn Ứng dụng phép kiểm t – Student độc lập để so sánh số trung bình lô khác thời điểm Ứng dụng phép kiểm one way Anova để đánh giá khác biệt trị số acid uric lô thử nghiệm thời điểm Tác dụng ức chế xanthin oxidase tỷ lệ phối hợp Diệp hạ châu – Râu mèo khác Bảng 1: Kết thử hoạt tính ức chế xanthin oxidase STT 10 11 Tên mẫu 4DHC:1RM 3DHC:1RM 2DHC:1RM DHC RM 1DHC:2RM 1DHC:3RM 3DHC:2RM 2DHC:5RM 1DHC:4RM 1DHC:1RM allopurinol 100 (µg/mL) 71,0 ± 1,5 61,2 ± 2,9 63,3 ± 1,8 69,05 ± 0,80 57,2 ± 2,2 43,80 ± 0,97 40,97 ± 1,8 32,8 ± 1,5 32,0 ± 2,2 30,38 ± 0,39 30,09 ± 0,61 Phần trăm ức chế 50 (µg/mL) 25 (µg/mL) 52,2 ± 3,5 43,23 ± 0,45 41,6 ± 1,4 21,84 ± 0,78 34,61 ± 0,99 24,1 ± 1,4 48,6 ± 1,9 33,9 ± 2,6 30,7 ± 1,3 5,9 ± 2,2 35,04 ± 0,81 19,0 ± 3,0 20,95 ± 0,82 6,6 ± 1,6 15,3 ± 2,0 2,9 ± 2,3 24,2 ± 2,5 18,9 ± 1,6 18,7 ± 2,1 9,8 ± 1,9 17,1 ± 2,7 6,1 ± 3,5 Khả ức chế peroxi hóa lipid Bảng Kết thử test MDA tỷ lệ phối hợp cao chiết Diệp hạ châu Râu mèo HTCO (%) Nồng độ 1DHC:1R 2DHC:1R 3DHC:1R 4DHC:1R 5DHC:1R (µg/ml) M M M M M 2000 91,30 86,72 86,26 84,96 75,88 1000 91,30 80,38 79,01 76,64 76,18 500 90,46 73,82 67,63 65,80 62,82 250 89,16 53,59 57,71 63,36 54,96 100 82,37 30,76 53,82 56,34 45,50 50 66,79 20,38 48,24 46,49 40,23 10 32,52 5,73 24,35 27,02 16,56 Cả tỷ lệ phối hợp Diệp hạ châu – Râu mèo nghiên cứu thể hoạt tính ức chế peroxi hóa lipid tăng theo nồng độ Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 10 (µg/mL) 16,7 ± 2,7 8,76 ± 0,59 9,6 ± 4,3 19,7 ± 1,9 2,31 ± 0,81 9,4 ± 1,9 5,2 ± 2,3 3,6 ± 2,9 - IC50 (µg/mL) 43,83 71,36 76,81 84,46 87,65 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 0,063 khảo sát Trong đó, nhìn sơ cho thấy tỷ lệ phối hợp phần cao đặc diệp hạ châu phần cao khô râu mèo cho hiệu ức chế tối ưu Tỷ lệ phối hợp đạt hoạt tính chống oxi hố nồng độ 50μg/ml 66,79% tương đương với hoạt tính trolox nồng độ 5mM (63,49%) Bảng Kết thử mẫu đối chiếu Nồng độ (mM) 0,1 0,5 10 Trolox/MDA OD 0,529 0,445 0,376 0,203 0,124 HTCO% 4,86 19,96 32,37 63,49 77,70 173 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 BÀNLUẬN KẾT LUẬN Khả ức chế xanthin oxidase Từ kết thu từ thực nghiệm, rút kết luận sau Theo bảng kết thử hoạt tính ức chế XO cho thấy, diệp hạ châu ức chế XO nhiều râu mèo kết hợp Diệp hạ châu Râu mèo theo tỷ lệ 4:1 khả ức chế XO lại lớn gấp đôi so với độc vị Diệp hạ châu Mặc dù khả ức chế XO cao chiết phối hợp Diệp hạ châu + Râu mèo tỷ lệ 4:1 nhỏ nhiều so với allopurinol tác dụng hạ acid uric máu cao chiết phối hợp Diệp hạ châu + Râu mèo lại không khác biệt so với allopurinol Điều chứng tỏ khả ức chế XO, cao chiết phối hợp Diệp hạ châu + Râu mèo có tác dụng tăng thải acid uric làm tiêu uric acid Khả ức chế peroxi hóa lipid Kết thử nghiệm cho thấy tỷ lệ phối hợp diệp hạ châu râu mèo thử nghiệm thể khả ức chế tạo MDA rõ đặc biệt tỷ lệ phối hợp phần cao đặc Diệp hạ châu phần cao khô Râu mèo 174 Tỷ lệ phối hợp phần cao đặc Diệp hạ châu phần Râu mèo thể khả ức chế xanthin oxidase in vitro mạnh Cao chiết phối hợp Diệp hạ châu – Râu mèo thể khả ức chế tạo MDA in vitro rõ TÀI LIỆU THAM KHẢO Antolovich M, Prenzler PD, Patsalides E, McDonald S and Robards K (2002) “Methods for testing antioxidant activity”, Analyst, vol 127, pp 183-198 Bộ Y Tế, Viện Dược Liệu (2006) Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 279 - 293 Mai Thanh Thi Nguyen, Suresh Awale, Yasuhiro Tezuka, Liying Shi (2005) “Hypouricemic Effects of Acacetin and 4,5-ODicaffeoylquinic Acid Methyl Ester on Serum Acid uric Levels in Potassium Oxonat – Pretreated Rats”, Biologycal and pharmaceutical Bulletin, pp 2231 – 2234 Ngày nhận báo: 28/09/2013 Ngày phản biện nhận xét báo: 10/10/2013, 15/10/2013 Ngày báo đăng: 02/01/2014 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền ... phần cao đặc Diệp hạ châu phần cao khô Râu mèo 174 Tỷ lệ phối hợp phần cao đặc Diệp hạ châu phần Râu mèo thể khả ức chế xanthin oxidase in vitro mạnh Cao chiết phối hợp Diệp hạ châu – Râu mèo. .. độc vị Diệp hạ châu Mặc dù khả ức chế XO cao chiết phối hợp Diệp hạ châu + Râu mèo tỷ lệ 4:1 nhỏ nhiều so với allopurinol tác dụng hạ acid uric máu cao chiết phối hợp Diệp hạ châu + Râu mèo lại... XO, cao chiết phối hợp Diệp hạ châu + Râu mèo có tác dụng tăng thải acid uric làm tiêu uric acid Khả ức chế peroxi hóa lipid Kết thử nghiệm cho thấy tỷ lệ phối hợp diệp hạ châu râu mèo thử nghiệm