TỔNG QUAN đặc TÍNH kỹ THUẬT của dấu ấn MIỄN DỊCH HER 2HER 2 NEW

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ THẢO TỔNG QUAN ĐẶC TÍNH KỸ THUẬT CỦA DẤU ẤN MIỄN DỊCH HER-2/HER-2 NEW KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2014 – 2018 HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ THẢO TỔNG QUAN ĐẶC TÍNH KỸ THUẬT CỦA DẤU ẤN MIỄN DỊCH HER-2/HER-2 NEW KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2014 – 2018 Người hướng dẫn khoa học: ThS Nguyễn Hữu Quốc TS Hoàng Trung Kiên HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin chân thành lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, Phịng Đào tạo Đại học, Bộ mơn Giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội phòng ban chứng tạo điều kiện, giúp đỡ em suốt thời gian làm khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ThS Nguyễn Hữu Quốc, Bộ môn Giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội, người thầy tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ em kiến thức chun mơn kỹ thực hành để hồn thành tốt khóa luận Thầy người truyền cảm hứng chia sẻ nhiều kinh nghiệm quý báu giúp em thêm yêu thích chuyên ngành xét nghiệm Giải phẫu bệnh Em xin chân thành cảm ơn TS Hoàng Trung Kiên, Ban Tổ chức Trung ương Đảng, thầy giúp đỡ, bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình làm khóa luận Với lịng thành kính, em xin cảm ơn thầy cô, cán kỹ thuật Bộ môn Giải phẫu bệnh giúp đỡ, bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi để em học tập, rèn luyện kỹ hoàn thành khóa luận Cuối vơ biết ơn bố mẹ, người thân ủng hộ Cảm ơn người bạn bên cạnh động viên, giúp đỡ chỗ dựa tinh thần vững giúp vượt qua khó khăn để hồn thành tốt cơng việc học tập Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2018 Đỗ Thị Thảo LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các nội dung nêu Tổng quan trung thực chưa công bố cơng trình khoa học Đỗ Thị Thảo DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BN BV DAB PBS GPB HMMD KKT KN KN - KT KT TBS KHV : Bệnh nhân : Bệnh viện : 3,3-diaminobenziden tetrahydrochlorid : Phosphat buffer saline : Giải phẫu bệnh : Hóa mô miễn dịch (Immunohistochemistry) : Kháng kháng thể : Kháng nguyên : Kháng nguyên - Kháng thể : Kháng thể : Tris Buffer Saline : Kính hiển vi MỤC LỤC Lời cảm ơn Lời cam đoan Danh mục chữ viết tắt Danh mục hình vẽ Contents DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 2.1 Phương pháp Hóa mơ miễn dịch trực tiếp 13 2.2 Phương pháp nhuộm HMMD theo kỹ thuật EPOS 14 2.3 Phương pháp nhuộm HMMD gián tiếp 15 2.4 Kỹ thuật nhuộm gián tiếp 16 2.5 Kỹ thuật Peroxidase anti peroxidase (PAP) 17 2.6 Kỹ thuật Aviddin-Biotin Streptavidin – biotin 18 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, kèm với phát triển kinh tế gia tăng mạnh mẽ ung thư, tạo nên gánh n ặng lớn cho xã h ội Bệnh có xu hướng trẻ hóa, gặp nhiều bệnh nhân với độ tuổi, nghề nghiệp khác Có 360.000 trường hợp ung th m ới Anh m ỗi năm, tức gần 990 ngày (2013-2015) đó, năm 2015 có khoảng 177.000 ca ung thư nữ Ở nữ giới Anh, ung th vú nguyên nhân thứ hai gây tử vong ung thư, với khoảng 11.400 ca t vong vào năm 2014 [1] Để chẩn đốn xác ung thư nói chung, ung thư nữ giới nói riêng, không kể đến xét nghiệm Giải phẫu bệnh tiêu chuẩn vàng ch ẩn đốn ung thư bệnh nhiễm khuẩn Có nhiều kỹ thuật đ ược đ ời ph ục vụ cho chẩn đoán ung thư vú, dày, buồng tr ứng… đặc biệt ph ải nói tới kỹ thuật nhuộm Hóa mơ miễn dịch Việc phát sớm ch ẩn đốn xác gen gây đột biến mang tính định tiên l ượng điều trị bệnh Trong nhuộm Hóa mơ miễn dịch, người ta sử dụng nhiều loại marker khác để làm dấu ấn phát cho nhiều loại ung th khác Marker HER-2 định nhiều trường hợp, ph ổ biến bệnh nhân nghi ngờ ung thư vú, dày, hay buồng tr ứng HER-2 (human epidermal growth factor receptor 2) gen đóng vai trị quan trọng q trình phát triển ung th vú Nhuộm Hóa mơ miễn dịch kỹ thuật phức tạp, chịu ảnh h ưởng c nhiều yếu tố, đòi hỏi phải tiến hành xác tỉ m ỉ t ất c ả bước thực [2] Ngay từ khâu bắt đầu cố định có định lớn đến kết cố định hỏng sửa ch ữa đ ược [3] Tiếp đến q trình chuyển, đúc tạo khn cắt mảnh bệnh ph ẩm, chuyển không tốt làm biến đổi tính chất mơ gây sai l ạc k ết qu ả V ấn đề quan trọng nhuộm mô, từ giai đoạn bộc lộ kháng nguyên, đến phủ kháng thể hay chất màu có lỗi xảy làm cho mơ nhuộm khơng đẹp Vậy q trình nhuộm Hóa mơ miễn dịch nói chung, với marker HER-2 nói riêng, cần ý điều để đảm bảo lam tiêu chất lượng đến tay nhà Gi ải phẫu bệnh Để góp phần tìm hiểu củng cố thêm kiến th ức nh kỹ đánh giá, xử lý số tình bất th ường nhu ộm Hóa mơ miễn dịch với marker HER-2, tơi xin trình bày Tổng quan tài li ệu v ề “Tổng quan đặc tính kỹ thuật dấu ấn HER-2/HER-2 new” Tổng quan bao gồm nội dung sau: Khái qt kỹ thuật nhuộm Hóa mơ miễn dịch vấn đề liên quan Mô tả đánh giá q trình nhuộm Hóa mơ miễn d ịch marker HER-2 số trung tâm TỔNG QUAN I TỔNG QUAN VỀ HĨA MƠ MIỄN DỊCH Khái niệm Hóa mơ miễn dịch (HMMD) Hóa mô miễn dịch (Immunohistochemistry, viết tắt HMMD) phương pháp xác định vị trí kháng nguyên (KN) đặc hiệu diện mô tế bào (bào tương, màng tế bào, nhân) dựa phản ứng miễn dịch (kháng nguyên - kháng thể) kết hợp với hóa chất [4] Vì KN khơng thể quan sát hình thái nên người ta phải xác định có mặt tế bào phản ứng miễn dịch hóa học Các vị trí gắn kháng thể (KT) xác định cách đánh dấu trực tiếp lên KT, cách sử dụng phương pháp đánh dấu phụ [5] Lịch sử hình thành phát triển kỹ thuật nhuộm HMMD Với lịch sử 70 năm, HMMD có ảnh hưởng to lớn chẩn đoán Giải phẫu bệnh (GPB), nh ững kỹ thu ật phát triển trở thành thường quy đa số phòng xét nghiệm GPB nước phát triển Các nguyên tắc HMMD biết đến t nh ững năm 1930, tới năm 1941 nghiên cứu HMMD m ới đ ược công bố Albert H Coons - người có ảnh h ưởng quan tr ọng s ự phát triển kỹ thuật kháng thể gắn huỳnh quang Kỹ thu ật h ữu dụng số chẩn đoán phát độc tố vi khu ẩn bệnh nhiễm trùng, song cần phải có kính hiển vi huỳnh quang khó thể chi tiết hình thái học tế bào gắn [6] Những thành công bước đầu HMMD thúc đẩy nhà gi ải phẫu bệnh tiếp tục tìm phương pháp để tránh nh ững h ạn - Lắp block chứng vào máy tiến hành cắt mảnh với độ dày 3-5 µm tương tự mảnh bệnh phẩm, vớt mảnh chứng bên cạnh mảnh bệnh phẩm lam kính - Ghi tên marker mã số bệnh nhân - Để tiêu tủ ấm qua đêm nhiệt độ 37 0C 560C đến 2h Tẩy paraffin: nhúng tiêu qua bể xylen, bể cồn 95 0C, bể cồn 1000C, bể phút Rửa nước chảy phút - Bộc lộ KN nồi áp suất sử dụng Epitope Retrieval Solution (10x) 95-990C 40 phút - Khử enzyme peroxidase nội sinh Peroxidase-Blocking phút - Phủ KT1: KT1 kháng thể HER-2 đa dòng từ thỏ, ủ KT1 30 phút - Phủ KT2 (HRP-labeled polymer) 30 phút KT2 HRP enzyme gắn phân tử dextran - Phủ chất màu DAB (chromogenic substrate) 10 phút - Nhuộm nhân Hematoxcylin Mayer Automated Link Platforms, Code SK308 Dako Autostainer/ Autostainer Plus, Code S3301 - Rửa nước, làm gắn bome Hình 3.1: Quy trình nhuộm HMMD theo kit HercepTestTM hãng Dako Kết nhuộm dấu ấn HER-2 số tiêu Dako đưa hướng dẫn cho điểm kết quả, có bệnh nhân ung th vú xâm lấn nên tính điểm Trong trường hợp mắc ung th ch ỗ xâm lấn ung thư mẫu bệnh phẩm, m ẫu mơ có thành phần xâm lấn nên tính điểm Kết tính điểm Mức độ biểu protein HER-2 Âm tính 1+ Âm tính 2+ Dương tính yếu 3+ Dương tính Mẫu mơ nhuộm Khơng thấy vết nhuộm, màng TB quan sát thấy trong, 10% tế bào khối u Các tế bào biểu nhuộm màng không đầy đủ Tỉ lệ mờ màng tế bào yếu đến vừa phải quan sát thấy > 10% tế bào khối u Sự nhuộm màng hoàn toàn mạnh mẽ quan sát thấy > 10% tế bào khối u Hình 3.1: Các mức độ biểu HER-2 mô vú (HercepTest Interpretation Manual – Breast Cancer of Dako) U nguồn gốc U di Hình 3.2 : Ung thư di não với HER-2 dương tính 2+ [40] Các mẫu khối u vú (trái) di (phải), cho biết môi tr ường não làm thay đổi tế bào ung thư Hình 3.3 : Ung thư buồng trứng với HER-2 [41] Hình 3.4: Ung thư dày với HER-2 dương tính 3+ [42] Hình 3.4 thể ung thư dày với khuếch đại HER-2, bi ểu mức thường biểu phản ứng bên bên cạnh với với ung thư vú mở rộng HER-2 thể phản ứng màng dương hoàn tồn IV KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG TRONG HĨA MƠ MIỄN DỊCH Vai trò chứng dương, chứng âm * Chứng dương: Mô chứng dương mẫu mô bi ết ch ắc ch ắn có kháng ngun cần tìm (hay nói cách khác bi ết ch ắc ch ắn d ương tính), đ ược nhu ộm giống với mô BN tất b ước Mô ch ứng d ương có th ể mơ nội sinh ngoại sinh V ới m ỗi marker c ần m ột mô ch ứng dương, thường cắt dán mảnh m ột lam kính v ới mô BN để thuận lợi nhuộm ti ết ki ệm hóa ch ất, đ ảm b ảo r ằng mô chứng mô bệnh nhân đ ược th ực hi ện ều ki ện gi ống Đối với marker HER-2 mô ch ứng d ương có th ể dùng mơ c bệnh nhân có ung th vú, ung th d dày, hay ung th bu ồng tr ứng… Mơ cho dương tính tế bào u bắt màu nâu đỏ lan tỏa tỏa màng tế bào Bất kì trường hợp bắt màu với nhân tế bào ho ặc b màu yếu với bào tương rải rác số tế bào u đánh giá ph ản ứng âm tính Nếu mơ bệnh nhân cho phản ứng âm tính chắn âm tính thật với đảm bảo mô chứng dương mô BN thực điều kiện giống khơng xảy sai sót khâu chuẩn bị mô BN (cố định, chuyển đúc, cắt) Nếu chứng dương cho phản ứng âm tính kết nhuộm mơ BN khơng chấp nhận dù âm tính hay dương tính * Chứng âm: Chứng âm mẫu mô biết chắn âm tính nhuộm HMMD Có loại chứng âm: - Tiêu cắt mẫu mô biết chắn khơng chứa KN cần tìm, ta lấy vùng lành mô BN (n ội sinh) ho ặc mô khác (ngoại sinh) Mẫu mô nhuộm t ương t ự nh mơ bệnh nhân dán mảnh tiêu v ới mô bệnh nhân - Hai tiêu đ ượ c c m ột mô b ệnh nhân, đ ược ti ến hành nhuộm gi ống nh ưng m ột tiêu b ản đ ược ph ủ KT1, Khi mô chứng âm cho phản ứng âm tính ch ứng tỏ KT1 có đ ộ đ ặc hiệu cao mơ BN cho phản ứng dương tính d ương tính thật Khi mơ chứng âm cho phản ứng dương tính dù mơ BN cho ph ản ứng dương tính hay âm tính khơng có giá trị Một số yếu tố ảnh hưởng tới chất lượng tiêu nhuộm Các bước thực Lấy bệnh phẩm Cố định - Chuyển đúc - Cắt dán mảnh bệnh phẩm - Các lỗi gặp Lấy bệnh phẩm không đạt yêu cầu BP không cố định sau lấy Chất cố định khơng thích hợp BP pha dày, làm giập nát BP Thời gian cố định không đủ, chất cố định không đủ thể tích khơng đủ nồng độ Thời gian cố định q dài Hóa chất chuyển khơng đảm bảo chất lượng, số lượng Thời gian chuyển không phù hợp với loại bệnh phẩm Khơng định hướng tốt bệnh phẩm, đúc chìm, block gắn kết không chặt chẽ Mảnh cắt không đại diện tốt cho mẫu mô Tiêu bị gấp, nhăn, xước, rách, dày mỏng - Tẩy paraffin - - Bộc lộ kháng nguyên - Chưa khử hết enzyme nội sinh - Viết bút mỡ - - - Pha, phủ ủ KT1 - Rửa TBS - không Tiêu bị bong Mô bị rạn, tan chảy Khoảng cách mô bệnh mô chứng cách xa Tiêu sau cắt để lâu nhuộm Không gây che lấp kháng nguyên, KT khó gắn kết vào KN gây âm tính giả Dung dịch bộc lộ khơng đảm bảo: không tỷ lệ, hết hạn sử dụng, tái sử dụng nhiều lần Thời gian bộc lộ ngắn gây âm tính giả dài gây tiêu bị Nhiệt độ bộc lộ cao thấp Gây dương tính giả Tiêu bị Để bút mỡ tràn vào mô, cản trở KT1 gắn vào KN gây âm tính giả Viết bút mỡ sát mô, nhỏ KT không lan hết phần mô bệnh phẩm, lam tiêu lên dương tính khơng Pha lỗng khơng tỉ lệ KT, dung dịch pha lỗng KT hết hạn sử dụng bị hỏng (do bảo quản không kỹ thao tác kỹ thuật viên) Thời gian ủ KT ngắn không đủ cho phản ứng xảy gây âm tính giả, thời gian dài gây dương tính giả Nhiệt độ ủ cao hay thấp Không đủ độ ẩm q trình ủ: tiêu bị khơ Lắc khơng gây lắng đọng KT quanh viền mô Nhỏ nhầm KT, gây kết sai lệch Nước buồng ủ tràn vào làm tiêu ủ trình lắc gây pha lỗng KT Dung dịch rửa khơng pha tỉ lệ, pH không Rửa thời gian ngắn tiêu không - Phủ ủ KT2 - Phủ DAB - Nhuộm nhân Gắn bome - Dán nhãn - KT hết hạn sử dụng bị hỏng (do bảo quản không kỹ thao tác kỹ thuật viên) Thời gian ủ KT ngắn không đủ cho phản ứng xảy gây âm tính giả, thời gian dài gây dương tính giả Nhiệt độ ủ cao hay thấp Không đủ độ ẩm q trình ủ: tiêu bị khơ Lắc không gây lắng đọng KT quanh viền mô Pha DAB không tỉ lệ DAB hết hạn sử dụng bảo quản không hợp lý Phủ DAB: thời gian ngắn dài Nhuộm nhân nhạt tương phản màu, đậm làm che lấp số kháng nguyên nhân dương tính yếu Thừa thiếu bome Có bọt khí, bọt nước Dán nhãn nhầm tên marker Dán nhãn nhầm mã bệnh phẩm HMMD xét nghiệm có độ nhạy, độ đặc hiệu cao, phụ thuộc nhiều yếu tố xung quanh Từ hóa chất, sinh phẩm, cho t ới kỹ thuật viên đòi hỏi trọn vẹn Trong trình nhuộm, kỹ thuật viên phải đảm bảo kiểm soát tất bước nhuộm , nhỏ dung dịch cần nhỏ, để thời gian quy định , quan trọng đảm bảo nắm vững kiến thức nhuộm HMMD KẾT LUẬN Phương pháp nhuộm HMMD cho phép nhà Giải phẫu bệnh quan sát đánh giá hai phương diện: hình thái học miễn dịch học tế bào mô u góp phần cải thiện chẩn đốn, phân loại, điều trị tiên lượng bệnh Tuy nhiên, để ứng dụng HMMD vào chẩn đoán ung thư xét nghiệm thường quy cần phịng xét nghiệm phải có quy trình chuẩn, với c ác trang thiết bị đầy đủ phục vụ cho q trình nhuộm Kỹ thuật nhuộm HMMD thực máy hay thủ công, cốt yếu cần có nguồn cung cấp hóa chất ổn định, chất lượng, đáng tin cậy Đối với nhuộm thủ cơng người thực kỹ thuật có vai trò quan trọng, cần phải đào tạo Để tang thêm tính tin cậy, có thể, lần nhuộm nên nhuộm mẫu mô chứng kèm theo để kiểm soát chất lượng Hiện nay, việc xác định mức độ biểu dấu ấn HER-2 ngày phổ biến Mức độ biểu có dấu ấn có ý nghĩa quan trọng tiên lượng điều trị bệnh, trường hợp ung thư vú, dày, buồng trứng… Có nhiều phương pháp để xác định đột biến mức độ biểu HER-2, nhiên xét nghiệm HMMD thường lựa chọn để thay phương pháp sinh học phân tử có độ nhạy, độ đặc hiệu cao tương đương với phương pháp sinh học phân tử; quan sát hình thái tế bào, cho kết nhanh Kỹ thuật nhuộm HMMD không đòi hỏi trang thiết bị đại, phòng xét nghiệm Giải phẫu bệnh triển khai kỹ thuật có nguồn nhân lực tốt Ngồi ra, nhuộm dấu ấn HER-2 việc ủ KT1 qua đêm 40C cho kết tốt so với ủ 30 phút nhiệt độ phòng TÀI LIỆU THAM KHẢO (2015) Cancer incidence statistics Cancer Research UK, , accessed: 28/03/2018 Đoàn Thị Ngọc Thúy (2014) Kỹ thuật nhuộm Hóa mơ miễn dịch chuẩn đốn mơ bệnh học Bộ mơn Giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội (2013), Giải phẫu bệnh vi thể lâm sàng, Nhà xuất Y học, Hà Nội Hứa Thị Ngọc Hà (2015), Bài giảng chứng sinh học phân tử: Hóa mơ miễn dịch, Kim Suvarna, Christopher Layton and John Bancroft (2012) Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques - 7th Edition 381–426 Nakane P.K Pierce G.B (1966) Enzyme-labeled antibodies: preparation and application for the localization of antigens J Histochem Cytochem Off J Histochem Soc, 14(12), 929–931 P.K.Nakane, G.B.Pierce (1966) Enzyme-labeled antibodies: preparation and application for the localization of antigens 929–931 Sternberger L.A., Hardy P.H., Cuculis J.J cộng (1970) The unlabeled antibody enzyme method of immunohistochemistry: preparation and properties of soluble antigen-antibody complex (horseradish peroxidase-antihorseradish peroxidase) and its use in identification of spirochetes J Histochem Cytochem Off J Histochem Soc, 18(5), 315–333 Hsu S.M., Raine L., Fanger H (1981) Use of avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques: a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures J Histochem Cytochem Off J Histochem Soc, 29(4), 577–580 10 Huang S.N., Minassian H., More J.D (1976) Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Lab Investig J Tech Methods Pathol, 35(4), 383–390 11 Nguyễn Tiến Lượng (2017), Tổng quan phương pháp bộc lộ kháng nguyên kỹ thuật nhuộm Hóa mơ miễn dịch, Y Hà Nội, Hà Nội 12 Lê Thị Phượng (2017), Tổng quan phương pháp Hóa mơ miễn dịch với dấu ấn BRAF, Y Hà Nội 13 Phạm Nguyên Cường (2014), Nghiên cứu phân loại mô bệnh học ung thư biểu mô phổi theo WHO 2004 IASLC/ATS/ERS 2011 có sử dụng dấu ấn hóa mơ miễn dịch, Y Hà Nội, Hà Nội 14 Nguyễn Kim Bình, Trương Nam Chi, Nguyễn Phúc Cương cộng (2001) Báo cáo khoa học kết thử nghiệm nhuộm hóa mô miễn dịch bệnh viện Việt Đức từ tháng 10/2000 - 4/2001 Hà Nội 15 Hứa Thị Ngọc Hà Huỳnh Ngọc Linh (2002) Ứng dụng kỹ thuật hóa mơ miễn dịch chẩn đốn giải phẫu bệnh Tập huấn ứng dụng hóa mơ miễn dịch chẩn đoán Giải phẫu bệnh, 143-154 16 Nguyễn Văn Duy (2014), Quy trình sản xuất kháng thể đơn dịng, ưu nhược điểm, Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên 17 Bộ Y tế (2011) Sinh lý bệnh miễn dịch (Phần miễn dịch học) Nhà xuất Y học, Hà Nội 18 Köhler G Milstein C (1976) Derivation of specific antibodyproducing tissue culture and tumor lines by cell fusion Eur J Immunol, 6(7), 511–519 19 Ramos-Vara J.A (2005) Technical aspects of immunohistochemistry Vet Pathol, 42(4), 405–426 20 Graham R.C Karnovsky M.J (1966) The early stages of absorption of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney: ultrastructural cytochemistry by a new technique J Histochem Cytochem Off J Histochem Soc, 14(4), 291–302 21 Graham R.C., Lundholm U., Karnovsky M.J (1965) Cytochemical Demonstration of Peroxidase Activity with 3-Amino-9Ethylcarbazole J Histochem Cytochem Off J Histochem Soc, 13, 150–152 22 Kaplow I.S (1975) Letter: Substitute for benzidine in myeloperoxidase stains Am J Clin Pathol, 63(3), 451 23 Nakane P.K (1968) Simultaneous localization of multiple tissue antigens using the peroxidase-labeled antibody method: a study on pituitary glands of the rat J Histochem Cytochem Off J Histochem Soc, 16(9), 557–560 24 Taylor C.R Burns J (1974) The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin-containing cells in formalin-fixed, paraffinembedded tissues using peroxidase-labelled antibody J Clin Pathol, 27(1), 14–20 25 Mohan K.H., Pai S., Rao R cộng (2008) Techniques of immunofluorescence and their significance Indian J Dermatol Venereol Leprol, 74(4), 415–419 26 Holgate C.S., Jackson P., Lauder I cộng (1983) Surface membrane staining of immunoglobulins in paraffin sections of non-Hodgkin’s lymphomas using immunogold-silver staining technique J Clin Pathol, 36(7), 742–746 27 Roth J (1982) Applications of immunocolloids in light microscopy Preparation of protein A-silver and protein A-gold complexes and their application for localization of single and multiple antigens in paraffin sections J Histochem Cytochem Off J Histochem Soc, 30(7), 691–696 28 Hứa Thị Ngọc Hà (2014), Hóa mơ miễn dịch chẩn đoán tiên lượng điều trị bệnh, Nhà xuất Y học, Hồ Chí Minh 29 Ross J.S Fletcher J.A (1998) The HER-2/neu oncogene in breast cancer: prognostic factor, predictive factor, and target for therapy Stem Cells Dayt Ohio, 16(6), 413–428 30 Breast Cancer Health Center (2014), Types of Breast Cancer: ER Positive, HER2 Positive, and Triple Negative, 31 Ross J.S., Fletcher J.A., Linette G.P cộng (2003) The Her-2/neu gene and protein in breast cancer 2003: biomarker and target of therapy The Oncologist, 8(4), 307–325 32 Slamon D.J Clark G.M (1988) Amplification of c-erbB-2 and aggressive human breast tumors? Science, 240(4860), 1795–1798 33 Lupu R., Cardillo M., Harris L cộng (1995) Interaction between erbB-receptors and heregulin in breast cancer tumor progression and drug resistance Semin Cancer Biol, 6(3), 135–145 34 Depowski P.L., Brien T.P., Sheehan C.E cộng (1999) Prognostic significance of overexpression, p34cdc2 and cyclin-dependent HER-2/neu gene kinase amplification and MIB1 detected by fluorescence in situ hybridization in breast cancer Am J Clin Pathol, 112(4), 459–469 35 Slamon D.J., Clark G.M., Wong S.G cộng (1987) Human breast cancer: correlation of relapse and survival with amplification of the HER2/neu oncogene Science, 235(4785), 177–182 36 Monteiro I de P.C., Madureira P., de Vasconscelos A cộng (2015) Targeting HER family in HER2-positive metastatic breast cancer: potential biomarkers and novel targeted therapies Pharmacogenomics, 16(3), 257– 271 37 Hynes N.E Lane H.A (2005) ERBB receptors and cancer: the complexity of targeted inhibitors Nat Rev Cancer, 5(5), 341–354 38 Bose R., Kavuri S.M., Searleman A.C cộng (2013) Activating HER2 mutations in HER2 gene amplification negative breast cancer Cancer Discov, 3(2), 224–237 39 28630_herceptest_interpretation_manual-breast_ihc_row.pdf , accessed: 09/04/2018 40 Brain microenvironment makes HER2-positive breast cancer metastases resistant to treatment , accessed: 09/04/2018 41 Mouse anti-Human HER2 Receptor antibody (ABIN723306) , accessed: 09/04/2018 42 (2014) Second act for HER2, in gastric cancers - Page of CAP TODAY, , accessed: 09/04/2018 ... marker HER- 2, tơi xin trình bày Tổng quan tài li ệu v ề ? ?Tổng quan đặc tính kỹ thuật dấu ấn HER- 2 /HER- 2 new? ?? Tổng quan bao gồm nội dung sau: Khái quát kỹ thuật nhuộm Hóa mơ miễn dịch vấn đề liên quan. .. TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ THẢO TỔNG QUAN ĐẶC TÍNH KỸ THUẬT CỦA DẤU ẤN MIỄN DỊCH HER- 2 /HER- 2 NEW KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 20 14 – 20 18 Người hướng dẫn khoa học: ThS Nguyễn... quan đến biệt hóa tạo sữa tế bào tuyến vú 6 .2 Đột biến gen HER- 2 Dấu ấn HER đóng vai trị quan trọng hình thành bệnh ung thư vú, đặc biệt bệnh nhân có bi ểu m ức HER- 2 [35] HER- 2, với HER- 1, HER- 3,