Khảo sát tần suất một số gen độc lực đường ruột và khả năng đề kháng colistin của 210 chủng E. coli sinh ESBL đã phân lập từ thực phẩm, người khỏe mạnh và bệnh nhân tiêu chảy tại thành phố Hồ Chí Minh.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 TẦN SUẤT MỘT SỐ GEN ĐỘC LỰC ĐƯỜNG RUỘT VÀ TÍNH KHÁNG COLISTIN CỦA CÁC CHỦNG ESCHERICHIA COLI SINH -LACTAMASE PHỔ RỘNG (ESBL) PHÂN LẬP TỪ THỰC PHẨM, NGƯỜI KHỎE MẠNH VÀ BỆNH NHÂN TIÊU CHẢY TẠI TP HỒ CHÍ MINH Hoàng Hoài Phương*, Lê Thị Hiên*, Trần Nguyễn Minh Đoan*, Nguyễn Thị Anh Đào*, Nguyễn Đỗ Phúc* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Một số nhóm Escherichia coli (E coli) có khả gây bệnh ngồi đường ruột chúng mang gen độc lực khác Hiện nay, E coli đề kháng với nhiều loại kháng sinh - đặc biệt cephalosporin hệ thứ ba colistin dẫn đến nguy thất bại điều trị làm tăng tỷ lệ tử vong Mục tiêu: Khảo sát tần suất số gen độc lực đường ruột khả đề kháng colistin 210 chủng E coli sinh ESBL phân lập từ thực phẩm, người khỏe mạnh bệnh nhân tiêu chảy thành phố Hồ Chí Minh Phương pháp nghiên cứu: Xác định kiểu gen ESBL, khảo sát diện số gen độc lực đường ruột phân nhóm phát sinh loài chủng E coli sinh ESBL phương pháp PCR Xác định giá trị MIC colistin chủng E coli sinh ESBL kiểm tra diện gen mcr-1 Kết quả: Kiểu gen ESBL chiếm ưu thuộc nhóm CTX-M (82,9%) – chủ yếu blaCTX-M-1 (52,9%), blaCTX(30,5%) Tỷ lệ chủng E coli sinh ESBL mang gen độc lực đường ruột thấp: chủng (3,4%) mang gen daaD, chủng (0,5%) mang gen eagg phân lập từ người khỏe mạnh bệnh nhân tiêu chảy Nhóm phát sinh loài A B1 chiếm ưu tổng số 210 chủng vi khuẩn E coli sinh ESBL với tỷ lệ 31,9% 30%, nhóm B2, C, D, E, F U chiếm tỷ lệ thấp hơn, 8,1%, 2,3%, 5,7%, 13,8%, 6,2% 1,4% Có 7,1% chủng E coli sinh ESBL phân lập từ thực phẩm 4,9% chủng vi khuẩn từ bệnh nhân tiêu chảy có khả đề kháng colistin mang gen mcr-1 M-9 Kết luận: Vi khuẩn E coli sinh ESBL mang gen độc lực đường ruột với tỷ lệ thấp Một số chủng E coli sinh ESBL đồng thời mang gen mcr-1 quy định khả đề kháng colistin Vì colistin xem giải pháp cuối điều trị bệnh vi khuẩn đa kháng, việc cấp thiết phải tiến hành theo dõi thực giải pháp can thiệp để ngăn chặn lan rộng vi khuẩn mang gen kháng mcr Từ khóa: gen độc lực, tính kháng colistin ABSTRACT INTESTINAL VIRULENCE GENES AND COLISTIN RESISTANCE OF EXTENDED-SPECTRUM -LACTAMASE (ESBL) – PRODUCING ECHERICHIA COLI ISOLATED FROM FOOD, HEALTHY PEOPLE AND DIARRHEA PATIENTS IN HO CHI MINH CITY Hoang Hoai Phuong, Le Thi Hien, Tran Nguyen Minh Doan, Nguyen Thi Anh Dao, Nguyen Do Phuc, * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 388 - 395 Background: Some groups of Escherichia coli (E coli) can cause intra- and extraintestinal disease because they carry different virulence genes Nowadays, E coli can be resistant to many antibiotics - especially thirdgeneration cephalosporins and colistin, leading to a risk of treatment failure and increased mortality Objectives: To evaluate of intestinal virulence and colistin resistance of 210 ESBL - E coli isolates from food, healthy people and diarrhea patients in Ho Chi Minh City *Viện Y Tế Cơng Cộng TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS Lê Thị Hiên ĐT: 0938640803 388 Email: lethihien@iph.org.vn Chuyên Đề Y Tế Công Cộng Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Methods: ESBL genotypes, some intestinal virulence genes and phylogenetic group of 210 ESBL - E coli strains were identified by PCR method To determine the MIC value for colistin and check the presence of mcr-1 gene in these strains Results: The dominant ESBL genotype belongs to CTX-M group (82.9%) - including blaCTX-M-1 (52.9%), blaCTX-M-9 (30.5%) eagg and daaD were detected in (0.5%) and (3.4%) strains The dominant phylogroups were A (31.9%) and B1 (30%); phylogroup B2, C, D, E, F and U rates are lower, 8.1%, 2.3%, 5.7%, 13.8%, 6.2% and 1.4%, respectively 7.1% of ESBL - E coli isolates from food and 4.9% from diarrhea patients had colistin MIC values of higher µg/ml and were positive with mcr-1 gene Conclusions: The frequency of intestinal virulence genes of ESBL - E coli is low Some ESBL - E coli isolates also carry mcr-1 gene that encodes mobilized colistin resistance As colistin is the last option against multidrug-resistant E coli infection, careful monitoring of the evolution of colistin resistance and the spread of mcr-1 gene in isolates is urgently needed Keywords: virulence gene, colistin resistance ĐẶT VẤN ĐỀ Escherichia coli loài vi khuẩn tồn thường trú thể người động vật Bên cạnh vi khuẩn E coli lành tính, cịn có nhiều vi khuẩn E coli có khả gây bệnh ngồi đường ruột chúng mang yếu tố gây bệnh khác Nhóm E coli gây tiêu chảy (DEC) phân thành loại dựa chế gây bệnh khác nhau, bao gồm: EHEC, EPEC, ETEC, EIEC, EAEC DAEC(7) Để điều trị bệnh nhiễm khuẩn E coli, kháng sinh loại thuốc thiếu Hiện nay, E coli có khả đề kháng với nhiều loại kháng sinh sử dụng phổ biến điều trị - đặc biệt kháng sinh họ cephalosporin hệ thứ ba, dẫn đến nguy thất bại điều trị làm tăng tỷ lệ tử vong, nguyên nhân điều vi khuẩn có khả sinh men βlactamase phổ rộng (ESBL) Trong năm gần đây, số nghiên cứu nhiều quốc gia ghi nhận vi khuẩn E coli mang gen kháng với colistin- kháng sinh xem giải pháp điều trị cuối cho vi khuẩn đa kháng thuốc(6) Đây xem mối đe dọa đặc biệt nghiêm trọng sức khỏe người Việc vi khuẩn E coli vừa mang yếu tố gây bệnh, vừa mang gen kháng kháng sinh làm tăng mối nguy hiểm vi khuẩn lên nhiều lần Các nghiên cứu nhiều quốc gia đánh giá vấn đề Trong đó, Việt Nam, Chun Đề Y Tế Cơng Cộng số lượng công bố đối tượng vi khuẩn E coli sinh ESBL hạn chế chưa đầy đủ khả mang gen độc lực đường ruột tính kháng với kháng sinh colistin Do đó, thực đề tài nhằm khảo sát tần suất số gen độc lực đường ruột khả đề kháng colistin chủng E coli sinh ESBL phân lập thành phố Hồ Chí Minh Mục tiêu nghiên cứu Xác định kiểu gen ESBL chủng E coli sinh ESBL phân lập Khảo sát diện số gen độc lực đường ruột chủng E.coli sinh ESBL Xác định phân nhóm phát sinh lồi chủng E coli sinh ESBL Xác định khả đề kháng colistin chủng E coli sinh ESBL ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu 210 chủng E coli có kiểu hình sinh ESBL phân lập từ nguồn mẫu khác nhau: 113 chủng từ thực phẩm, 36 chủng từ người khỏe mạnh 61 chủng từ bệnh nhân tiêu chảy thành phố Hồ Chí Minh năm 2016 – 2018, tiến hành phịng thí nghiệm Vi sinh vật – Trung tâm Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm khu vực phía Nam, Viện Y tế cơng cộng TP Hồ Chí Minh Chủng chứng dương từ Viện Y tế công cộng 389 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Phủ Osaka, giáo sư Yamasaki Shinji (Trường đại học phủ Osaka – Nhật Bản) Viện Y tế Cơng cộng TP Hồ Chí Minh Phương pháp nghiên cứu Tách chiết DNA vi khuẩn Vi khuẩn nuôi cấy môi trường Tryptic Soy agar (Merck) 37oC 1824 Lấy khuẩn lạc tạo huyền phù vi khuẩn 100 µL dung dịch TE 1X, tiến hành đun sôi 95oC 10 phút để tách DNA Dịch DNA vi khuẩn sử dụng làm khuôn cho phản ứng PCR Xác định kiểu gen ESBL Các chủng E coli có kiểu hình ESBL phương pháp multiplex PCR tham khảo từ tác giả Le QP cộng sự(8) sử dụng mồi đặc hiệu cho nhóm TEM, SHV, CTX-M-1, CTX-M-2, CTXM-8, CTX-M-9 CTX-M-25 Xác định phân nhóm phát sinh lồi 210 chủng E coli sinh ESBL tiến hành xác định nhóm phát sinh loài A, B1, B2, C, D, E F theo phương pháp tác giả Clermont O cộng sự(2) Xác định kiểu hình đề kháng colistin Các chủng E coli sinh ESBL xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) colistin phương pháp vi pha loãng kháng sinh dung dịch theo tiêu chuẩn CLSI(3) Chủng sử dụng làm chủng kiểm soát cho quy trình thử nghiệm kháng sinh bao gồm E coli ATCC 25922 (MIC = 0,25 - µg/mL) Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (MIC = 0,5 - µg/mL) Nước cất sử dụng làm chứng âm Phát gen kháng colistin mcr-1 Gen quy định tính kháng colistin di động mcr-1 tiến hành kiểm tra chủng E coli sinh ESBL quy trình PCR nhóm tác giả Covaco L cộng sự(1) Xác định diện số gen độc lực đường ruột KẾT QUẢ Các phản ứng PCR multiplex PCR tham khảo từ nghiên cứu trước thực Phân tích kiểu gen ESBL để phát 10 gen độc lực đường ruột Bảng thể tần suất tỷ lệ gen đặc trưng cho nhóm vi khuẩn gây bệnh DEC ESBL phát 210 chủng E coli sinh 210 chủng E coli sinh ESBL, bao gồm ESBL nghiên cứu gen astA, eaeA, bfpA, ial, stx1, stx2, eagg, elt(10), est(5) daaD(11) Bảng 1: Tần suất tỷ lệ kiểu gen ESBL 210 chủng E coli sinh ESBL Kiểu gen ESBL blaTEM blaCTX-M-1 blaCTX-M-9 blaCTX-M-8/25 Chủng mang gen blaSHV + blaTEM blaTEM + blaCTX-M-1 blaTEM + blaCTX-M-9 Chủng mang gen blaTEM + blaCTX-M-1 + blaCTX-M-9 Thực phẩm 14 (12,4%) 19 (16,8%) 16 (14,2%) (0%) (0,9%) 43 (38,1%) 18 (15,9%) (0%) (22,2%) (19,4%) (0%) 13 (21,3%) 11 (18,0%) (1,8%) (0%) (0%) Kết từ Bảng cho thấy có 107/210 chủng E coli (chiếm tỷ lệ 51%) mang gen ESBL nhất; 101/210 chủng (48%) có mang gen ESBL khác nhau: chủ yếu blaTEM blaCTX-M, đặc biệt có chủng (1%) nguồn gốc từ thực phẩm 390 Tần suất (Tỷ lệ) Người khỏe mạnh Bệnh nhân tiêu chảy (22,2%) 13 (21,3%) (19,4%) 19 (31,1%) (16,7%) (6,6%) (0%) (1,6%) Tổng cộng 35 (16,7%) 45 (21,4%) 26 (12,4%) (0,5%) 107 (51%) (0,5%) 64 (30,5%) 36 (17,1%) 101 (48%) (1%) mang gen ESBL khác nhau: blaTEM với blaCTX-M-1 blaCTX-M-9 Kiểu gen ESBL chiếm tỷ lệ cao blaTEM blaCTX-M-1 (30,5%) Trong mẫu ghi nhận kiểu gen ESBL chiếm ưu thuộc nhóm CTX-M, hầu hết Chuyên Đề Y Tế Công Cộng Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 blaCTX-M-1 blaCTX-M-9, phát chủng mang gen blaCTX-M-8/25 phân lập từ bệnh nhân tiêu chảy, không phát gen blaCTX-M-2 Kiểu gen ESBL thuộc nhóm TEM chiếm tỷ lệ cao thấp nhóm SHV (1/113 chủng phân lập từ thực phẩm) Trong mẫu thực phẩm, tỷ lệ kiểu gen blaTEM, blaCTX-M-1 blaCTX-M-9 phát với tỷ lệ 69%, 56,7% 31,9% Trong mẫu người khỏe mạnh, tỷ lệ kiểu gen blaTEM, blaCTX-M-1 blaCTX-M-9 phát với tỷ lệ 63,9%, 41,7% 36,1% Trong mẫu bệnh nhân tiêu chảy, tỷ lệ 60,7%, 52,5% 24,5% Khảo sát số gen độc lực đường ruột Nghiên cứu Y học trưng cho nhóm vi khuẩn DEC Kết thể tóm tắt Bảng Chúng phát 146/210 chủng (69,5%) không mang 10 gen độc lực liên quan với DEC kiểm tra; 64 chủng (30,5%) có mang gen độc lực, bao gồm astA, eagg daaD astA gen phát chủng E coli sinh ESBL phân lập từ thực phẩm Tuy nhiên, chủng có nguồn gốc phân lập từ người khỏe mạnh bệnh nhân xuất thêm yếu tố gây bệnh khác eagg daaD Kết cho thấy có 7/210 chủng (3,4%) xếp vào loại DAEC mang gen daaD chủng xếp vào loại EAEC mang gen eagg 210 chủng vi khuẩn E coli sinh ESBL kiểm tra diện 10 gen độc lực đặc Bảng 2: Kết kiểm tra gen độc lực 210 chủng E coli sinh ESBL Gen độc lực ND astA Eagg Dad astA, daaD Tổng cộng Thực phẩm 70 43 0 113 Người khỏe mạnh 30 36 Bệnh nhân tiêu chảy 46 11 1 61 ND: Không phát Phân nhóm phát sinh lồi chủng E coli sinh ESBL Tỷ lệ nhóm phát sinh lồi khác 210 chủng E coli sinh ESBL thể Bảng Thực phẩm 47 (41,6%) 40 (35,4%) (4,4%) (0,9%) Chuyên Đề Y Tế Công Cộng Tỷ lệ 69,5% 26,7% 0,5% 2,4% 1,0% 500bp mẫu có khác Đối với mẫu thực phẩm, nhóm phát sinh lồi A B1 chiếm ưu với tỷ lệ 41,6% 35,4%, sau nhóm E (12,4%), khơng phát nhóm B2 Trong đó, chủng E coli sinh ESBL phân lập từ bệnh nhân tiêu chảy có nhóm A B1 chiếm ưu với tỷ lệ 24% 28%, nhóm B2, D, E F chiếm tỷ lệ tương đương (10 - 13%), khơng phát nhóm C Trên đối tượng người khỏe mạnh, nhóm chiếm ưu lại nhóm B2 (22,2%) E (19,4%), sau nhóm A, B1 (cùng tỷ lệ 16,7%) nhóm D (13,9%), khơng phát nhóm C Từ Bảng cho thấy khơng xét nguồn gốc phân lập đa số chủng thuộc nhóm A (31,9%) B1 (30%); nhóm E (13,8%), nhóm B2, C, D F chiếm tỷ lệ thấp hơn, 8,1%, 2,3%, 5,7% 6,2% 1,4%; có 1,4% chủng khơng xác định nhóm phát sinh lồi Tuy nhiên, tỷ lệ nhóm phát sinh lồi chủng E coli sinh ESBL phân lập từ Bảng 3: Tần suất tỷ lệ nhóm phát sinh lồi chủng E coli sinh ESBL TspE4.C2 Nhóm phát sinh lồi A B1 B2 C D Tần suất (n) 146 56 210 Người khỏe mạnh (16,7%) (16,7%) (22,2%) (13,9%) (152bp) Bệnh nhân tiêu chảy 14 (23,3%) 17 (28,3%) (15,0%) (10,0%) Tổng cộng 67 (31,9%) 63 (30,0%) 17 (8,1%) (2,3%) 12 (5,7%) 391 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Nhóm phát sinh lồi E F U Thực phẩm 14 (12,4%) (4,4%) (0,9%) Người khỏe mạnh (19,4%) (5,6%) (5,6%) Bệnh nhân tiêu chảy (13,3%) (10,0%) Tổng cộng 29 (13,8%) 13 (6,2%) (1,4%) U: Không xác định Khả đề kháng colistin chủng E coli sinh ESBL Hình 1: Tỷ lệ phân bố chủng E coli sinh ESBL phân lập từ mẫu theo giá trị MIC colistin Hình mơ tả phân bố tỷ lệ chủng E coli sinh ESBL từ nguồn phân lập theo giá trị MIC colistin Các chủng có MIC phân bố từ 0,25 đến 16 g/ mL Tỷ lệ phát chủng vi khuẩn E coli sinh ESBL có giá trị MIC colistin vượt giá trị ngưỡng ECV (2 µg/mL) cao mẫu thực phẩm (8/113 chủng; 7,1%), bệnh nhân tiêu chảy (3/61 chủng; 4,9%) không phát mẫu người khỏe mạnh 11 chủng vi khuẩn E coli sinh ESBL có giá trị MIC lớn g/ mL phát mang gen kháng colistin mcr-1 BÀN LUẬN 210 chủng E coli có kiểu hình ESBL phân lập từ thực phẩm (n=113), người khỏe mạnh (n=36) bệnh nhân tiêu chảy (n=61) thành phố Hồ Chí Minh năm 2016 – 2018 kiểm tra kiểu gen ESBL Kiểu gen ESBL chia thành loại chính: SHV, TEM CTXM, CTX-M chia thành nhóm: CTX-1, 2, -8, -9 -25 Bảng thể tần suất tỷ lệ chủng E.coli có kiểu gen ESBL khác Kết nghiên cứu tương đồng với 392 cơng bố nhiều nhóm nghiên cứu quốc gia gia tăng chiếm ưu nhóm gen ESBL họ CTX-M Một vài nghiên cứu châu Âu cho thấy kiểu gen ESBL bật thuộc nhóm CTX-M-1 Anh(9) Ở Việt Nam, nghiên cứu tiến hành chủng E coli sinh ESBL cho thấy phần lớn kiểu gen kháng thuộc nhóm CTX-M với nhóm CTX-M-1 CTX-M-9, nhiên số nghiên cứu cho thấy tỷ lệ kiểu gen nhóm CTX-M-1 chiếm tỷ lệ cao nhất(8) - tương tự với kết nghiên cứu Ngồi ra, chúng tơi nhận thấy mẫu phân lập chủng nghiên cứu dường khơng có khác biệt tỷ lệ gen chiếm ưu Tiêu chảy cấp tính nguyên nhân thứ hai gây tử vong trẻ em tuổi – đặc biệt nước phát triển Theo WHO, với Rotavirus, E coli nguyên nhân quan trọng hàng đầu gây tiêu chảy Vi khuẩn E coli vốn thành viên bình thường hệ vi sinh đường ruột động vật, lưu trú từ vùng dày tới ruột già Tuy nhiên, trình phát triển biến đổi thích nghi, số chủng E coli thu nhận DNA bacteriophage plasmid mã hóa yếu tố độc lực đường ruột trở thành chủng gây bệnh DEC Các vi khuẩn lưu hành lây lan hệ thống phân phối thực phẩm, bệnh nhân người khỏe mạnh Để kiểm tra khả vi khuẩn E coli sinh ESBL, sử dụng phản ứng multiplex-PCR PCR có khả phát gen mã hóa yếu tố gây bệnh đặc trưng cho DEC Kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ phát yếu tố gây bệnh khác eagg daaD đặc trưng cho DAEC EAEC thấp Trong khi, DAEC chưa thể mối liên hệ với tình trạng tiêu chảy vi khuẩn E coli bệnh nhân nhập viện DAEC người khỏe mạnh bệnh nhân tiêu chảy EAEC lại Chuyên Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 biết đến nhiều nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy cấp tính nước phát triển khách du lịch người bị suy giảm miễn dịch EAEC gây nhiều vụ dịch toàn giới Việc phát chủng E coli thuộc nhóm EAEC từ bệnh nhân tiêu chảy đồng thời có khả sinh ESBL để phá hủy kháng sinh điều trị cho thấy mức độ nguy hiểm chủng vi khuẩn này, theo đó, bệnh nhân cần phải điều trị với kháng sinh mạnh Trong đó, vai trò gen astA – phát với tỷ lệ cao (27,7%) chưa thực rõ ràng astA gen phát chủng phân lập từ mẫu thực phẩm (38%) Đối với chủng E coli sinh ESBL phân lập từ bệnh nhân tiêu chảy astA gen phổ biến (18%) Trên thực tế, có báo cáo vụ bùng phát bệnh dày – ruột liên quan tới chủng E coli có mang gen astA Vì thế, từ kết nghiên cứu này, đề xuất nên có nghiên cứu sâu để chứng tỏ chức astA trình gây bệnh vi khuẩn E coli Ngoài ra, kết nghiên cứu cho thấy số lượng gen độc lực đường ruột chủng E coli sinh ESBL phát thấp Kết tương đối phù hợp với nghiên cứu khác công bố giới Khi đánh giá tổng thể thay đổi quần thể vi sinh vật, phân tích phân nhóm phát sinh lồi chủng vi khuẩn hữu ích, đặc biệt phân tích có ý nghĩa quan trọng nghiên cứu dịch tễ học Xác định phân nhóm phát sinh lồi bên cạnh việc phát gen độc lực cơng cụ hữu ích giúp đánh giá, dự đoán nguy tiềm ẩn vi khuẩn E coli tìm thấy sức khỏe người Sự phân bố nhiều gen độc lực chứng tỏ có khác nhóm phát sinh loài khác Trước đây, chủng E coli phân thành nhóm phát sinh lồi chính: A, B1, B2, D Các chủng vi khuẩn gây bệnh đường ruột chủ yếu thuộc nhóm B2 D; chủng thường trú đường ruột thường thuộc nhóm A B1 Sau đó, ngồi nhóm này, người Chuyên Đề Y Tế Công Cộng Nghiên cứu Y học ta cịn xác định thêm nhóm khác: E (trong có E coli O157: H7), C F Sự phân bố nhiều gen độc lực chứng tỏ có khác nhóm phát sinh lồi khác Bảng mơ tả kết phân nhóm phát sinh lồi 210 chủng E coli sinh ESBL từ nguồn mẫu phân lập khác Chúng nhận thấy gia tăng tỷ lệ cao phân nhóm phát sinh lồi B2 D mẫu người khỏe mạnh bệnh nhân tiêu chảy so với mẫu thực phẩm Kết có tương đồng với nghiên cứu trước Một số nghiên cứu cho thấy chủng vi khuẩn E coli phân lập từ người chủ yếu thuộc nhóm A, sau nhóm B1, nhóm B2 D chiếm tỷ lệ tương đối cao, chủng E coli phân lập từ thực phẩm chủ yếu thuộc nhóm A B1, nhóm B2 D phát với tỷ lệ thấp(8) Các chủng E coli thuộc nhóm B2 D mang gen độc lực đường ruột, cho thấy người khỏe mạnh bệnh nhân tiêu chảy xem vật chủ mang vi khuẩn có khả chứa độc lực Colistin xem giải pháp cuối điều trị vi khuẩn siêu đa kháng Khả kháng colistin vi khuẩn đột biến gen nằm nhiễm sắc thể phát từ sớm, nhiên đến năm 2015, nhà khoa học phát gen kháng colistin nằm plasmid có khả lây truyền cao – gọi gen mcr Trong năm gần đây, vi khuẩn có khả kháng colistin mang gen kháng mcr phát nhiều mẫu khác báo cáo nhiều quốc gia khắp giới Kể từ sau phát gen mcr-1, gen kháng colistin mcr-2, -3, -4, -5 báo cáo, phần lớn báo cáo ghi nhận phát gen mcr-1 với tỷ lệ cao 210 chủng E coli sinh ESBL xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) colistin diện gen mcr-1 Kết cho thấy chủng vi khuẩn E coli sinh ESBL phân lập từ thực phẩm có tỷ lệ mang gen kháng colistin mcr-1 cao người khỏe mạnh bệnh nhân tiêu chảy Các chủng vi khuẩn mang gen mcr-1 phân 393 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 lập từ mẫu thịt tươi sống, lấy từ hệ thống phân phối: siêu thị, chợ đầu mối chợ bán lẻ Tỷ lệ chủng vi khuẩn E coli sinh ESBL mang gen mcr-1 phân lập từ thực phẩm (7,1%) phát nghiên cứu thấp so với công bố số nhóm tác giả khác Trung Quốc(6) Trong nghiên cứu này, phát chủng vi khuẩn mang gen kháng mcr-1 từ 61 chủng E coli sinh ESBL phân lập từ bệnh nhân tiêu chảy thành phố Hồ Chí Minh, chiếm tỷ lệ 4,9% Tại Hà Nội, Tada cộng báo cáo phát chủng E coli mang gen kháng mcr-1 từ bệnh nhân nhập viện(12) Colistin hạn chế sử dụng điều trị bệnh cho người; nhiên, loại kháng sinh này sử dụng quy mô công nghiệp nhiều nông dân không Việt Nam mà khắp giới, gây rủi ro cho sức khỏe người Colistin bị lạm dụng chăn nuôi, heo, gà động vật nuôi khác để làm cho chúng tăng cân nhanh bảo vệ chống lại bệnh tật Một số nghiên cứu phát vi khuẩn mang gen mcr-1 từ nhiều năm trước chứng tỏ quần thể vi khuẩn sớm hình thành lan truyền khả đề kháng với colistin, Pháp(4) Sự lây truyền vi khuẩn từ vật nuôi, thực phẩm qua môi trường người làm lan rộng tính kháng colistin qua nhiều quần thể vi khuẩn khác, kể loài vi khuẩn khác Nếu khơng có biện pháp can thiệp, lồi người hàng phòng thủ cuối Đây hiểm họa toàn cầu gây nguy hiểm cho sức khỏe cộng đồng Năm 2017, Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) khuyến cáo quốc gia cần ngừng sử dụng kháng sinh quan trọng động vật nuôi khỏe mạnh(13) Trong bối cảnh này, nhà quản lý Việt Nam cần tiến hành biện pháp can thiệp để ngăn chặn mối nguy KẾT LUẬN Vi khuẩn E coli sinh ESBL có kiểu gen kháng ESBL chiếm ưu thuộc loại CTX-M, với tỷ lệ dạng kết hợp với gen khác 394 cao Tỷ lệ chủng E coli sinh ESBL mang gen độc lực đường ruột thấp: 3,4% chủng DAEC, 0,5% chủng EAEC - phân lập từ người khỏe mạnh bệnh nhân tiêu chảy astA gen phát chủng vi khuẩn E coli sinh ESBL từ thực phẩm – nhiên, gen chưa xác định rõ chức trình gây bệnhđộc lực đường ruột với tỷ lệ thấp Tuy phát với tỷ lệ thấp số chủng E coli sinh ESBL đồng thời mang gen mcr-1 quy định khả đề kháng colistin Đây thực điều đáng báo động với sức khỏe cộng đồng TÀI LIỆU THAM KHẢO Cavaco L, Mordhorst H, Hendriksen R (2016) Laboratory protocol: PCR for plasmid-mediated colistin resistance genes, DTU Food Natl food Inst 2(October 2016):1–15 Clermont O, Christenson JK, Denamur E, Gordon DM (2013) The Clermont Escherichia coli phylo-typing method revisited: Improvement of specificity and detection of new phylo-groups Environ Microbiol Rep 5(1):58–65 CLSI (2017) M100- Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, 27th edition Clin Lab Stand Inst, pp.18 Delannoy S, et al (2017) Characterization of Colistin-Resistant Escherichia coli Isolated from Diseased Pigs in France Front Microbiol, 8:1–12 Hinenoya A, et al (2014) Molecular characterization of cytolethal distending toxin gene-positive Escherichia coli from healthy cattle and swine in Nara, Japan BMC Microbiol, 14(97):1–13 Huang X, et al (2017) High Prevalence of Colistin Resistance and mcr-1 Gene in Escherichia coli Isolated from Food Animals in China Front Microbiol, 8:1–5 Kaper JB (2005) Pathogenic Escherichia coli Int J Med Microbiol 295(6–7):355–356 Le Quoc Phong, et al (2015) Characteristics of ExtendedSpectrum beta-Lactamase-Producing Escherichia coli in Retail Meats and Shrimp at a Local Market in Vietnam Foodborne Pathog Dis, 12(8):719–725 Munday CJ, Whitehead GM, Todd NJ, Campbell M, Hawkey PM (2004) Predominance and genetic diversity of communityand hospital-acquired CTX-M extended-spectrum β-lactamases in York, UK J Antimicrob Chemother, 54(3):628–633 10 Omar KB, Barnard TG (2014) Detection of diarrhoeagenic Escherichia coli in clinical and environmental water sources in South Africa using single-step 11-gene m-PCR World J Microbiol Biotechnol, 30(10):2663–2671 11 Salmani H, Azarnezhad A, Fayazi MR, Hosseini A (2016) Chuyên Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Pathotypic and Phylogenetic Study of Diarrheagenic Escherichia 13 WHO (2017) WHO guidelines on use of medically important coli and Uropathogenic E coli Using Multiplex Polymerase antimicrobials in food-producing animals World Heal Organ, Chain Reaction Jundishapur J Microbiol, 9(2):1–7 pp.13–22 12 Tada T, et al (2017) Emergence of colistin-resistant Escherichia coli clinical isolates harboring mcr-1 in Vietnam Int J Infect Dis, Ngày nhận báo: 15/08/2019 doi:10.1016/j.ijid.2017.07.003 Ngày phản biện nhận xét báo: 31/08/2019 Ngày báo đăng: 15/10/2019 Chuyên Đề Y Tế Công Cộng 395 ... độc lực đường ruột tính kháng với kháng sinh colistin Do đó, chúng tơi thực đề tài nhằm khảo sát tần suất số gen độc lực đường ruột khả đề kháng colistin chủng E coli sinh ESBL phân lập thành phố... kiểu gen ESBL chủng E coli sinh ESBL phân lập Khảo sát diện số gen độc lực đường ruột chủng E .coli sinh ESBL Xác định phân nhóm phát sinh lồi chủng E coli sinh ESBL Xác định khả đề kháng colistin. .. đề kháng colistin chủng E coli sinh ESBL Hình 1: Tỷ lệ phân bố chủng E coli sinh ESBL phân lập từ mẫu theo giá trị MIC colistin Hình mơ tả phân bố tỷ lệ chủng E coli sinh ESBL từ nguồn phân lập