Đánh giá mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA tinh trùng và các chỉ số tinh dịch đồ ở nam giới vô sinh đến khám và điều trị tại Bệnh viện A Thái Nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC  DƯƠNG THỊ NHÀN ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN HỆ GIỮA MỨC ĐỘ PHÂN MẢNH DNA TINH TRÙNG VÀ CÁC CHỈ SỐ TINH DỊCH ĐỒ Ở NAM GIỚI VÔ SINH ĐẾN KHÁM VÀ ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN A THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN, 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC  DƯƠNG THỊ NHÀN ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN HỆ GIỮA MỨC ĐỘ PHÂN MẢNH DNA TINH TRÙNG VÀ CÁC CHỈ SỐ TINH DỊCH ĐỒ Ở NAM GIỚI VÔ SINH ĐẾN KHÁM VÀ ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN A THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Phú Hùng THÁI NGUYÊN, 2020 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố cơng trình Mọi kết thu khơng chỉnh sửa, chép từ nghiên cứu khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, em xin trân trọng gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Phú Hùng định hướng khoa học, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt suốt trình em tiến hành nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo cán Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên tận tình dạy dỗ, bảo truyền cho em niềm đam mê nghiên cứu khoa học Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo cán Bộ phận Sau đại học – Phòng Đào tạo & QHQT, Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi thủ tục, văn suốt q trình học tập Tơi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo Bệnh viện A Thái Nguyên, đặc biệt anh chị, bạn, em Khoa Hỗ trợ Sinh sản – Bệnh viện A Thái Nguyên nơi công tác, chia sẻ giúp đỡ thời gian tiến hành làm luận văn Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn bố mẹ, anh chị em gia đình ln động viên cho tơi thêm động lực hồn thành tốt trình học tập nghiên cứu khoa học Thái Nguyên,09 tháng 07 năm 2020 Tác giả Dương Thị Nhàn iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu 3 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược sinh lý sinh sản nam 1.1.1 Cấu tạo hệ sinh dục nam 1.1.2 Cấu tạo tinh trùng người 1.1.2 Cấu tạo nhiễm sắc chất tinh trùng người 1.2 Tình hình vơ sinh nam giới 1.2.1 Sơ lược vô sinh nam 1.2.2 Nguyên nhân vô sinh nam giới 1.2.3 Sơ lược tinh dịch đồ 1.3 Sự phân mảnh DNA tinh trùng người 10 1.3.1 Khái niệm phân mảnh DNA tinh trùng 11 1.3.2 Một số nguyên nhân gây tổn thương DNA tinh trùng 11 1.3.3 Ảnh hưởng phân mảnh DNA tinh trùng tới khả sinh sản nam giới 13 1.3.4 Các phương pháp xác định phân mảnh DNA tinh trùng 15 1.3.5 Phương pháp khảo sát cấu trúc nhiễm sắc chất tinh trùng 16 1.4 Tình hình khám điều trị vơ sinh khoa Hỗ trợ Sinh sản – Bệnh viện A Thái Nguyên 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 21 NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 21 2.2 Hóa chất thiết bị 22 2.2.1 Hóa chất 22 iv 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 22 2.3 Phương pháp nghiên cứu 23 2.3.1 Phương pháp thu nhận mẫu bệnh phẩm 23 2.3.2 Phương pháp phân tích tinh dịch đồ 23 2.3.3 Quy trình phân tích phân mảnh DNA tinh trùng phương pháp khảo sát cấu trúc nhiễm sắc chất (SCSA) 24 2.3.4 Phân tích số liệu 25 2.4 Đạo đức nghiên cứu 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Đặc điểm lâm sàng đặc điểm tinh dịch đồ đối tượng nghiên cứu 26 3.1.1 Đặc điểm lâm sàng đối tượng nghiên cứu 26 3.1.2 Đặc điểm tinh dịch đồ đối tượng nghiên cứu 28 3.2 Kết phân tích mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 29 3.3 Kết mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với đặc điểm lâm sàng số tinh dịch đồ đối tượng nghiên cứu 31 3.3.1 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với đặc điểm lâm sàng 32 3.3.2 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng số tinh dịch đồ đối tượng nghiên cứu 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 50 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt AO Acridine orange AOT Acridine orangetest Phương pháp nhuộm acridine orange ART Assited reproductive techniques Kỹ thuật hỗ trợ sinh sản Bệnh nhân BN DFI DNA fragmentation index Chỉ số phân mảnh DNA dsDNA Double – stranded DNA DNA mạch đơi FCM Flow cytometer Máy phân tích dịng chảy tế bào FSH Follice stimulating hormone Hormon kích thích nang noãn Hỗ trợ sinh sản HTSS LH Luteinizing hormone Hormon kích thích hồng thể ICSI Intra cytoplasmic sperm ịnjection Kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương trứng IUI Intra ulterine insemination Kỹ thuật bơm tinh trùng vào buồng tử cung IVF Invitro fertilization Thụ tinh ống nghiệm Nhiễm sắc thể NST ROS Reactive oxygen species Các tác nhân oxy hóa GTMTT Giãn tĩnh mạch thừng tinh TTTON Thụ tinh ống nghiệm vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Giá trị bình thường tinh dịch đồ [54], [81] 10 Bảng 1.2 Một số phương pháp xác định phân mảnh DNA tinh trùng 15 Bảng 2.1 Danh mục hóa chất sử dụng cho nghiên cứu 22 Bảng 2.2 Danh mục dụng cụ sử dụng cho nghiên cứu 22 Bảng 2.3 Danh mục thiết bị sử dụng cho nghiên cứu 23 Bảng 3.1 Đặc điểm lâm sàng đối tượng nghiên cứu 26 Bảng 3.2 Đặc điểm tinh dịch đồ đối tượng nghiên cứu 28 Bảng 3.3 Kết đánh giá mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 30 Bảng 3.4 Mối liên hệ việc sử dụng rượu bia với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 32 Bảng 3.5 Mối liên hệ việc sử dụng thuốc với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 34 Bảng 3.6 Mối liên hệ tiền sử bị quai bị với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 36 Bảng 3.7 Mối liên hệ độ tuổi với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 38 Bảng 3.8 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với thời gian kiêng xuất tinh 40 Bảng 3.9 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với độ pH tinh dịch 41 Bảng 3.10 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với thể tích xuất tinh 42 Bảng 3.11 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với mật độ tinh trùng 43 Bảng 3.12 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với độ di động tinh trùng 44 Bảng 3.13 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với tỷ lệ sống tinh trùng 45 Bảng 3.14 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với hình dạng tinh trùng 47 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc tinh trùng trưởng thành Hình 1.2 Sự sinh tinh Hình 1.3 Cấu trúc chromatin tinh trùng Hình 1.4 Các chế gây tổn thương DNA tinh trùng trình sản xuất vận chuyển tế bào tinh trùng 11 Hình 3.1 Cường độ tín hiệu tinh trùng sau nhuộm AO 29 Hình 3.2 Tần suất mức độ phân mảnh DNA tinh trùng tổng số 151 bệnh nhân nghiên cứu 31 Hình 3.3 Mối liên hệ tiền sử quai bị với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 37 Hình 3.4 Mối tương quan mức độ phân mảnh DNA tinh trùng pH tinh dịch41 Hình 3.5 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với mật độ tinh trùng 43 Hình 3.6 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với độ di động tinh trùng 45 Hình 3.7 Mối tương quan mức độ phân mảnh DNA với tỷ lệ sống tinh trùng 46 ĐẶT VẤN ĐỀ Lý chọn đề tài Vơ sinh tình trạng khơng có thai sau thời gian năm chung sống vợ chồng không sử dụng biện pháp tránh thai [110] Vô sinh trở nên phổ biến toàn giới ảnh hưởng đến 70 triệu cặp vợ chồng độ tuổi sinh sản [23] Theo ghi nhận y văn giới, tỷ lệ vô sinh nam chiếm từ 30 – 40% cách 10 năm, tỷ lệ nam giới điều trị muộn có liên quan đến bất thường tinh dịch chiếm 77,3% [7] Có ý kiến cho khả sinh sản nam giới giảm nhiều thập kỷ qua [51] tỷ lệ khuyết tật hạt nhân tinh trùng nguyên nhân gây vô sinh ước tính đại diện cho khoảng 3% cặp vợ chồng vô sinh hỗ trợ phương pháp thụ tinh ống nghiệm (IVF - In Vitro Fertilization) [62] Trong hai thập kỷ qua, hình thái tinh trùng công nhận yếu tố dự báo quan trọng kết thụ tinh nhân tạo, thông thường IVF ICSI (Intra cytoplasmic sperm injection) [74] Trong mối quan hệ mật độ tinh trùng phân mảnh DNA tinh trùng (SDF- Sperm DNA fragmentation) nam giới muộn khác nhau, mối tương quan SDF khả sống tinh trùng đánh giá [24] Nhiều nghiên cứu cho thấy mức độ đứt gãy DNA tinh trùng người nam vô sinh cao người bình thường [21], [100] có mối liên quan mức độ dị dạng tinh trùng với phân mảnh DNA tinh trùng [27], [77], yếu tố để dự đốn mức độ phân mảnh DNA tinh trùng khơng phải hình dạng tinh trùng [27] tinh trùng bình thường mang DNA bị phân mảnh [16] Tinh trùng có tỷ lệ DNA phân mảnh cao làm ảnh hưởng tới chất lượng tinh trùng kết có thai trường hợp bệnh nhân điều trị phương pháp hỗ trợ sinh sản DNA bị phân mảnh ảnh hưởng tới độ di động tinh trùng [95], làm giảm tỷ lệ thụ tinh trường hợp làm ICSI [79], tăng nguy sảy thai [108], giảm chất lượng phôi, giảm tỷ lệ tiền làm tổ [48] Theo Aziz N (2008), thất bại IUI (Intra ulterine insemination) đòi 52 Aitken R.J., de Iuliis G.N (2007), “Origins and consequences of DNA damage in male germ cells”, Reprod Biomed Online, 14, 727-733 10 Ajduk A., Yamauchi Y., Ward M.A (2006), “Sperm chromatin remodeling after intracytoplasmic sperm injection differs from that of in vitro fertilization”, Biol Reprod, 75, 442-51 11 Akira Komiya, Tomonori Kato, Yoko Kawauchi, Akihiko Watanabe, and Hideki Fuse (2014), “Clinical Factors Associated with Sperm DNA Fragmentation in Male Patients with Infertility”, Published online 2014 Aug doi: 10.1155/2014/868303 12 Alrabeeah K., Yafi F., Flageole C., Phillips S., Wachter A., Bissonnette F., Kadoch I.J & Zini A ( 2014), “Testicular sperm aspiration for nonazoospermic men: sperm retrieval and intracytoplasmic sperm injection outcomes”, Urology 84, 1342– 1346 13 Alvarez J.G (2003), “DNA fragmentation in human spermatozoa: significance in the diagnosis and treatment of infertility”, Minerva Ginecol, 55, 233-239 14 Anatomy & Physiology, “Chapter 7: The reproductive system”, OpenStax CollegeRice University, p 1223, 77005 15 Anupama Deenadayal Mettlera, Mirudhubashini Govindarajanb, Sapna Srinivasa, Sridurga Mithraprabhub, Donald Evensond and Tara Mahendran, “Male age is associated with sperm DNA/chromatin integrity”, Andrology Center, 1056/2 16 Avendaño C., Franchi A., Duran H & Oehninger S (2010), “DNA fragmentation of normal spermatozoa negatively impacts embryo quality and intracytoplasmic sperm injection outcome”, Fertility and sterility, 94(2), 549557 17 Aziz N., Agarwal A (2008), “Evaluation of sperm damage: beyond the World HealthOrganization criteria”, Fertil Steril , vol 90(pg 484–485) 18 Balhorn R (2007), “The protamine family of sperm nuclear proteins” Genome biology, 8(9) 77-82 53 19 Balhorn R (2012), “The protamine proteins”, Genome biology, 8(9) 77-82 family of sperm nuclear 20 Barratt C.L.R, Björndahl L., Menkveld R., Mortimer D (2011), “Special interest group for andrology basic semen analysis course: a continued focus on accuracy, quality, efficiency and clinical relevance”, Human Reproduction, 3207-3212 21 Benchaib M, Braun V, Lornage J, Hadj S, Salle B, Lejeune H, Guerin J.F (2003), “Sperm DNA fragmentation decreases the pregnancy rate in an assisted reproductive technique”, Hum Reprod, 18, 1023–1028 22 Boe-Hansen G B., Fedder J., Ersbøll A.K., & Christensen, (2006), “The sperm chromatin structure assay as a diagnostic tool in the human fertility clinic”, Human Reproduction, 21(6), 1576–1582 doi:10.1093/humrep/del019 23 Boivin, J., Bunting, L., Collins, J.A., and Nygren, K.G (2007), “International estimates of infertility prevalence and treatment-seeking: potential need and demand for infertility medical care”, Hum Reprod; 22: 1506– 1512 24 Brahem S., Jellad S., Ibala S., Saad A., Mehdi M (2012), “DNA fragmentation status in patients with necrozoospermia”, SystBiolReprod Med; 58:319-23 25 Bungum M., Humaidan P., Axmon A., Spano M., Bungum L., Erenpreiss J.& Giwercman A (2007), “Sperm DNA integrity assessment in prediction ofassisted reproduction technology outcome”, Human Reproduction, 22(1),174179 26 Cathy K., Naughton, Ajay K., Nangia, Ashok Agarwal (2001), “Varicocele and male infertility: Part II: Pathophysiology of varicoceles in male infertility”, Human Reproduction Update, vol 7, No 5, pp,473 – 481 27 Celik-Ozenci C., Jakab A., Kovacs T., Catalanotti J., Demir R., Bray-Ward P & Huszar G (2004), “Sperm selection for ICSI: shape properties notpredict the absence or presence of numericalchromosomal aberrations”, Human Reproduction, 19(9), 2052-2059 54 28 Cheek A.O and MacLachlan J.A (1998), “Environmental hormones and the male reproductive system”, J Androl 19: 5-10 29 Chemes H.E., Rawe Y.V (2003), “Sperm pathology: a step beyond descriptive morphology Origin, characterization and fertility potential of abnormal sperm phenotypes in infertile men”, Hum Reprod Update; 9:405 – 428 30 Churikov D., Zalenskaya I.A & Zalensky A.O (2004), “Male germlinespecific histones in mouse and man”, Cytogenetic and genome research, 105(2-4), 203-214 31 Cissen M., Wely M.V., Scholten I., et al (2016), “Measuring sperm DNA fragmentation and clinical outcomes of medically assisted reproduction: a systematic review and metaanalysis”, PLoS One;10;11:e0165125 32 Colasante A., lobascio A.M., Scarselli F., Minasi M.G., Alviggi E.P., Casciani V., Peña R., Varricchio M.T , Litwicka K., Ferrero S., Zavaglia D., Franco G., Nagy Z.P., Greco E., “The relationship between male age, sperm quality and sperm DNA damage in an unselected population of 1566 men attending a fertility centre for the first time”, Human Reproduction, Volume 26, Issue suppl_1, 2011, Pages i123–i148 33 Correa-Perez J.R., Fernandez Plegrina R., Aslanis P et al (2004), “Clinical management of men producing ejaculates characterized by high levels of dead sperm and altered seminal plasma factors consistent with epididymal necrospermia”, Fertil Steril 81:1148-50 34 Courtens J.L & Loir M (1981), “Ultrastructural detection of basic nucleoproteins: alcoholic phosphotungstic acid does not bind to arginine residues”, Journal of ultrastructure research, 74(3), 322-326 35 Dadoune J.P (1995), “The nuclear status of human sperm cells”, Micron, 26(4), 323-345 36 Daris B., Goropevsek A., Hojnik N., Vlaisavljevic V (2010), “Sperm morphological abnormalities as indicators of DNA fragmentation and fertilization in ICSI”, Archives of gynecology and obstetrics; 281(2):363-7 55 37 De Kretser D.M (1969), “Ultrastructural features of human spermiogenesis”, Zeitschrift für Zellforschung und Mikroskopische Anatomie, 98(4), 477-505 38 Denny Sakkas, Juan G., Alvarez (2010), “Sperm DNA fragmentation: mechanisms of origin, impact on reproductive outcome, and analysis”, Fertil Steril 1;93(4), pp:1027-36 39 Dixon G.H., Aiken J.M., Jankowski J.M., McKenzie D.I & Moir R (1985), “Organization and evolution of the protamine genes of salmonid fishes, In Chromosomal proteins and gene expression”, Springer US, 287-314 40 Dyer S., Chambers G.M., De Mouzon J., Nygren K.G., Zegers-Hochschild F., Mansour R., Ishihara O., Banker M., (2016), “Adamson, International committee for monitoring assisted reproductive technologies world report: Assisted reproductive technology 2008, 2009 and 2010”, Hum Reprod https://doi.org/10.1093/humrep/dew082 41 Dym M & Fawcett D.W (1971), “Further observations on the numbers of spermatogonia, spermatocytes, and spermatids connected by intercellular bridges in the mammalian testis”, Biology of Reproduction, 4(2), 195-215 42 Elaine N.M (2012), “Essentials of human anatomy and physiology”, Pearon Education, USA 43 Evenson D.P., Witkin S.S., De Harven E & Bendich A (1978), “Ultrastructureof partially decondensed human spermatozoal chromatin”, Journal ofultrastructure research, 63(2), 178-187 44 Evenson D.P., Darzynkiewicz Z & Melamed M.R (1980), “Comparison of human and mouse sperm chromatin structure by flow cytometry”, Chromosoma, 78(2), 225-238 45 Evenson D.P., Jost L.K., Baer R.K., Turner T.W & Schrader S.M (1991), “Individuality of DNA denaturation patterns in human sperm as measured bythe sperm chromatin structure assay”, Reproductive Toxicology, 5(2), 115-125 46 Evenson D.P., Jost L.K., Marshall D., Zinaman M.J., Clegg E., Purvis K & Claussen O.P (1999), “Utility of the sperm chromatin structure assay as a 56 diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic”, Human Reproduction, 14(4), 1039-1049 47 Evenson D.P & Jost L.K (2000), “Sperm chromatin structure assay is usefulfor fertility assessment”, Methods in Cell Science, 22(2-3), 169-189 48 Evenson D.P., Wixon R (2005), “Comparison of the Halosperm test kit with the sperm chromatin structure assay (SCSA) infertility test in relation to patient diagnosis and prognosis”, Fertil Steril, 84, 846–849 49 Evenson D.P (2016), “The Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA®) andother sperm DNA fragmentation tests for evaluation of sperm nuclear DNAintegrity as related to fertility”, Animal reproduction science, 169, 56-75 50 Evenson D.P (2017), “Evaluation of sperm chromatin structure and DNA strand breaks is an important part of clinical male fertility assessment”, Transl Androl Urol; 6:S495-500 51 ESHRE Capri Workshop Group (2010), “Europe, the continent with the lowest fertility”, Hum Reprod Update; 16: 590–602 52 Fernández J.L., Muriel L., Rivero M.T et al (2003), “The sperm chromatin dispersion test: a simple method for the determination of sperm DNA fragmentation”, J Androl,24, 59–66 53 Fernández J.L et al (2005), “Simple determination of human sperm DNA fragmentation with an improved sperm chromatin dispersion test”, Fertil Steri, l84, 833-842 54 Figà-Talamanca I., Cini C., Varricchio G.C., Dondero F., Gandini L., Lenzi A., Lombardo F., Angelucci L., Di Grezia R., Patacchioli F.R (1996), “Effects of prolonged autovehicle driving on male reproduction function: a study among taxi drivers”, Am J Ind Med Dec;30(6):750-8 55 Gatewood J.M., Cook G.R., Balhorn R., Bradbury E.M &Schmid C.W (1987), “Sequence-specific packaging of DNA in human sperm chromatin”, Science 236, 962–964 57 56 Gatewood J.M., Cook G.R., Balhorn R., Schmid C.W & Bradbury E.M (1990), “Isolation of four core histones from human sperm chromatin representing a minor subset of somatic histones”, J BiolChem 265,20662–20666 57 Gorczyca W., Traganos F., Jesionowska H & Darzynkiewicz Z (1993), “Presence of DNA strand breaks and increased sensitivity of DNA in situ to denaturation in abnormal human sperm cells: analogy to apoptosis of somatic cells”, Experimental cell research, 207(1), 202-205 58 Gosa´ lvez J., Gonza´ lez-Martı´ nez M., Lo´ pez-Ferna´ ndez C., Ferna´ ndez J.L., Sa´ nchez-Martı´ n P (2011), “Shorter abstinence decreases sperm deoxyribonucleic acid fragmentation in ejaculate”, Fertil Steril; 96:1083–6 59 Greco E., Romano S., Iacobelli M., Ferrero S., Baroni E., Minasi M.G., Ubaldi F., Rienzi L & Tesarik J ( 2005a), “ICSI in cases of sperm DNA damage: beneficial effect of oral antioxidant treatment”, Hum Reprod 20, 2590– 2594 60 Greco E., Iacobelli M., Rienzi L., Ubaldi F., Ferrero S & Tesarik J ( 2005b), “Reduction of the incidence of sperm DNA fragmentation by oral antioxidant treatment”, J Androl 26, 349– 353 61 Hammoud S.S., Nix D.A., Zhang H., Purwar J., Carrell D.T., Cairns B.R (2009), “Distinctive chromatin in human sperm packages genes for embryo development”, Nature, 460, 473-8 62 Haruo Katayose, Tomoko Takayama, Shoutarou Hayashi and Akira Sato (2006), “Role of mammalian sperm nuclear structure in fertilization and embryo development”, Reproductive Medicine and Biology; 5: 161–168 63 Hongyi Yang, Gang Li, Haixia Jin, Yihong Guo, Yingpu Sun (2019), “The effect of sperm DNA fragmentation index on assisted reproductive technology outcomes and its relationship with semen parameters and lifestyle”, Transl Androl Urol; 8(4):356-365 64 Jarvi K., Lau S., Lo K., Grober E., Trussell J.C., Hotaling J., Walsh T., Kolettis P., Chow V., Zini A., Spitz A., Fischer M., Domes T., Zeitlin S., Fuchs E., Hedges J., Samplaski M., Sandlow J., Brannigan R., Dupree J., Goldstein M., Ko E., Smith J., Kamal P., Hsieh M., Bieniek J., Shin D., Nangia A., “Results of 58 a North American Survey on the Characteristics of Men Presenting for Infertility”, Investigations: the Andrology Research Consortium, J Urol 199 (2018) e247 https://doi.org/10.1016/j.juro.2018.02.658 65 Joanna Jakubik-Uljasz, Kamil Gill, Aleksandra Rosiak-Gill, Malgorzata Piasecka (2020), “Relationship between sperm morphology and sperm DNA dispersion”, Transl Androl Urol;9(2):405-415 66 Joel L Marmar (2001), “Varicocele and male infertility: Part II: The pathophysiology of varicoceles in the light of current molecular and genetic information”, Human Reproduction Update, Volume 7, Issue 5, September 2001, Pages 461–472 67 Kemal Duru N., Morshedi M & Oehninger S ( 2000), “Effects of hydrogen peroxide on DNA and plasma membrane integrity of human spermatozoa”, Fertil Steril; 74, 1200– 1207 68 Khalili M.A., Aghaie‐Maybodi F., Anvari M., Talebi A.R (2006), “Sperm nuclear DNA in ejaculates of fertile and infertile men: correlation with semen parameters”, Urol J; 3(3):154-159 69 Koppers A.J., Iuliis G.N., Finnie J.M., McLaughlin E.A & Aitken R.J (2008), “Significance of mitochondrial reactive oxygen species in the generation of oxidative stress in spermatozoa”, J Clan Endocrinol Metab 93, 3199– 3207 70 Kosower N.S., Katayose H & Yanagimachi R (1992), “Thiol‐disulfide status and acridine orange fluorescence of mammalian sperm nucleic”, Journal of andrology, 13(4), 342-348 71 Krawetz S.A & Dixon G.H (1988), “Sequence similarities of the protamine genes: implications for regulation and evolution”, Journal of molecular evolution, 27(4), 291-297 72 Kristian Leisegang, Sulagna Dutta (2020), “Do lifestyle practices impede male fertility? Invited review Special Edition: An Update on Male Infertility: Factors, Mechanisms and Interventions”, Andrologia; 00:e13595 73 Kruger, T F., Menkveld, Lombard C.J., Van der Merwe J.P., Van Zyl J.A., et al (1986), “Sperm morphologic features as a prognostic factor in in vitro fertilization”, Fertil Steril 46:1118-23 59 74 Kruger T.F., Acosta A.A., Simmons K.F., Swanson R.J., Matta J.F., Oehninger S 1988, “Predictive value of abnormal sperm morphology in in vitro fertilization”, Fertil Steril; 49:112-7 75 Lasen L., Scheike T., Jensen T.K., Bonde J P, Giwercman A (2000), “Computer-assited semen analaysis prameters as predictors for fertility of men from the general population”, The Danish First Pregnancy Planner Study Team Human Reprod ;15:1562-1567 76 Larson - Cook K.L., DeJonge C., Barnes A., Jost L & Evenson cs D.P (2000), “Relationship between assisted reproductive techniques (ART) outcome andstatus of chromatin integrity as measured by the Sperm Chromatin StructureAssay (SCSA)”, Hum Reprod, 15, 1717-1722 77 Larson-Cook K.L., Brannian J.D., Hansen K.A., Kasperson K.M., Evenson cs D.P (2003), “Relationship between the outcomes of assisted reproductive techniques and sperm DNA fragmentation as measured by the sperm chromatin structure assay”, Fer & Ster, 80(4), 895-902 78 Levine H., Jorgensen N., Martino-Andrade A., Mendiola J., Weksler-Derri D., Mindlis I., Pinotti R & Swan S.H (2017), “Temporal trends in spermcount: a systematic review and meta-regression analysis”, Hum ReprodUpdate; 23, 646–659 79 Lopes S., Sun J.G., Jurisicova A., Meriano J., Casper R.F (1998), “Sperm deoxyribonucleic acid fragmentation is increased in poor-quality semen samples and correlates with failed fertilization in intracytoplasmic sperm injection”, Fertil Steril, 69, 528–532 80 Majzoub A., Esteves S.C., Gosálvez J., et al (2016), “Specialized sperm function tests in vari cocele and the future of andrology laboratory”, Asian J Androl; 18(2): 205-12 81 Mary Ann Emanuele, M.D., Nicholas V Emanuele, M.D (1998), “Alcohol’s Effects on Male Reproduction”, Alcohol Health & Research World, Vol 22, No 3, 1998, 195 – 201 82 Menkveld R., Wong W.Y., Lombard CJ., Wetzels A.M., Thomas C.M., Merkus H.M., Steegers-Theunissen R.P (2001), “Semen parameters including 60 WHO and strict criteria morphology, in a fertile and subfertile population: an effort towards standardization of in-vivo thresholds”, Hum Reprod, vol 16 (pg 1165-1171) 83 Milewski R., Milewska AJ., Czerniecki J., Lesniewska M & Wolczynski S (2013), “Analysis of the demographic profile of patients treated for infertility using assisted reproductive techniques in 2005–2010”, Ginekol Pol 84, 609– 614 84 Mortimer D (1994), “Sperm physiology” In: Mortimer D., ed Practical laboratory andrology”, Oxford University Press, UK 85 Muriel L., Meseguer M., Fernandez JL., et al (2006), “Value of the sperm chromatin dispersion test in predicting pregnancy outcome in intrauterine insemination: a blind prospective study”, Human Reprod ;21(3):738‐744 86 Oko R.J., Jando V., Wagner C.L., Kistler W.S., Hermo L.S (1996), “Chromatin reorganization in rat spermatids during the disappearance of testisspecific histone, H1t, and the appearance of transition proteins TP1 and TP2”, Biol Reprod, 54(5), 1141–57 87 Pacey A.A., Povey A.C., Clyma J.A., McNamee R., Moore H.D., Baillie H., Cherry N.M., Participating Centres of Chaps-UK Author Notes (2014), “Modifiable and non-modifiable risk factors for poor sperm morphology”, Human Reproduction, Volume 29, Issue 8, August 2014, Pages 1629–1636 88 Parmegiani L., Cognigni G., Filicori M (2012), “New advances in Intracytoplasmic sperm injection (ICSI)”, Intech, 2, 99-117 89 Plessis SS., McAllister DA., Luu A., Savia J., Agarwal A & Lampiao F ( 2010), “Effects of H(2)O(2) exposure on human sperm motility parameters, reactive oxygen species levels and nitric oxide levels”, Andrologia 42, 206– 210 90 Potts R., Newbury C., Smith G., Notarianni L., Jefferies T (1999), “Sperm chromatin damage associated with male smoking”, Mutat Res; 423: 103-111 [DOI:10.1016/S0027-5107(98)00242-5] 61 91 Ribas-Maynou J., García-Peiró A., Fernández-Encinas A., et al (2013), “Comprehensive analysis of sperm DNA fragmentation by five different assays: TUNEL assay, SCSA, SCD test and alkaline and neutral Comet assay”, Andrology; 1:715-722 92 Richthoff J , Spano M., Giwercman Y.L., Frohm B., Jepson K., Malm J., Elzanaty S., Stridsberg M., Giwercman A (2002), “The impact of testicular and accessory sex gland function on sperm chromatin integrity as assessed by the sperm chromatin structure assay (SCSA)”, Human Reproduction, Volume 17, Issue 12, December 2002, Pages 3162–3169 93 Said T.M., Paasch U., Glander H.J., Agarwal A (2004), “Role of caspases in male infertility”, Human Reproduction Update, 10(1), 39-51 94 Said T.M., Aziz N., Sharma R.K., Lewis-Jones I., Thomas A.J., Agarwal A (2005), “Novel association between sperm deformity index and oxidative stress-induced DNA damage in infertile male patients”, Asian J Androl, 7, 121126 95 Salah Elbashira, Yasmin Magdib, Ayman Rashedc, Mohamed Ahmed, IbrahimdYehiaEdrisd, Ahmed Mostafa, Abdelazizd (2018), “Relationship between sperm progressive motility and DNA integrity in fertile and infertile men”, Middle East Fertility Society Journal, Volume 23, Issue 3, pp: 195-1978 96 Sandro C Esteves, Daniele Santi, Manuela Simoni (2020), “An update on clinical and surgical interventions to reduce sperm DNA fragmentation in infertile men”, Andrology; 8:53–81 97 Santi D., Spaggiari G., Simoni M (2018), “Sperm DNA fragmentation index as a promising predictive tool for male infertility diagnosis and treatment management – meta-analyses”, Reprod Biomed Online.;37:315-326 98 Sepaniak S, Forges T, Gerard H, Foliguet B, Bene MC, Monnier Barbarino P (2006), “The influence of cigarette smoking on human sperm quality and DNA fragmentation”, Toxicology; 223(1-2):54-60 99 Sergerie M., Laforest G., Boulanger K., Bissonnette F and Bleau1G., “Longitudinal study of sperm DNA fragmentation as measured by terminal 62 uridine nick end-labelling assay”, Human Reproduction Vol.20, No.7 pp 1921– 1927, 2005 100 Sergerie M., Laforest G., Bujan L., Bissonnette F., Bleau G (2005), “Sperm DNA fragmentation: threshold value in male fertility”, Hum Reprod, 20, 3446– 3451 101 Setchell BP (1986), “Spermatogenesis and spermatozoa”, In: Austin CR, Short RV, eds Reproduction in mamals, Book 1: Germ cells and fertilization Cambridge University Press; 63-101 102 Shi, TY, Chen, G, Huang, X, Yuan, Y, Wu, X, Wu, B, Li, Z, Shun, F, Chen, H & Shi, H ( 2012), “Effects of reactive oxygen species from activated leucocytes on human sperm motility, viability and morphology”, Int J Androl Volume44, Issues1May 2012 Pages 696-703 103 Sivanarayana T, Ravi Krishna C, Jaya Prakash G, Krishna KM, Madan K, Sudhakar G, et al (2014), “Sperm DNA fragmentation assay by sperm chromatin dispersion (SCD): correlation between DNA fragmentation and outcome of intracytoplasmic sperm injection”, Reproductive medicine and biology,13(2):8794 104 Skakkebaek NE, Rajpert‐De Meyts E, Buck Louis GM, Toppari J, Andersson A‐M, Eisenberg ML, Kold Jensen T, Jorgensen N, Swan SH, Sapra KJ, Ziebe S, Priskorn L & Juul A (2016), “Male reproductive disorders and fertility trends: influences of environment and genetic susceptibility”, Physiol Rev 96, 55– 97 105 Skakkebaek NE, Jorgensen N, Andersson A‐M, Juul A, Main KM, Kold Jensen T & Toppari J (2019), “Populations, decreasing fertility, and reproductive health”, Lancet 393, 1500– 1501 106 Stuppia L, Franzago M, Ballerini P, Gatta V & Antonucci I ( 2015), “Epigenetics and male reproduction: the consequences of paternal lifestyle on fertility, embryo development, and children lifetime health”, Clin Epigenet; 7, 120 107 Tang SS., Gao H., Zhao Y., et al (2010), “Aneuploidy and DNA fragmentation in morphologically abnormal sperm”, Int J Androl;33:e163-79 63 108 Tesarik J., Greco E., Mendoza C (2004), “Late, but not early, paternal effect on human embryo development is related to sperm DNA fragmentation”, Hum Reprod, 19, 611–615 109 Utsuno H, Oka K, Yamamoto A, Shiozawa T (2013), “Evaluation of sperm head shape at high magnification revealed correlation of sperm DNA fragmentation with aberrant head ellipticity and angularity”, Fertility and sterility.;99(6):1573-80 110 Venkatesh T, Suresh PS & Tsutsumi R ( 2014), “New insights into the genetic basis of infertility”, Appl Clin Gen 7, 235– 243 111 Ward W.S (2010), “Function of sperm chromatin structural elements in fertilization and development”, Mol Hum Reprod, 16, 30-36 112 Wiweko B, Utami P (2017), “Predictive value of sperm deoxyribonucleic acid (DNA) fragmentation index in male infertility”, Basic Clin Androl.;27:1 113 World Health Organization 2010, “Laboratory manual for the examination and processing of human semen” 114 Xiangrong Cui, Xuan Jing, Xueqing Wu, Zhenqiang Wang, and Qiang Li “Potential effect of smoking on semen quality through DNA damage and the down regulation of chk1 in sperm” Mol Med Rep 2016 Jul; 14(1): 753–761 115 Zhao M., Shirley C.R., Mounsey S & Meistrich M.L (2004), “Nucleoprotein transitions during spermiogenesis in mice with transition nuclear protein Tnp1 and Tnp2 mutations”, Biology of reproduction, 71(3), 1016-1025 116 Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi (2008), “Analysis of sperm chromosomal abnormalities and sperm DNA fragmentation in infertile males”, Article in Chinese, 25(6) pp:681-5 117 Zini A., Meriano J., Kder K., Jarvi K., Laskin C.A & Cadesky K (2005), “Potential adverse effect of sperm DNA damage on embryo quality after ICSI”, Hum Reprod, 20, 3476-3480 64 PHỤ LỤC PHIẾU ĐỒNG Ý THAM GIA NGHIÊN CỨU Tên đề tài: Đánh giá mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng số tinh dịch đồ nam giới vô sinh đến khám điều trị Bệnh viện A Thái Nguyên Chủ nhiệm đề tài: Dương Thị Nhàn Đơn vị công tác: Khoa Hỗ trợ Sinh sản - Bệnh viện A Thái Nguyên Quyền lợi tham gia: Được cung cấp thông tin đầy đủ nội dung nghiên cứu, lợi ích nghĩa vụ người tham gia nghiên cứu, nguy cơ, tai biến xảy q trình nghiên cứu Việc tham gia nghiên cứu hoàn toàn tự nguyện, khơng bị ép buộc có quyền tự ý rút khỏi nghiên cứu thời điểm mà không bị phân biệt đối xử Các thông tin bí mật, riêng tư ngưởi tham gia nghiên cứu đảm bảo, số liệu kết nghiên cứu phục vụ cho mục đích khoa học Sau nhóm nghiên cứu giải thích nguy xảy ra, tơi đồng ý tham gia Việc tham gia nghiên cứu hoàn toàn tự nguyện Thái Nguyên, ngày…….tháng…….năm…… (Người tình nguyện tham gia ký ghi rõ họ tên) 65 PHỤ LỤC PHIẾU THU THẬP THÔNG TIN BỆNH NHÂN Họ tên người bệnh:……………………………………Năm sinh……………… Địa chỉ:…………………………………………………………………………… Nghề nghiệp……………………………………………………………………… I TIỀN SỬ NGƯỜI BỆNH Mắc quai bị Có:… Khơng:… Có:… Khơng:… Hút thuốc Uống rượu, bia Có:… Khơng:… II XÉT NGHIỆM NỘI TIẾT FSH:……… (mIU/mL) LH:……… (mIU/mL) Testoteron:……… (nmol/L) Thái Nguyên, ngày…….tháng…….năm…… Người thu thập thông tin 66 PHỤ LỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Dương Thị Nhàn, Nguyễn Phú Hùng (2020), “Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng số tinh dịch đồ nam giới vơ sinh”, Tạp chí Khoa học Công nghệ - Đại học Thái Nguyên, số 225, tập 08, trang 105-111 ... HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC  DƯƠNG THỊ NHÀN ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN HỆ GI? ?A MỨC ĐỘ PHÂN MẢNH DNA TINH TRÙNG VÀ CÁC CHỈ SỐ TINH DỊCH ĐỒ Ở NAM GIỚI VÔ SINH ĐẾN KHÁM VÀ ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH... tương quan mức độ phân mảnh DNA tinh trùng pH tinh dịch4 1 Hình 3.5 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với mật độ tinh trùng 43 Hình 3.6 Mối liên hệ mức độ phân mảnh DNA với độ di động tinh trùng. .. khai đánh giá mức độ phân mảnh DNA tinh trùng nhiều phương pháp khác Tuy nhiên, để đánh giá mối tương quan số tinh dịch đồ với mức độ phân mảnh trường hợp vô sinh nam đến khám điều trị khoa Hỗ