BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Hoàng Minh Ngân NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA HÌNH THÁI PHƠI NANG VÀ ĐỘT BIẾN NHIỄM SẮC THỂ CỦA PHÔI TRONG THỤ TINH ỐNG NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Hà Nội – 2020 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Hoàng Minh Ngân NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA HÌNH THÁI PHƠI NANG VÀ ĐỘT BIẾN NHIỄM SẮC THỂ CỦA PHÔI TRONG THỤ TINH ỐNG NGHIỆM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC Hƣớng dẫn 1: GS.TS Nguyễn Đình Tảo Hƣớng dẫn 2: TS Nguyễn Trung Nam Hà Nội – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 28 tháng năm 2020 TÁC GIẢ LUẬN VĂN HOÀNG MINH NGÂN LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn Học viện Khoa học Công nghệ - Viện hàn lâm Khoa học công nghệ Việt Nam cho phép tạo điều kiện để học tập, nâng cao tri thức Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám đốc Bệnh viện Đa khoa 16A Hà Đông, Trung tâm Hỗ trợ sinh sản Bệnh viện Đa khoa 16A, tạo điều kiện cho thực thành cơng luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Nguyễn Đình Tảo, Ngun phó giám đốc Viện Mô phôi lâm sàng Quân đội – HVQY, TS Nguyễn Trung Nam, Viện phó Viện Cơng nghệ Sinh học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, người thầy trực tiếp, tận tâm hết lịng hướng dẫn, tạo điều kiện cho tơi kinh nghiệm quý báu suốt thời gian nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn nhà khoa học, Thầy (Cô) Hội đồng chấm luận văn đóng góp ý kiến q báu để tơi hồn thiện luận văn Trong q trình thực đề tài nghiên cứu tơi hướng dẫn giúp đỡ nhiều thầy bạn bè để hồn thành đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến: Tất thầy cô giáo, giảng viên cán nhân viên Học viện Khoa học Công nghệ - Viện hàn lâm Khoa học công nghệ Việt Nam tạo điều kiện, hướng dẫn, bảo tận tình giúp tơi có lượng kiến thức định để hồn thành mơn học đề tài luận văn Tập thể cán bộ, nhân viên Trung tâm Hỗ trợ sinh sản Bệnh viện Đa khoa 16A tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình học tập, thu thập số liệu hoàn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè động viên, hỗ trợ mặt sống, học tập công tác Hà Nội, ngày 28 tháng năm 2020 HOÀNG MINH NGÂN DANH MỤC CÁC THUẬT NGỮ VÀ CHỮ VIẾT TẮT a-CGH Array Comparative Genomic Hybridization/ Lai so sánh/đối chiếu gen dùng chíp DNA AMH Anti Mullerian Hormone a-SNP Array Single Nucleotide Polymorphism/ Phân tích đa hình đơn dùng chíp DNA CGH Comparative Genomic Hybridization/ Lai so sánh gen FISH Fluorescent In Situ Hybridization/ Lai huỳnh quang chỗ ICM Inner Cell Mass/ Khối tế bào nụ phôi ICSI Intra Cytoplasmic Sperm Injection/ Tiêm tinh trùng vào bào tƣơng noãn IVF In Vitro Fertilization/ Thụ tinh ống nghiệm NGS Next Generation Sequencing/ Giải trình tự gene hệ NST Nhiễm sắc thể PGT-A Preimplantation Genetic Testing for Aneuploidy/ Xét nghiệm di truyền lệch bội tiền làm tổ TE Trophectoderm Epithelium/ Nguyên bào nuôi DANH MỤC CÁC BẢNG 1.1 Đánh giá phôi nang theo tiêu chuẩn Gardner D K 19 2.1 Đánh giá chất lƣợng phôi nang nghiên cứu theo tác giả Gardner D K (1999) tác giả Majumdar (2017) 46 3.1 Phân bố tuổi mẹ nhóm đối tƣợng nghiên cứu 57 3.2 Các NST đột biến thƣờng gặp 61 3.3 Đánh giá hình thái ni (TE) 65 3.4 Đánh giá hình thái nụ phơi (ICM) 66 3.5 Đánh giá chất lƣợng 953 phôi nang ngày nuôi cấy ngày 68 3.6 Mối liên quan hình thái phôi nang tuổi mẹ 70 3.7 Mối liên quan độ giãn rộng khoang phôi với đột biến NST 72 3.8 Mối liên quan hình thái nuôi với đột biến NST 74 3.9 Mối liên quan hình thái nụ phơi với đột biến NST 76 3.10 Mối liên quan hình thái phơi nang với đột biến số lƣợng NST 78 3.11 Mối liên quan hình thái phơi nang với đột biến cấu trúc NST 79 3.12 Mối liên quan hình thái phôi nang với đột biến khảm NST 81 3.13 Mối liên quan hình thái phơi nang với đột biến NST 83 3.14 Mối liên quan hình thái phơi nang với số lƣợng đột biến NST tính phơi 85 3.15 Mối liên quan nhóm tuổi mẹ với đột biến NST 86 3.16 Nguy có phơi đột biến NST phụ nữ >35 tuổi 89 DANH MỤC CÁC HÌNH 1.1 Đánh giá phơi nang Gardner D K(1999) 20 1.3 Hình ảnh phơi khảm NST số 2s, 5s, 10 28 1.4 Hình ảnh phơi bình thƣờng 46,XY 29 1.5 Các giai đoạn trình giải trình tự xử lý số liệu 33 2.1 Các mơi trƣờng sử dụng trong q trình ni cấy sinh thiết 41 2.2 Tủ nuôi cấy phôi trigas tủ khí có chƣơng trình khử nhiệt 42 2.3 Tủ trữ mẫu chuyên dụng 42 2.4 Tủ thao tác vô trùng 42 2.5 Lồng thao tác với trứng phơi 43 2.6 Tủ cấy khí G210 43 2.7 Kính hiển vi đảo ngƣợc vi thao tác gắn hệ thống laser 43 2.8 Máy phân tích kết giải trình tự Miseq Illumine 43 2.9 Chuẩn bị đĩa test (A) đĩa sinh thiết phôi (B) 47 2.10 Các bƣớc sinh thiết phôi nang ngƣời 49 2.11 Đĩa rửa cụm tế bào sau sinh thiết 50 2.12 Ống PCR cách ghi kí hiệu ống 51 2.13 Thao tác Bullet rửa phôi bào 52 3.1 Hình ảnh mẫu có NST 47,XY,+21 63 3.2 Hình ảnh mẫu có NST 46,XX,+13,-16 63 3.3 Hình ảnh mẫu có NST 45,X 63 3.4 Hình ảnh chất lƣợng phơi nang ngày 69 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ 3.1Kết nuôi cấy phôi nang ngày 56 3.2Tỷ lệ xuất đột biến NST phôi nang ngày 59 3.3Tỷ lệ số lƣợng đột biến NST tính phơi 60 3.4Đánh giá mức độ giãn rộng khoang phôi 64 3.5Phân bố tuổi mẹ theo đánh giá hình thái phơi 71 3.6Phân bố tuổi mẹ theo đột biến NST 88 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐỊNH NGHĨA, TÌNH HÌNH VƠ SINH THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 1.1.1 Định nghĩa vô sinh 1.1.2 Tình hình vơ sinh giới .7 1.1.3 Tình hình vơ sinh Việt Nam 1.2 QUÁ TRÌNH THỤ TINH VÀ LÀM TỔ CỦA PHÔI NGƢỜI 1.2.1 Sự thụ tinh - giai đoạn hình thành hợp tử 1.2.2 Sự phân cắt làm tổ phôi 1.2.3 Quá trình phát triển đánh giá phơi tới giai đoạn ngày thụ tinh ống nghiệm 1.3 HÌNH THÁI PHƠI NANG 11 1.3.1 Những nghiên cứu phôi nuôi cấy ngày 11 1.3.2 Những nghiên cứu mức độ phát triển khoang phôi nang 13 1.3.3 Những nghiên cứu hình thái nụ phôi .14 1.3.4 Những nghiên cứu hình thái ni 15 1.3.5 Những nghiên cứu đột biến NST giai đoạn phôi nang 16 1.3.6 Đánh giá phôi nang theo tiêu chuẩn Gardner D K (1999) 18 1.4 ĐỘT BIẾN NHIỄM SẮC THỂ VÀ PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NHIỄM SẮC THỂ Ở PHƠI 21 1.4.1 Đột biến NST phôi 21 1.4.1.1 Đột biến NST 21 1.4.1.2 Đặc điểm số bệnh di truyền đột biến số lƣợng NST thƣờng gặp 23 1.4.1.3 Các bệnh đột biến cấu trúc NST thƣờng phôi 25 DANH SÁCH BỆNH NHÂN STT Bệnh nhân Năm sinh STT Bệnh nhân Năm sinh 151 PHẠM THỊ L 1993 176 NGUYỄN THỊ T 1987 152 VŨ THÚY H 1977 177 PHẠM THANH B 1992 153 HOÀNG THỊ TH 1979 178 HÀ VIỆT H 1994 154 HOÀNG MÙI NH 1986 179 NGUYỄN THỊ H 1989 155 ĐINH THỊ T 1997 180 NGUYỄN THỊ THU TH 1982 156 CHU THỊ H 1975 181 ĐINH THỊ D 1989 157 ĐỖ THỊ L 1991 182 NGUYỄN THỊ TH 1988 158 LÊ THỊ X 1974 183 ĐOÀN THỊ PH 1986 159 TRẦN NGUYỄN VÂN N 1983 184 LÊ THỊ TUYẾT H 1982 160 CHU THỊ H 1975 185 PHẠM HƢNG TH 1997 161 ĐỖ KIM NG 1983 186 PHAN THỊ NH 1981 162 PHẠM THỊ H 1982 187 PHẠM THỊ NH 1983 163 NGUYỄN THỊ TH 1989 188 VŨ HẢI N 1982 164 CAO HỒNG L 1977 189 TRẦN THỊ H 1997 165 HOÀNG THỊ TH 1979 190 TRẦN THỊ THANH TH 1975 166 PHAN THỊ H 1983 191 NGÔ THỊ KIM Q 1979 167 TRẦN THU TH 1981 192 NGUYỄN THỊ NG 1984 168 HỒ THỊ PH 1979 193 VŨ QUỲNH TH 1986 169 ĐỖ THỊ B 1975 194 BÙI THỊ TH 1983 170 NGUYỄN THỊ THU TH 1982 195 HUỲNH THỊ TUYẾT L 1996 171 LƢU THỊ H 1987 196 ĐƢỜNG THỊ MAI H 1990 172 PHAN THỊ H 1991 197 CHU THỊ H 1982 173 HOÀNG THỊ HỒNG NH 1985 198 NGUYỄN THỊ NG 1988 174 LÊ THỊ H 1984 199 NGUYỄN THỊ XUÂN L 1983 175 HOÀNG THỊ CH 1989 200 LÊ THỊ B 1977 HÌNH ẢNH MỘT SỐ EM BÉ ĐƢỢC SINH RA KHỎE MẠNH NHỜ PHƢƠNG PHÁP PGT-A SỬ DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ GEN THẾ HỆ MỚI TRONG THỤ TINH ỐNG NGHIỆM TẠI TRUNG TÂM HỖ TRỢ SINH SẢN BỆNH VIỆN ĐA KHOA 16A HÀ ĐƠNG DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Hồng Minh Ngân, Nguyễn Đình Tảo, Nguyễn Trung Nam, Triệu Tiến Sang, 2020, Nghiên cứu mối liên quan hình thái phơi nang với bất thường nhiễm sắc thể, Tạp chí Y – Dược học Quân sự, (3), tr.74-81 Hoang Minh Ngan, Nguyen Dinh Tao, Nguyen Trung Nam, Trieu Tien Sang, 2020, Study on the relationship between blastocyst morphology and chromosome abnormality, Journal of Military Pharmaco – Medicine, pp.197204 Hồng Minh Ngân, Nguyễn Đình Tảo, Nguyễn Trung Nam, Triệu Tiến Sang, 2020, Khảo sát mối liên quan tuổi mẹ với hình thái đột biến nhiễm sắc thể phơi ngày 5, Tạp chí y học Việt Nam, 490(2) Hồng Minh Ngân, Nguyễn Đình Tảo, Nguyễn Trung Nam, Triệu Tiến Sang, 2020, Đánh giá mối liên quan hình thái phơi nang với bất thường nhiễm sắc thể, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Vit Nam, 62(7) Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 3-2020 NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA HÌNH THÁI PHƠI NANG VỚI BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ Hồng Minh Ngân1, Nguyễn Đình Tảo2 Nguyễn Trung Nam3, Triệu Tiến Sang3 TÓM TẮT Mục tiêu: Đánh giá mối liên quan hình thái phơi nang với bất thường nhiễm sắc thể (NST) Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu hồi cứu, mô tả cắt ngang 953 phôi ngày thứ lâm sàng lọc NST Trung tâm Hỗ trợ Sinh sản, Bệnh viện Đa khoa 16A Hà Đông từ 2/2018 - 5/2019 Kết quả: Tỷ lệ bất thường NST phôi nang lớn, bất thường khảm 56,68%, bất thường số lượng nhiễm sắc thể 36,6%, bất thường cấu trúc 6,68% Số phơi bình thường chiếm đa số nhóm phơi phân loại hình thái tốt (69,1%) Tỷ lệ mang 1, 2, bất thường tăng dần nhóm phơi trung bình xấu Nguy bất thường NST tăng lên độ giãn rộng khoang phơi thấp hình thái ni, hình thái nụ phơi xấu Với hình thái phơi ngày thứ xếp loại tốt, nguy bất thường nhiễm sắc thể giảm (OR = 0,22; 95%CI = 0,16 - 0,29; p < 0,001) Kết luận: Có mối liên quan chặt chẽ hình thái phơi nang với bất thường NST Độ giãn rộng (ĐGR) phơi thấp, hình thái ni, nụ phơi hình thái phơi nang xấu tỷ lệ bất thường NST tăng lên * Từ khóa: Bất thường nhiễm sắc thể; Phôi nang; Thụ tinh ống nghiệm; Sàng lọc di truyền ĐẶT VẤN ĐỀ Kỹ thuật hỗ trợ sinh sản kết hợp với kỹ thuật sinh học phân tử chẩn đốn di truyền trước chuyển phơi bệnh nhân (BN) có nguy cao bất thường NST Chẩn đốn rối loạn NST trước chuyển phơi giúp sàng lọc, đánh giá bất thường NST phôi trước chuyển vào buồng tử cung người mẹ Phương pháp ứng dụng lâm sàng cho kết cải thiện tỷ lệ thành công điều trị vơ sinh áp dụng BN có nguy cao bất thường NST Đặc biệt, cặp vợ chồng có yếu tố nguy tuổi mẹ cao, chuyển phôi thất bại nhiều lần sảy thai liên tiếp Để cải thiện tỷ lệ thành công kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm (in vitro fertilization - IVF) giảm tỷ lệ sảy thai, số trường hợp nên cân nhắc sàng lọc rối loạn NST tiền làm tổ (preimplantation genetic screening - PGS) Ưu điểm kỹ thuật không xâm lấn người mẹ, nhanh chóng, giảm chi phí tránh gánh nặng tinh thần áp dụng cho tất BN Gần đây, kết nghiên cứu cho thấy, cặp vợ chồng có phơi làm PGS tỷ lệ chuyển phơi, có thai tăng lên đáng kể Bệnh viện Đa khoa 16A Hà Đông Học viện Quân y Học viện Khoa học Cơng nghệ Người phản hồi: Hồng Minh Ngân (hmngan3509@gmail.com) Ngày nhận bài: 03/4/2020 Ngày báo đăng: 15/4/2020 74 Tạp chí y - dợc học quân số 3-2020 Trên giới, có nghiên cứu sử dụng đặc điểm hình thái phơi nang kết hợp với xét nghiệm sàng lọc di truyền phôi nhằm lựa chọn phôi tiềm để chuyển vào buồng tử cung người mẹ, tăng hiệu chu kỳ IVF Tuy nhiên, nghiên cứu mối liên quan hình thái đến rối loạn NST phơi nang cịn Do vậy, chúng tơi tiến hành đề tài nhằm: Nghiên cứu mối liên quan hình thái phôi nang với bất thường NST Phương pháp nghiên cứu - Nghiên cứu hồi cứu, mô tả cắt ngang - Các phơi đánh giá chất lượng hình thái phôi theo tiêu chuẩn tác giả Gardner D.K (1999) Hình thái ni nụ phơi chia thành loại A, B, C dựa số lượng tế bào cách xếp tế bào Bảng 1: Hình thái phơi nang theo tiêu chuẩn Gardner Majumda Xếp loại ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mô tả Tốt Phơi có mức ĐGR ≥ Phân loại ICM TE là: AA; AB; BA Trung bình Phơi có mức ĐGR ≥ Phân loại ICM TE là: BB; CA Đối tượng nghiên cứu 953 phôi ngày thứ tạo phương pháp tiêm tinh trùng vào bào tương nỗn có kết hợp đánh giá hình thái phơi tiến hành sinh thiết sàng lọc NST Trung tâm Hỗ trợ Sinh sản, Bệnh viện Đa khoa 16A Hà Đông từ 2/2018 5/2019 * Tiêu chuẩn lựa chọn: - Các phơi có mức độ phát triển giãn rộng xoang phôi ≥ độ Các phôi sinh thiết tiến hành sàng lọc phương pháp giải trình tự gen hệ (NGS) * Tiêu chuẩn loại trừ: - Các phôi không đủ điều kiện sinh thiết, phát triển giai đoạn sớm có dấu hiệu ngừng phát triển - Phơi cặp bố mẹ người gia đình bố mẹ mắc bệnh di truyền; Phôi cặp bố mẹ mắc bệnh nội khoa cấp tính hay mạn tính Phơi có mức ĐGR < Xấu Hoặc ĐGR ≥ 3, phân loại ICM TE là: AC; BC; CB; CC Các phôi sinh thiết, rửa tế bào mang mẫu sàng lọc: Lấy cụm tế bào nuôi từ phôi nuôi cấy ngày thứ kim sinh thiết, rửa cụm tế bào thật dung dịch PBS (Phosphate Buffered Saline) cho mẫu vào ống PCR cất vào bullet Phân tích mẫu phương pháp NGS sử dụng kít VERIEQ máy MiseQ Thu thập số liệu cách chụp ảnh qua kính hiển vi đảo ngược vi thao tác Carl zeiss (Đức) Xử lý liệu phần mềm SPSS 20.0 75 Tạp chí y - dợc học quân sè 3-2020 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Tỷ lệ loại bất thường NST phôi nang Bất thường số lượng (36,6%) Bất thường cấu trúc (6,68%) Bất thường khảm (56,68%) Biểu đồ 1: Tỷ lệ loại bất thường NST phôi nang Trong 953 phôi sàng lọc, có 614 phơi đột biến (64,53%) Điều cho thấy, tỷ lệ đột biến NST cao Trong phôi bất thường NST, tỷ lệ bất thường khảm cao 56,68%, bất thường số lượng NST (36,6%) Trong đó, tỷ lệ bất thường nhóm NST thừa NST 18,73% 17,92% Điều tương tự nghiên cứu Franasiak CS (2014) nghiên cứu 15.169 phơi, nhóm tác giả tỷ lệ trisomy/monosomy xấp xỉ Tỷ lệ bất thường thừa NST NST phổ biến gần tương đương [3] Nhóm bất thường cấu trúc NST nghiên cứu chiếm tỷ lệ thấp (6,68%) Mối liên quan hình thái phơi nang với bất thường NST Bảng 2: Mối liên quan hình thái phơi nang với bất thường NST Bình thường n (%) Bất thường NST n (%) OR (95%CI) Độ 364 (68,70) 166 (31,30) 0,32 (0,25 - 0,42) Độ 153 (44,60) 190 (55,40) 2,14 (1,64 - 2,80) Độ 22 (27,50) 58 (72,50) 3,83 (2,30 - 6,37) A 303 (72,30) 116 (27,70) 0,30 (0,23 - 0,40) B 214 (49,90) 215 (50,10) 1,64 (1,27 - 2,13) C 22 (21,00) 83 (79,00) 5,89 (3,61 - 9,62) p Độ giãn rộng < 0,001 Hình thái nuụi 76 < 0,001 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 3-2020 Hình thái nụ phơi A 415 (68,7) 189 (31,3) 0,25 (0,19 - 0,33) B 104 (39,1) 162 (60,9) 2,69 (2,01 - 3,60) C 20 (24,1) 63 (75,9) 4,66 (2,77- 7,84) Mức ĐGR xoang phôi thể tốc độ phát triển phôi đồng nghĩa với việc phơi phát triển nhanh khả có bất thường NST thấp, điều thể rõ kết chúng tơi Những phơi có ĐGR loại (phân loại thấp ghi nhận nghiên cứu) làm tăng nguy bất thường NST (OR = 3,83; 95%CI = 2,3 - 6,37; p < 0,001) so với nhóm cịn lại Trong đó, phơi có ĐGR xoang phôi loại 5, nguy bất thường NST giảm đáng kể (OR = 0,32; 95%CI = 0,25 - 0,42; p < 0,001) so với nhóm cịn lại Điều đề cập tới nghiên cứu Wang (2018) 1.559 phôi, ĐGR xoang phôi liên quan đáng kể với bất thường NST: ĐGR xoang phôi độ cho kết chuẩn bội 31,2%; độ cho kết chuẩn bội 32,2%; độ cho kết chuẩn bội 48,8% [4] Lá nuôi tế bào (TE) yếu tố để đánh giá hình thái phơi nang Nghiên cứu rằng, phôi với TE bình thường (TE loại A) làm giảm nguy bất thường NST (OR = 0,30; 95%CI = 0,23 - 0,40; p < 0,001) Những phơi có chứa TE loại C có nguy bất thường NST lên đến 5,89 lần (95%CI = 3,61 - 9,62; p < 0,001) Năm 2017, G Majumdar CS xác định tỷ lệ lệch bội tăng chất lượng TE giảm dần Phôi với TE loại A, tỷ lệ lệch bội 26,4%; tỷ lệ TE loại B loại C 49% 56,7% [2] Kết tương tự nghiên cứu < 0,001 Tuy nhiên, với chất lượng ni loại C tỷ lệ bất thường cao 79%, khác biệt có ý nghĩa thống kê Sự chênh lệch tỷ lệ chúng tơi xét loại bất thường số lượng cấu trúc G Majumdar xét yếu tố bất thường số lượng Điều tương tự với kết nghiên cứu Zhao CS (2018) đánh giá vai trò độc lập yếu tố ảnh hưởng đến tiên lượng tỷ lệ có thai cho thấy vai trị quan trọng hình thái ni Các phơi nang biểu TE loại A, tỷ lệ mang thai sinh sống lâm sàng cao đáng kể so với phơi có TE loại C (62,4% so với 35,7% 49,7% so với 27,4%) [5] Nụ phôi (ICM) phơi có mối liên quan tới bất thường NST Phơi có ICM xếp loại xấu (ICM C) làm tăng rõ rệt nguy bất thường NST (OR = 4,66; 95%CI = 2,77 - 7,84; p < 0,001) Ngược lại, phơi có ICM tốt (ICM A) làm giảm đáng kể nguy bất thường NST (OR = 0,25; 95%CI = 0,19 - 0,33; p < 0,001) Kết tương tự với nghiên cứu Khánh Vy (2016) chứng minh tỷ lệ lệch bội NST tăng chất lượng nụ phôi giảm (p < 0,05) [1] nghiên cứu G Majumdar CS ( 2017), khảo sát 151 phôi nang xác định: tỷ lệ lệch bội tăng chất lượng nụ phôi giảm từ loại A xuống loại C (p < 0,001) [2] 77 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 3-2020 Hiện nay, cịn nhiều tranh cãi vai trị quan trọng ni hay nụ phôi việc xem xét đánh giá lựa chọn phôi để chuyển Năm 2013, De Paepe C CS, nghiên cứu cơng bố tạp chí Human Reproduction, phần giải thích vai trị quan trọng nuôi giai đoạn phát triển sớm phôi nang De Paepe C nhận thấy nuôi cấy độc lập phơi nang có ni (đã tách bỏ tế bào nụ phôi), tế bào tiếp tục biệt hóa để hình thành khối tế bào nụ phơi [6] Vai trị TE khẳng định nghiên cứu Honnma H CS (2012) 1.087 chu kỳ chuyển phôi đông lạnh Honnma H khẳng định lại vai trị quan trọng ni nụ phôi xem xét đánh giá lựa chọn phôi để chuyển [7] Nghiên cứu chúng tơi tỷ lệ phơi bình thường nhóm phơi TE tốt tương tự với nhóm phơi ICM tốt (p > 0,05) Mối liên quan hình thái phơi nang với bất thường NST nói chung loại bất thường số lượng, cấu trúc bất thường khảm Bảng 3: Mối liên quan hình thái phơi nang với loại bất thường NST Loại bất Bất thường NST thường Số phơi Hình thái Số lượng chung (%) Tốt 193 (625 phôi) (30,9%) Trung bình 114 (188 phơi) (60,6%) Xấu 107 (140 phơi) (76,4%) OR Số phôi (%) (95%CI) 0,22c (0,16 0,29) 78 (12,5%) 2,39c (1,72 3,31) 49 (26,1%) 5,34c (3,53 8,10) 56 (40,0%) Cấu trúc Khảm OR Số phôi OR Số phôi OR (95%CI) (%) (95%CI) (%) (95%CI) 0,30c (0,22 0,42) 1,66a (1,14 2,42) 3,60c (2,44 5,31) 14 (2,2%) 10 (5,3%) 12 (8,6%) 0,32b (0,16 0,63) 1,60b (0,76 3,37) 3,08b (0,50 6,32) 116 (18,6%) 64 (34,0%) 48 (34,3%) 0,44c (0,32 0,60) 1,89c (1,34 2,68) 1,84c (1,25 2,70) (a: > 0,05; b: = 0,001; c: < 0,001) Theo nghiên cứu chúng tôi, phôi có phân loại hình thái xấu có nguy bất thường NST cao gấp 5,34 lần (95%CI = 3,53 - 8,10), phôi tốt, số 0,22 lần (95%CI = 0,16 - 0,29) Kết cho thấy, việc lựa chọn phôi phân loại tốt ưu tiên cao việc giảm tỷ lệ bất thường NST khơng sàng lọc Trong trường hợp có sàng lọc giảm số lượng phơi cần sàng lọc Khi sâu vào loại bất thường, hình thái phôi xấu làm tăng nguy tất loi bt thng 78 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 3-2020 Xét bất thường số lượng NST, tỷ lệ khảm ≤ 50%) có 33 phơi mang kiểu nhân bất thường nhóm phơi tốt (12,5%), tăng bình thường tạo thành em bé khỏe lên nhóm phơi trung bình (26,1%) mạnh [8] Do đó, phơi khảm khơng cao nhóm phơi xấu (40%) Xét bất thiết phải loại trừ, nhiên thường cấu trúc NST, nhìn chung tỷ lệ phơi hồn tồn chuẩn bội loại bất thường cấu trúc NST thấp so ưu tiên chuyển so với phơi với loại cịn lại Cụ thể, tỷ lệ bất khảm Những phụ nữ mang thai sau thường nhóm phơi tốt (2,2%), tăng dần chuyển phơi khảm phải xét nghiệm nhóm phơi trung bình (5,3%) cao trước sinh với tư vấn thích hợp nhóm phơi xấu (8,6%) Tỷ lệ bất thường bác sỹ Khi xem xét đến hình thái khảm nhóm hình thái phơi tốt (18,6%), phôi nang với yếu tố bất thường NST, tăng dần nhóm phơi trung bình (34%) chúng tơi thấy tỷ lệ bất thường NST cao nhóm phơi xấu (34,3%) tăng phơi nang có chất lượng hình thái Nghiên cứu chúng tơi xấu Cụ thể, tỷ lệ bất thường NST thấp rằng, hình thái phơi xấu làm gia tăng nguy (30,9%) phơi có chất lượng tốt so với bất thường số lượng, bất thường cấu 60,6% phơi có chất lượng trung bình trúc bất thường khảm là: OR = 76,4% phơi có chất lượng Điều 3,6 (95%CI = 2,44 - 5,31); OR = 3,08 tương tự nghiên cứu (95%CI = 0,50 - 6,32) OR = 1,84 G Majumdar CS (2017) nhóm tác (95%CI = 1,25 - 2,70) giả xác định tỷ lệ bất thường tăng Trong đó, với hình thái phơi tốt, dần từ 40,5 đến 50% 73,2% nhóm nguy bất thường NST giảm tất phân loại phôi mang hình thái từ tốt tới dạng bất thường Phơi có hình thái tốt xấu [2] giảm nguy bất thường số lượng, bất thường cấu trúc bất thường khảm Mối liên quan hình thái phơi nang với số lượng bất thường NST giảm so với nhóm phơi khơng tốt, Trong phơi có bất thường NST OR = 0,30 (95%CI = 0,22 - 0,42); OR = tồn nhiều dạng bất thường, 0,32 (95%CI = 0,16 - 0,63) OR = 0,44 phân loại 953 phôi nghiên cứu làm (95%CI = 0,32 - 0,60) loại dựa số lượng bất thường tính P Rubino CS (2018), sử dụng phơi Sau tiếp tục xét mối liên phương pháp NGS nghiên cứu tỷ lệ quan hình thái phơi số lượng bất chuyển phôi 55 phôi khảm (tỷ lệ thường NST tớnh trờn phụi 79 Tạp chí y - dợc häc qu©n sù sè 3-2020 Bảng 4: Mối liên quan hình thái phơi nang với số lượng bất thường NST Số lượng bất thường phơi Hình thái Tốt Trung bình Tổng 432 121 58 12 (69,1%) (19,4%) (9,3%) (1,9%) (0,32%) 74 67 40 (39,4%) (35,6%) (21,3%) (3,7%) (0,0%) 33 55 46 (23,6%) (39,3%) (32,9%) (4,3%) (0,0%) 539 243 144 25 (56,6%) (25,5%) (15,1%) (2,6%) (0,2%) p 625 188 < 0,001 Xấu Tổng Trong nhóm phơi hình thái tốt, số phơi bình thường chiếm đa số với 432 phơi (69,1%); tỷ lệ phơi tốt có bất thường NST 19,4% tỷ lệ phôi bất thường ≥ NST chiếm 11,52% Trong nhóm phơi hình thái trung bình xấu, tỷ lệ phơi bình thường chiếm 39,4% 23,6%, thấp đáng kể so với nhóm phơi hình thái tốt Đồng thời, tỷ lệ bất thường NST nhóm phơi hình thái trung bình xấu cao nhóm phơi hình thái tốt, 35,6% 39,3% Tỷ lệ bất thường ≥ NST nhóm phơi trung bình xấu cao gấp 2,17 3,23 lần so với nhóm phơi tốt Xét tổng số 414 phơi đột biến tỷ lệ mang đột biến NST 58,6%, lại đột biến phức tạp Kết tương tự nghiên cứu Franasiak CS (2014) nghiên cứu 15.169 phôi nang sinh thiết, ghi nhận 6.168 phơi lệch bội, 64% đột biến liên quan đến NST [3] 80 140 953 KẾT LUẬN Tỷ lệ bất thường NST lớn phôi nang, bất thường khảm (56,68%), bất thường số lượng NST 36,6%, bất thường cấu trúc 6,68% Số phơi bình thường chiếm đa số nhóm phơi phân loại hình thái tốt (69,1%) Tỷ lệ mang 1, 2, bất thường tăng dần nhóm phơi trung bình xấu - Nguy bất thường NST giảm ĐGR khoang phôi lớn (độ 5) (OR = 0,32; 95%CI = 0,25 - 0,42; p < 0,001) tăng lên ĐGR thấp (độ 3) (OR = 3,83; 95%CI = 2,30 - 6,37; p < 0,001) - Nguy bất thường NST tăng lên hình thái ni xấu (OR = 5,89; 95%CI = 3,61 - 9,62; p < 0,001) - Nguy bất thường NST tăng hình thái nụ phơi có chiều hướng xấu (OR = 4,66 lần; 95%CI = 2,77 - 7,84; p < 0,001) - Với hình thái phơi ngày thứ xếp loại tốt, nguy bất thường NST giảm (OR = 0,22; 95%CI = 0,16 - 0,29; p < 0,001) Tạp chí y - dợc học quân số 3-2020 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phan Thị Khánh Vy Nghiên cứu số yếu tố liên quan tới lệch bội NST phôi người trước làm tổ Luận văn Tiến sỹ Y học Đại học Y Hà Nội Hà Nội 2015, tr.121-122 Majumdar G., Majumdar A., Verma I C., Upadhyaya K C Relationship between morphology, euploidy and implantation potential of cleavage and blastocyst stage embryos Journal of Human Reproductive Sciences 2017, 10(1), p.49 Franasiak J M., Forman E J., Hong K H et al The nature of aneuploidy with increasing age of the female partner: A review of 15,169 consecutive trophectoderm biopsies evaluated with comprehensive chromosomal screening Fertility and Sterility 2014, 101(3), pp.656-663 Wang A., Kort J., Behr B., Westphal L.M Euploidy in relation to blastocyst sex and morphology Journal of Assisted Reproduction and Genetics 2018, 35(9), pp.1565-1572 Zhao Y.Y., Yu Y., Zhang X W Overall blastocyst quality, trophectoderm grade, and inner cell mass grade predict pregnancy outcome in euploid blastocyst transfer cycles Chinese Medical Journal 2018, 131(11), p.1261 De Paepe C., Cauffman G., Verloes A et al Human trophectoderm cells are not yet committed Hum Reprod 2013 28(3), pp.740-749 Honnma H., Baba T., Sasaki M et al Trophectoderm morphology significantly affects the rates of ongoing pregnancy and miscarriage in frozen-thawed single-blastocyst transfer cycle in vitro fertilization Fertil Steril 2012, 98(2), pp.361- 367 Rubino P., Li X., Alonso R.R.D.A., Mazmanian K et al Embryos classified as lowgrade mosaic (< 50%) after preimplantation genetic screening (PGS) by means of high resolution next-generation screening (hr-NGS), can have the same competence of producing healthy newborns as euploid embryos Fertility and Sterility 2018, 109(3), e46-e47 81 ... quan hình thái phơi nang đột biến nhiễm sắc thể phôi thụ tinh ống nghiệm? ?? với mục tiêu: Đánh giá hình thái phôi ngày thụ tinh ống nghiệm Bƣớc đầu xác định mối liên quan hình thái phôi với nhiễm sắc. .. Mối liên quan hình thái ni với đột biến NST 74 3.9 Mối liên quan hình thái nụ phôi với đột biến NST 76 3.10 Mối liên quan hình thái phơi nang với đột biến số lƣợng NST 78 3.11 Mối liên quan hình. .. hình thái phơi nang với đột biến cấu trúc NST 79 3.12 Mối liên quan hình thái phơi nang với đột biến khảm NST 81 3.13 Mối liên quan hình thái phôi nang với đột biến NST 83 3.14 Mối liên quan hình