Luận án tiến sĩ chuyên ngành sinh vật học phân lập và khảo sát các đặc tính của vi khuẩn nội sinh trong cây lúa trồng trên đất ở tỉnh phú yên

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VĂN THỊ PHƯƠNG NHƯ PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT CÁC ĐẶC TÍNH CỦA VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY LÚA TRỒNG TRÊN ĐẤT Ở TỈNH PHÚ YÊN LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành VI SINH VẬT HỌC Mã số 62 42 01 07 Cần Thơ, 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VĂN THỊ PHƯƠNG NHƯ PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT CÁC ĐẶC TÍNH CỦA VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY LÚA TRỒNG TRÊN ĐẤT Ở TỈNH PHÚ YÊN LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành VI SINH VẬT HỌC Mã số 62 42 01 07 Người hướng dẫn khoa hoc Gs Ts CAO NGỌC ĐIỆP Cần Thơ, 2015 LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn thầy GS TS Cao Ngọc Điệp, người tận tình hướng dẫn khoa học, hướng dẫn cách tiếp cận với kiến thức khoa học lĩnh vực nghiên cứu để tơi hồn thành luận án tiến sĩ Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại học Cần Thơ, Ban Lãnh Đạo Viện Nghiên cứu Phát Triển Cơng Nghệ Sinh học, Phịng Đào Tạo, Phịng Quản Lý Khoa học, Khoa Sau Đại học phòng ban khác Trường Đại học Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận án tiến sĩ Cảm ơn gia đình người thân động viên chia sẻ để tơi hồn thành luận án tiến sĩ Xin chân thành cảm ơn i TÓM TẮT Phú Yên tỉnh ven biển Nam Trung bộ, với sản xuất chủ yếu nông nghiệp lúa lương thực Nhu cầu phân bón lúa lớn, đất trồng lúa tỉnh Phú Yên chất dinh dưỡng khơng cao, song ý thức trình độ canh tác người dân thấp Do để cải thiện suất lúa người dân lạm dụng phân bón hóa học hưởng đến hiệu kinh tế tác động bất lợi môi trường Vì đề tài “Phân lập khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh lúa trồng đất tỉnh Phú Yên” thực nhằm phân lập tuyển chọn dòng vi khuẩn nội sinh lúa trồng đất tỉnh Phú n có đặc tính cố định đạm, hòa tan lân, sinh tổng hợp IAA cao đặc biệt dịng vi khuẩn thích nghi tốt với điều kiều thổ nhưỡng thời tiết khu vực tỉnh Phú Yên Các dòng vi khuẩn tuyển chọn có tiềm ứng dụng sản xuất phân bón sinh học cho lúa trồng đất tỉnh Phú Yên Trong loại môi trường phân lập chuyên biệt chọn 593 dòng vi khuẩn phân lập từ lúa trồng đất tỉnh Phú Yên, có màu sắc khác nhau: vàng nhạt, vàng đậm, trắng đục trắng Hình dạng khuẩn lạc chủ yếu trịn, bìa ngun nhơ, hầu hết dịng vi khuẩn có tế bào dạng hình que, Gram âm Bằng kỹ thuật PCR với cặp mồi p515FPL p13B xác định 556 dòng vi khuẩn vi khuẩn nội sinh lúa Các dòng vi khuẩn nuôi môi trường Burk không đạm, môi trường NBRIP môi trường phân lập xác định khả cố định đạm, hòa tan lân khó tan phương pháp so màu Kết cho thấy có 533 dịng có khả cố định đạm, số 457 dịng có khả hịa tan lân khó tan tổng hợp IAA Trong số 90 dịng vi khuẩn có khả cố định đạm cao phân tích vùng tự gen 16S rDNA Kết cho thấy dòng vi khuẩn định danh có mức tương đồng 97% trở lên so với dòng vi khuẩn nội sinh ngân hàng gen 90 dịng vi khuẩn thuộc nhóm: Alphaproteobacteria (chiếm tỉ lệ 1,11%), Betaproteobacteria (chiếm tỉ lệ 11,11%), Gammaproteobacteria (chiếm tỉ lệ 53,33%), Bacteroidetes (chiếm tỉ lệ 6,67%) Bacilli (chiếm 27,78%) Trong số 90 dịng vi khuẩn có hoạt tính sinh học cao chọn 22 dịng vi khuẩn có khả cung cấp đạm hịa tan lân khó tan cung cấp cho lúa trồng ống nghiệm Kết khảo sát khả cố định đạm hòa tan lân cung cấp cho lúa trồng điều kiện nhà lưới có 8/22 dịng vi khuẩn có khả giúp giảm lượng phân đạm vô cung cấp từ 25% - 75% N (tương đương với 30 kg N - 90 kg N/ha) 4/8 dịng vi khuẩn có khả làm giảm lượng lân vô cung cấp 50% P (tương đương với 40 kg P2O5/ha) cho lúa Trong thí ii nghiệm ngồi đồng địa điểm khác đất thịt pha cát tỉnh Phú Yên tuyển chọn dòng vi khuẩn SHL70 (tương đồng 98% với lồi Azospirillum amazonense) dịng PHL87 (tương đồng 99% Burkholderia kururiensis) có khả cung cấp 50% lượng đạm sinh học (tương đương 60 kg N/ha) cho lúa dòng vi khuẩn TAL1 (tương đồng 99% loài Pseudomonas putida) TAL4 (tương đồng 99% với lồi Bacillus subtilis) có khả hịa tan lân khó tan thành dễ tan để đáp ứng nhu cầu sinh trưởng phát triển cho lúa tiết kiệm 50% lượng phân lân vô (tương đương 40 kg P2O5/ha) đảm bảo suất, cải thiện chất lượng gạo Kết bổ sung kết hợp dòng vi khuẩn SHL70 TAL4 lên lúa trồng địa điểm khác Phú Yên cho hiệu cố định đạm hịa tan lân khó tan cao bổ sung riêng rẽ dòng cho lúa Sự kết hợp dòng SHL70 TAL4 giúp giảm 50% N (tương đương 60 kg N/ha) 50% P (tương đương 40 kg P2O5/ha) sản xuất lúa mà đảm bảo suất lúa tốt Từ khóa: Cố định đạm, hòa tan lân, lúa cao sản, Phú Yên, tổng hợp IAA, vi khuẩn nội sinh iii ABSTRACT Title “Isolation and characterization of rice endophytic bacteria cultivated on soils of Phu Yen province” Phu Yen province is located in coastal of Central Vietnam and rice is main crop Due to low soil fertility, big amount of chemical fertilizers are used for rice production but low ecomomical effect and this may cause environmental pollution and negatively influence human health Besides that, endophytic bacteria are microorganisms that live in plant tissues and they may be responsible for the supply of biologically fixed nitrogen to their host plant and plant promoting growth such as phosphate solubilization and IAA biosynthesis Title “Isolation and characterization of rice endophytic bacteria cultivated on soils of Phu Yen province” was conducted to isolate and select rice endophytes with good characteristics such as high nitrogen fixation, phosphate solubilization and IAA production to produce biofertilizer for rice cultivation in soils of Phu Yen province in the future Five hundreds and ninety-three of bacterial isolates were isolated from stems and roots of rice samples which were collected from seven districts and Tuy Hoa city in three kinds of medium (LGI, NFb, RMR) Their colonies had round-shape, climy, smooth, colourless or milk-color, yellow and some colonies appeared in much larger size Using 16S rRNA gene fragments amplified with DNA using eubacterial universal primers (p515FPL and p13B), 556 isolates were identified as endophytic bacteria A total of 533 endophytic isolates had the ability of nitrogen fixation, in which 457/533 isolates have ability of phosphate solubilization together with IAA biosynthesis The sequences of selected endophytic bacteria (90 isolates) showed high degrees of similarity to those of the GenBank references strains (between 97% and 99%) From 90 isolates, 27,78% isolates belonged to Bacilli, 1,11% isolates was Alphaproteobacteria, 11,11% isolates were identified as Betaproteobacteria and 53,33% isolates were Gammaproteobacteria, while 6,67% isolates were Bacteroides Total 22/90 endophytes having high ability of nitrogen fixation and phosphate solubilization were selected from the in-vitro experiments and 8/22 endophytes which could provides from 25% to 75% N and 4/8 endophytes solubilized 50% P2O5 for rice plants in pot experiments From field experiments, two strains (Azospirillum amazonense SHL70 and Burkholderia vietnamiensis PHL87) fixed and provided 50% of biological nitrogen for rice plants and two strains (Pseudomonas putida TAL1 and Bacillus subtilis TAL4) solubilized and provided 50% P2O5 requirement of iv rice cultivation The effect of Azospirillum amazonense SHL70 and Bacillus subtilis TAL4 in rice cultivated on soils of two sites (Dong Hoa and Tuy An districts, Phu Yen province) showed that either SHL70, TAL4 or mixture of SHL70 and TAL4 saved 50% N and 50% P2O5 in rice cultivation but grain yield of inoculated rice seeds as same as control treatment 100% N and 100% P2O5 without inoculation Keywords: endophytic bacteria, high-yielding rice, IAA biosynthesis, nitrogen fixation, phosphate solubilization, Phu Yen v Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu “Phân lập khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh lúa trồng đất tỉnh Phú Yên” Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa người khác cơng bố cơng trình khác Nghiên cứu sinh Văn Thị Phương Như vi MỤC LỤC TÓM TẮT ii ABSTRACT iv MỤC LỤC vii DANH SÁCH BẢNG xi DANH SÁCH HÌNH xiv DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xvi CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.5 Những đóng góp luận án 1.6 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn luận án CHƯƠNG II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Điều kiện tự nhiên tình hình sản xuất lúa tỉnh Phú Yên 2.1.1 Điều kiện tự nhiên tỉnh Phú Yên 2.1.2 Tình hình sản xuất lúa tỉnh Phú Yên 2.2 Hiện trạng sử dụng phân bón Việt Nam Phú Yên 2.2.1 Hiện trạng sử dụng phân bón hóa học Việt Nam, Phú Yên hiệu suất sử dụng phân bón hóa học 2.2.1.1 Ở Việt Nam 2.2.1.2 Ở Phú Yên 2.2.1.3 Hiệu suất sử dụng phân bón hóa học nguyên nhân làm tổn thất lượng phân bón 2.2.2 Phân bón hữu 11 2.2.3 Phân hữu - vi sinh 12 2.2.4 Phân vi sinh 12 2.2.4.1 Khái niệm phân vi sinh 12 2.2.4.2 Tình hình nghiên cứu phân bón vi sinh Việt Nam 12 2.3 Vai trị phân bón lúa 15 2.3.1 Vai trò phân đạm lúa 15 2.3.2 Vai trò phân lân lúa 15 2.3.3 Vai trò phân kali lúa 16 2.4 Tổng quan vi khuẩn nội sinh 16 2.4.1 Các nhóm vi khuẩn nội sinh thực vật 17 2.4.2 Các nhóm vi khuẩn nội sinh lúa 20 2.4.3 Đặc điểm vi khuẩn nội sinh thực vật - lúa 22 vii 2.4.4 Vai trò vi khuẩn nội sinh 24 2.4.4.1 Khả cố định đạm 24 2.4.4.2 Khả hòa tan lân khó tan 26 2.4.4.3 Khả tổng hợp IAA 28 2.4.4.4 Đối kháng sinh học 29 2.4.5 Những nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn nội sinh thực vật sản xuất phân vi sinh 31 2.4.5.1 Phân vi sinh cố định đạm 31 2.4.5.2 Phân vi sinh hịa tan lân khó tan 33 2.4.5.3 Phân vi sinh kích thích, điều hồ sinh trưởng thực vật 35 2.4.5.4 Phân vi sinh đa chức 35 CHƯƠNG III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 3.1 Phương tiện nghiên cứu 37 3.1.1 Vật liệu 37 3.1.2 Dụng cụ 37 3.1.3 Thiết bị 37 3.1.4 Hóa chất mơi trường phân lập nuôi cấy vi khuẩn 38 3.2 Phương pháp nghiên cứu 41 3.2.1 Thu mẫu lúa 42 3.2.2 Phân lập vi khuẩn nội sinh lúa 43 3.2.3 Khảo sát hình thái khuẩn lạc đặc điểm tế bào vi khuẩn 44 3.2.4 Nhận diện vi khuẩn nội sinh kỹ thuật PCR 45 3.2.5 Khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh lúa 46 3.2.6 Tuyển chọn vi khuẩn nội sinh 50 3.2.6.1 Nhận diện xây dựng mối quan hệ di truyền dòng vi khuẩn nội sinh 50 3.2.6.2 Đo lượng Acethylen bị khử 51 3.2.6.3 Khảo sát hiệu cố định đạm hịa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh lên lúa trồng ống nghiệm 53 3.2.6.4 Khảo sát đặc tính sinh lý, sinh hóa dòng vi khuẩn 55 3.2.6.5 Khảo sát hiệu cố định đạm hịa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh lúa trồng nhà lưới 55 3.2.6.6 Khảo sát hiệu cố định đạm hòa tan lân khó tan dịng vi khuẩn nội sinh lúa trồng điều kiện đồng 59 3.2.6.7 Khảo sát hiệu cố định đạm hịa tan lân khó tan kết hợp dòng vi khuẩn nội sinh lên lúa 61 3.3 Xử lý số liệu 63 viii * Kiểm định Tổng Protein Gạo với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 3.429 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 180.6 C 60N40P2O5 = 269.8 B 120N80P2O5 = 350.6 A * Kiểm định Tổng Protein Gạo với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 5.271 at alpha = 0.050 OVK = 199.8 C SHL70 = 260.0 B TAL4 = 262.3 B SHL70 + TAL4 = 345.8 A * Kiểm định Tổng Protein Gạo với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 9.129 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 124.7 H 0N0P2O5-SHL70 = 178.3 F 0N0P2O5-TAL4 = 169.0 G 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 250.4 D 60N40P2O5-OVK = 205.2 E 60N40P2O5-SHL70 = 261.5 C 60N0P2O5-TAL4 = 268.6 C 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 343.7 B 120N80P2O5-OVK = 269.7 C 120N80P2O5-SHL70 = 340.0 B 120N80P2O5-TAL4 = 349.4 B 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 443.4 A * % N rơm ANALYSIS OF VARIANCE TABLE K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Replication 0.012 0.004 0.2372 Phân (A) 14.770 7.385 451.7697 0.0000 -3 Error 0.098 0.016 Vi khuẩn (B) 14.540 4.847 235.6342 0.0000 AB 1.367 0.228 11.0779 0.0000 -7 Error 27 0.555 0.021 Total 47 31.343 * Kiểm định %N Rơm với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 0.01094 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 0.4460 C 60N40P2O5 = 0.5303 B 120N80P2O5 = 0.5805 A * Kiểm định %N Rơm với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 0.01214 at alpha = 0.050 OVK = 0.4404 C SHL70 = 0.5232 B TAL4 = 0.5163 B SHL70 + TAL4 = 0.5959 A 321 * Kiểm định %N Rơm với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.02103 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 0.3714 H 0N0P2O5-SHL70 = 0.4291 G 0N0P2O5-TAL4 = 0.4531 F 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.5306 CD 60N40P2O5-OVK = 0.4791 E 60N40P2O5-SHL70 = 0.5423 C 60N0P2O5-TAL4 = 0.5131 D 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.5867 B 120N80P2O5-OVK = 0.4706 EF 120N80P2O5-SHL70 = 0.5983 B 120N80P2O5-TAL4 = 0.5827 B 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.6704 A * Tổng N rơm ANALYSIS OF VARIANCE TABLE K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Replication 2.313 0.771 0.5097 Phân (A) 1543.674 771.837 510.2047 0.0000 -3 Error 9.077 1.513 Vi khuẩn (B) 1305.320 435.107 370.3377 0.0000 AB 70.288 11.715 9.9709 0.0000 -7 Error 27 31.722 1.175 Total 47 2962.394 * Kiểm định Tổng N Rơm với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 1.064 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 25.63 C 60N40P2O5 = 34.25 B 120N80P2O5 = 39.38 A * Kiểm định Tổng N Rơm với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 0.9080 at alpha = 0.050 OVK = 25.96 D SHL70 = 33.43 B TAL4 = 32.30 C SHL70 + TAL4 = 40.66 A * Kiểm định Tổng N Rơm với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.573 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 19.50 G 0N0P2O5-SHL70 = 24.19 F 0N0P2O5-TAL4 = 25.09 F 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 33.75 D 60N40P2O5-OVK = 28.57 E 60N40P2O5-SHL70 = 35.33 C 60N0P2O5-TAL4 = 32.32 D 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 40.78 B 120N80P2O5-OVK = 29.82 E 120N80P2O5-SHL70 = 40.76 B 120N80P2O5-TAL4 = 39.48 B 322 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 47.44 A * % P gạo ANALYSIS OF VARIANCE TABLE K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Replication 0.010 0.005 2.1652 0.2306 Phân (A) 0.354 0.177 77.2190 0.0006 -3 Error 0.009 0.002 Vi khuẩn B 1.445 0.482 101.6783 0.0000 AB 0.161 0.027 5.6796 0.0018 -7 Error 18 0.085 0.005 Total 35 2.065 * Kiểm định % P Gạo với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 0.005069 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 0.2449 C 60N40P2O5 = 0.2563 B 120N80P2O5 = 0.2692 A * Kiểm định % P Gạo với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 0.007003 at alpha = 0.050 OVK = 0.2284 D SHL70 = 0.2530 C TAL4 = 0.2615 B SHL70 + TAL4 = 0.2844 A * Kiểm định % P Gạo với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.01213 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 0.2136 F 0N0P2O5-SHL70 = 0.2309 E 0N0P2O5-TAL4 = 0.2629 CD 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.2723 BC 60N40P2O5-OVK = 0.2320 E 60N40P2O5-SHL70 = 0.2525 D 60N0P2O5-TAL4 = 0.2585 D 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.2823 B 120N80P2O5-OVK = 0.2396 E 120N80P2O5-SHL70 = 0.2755 BC 120N80P2O5-TAL4 = 0.2632 CD 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.2986 A * Tổng P gạo ANALYSIS OF VARIANCE TABLE K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Replication 0.207 0.103 1.0595 0.4273 Phân (A) 198.942 99.471 1020.0868 0.0000 -3 Error 0.390 0.098 Vi khuẩn (B) 177.867 59.289 643.8269 0.0000 AB 2.263 0.377 4.0955 0.0091 -7 Error 18 1.658 0.092 Total 35 381.326 323 * Kiểm định Tổng P Gạo với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 0.3548 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 9.048 C 60N40P2O5 = 12.41 B 120N80P2O5 = 14.74 A * Kiểm định Tổng P Gạo với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 0.3004 at alpha = 0.050 OVK = 9.090 C SHL70 = 11.94 B TAL4 = 12.20 B SHL70 + TAL4 = 15.03 A * Kiểm định Tổng P Gạo với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.5203 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 5.942 G 0N0P2O5-SHL70 = 8.351 F 0N0P2O5-TAL4 = 9.475 E 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 12.42 C 60N40P2O5-OVK = 9.654 E 60N40P2O5-SHL70 = 12.55 C 60N0P2O5-TAL4 = 12.73 C 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 15.70 B 120N80P2O5-OVK = 11.67 D 120N80P2O5-SHL70 = 14.91 B 120N80P2O5-TAL4 = 14.39 B 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 17.98 A * % P rơm ANALYSIS OF VARIANCE TABLE K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Replication 0.009 0.005 1.2121 0.3877 Factor A 0.405 0.202 54.1763 0.0013 -3 Error 0.015 0.004 Factor B 0.763 0.254 106.7299 0.0000 AB 0.092 0.015 6.4077 0.0010 -7 Error 18 0.043 0.002 Total 35 1.326 * Kiểm định % P Rơm với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 0.007169 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 0.05858 C 60N40P2O5 = 0.07292 B 120N80P2O5 = 0.08450 A * Kiểm định % P Rơm với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 0.004429 at alpha = 0.050 OVK = 0.05678 D SHL70 = 0.06356 C TAL4 = 0.07233 B SHL70 + TAL4 = 0.09533 A 324 * Kiểm định % P Rơm với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.007671 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 0.04900 F 0N0P2O5-SHL70 = 0.05067 F 0N0P2O5-TAL4 = 0.05200 F 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.08267 C 60N40P2O5-OVK = 0.06067 E 60N40P2O5-SHL70 = 0.06767 DE 60N0P2O5-TAL4 = 0.07067 D 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.09267 B 120N80P2O5-OVK = 0.06067 E 120N80P2O5-SHL70 = 0.07233 D 120N80P2O5-TAL4 = 0.09433 B 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 0.1107 A * Tổng P rơm ANALYSIS OF VARIANCE TABLE K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Replication 0.395 0.198 1.4659 0.3330 Phân (A) 34.234 17.117 126.8974 0.0002 -3 Error 0.540 0.135 Vi khuẩn B 49.825 16.608 187.7828 0.0000 AB 4.922 0.820 9.2755 0.0001 -7 Error 18 1.592 0.088 Total 35 91.509 * Kiểm định Tổng P Rơm với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 0.4165 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 3.386 C 60N40P2O5 = 4.737 B 120N80P2O5 = 5.767 A * Kiểm định Tổng P Rơm với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 0.2938 at alpha = 0.050 OVK = 3.347 D SHL70 = 4.063 C TAL4 = 4.592 B SHL70 + TAL4 = 6.519 A * Kiểm định Tổng P Rơm với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.5089 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 2.584 F 0N0P2O5-SHL70 = 2.837 F 0N0P2O5-TAL4 = 2.882 F 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 5.241 C 60N40P2O5-OVK = 3.608 E 60N40P2O5-SHL70 = 4.420 D 60N0P2O5-TAL4 = 4.456 D 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 6.464 B 120N80P2O5-OVK = 3.849 E 325 120N80P2O5-SHL70 = 4.931 CD 120N80P2O5-TAL4 = 6.440 B 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 7.851 A * Tổng P rơm gạo ANALYSIS OF VARIANCE TABLE K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Replication 0.074 0.037 0.2076 Phân (A) 397.733 198.867 1122.9243 0.0000 -3 Error 0.708 0.177 Vi khuẩn (B) 409.853 136.618 613.9555 0.0000 AB 3.978 0.663 2.9793 0.0336 -7 Error 18 4.005 0.223 Total 35 816.352 * Kiểm định Tổng P Cây với Phân bón Least Significant Difference Test LSD value = 0.4769 at alpha = 0.050 0N0P2O5 = 12.43 C 60N40P2O5 = 17.39 B 120N80P2O5 = 20.51 A * Kiểm định Tổng P Cây với Vi khuẩn Least Significant Difference Test LSD value = 0.4677 at alpha = 0.050 OVK = 12.44 D SHL70 = 16.00 C TAL4 = 16.79 B SHL70 + TAL4 = 21.89 A * Kiểm định Tổng P Cây với Phân bón Vi khuẩn Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.8101 at alpha = 0.050 0N0P2O5-OVK = 8.527 J 0N0P2O5-SHL70 = 11.19 I 0N0P2O5-TAL4 = 12.36 H 0N0P2O5-SHL70 + TAL4 = 17.66 E 60N40P2O5-OVK = 13.26 G 60N40P2O5-SHL70 = 16.96 E 60N0P2O5-TAL4 = 17.19 E 60N40P2O5-SHL70 + TAL4 = 22.16 B 120N80P2O5-OVK = 15.52 F 120N80P2O5-SHL70 = 19.84 D 120N80P2O5-TAL4 = 20.83 C 120N80P2O5-SHL70 + TAL4 = 25.83 A 326 PHỤ LỤC 4.14 Một số hình ảnh thí nghiệm Hình lúa trồng ống nghiệm đo ARA ĐCĐC+ SHL70 PHN86 Hình Sự sinh trưởng lúa trồng mơi trường khống Yoshida khơng đạm ĐC- ĐC+ TAL4 TAL1 Hình Sự sinh trưởng lúa trồng mơi trường khống Yoshida khơng lân 327 * Hình thí nghiệm khảo sát nguồn cacbon dòng vi khuẩn tuyển chọn * Các dòng vi khuẩn cấy mơi trường bổ sung Glucose * Các dịng vi khuẩn cấy môi trường bổ sung Sucrose 328 * Các dịng vi khuẩn cấy mơi trường bổ sung Manitol * Các dịng vi khuẩn cấy mơi trường bổ sung Fructose 329 * Các dòng vi khuẩn cấy mơi trường bổ sung Maltose * Dịng vi khuẩn SHL70 cấy môi trường khoai tây (BMS) * Hình ảnh lúa gieo chậu trồng nhà lưới Trường Đại học Phú n * Hình thí nghiệm trồng lúa chậu nhà lưới giai đoạn 48 NSKG 330 * Hình lúa giai đoạn trỗ chín trồng chậu nhà lưới 0VK TALa14 PHL87 A SHL70 0VK TALa14 PHL87 B SHL70 A: Chiều cao lúa trồng chậu lúc thu hoạch mức phân bón 60N B: Chiều dài bơng lúa trồng chậu lúc thu hoạch mức phân bón 90N 1* Một số hình ảnh trồng lúa ngồi đồng ruộng Phường Phú Thạnh Hình đắp bờ ruộng thí nghiệm 331 Hình cấy lúa ruộng thí nghiệm Hình ruộng lúa thí nghiệm khảo sát phân lân, đạm giai đoạn 35 NSKC Hình ảnh thu hoạch lúa m2 thí nghiệm thu lấy hạt 2* Một số hình ảnh trồng lúa ngồi đồng ruộng huyện Đơng Hịa * Hình đắp bờ thí nghiệm * Hình ruộng lúa 15 NSKC 332 * Hình ruộng lúa 45 NSKC, VK1: SHL70, VK2: TAL4 * Hình ruộng lúa giai đoạn chín, VK1: SHL70, VK2: TAL4 333 * Hình ruộng lúa chín hình ảnh thu lấy hạt rơm 3* Một số hình ảnh trồng lúa đồng ruộng huyện Tuy An * Hình ruộng lúa 15 NSKC * Hình ruộng lúa 45 NSKC, VK1: SHL70, VK2: TAL4 334 * Hình ruộng lúa giai đoạn chín, VK1: SHL70, VK2: TAL4 * Hình ruộng lúa chín thu hoạch lúa m2 thí nghiệm * Hình ảnh thu lấy hạt rơm 335 ... vi sinh thành loại sau: - Phân vi sinh dạng bột - Phân vi sinh dạng lỏng - Phân vi sinh dạng vi? ?n tạo thành sinh khối vi sinh vật phối trộn xử lý chất mang tạo thành hạt phân bón có chứa vi sinh. .. loại: - Phân vi sinh chất mang khử trùng - Phân vi sinh chất mang không khử trùng + Dựa vào đặc tính tác dụng vi sinh vật sử dụng bao gồm loại: - Phân vi sinh cố định đạm - Phân vi sinh hịa tan... ứng dụng vi khuẩn nội sinh thực vật sản xuất phân vi sinh 31 2.4.5.1 Phân vi sinh cố định đạm 31 2.4.5.2 Phân vi sinh hịa tan lân khó tan 33 2.4.5.3 Phân vi sinh kích