Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của lợn sau khi tiêm vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1.vn đã được tiến hành tại Công ty Hanvet. Sự khác biệt về diễn biến kháng thể trung hòa và kháng thể được xác định bằng phản ứng IPMA trong huyết thanh lợn.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA LN SAU KHI TIÊM VACXIN TAI XANH NHƯC ĐỘC CHỦNG PRRS HANVET 1.VN Bùi Trần Anh Đào1, Nguyễn Thanh Ba2, Nguyễn Thu Trang2, Trần Văn Khánh2, Nguyễn Thị Ngọc2, Nguyễn Thị Nga3, Nguyễn Hữu Vũ2 TÓM TẮT Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch lợn sau tiêm vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1.vn tiến hành Công ty Hanvet Sự khác biệt diễn biến kháng thể trung hòa kháng thể xác định phản ứng IPMA huyết lợn Kết nghiên cứu cho thấy kháng thể xuất ngày sau miễn dịch đạt hàm lượng cao vào tuần thứ sau tiêm vacxin (1/4888,7), sau hàm lượng kháng thể giảm dần, đến tháng thứ 1/463,13 Kháng thể trung hòa xuất muộn, tuần sau tiêm vacxin, đạt hiệu giá cao tuần thứ 11 sau miễn dịch (1/21,11) sau giảm dần Đến tháng thứ sau tiêm vacxin, hàm lượng kháng thể trung hịa cịn ¼, đến tháng thứ kháng thể trung hịa khơng cịn khả bảo hộ cho lợn Lợn sinh từ lợn nái tiêm vacxin tai xanh nhận nhiều kháng thể từ mẹ qua sữa đầu Hàm lượng kháng thể máu lợn đạt cao vào thời điểm ngày sau sinh (1/1835,46 với IPMA 1/8,46 với kháng thể trung hịa) Sau kháng thể máu lợn giảm nhanh Đến 14 ngày sau sinh hàm lượng kháng thể máu lợn 1/676,49 (IPMA) 1/4,11(trung hòa) Lợn tuần tuổi cho đáp ứng miễn dịch tốt sau tiêm vacxin Từ khóa: đáp ứng miễn dịch, vacxin nhược độc tai xanh, PRRS Hanvet1.vn Study on immune response of pigs vaccinated with Hanvet 1.vn PRRS attenuated virus vaccine Bui Tran Anh Dao, Nguyen Thanh Ba, Nguyen Thu Trang, Tran Van Khanh, Nguyen Thi Ngoc, Nguyen Thi Nga, Nguyen Huu Vu SUMMARY The research on immune response of the pigs after vaccination with Hanvet1.vn PRRS attenuated virus vaccine was carried out at Hanvet company The changes of neutralising antibody and antibody were determined by the IPMA method The studied result showed that days after vaccination, antibody appeared and reached the highest content in the 5th week after vaccination (1/4888.7), then the antibody content decreased in the 6th month, remaining 1/463.13 only Neutralising antibody appeared later, weeks after the vaccination, and reached the highest titre at the 11th week after vaccination (1/21.11) then it was decreased Up to the 5th month after vaccination, the neutralising antibody content remained only ¼ and then the antibody content was not capable to protect the pigs in the 6th month after vaccination The piglets were born from the sows vaccinated with Hanvet1.vn PRRS vaccine, they received antibody through colostrum The antibody content in the blood of the piglets reached the highest level at the 1st day after birth (1/1835,46 with IPMA and 1/8.46 with neutralising antibodies) Then antibody content in the blood of piglets decreased rapidly Up to the 14th days after birth, antibody content in the blood of piglets reached 1/676.49 (IPMA) and 1/4.11 (neutralising) The piglets at 4-weeks-old presented the best immune response after the vaccination Keywords: immune response, attenuated vaccine, Hanvet 1.vn PRRS Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Công ty thuốc thú y Hanvet Viện kỹ thuật hóa sinh tài liệu nghiệp vụ, Bộ Công an 28 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 I ĐẶT VẤN ĐỀ Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome – PRRS), hay gọi bệnh tai xanh, dịch bệnh nguy hiểm ngành chăn nuôi lợn Việt Nam giới PRRS ghi nhận lần Việt Nam vào năm 1997 Tuy nhiên, thời điểm đó năm sau, không ghi nhận ca bệnh lâm sàng Năm 2006, PRRS thể độc lực cao ghi nhận Trung Quốc làm triệu lợn mắc bệnh diễn biến phức tạp năm 2007 Do quan hệ thông thương phức tạp Việt Nam Trung Quốc, PRRS trở thành dịch lớn nước ta Năm 2007, nước có 70.577 lợn mắc PRRS, số lợn chết tiêu hủy 20.366 Năm 2008 có 309.586 ca bệnh, số lợn chết tiêu hủy 300.906 Năm 2010, dịch lại nổ hai đợt vào tháng tháng 10 làm 812.947 lợn mắc bệnh, số lợn chết tiêu hủy lên đến 442.699 Có thể nói PRRS ngày trở thành vấn đề thời ngành chăn nuôi thú y Trước tình trạng nghiêm trọng đó, Chính phủ tiến hành nhiều biện pháp khác để khống chế dịch, đó quan trọng nhất là việc nhập khẩu và phân phối các loại vacxin phòng bệnh Tuy nhiên, các vacxin nhập khẩu từ các nước khác có tính kháng nguyên khác nhau, đặc biệt từ các nước châu Âu chủng virus gây bệnh Việt Nam biến chủng virus PRRS dòng Bắc Mỹ Ngoài ra, giá của các loại vacxin nhập khẩu rất cao (trên 30 nghìn đồng/ liều), nguồn nhập không chủ động, gây khó khăn cho công tác tiêm phòng Trước tình hình trên, Cơng ty Hanvet tập trung nghiên cứu, chế tạo vacxin tai xanh nhược độc từ chủng virus PRRS Hanvet1.vn với mong muốn tạo vacxin có chất lượng tốt, giá thành hạ, góp phần vào việc phòng chống dịch bệnh tai xanh nước ta Nghiên cứu nhằm đánh giá khẳng định chất lượng của vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1.vn làm sở cho việc đăng ký lưu hành sản phẩm II VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Vật liệu nghiên cứu gồm vacxin tai xanh nhược độc Công ty Hanvet sản xuất từ chủng virus nhược độc PRRS Hanvet1.vn lô 0614, ngày sản xuất 04/11/2014, hạn sử dụng 04/05/2016 Mỗi liều vacxin chứa 105TCID50 virus nhược độc PRRS Hanvet1.vn chất bổ trợ đông khô Chủng virus PRRS cường độc phân lập tại Việt Nam được giữ giống tại Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y trung ương I Một số loại vacxin phòng bệnh PRRS thị trường tế bào dòng Marc 145 Lợn thí nghiệm gồm lợn lai hướng nạc, khỏe mạnh, ở các độ tuổi khác lợn nái mang thai ở ngày thứ 80 của thai kỳ Tất cả lợn sử dụng thí nghiệm đều được xét nghiệm và xác định âm tính với các bệnh: PRRS, dịch tả lợn, bệnh Mycoplasma Circo virus kỹ thuật rRT-PCR Nghiên cứu tiến hành Trung tâm nghiên cứu Sản xuất sinh phẩm – Công ty Hanvet, trại thực nghiệm trại liên kết Công ty Hưng Yên, Bắc Ninh Hịa Bình 2.2 Nội dụng nghiên cứu Nghiên cứu thực theo nội dung sau: - Xác định đường đưa vacxin thích hợp vào thể lợn - Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch dịch thể độ dài miễn dịch tiêm vacxin cho lợn - Nghiên cứu khả truyền kháng thể từ lợn mẹ sang lợn qua sữa đầu - Đánh giá khả bảo hộ vacxin thử thách với virus PRRS cường độc - Xác định độ tuổi sử dụng vacxin thích hợp - So sánh đáp ứng miễn dịch dịch thể vacxin tai xanh chủng PRRS Hanvet1.vn với số vacxin thị trường 29 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 2.3 Bố trí thí nghiệm phương nghiên cứu pháp 2.3.1 Bố trí thí nghiệm Để xác định đường sử dụng vacxin thích hợp, lựa chọn 45 lợn tuần tuổi đồng giống, tình trạng sức khoẻ, điều kiện chăn nuôi vệ sinh thú y Phân chia ngẫu nhiên số lợn vào nhóm, sử dụng vacxin virus nhược độc PRRS Hanvet1.vn cho nhóm với liều nhau, theo đường sử dụng khác nhau: tiêm bắp, tiêm da nhỏ mũi Xác định hiệu giá kháng thể sau tiêm vacxin 28 ngày Đánh giá sự hình thành đáp ứng miễn dịch và độ dài miễn dịch sau tiêm vacxin lấy máu lợn thời điểm sau tiêm vacxin 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 tuần; 2, 3, 4, 5, tháng, xác định hiệu giá kháng thể bằng IPMA hiệu giá kháng thể trung hòa Để xác định khả truyền kháng thể từ lợn mẹ sang lợn con, tiêm vacxin cho lợn nái mang thai 80 ngày Sau tiêm vacxin, theo dõi tình trạng sức khỏe lợn nái, lấy máu lợn nái sau sinh 24 lợn sau sinh 24 giờ để kiểm tra hiệu giá kháng thể Cho đến lợn đạt tuần tuổi, hàng tuần lấy máu lợn con/ổ để kiểm tra hiệu giá kháng thể Để đánh giá khả bảo hộ vacxin với chủng virus cường độc, đã tiêm vacxin cho 12 lợn tuần tuổi có huyết âm tính với kháng thể PRRS Sau tiêm 28 ngày, lấy máu 12 lợn miễn dịch (lơ thí nghiệm này) lợn không tiêm vacxin (lô đối chứng) để kiểm tra hiệu giá kháng thể phản ứng IPMA và phản ứng trung hòa tế bào Sau lợn thí nghiệm đối chứng thử thách với virus PRRS cường độc phân lập Việt Nam với liều 106 TCID50 Sau công cường độc, theo dõi biểu lâm sàng, thân nhiệt, khả tăng trọng, đồng thời lấy máu lợn thời điểm 3, 5, 7, 10, 14, 21 ngày sau công cường độc để phân lập, xác định virus huyết mổ khám xác định bệnh tích Để xác định đợ t̉i thích hợp cho việc sử 30 dụng vacxin: Tiêm vacxin cho nhóm lợn lứa tuổi khác nhau: 2, tuần tuổi Xác định hiệu giá kháng thể bằng IPMA kháng thể trung hòa sau 28 ngày miễn dịch Nhằm so sánh đáp ứng miễn dịch vacxin tai xanh Hanvet sản xuất với số vacxin phịng bệnh PRRS có thị trường, chọn 24 lợn giống, lứa tuổi sức khoẻ tương đương, chia làm nhóm Lợn nhóm tiêm liều (105TCID50) với loại vacxin tai xanh khác nhau: Vacxin Hanvet (từ chủng PRRS Hanvet1 vn), vacxin A (từ chủng JXA1 – R), vacxin B (từ chủng VP-046BIS) vacxin C (từ chủng nhược độc, không công bố cụ thể) Xác định hiệu giá kháng thể bằng IPMA và kháng thể trung hòa 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu Các phương pháp sử dụng nghiên cứu gồm: Phương pháp IPMA; phương pháp phân lập virus; phương pháp rRT- PCR thực theo TCVN 8400-21:2014 Phương pháp trung hòa virus tế bào để xác định hiệu giá kháng thể trung hòa thực theo phương pháp Yoon & cs (1994) Phương pháp mổ khám xác định bệnh tích theo TCVN 8400-21:2014 Số liệu xử lý thống kê, sử dụng phần mềm Minitab 16 với phép thử phân tích phương sai nhân tố (ANOVA_One way…) III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đáp ứng miễn dịch lợn tiêm vacxin tai xanh nhược độc Kết quả thu cho thấy có sự khác biệt rất rõ rệt khả sinh đáp ứng miễn dịch của vacxin tai xanh đưa theo các đường khác Đáp ứng miễn dịch của lợn đưa vacxin theo đường nhỏ mũi không cao Cụ thể hàm lượng kháng thể đạt trung bình 1/339,03 Đưa vacxin theo đường tiêm da và tiêm bắp cho đáp ứng miễn dịch cao, hàm lượng kháng thể sau 28 ngày miễn dịch KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 cách tiêm 1/3417,19 Sự sai khác về hiệu giá kháng thể của lợn đưa vacxin theo đường nhỏ mũi với đường tiêm là có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Mặt khác, tiêm dưới da hoặc tiêm bắp thịt cũng đơn giản, thuận tiện Xác định IPMA phương pháp nhỏ mũi Diễn biến hàm lượng giá kháng thể trung bình (GMT) lợn sau tiêm vacxin xác định bằng IPMA kháng thể trung hồ thể qua hình Xác định kháng thể trung hồ Hình Biến động kháng thể sau tiêm vacxin tai xanh Một tuần sau tiêm vacxin, lợn bắt đầu có đáp ứng miễn dịch thông qua hiệu giá kháng thể xác định IPMA Hàm lượng kháng thể máu lợn tăng dần và đạt giá trị cao nhất vào tuần thứ với hiệu giá kháng thể trung bình đạt 1/4888,78 Sau đó hàm lượng kháng thể giảm xuống tuần thứ sau tiêm vacxin Diễn biến hàm lượng kháng thể trung hòa máu lợn sau tiêm vacxin cho thấy xuất kháng thể trung hòa huyết lợn tiêm vacxin muộn so với kháng thể xác định IPMA Sau tiêm vacxin tuần, huyết lợn xuất kháng thể trung hòa (1/1,32) đạt hiệu giá cao (1/21,11) tuần thứ 11 sau tiêm vacxin Như vậy, có khác biệt rõ rệt xuất kháng thể xác định phản ứng IPMA kháng thể trung hòa virus Kháng thể đặc hiệu xác định phản ứng IPMA xuất từ sớm, từ tuần sau tiêm vacxin đạt đỉnh tuần thứ Trong đó, xuất kháng thể trung hòa muộn Ở tuần thứ sau tiêm vacxin, lợn bắt đầu có kháng thể trung hòa Kháng thể trung hòa virus đạt hiệu giá cao vào tuần thứ 10 đến tuần thứ 11 sau tiêm vacxin đạt ngưỡng 1/21,11 Điều này được giải thích sau: Các epitop virus có khả gây xuất kháng thể trung hịa nằm GP5 Epitop chịu trách nhiệm hoạt động sinh kháng thể trung hòa nằm acid amin 37 đến 44 gọi epitop B (Mateu Diaz, 2008) Tuy nhiên, trước epitop B virus PRRS, có epitop khác được xác định có ưu miễn dịch vượt trội gọi epitop A nằm acid amin 27 đến 31 (sát kề phía đối mặt với epitop B) Đặc điểm phù hợp với chức epitop ngụy trang epitop đánh lừa (decoy epitop) Epitop ngụy trang mạnh epitop B, làm giảm đáp ứng miễn dịch epitop trung hòa B nằm liền kề, dẫn đến chậm đáp ứng miễn dịch trung hoà Hiện tượng tương tự trường hợp với protein GP41 HIV người (virus gây suy giảm miễn dịch, bệnh AIDS) chứng minh thỏ; tương tự VP-3P, đặc điểm virus lactate dehydrogenase elevating (LDV) (cùng họ Arteviridae với PRRS) epitop có thể nhận biết kháng thể trung 31 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 hịa lại khơng có tính gây miễn dịch, giả thiết cho có chất khác hạn chế việc sinh kháng thể trung hòa (Lopez Osorio, 2004) Kết nghiên cứu tương đồng với kết nghiên cứu Lopez và Osorio (2004); Molina R.M cộng (2008) hình thành đáp ứng miễn dịch virus PRRS Với hiệu giá kháng thể đạt mức 1/4, lợn bắt đầu bảo hộ, công cường độc lợn khơng có biểu lâm sàng bệnh, tượng virus huyết hàm lượng thấp Nếu hiệu giá kháng thể trung hòa đạt 1/8, lợn bảo hợ hồn tồn cơng cường độc (Lopez Osorio, 2004; Lopez et al., 2007) Từ kết nghiên cứu có thể thấy lợn tiêm vacxin tai xanh nhược độc chủng Hanvet1.vn sinh đáp ứng miễn dịch dịch thể tốt 3.2 Độ dài miễn dịch lợn được tiêm vacxin tai xanh nhược độc Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết phản ứng IPMA phản ứng trung hòa tháng sau tiêm vacxin được trình bày bảng Bảng Hiệu giá kháng thể lợn xác định phản ứng IPMA trung hoà Hiệu giá kháng thể tháng tháng tháng tháng tháng tháng Phản ứng IPMA 3880,23 2334,01 1612,70 1167,00 670,27 463,13 1,32 5,79 15,28 6,06 4,39 2,76 Phản ứng trung hòa Kết cho thấy hiệu giá kháng thể IPMA của lợn đạt cao nhất ở tháng đầu tiên sau tiêm vacxin (1/3880,23) Sau đó kháng thể giảm dần, đến tháng thứ hàm lượng kháng thể giảm thấp, chỉ còn 1/463,13 Kháng thể trung hòa xuất muộn hơn, đạt hàm lượng cao tại thời điểm – tháng sau tiêm vacxin, sau đó giảm dần Đến tháng thứ 5, hiệu giá kháng thể chỉ còn khoảng 1/4 tháng thứ 6, kháng thể trung hòa không còn khả bảo hộ cho lợn Như lợn nuôi thịt, cần tiêm vacxin lần bảo hợ suốt trình ni Với lợn nái, lợn đực giống nên tiêm phịng lần năm để đảm bảo trì miễn dịch cho lợn 3.3 Khả truyền kháng thể từ lợn mẹ sang lợn qua sữa đầu Kết theo dõi hiệu giá kháng thể lợn mẹ sau sinh trình bày qua bảng Bảng Hiệu giá kháng thể lợn mẹ sau sinh Lợn nái số Hiệu giá kháng thể xác định IPMA (X-1) Hiệu giá kháng thể trung hòa (X-1) N1 10.240 32 N2 5.120 16 N3 2.560 16 N4 10.240 32 N5 5.120 16 Trung bình 5.881,34 21,11 Bảng cho thấy các lợn nái có đáp ứng miễn dịch rất tốt, hiệu giá kháng thể xác định 32 IPMA trung bình đạt 1/5881,34 và hiệu giá kháng thể trung hòa trung bình đạt 1/21,11 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Hiệu giá kháng thể máu lợn được thể hiện qua bảng Bảng Hiệu giá kháng thể lợn theo mẹ Hiệu giá kháng thể 14 ngày 21 ngày 28 ngày 35 ngày Phản ứng IPMA 1.835,46 1.352,98 676,49 294,46 147,23 73,62 Phản ứng trung hòa 8,46 4,99 4,11 2,57 1,89 1,32 Qua kết quả nghiên cứu về khả truyền kháng thể PRRS của lợn mẹ được tiêm vacxin sang lợn cho thấy, sau bú sữa đầu, lợn hấp thu được nhiều kháng thể từ mẹ truyền Hiệu giá kháng thể thụ động của lợn đạt được cao nhất tại thời điểm 24 giờ sau sinh (1/1835,46 với IPMA; 1/8,46 với kháng thể trung hòa) Kháng thể này lưu hành máu lợn và giảm dần Đến thời điểm 14 ngày sau sinh, hiệu giá kháng thể thụ động còn lại của lợn là 1/676,49 với IPMA và 1/4,11 với kháng thể trung hòa Với lượng kháng thể này, lợn vẫn có thể được bảo hộ với virus cường độc (Lopez Osorio, 2004) Nhưng đến thời điểm 21 ngày sau sinh, hàm lượng kháng thể máu của lợn còn rất thấp (294,46 với IPMA và 2,57 với kháng thể trung hòa), không còn đủ để bảo hộ lợn chống lại virus cường độc Đến tuần tuổi, kháng thể thụ động của lợn không còn máu 3.4 Hiệu bảo hộ vacxin thử thách với virus cường độc Kiểm tra hiệu giá kháng thể trước công cường độc nhận thấy: Cả 12 lợn sau tiêm vacxin đều có đáp ứng miễn dịch tốt, tương ứng với giá trị trung bình IPMA trung hồ 1/3417,19 1/1,19; đó, lợn đới chứng không có đáp ứng miễn dịch với virus PRRS trước công cường độc Sau công cường độc, 100% lợn lơ khơng tiêm phịng vacxin xuất triệu chứng: ủ rũ, giảm ăn bỏ ăn, thở khó, ho, sốt; 12 lợn tiêm phịng khơng xuất triệu chứng lâm sàng nêu Diễn biến thân nhiệt của lợn sau công cường độc vào thời điểm giờ sáng và giờ chiều 10 ngày sau công cường độc biểu diễn hình Hình Thân nhiệt của lợn sau công cường độc 33 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Hình cho thấy có sự khác biệt rõ rệt thân nhiệt lợn đối chứng không tiêm vacxin và lợn thí nghiệm được tiêm vacxin Sau công cường độc, cả 12/12 lợn được tiêm vacxin đều không có biểu hiện sốt, đó lợn đối chứng sốt rất cao (41,70C) và kéo dài liên tục ngày Đặc biệt, có lợn đới chứng thân nhiệt lên tới 420C và co giật mạnh ở ngày thứ sau công cường độc của tất các lợn được tiêm vacxin ở tất các thời điểm lấy máu Kết phân lập virus thời điểm 3, 5, 7, 10, 14 21 ngày sau công cường độc cho thấy: Không phân lập được virus máu Kết xác định virus huyết lợn đối chứng không tiêm vacxin sau công cường độc thể bảng Ở lợn đối chứng, hiện tượng virus huyết xảy ở cả 4/4 lợn (100%) Virus máu lợn xuất hiện sớm, đạt hàm lượng cao nhất là 104 TCID50/ ml tại thời điểm ngày sau công cường độc, sau đó giảm dần đến ngày thứ 14, không còn phân lập được virus máu lợn Bảng Hàm lượng virus huyết lợn đối chứng tại các thời điểm lấy máu Thời điểm lấy máu ngày 10 ngày 14 ngày Ký hiệu lợn Độ pha loãng huyết phân lập 10 10-1 10-3 10-4 D1 + + D2 + + - - - + + - D3 + + - - - D4 + D1 + + + - - + + - - D2 + + + + - D3 + + + - - D4 + + + - - D1 + + + - - D2 + - - - - D3 + - - - - D4 + - - - - D1 + + + - - D2 + - - - - D3 + - - - - D4 + - - - - D1 - - - - - D2 - - - - - D3 - - - - - D4 - - - - - Các kết gửi mẫu phân tích Trung tâm Chẩn đoán thú y quốc gia để xác định virus 34 10-2 huyết bằng kỹ thuật rRT – PCR trình bày bảng KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Bảng Kết quả kiểm tra virus huyết kỹ thuật rRT- PCR Tỷ lệ dương tính (%) Được tiêm vacxin Không tiêm vacxin ngày 10 ngày 14 ngày 21 ngày 8,33 (1/12) 8,33 (1/12) 0 0 100 100 100 100 100 50 Bảng cho thấy 100% lợn đối chứng không tiêm vacxin dương tính với virus tại các thời điểm ngày, ngày, ngày, 10 ngày và 14 ngày sau công cường độc Tại thời điểm 21 ngày sau công cường độc, có 50% lợn dương tính với virus Kết quả đã khẳng định thêm về khả ngăn chặn hiện tượng virus huyết của vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1.vn Theo Lopez và Osorio (2004), hiệu giá kháng thể trung hòa máu lợn phải đạt mức 1/8 mới có khả ngăn cản hiện tượng virus huyết công cường độc cho lợn Tuy nhiên nghiên cứu này, chỉ với hiệu giá kháng thể trung hòa trung bình ở mức 1/1,19, tất cả lợn đã tiêm vacxin được bảo hộ và hoàn toàn không bị virus huyết Kết quả phân lập virus huyết cho thấy có sự khác biệt nghiên cứu này với nghiên cứu Lopez Osorio (2004) Lopez et al (2007) Sự khác biệt tác giả tạo miễn dịch cho lợn kháng thể thụ động, nghiên cứu sử dụng vacxin để gây đáp ứng miễn dịch chủ động cho lợn Kết nghiên cứu khác biệt với kết nghiên cứu Tô Long Thành cs (2014) đánh giá hiệu lực vacxin Amervac PRRS với chủng virus PRRS gây bệnh độc lực cao Việt Nam Sự khác biệt chủng virus vacxin tác giả virus nhược độc dòng châu Âu, chủng virus vacxin nghiên cứu làm nhược độc từ chủng virus độc lực cao thuộc dòng Bắc Mỹ Kết khác biệt so với kết Nguyễn Tùng cs (2011) khảo nghiệm vacxin nhược độc chủng JXA1-R Trong nghiên cứu tác giả này, lợn tiêm vacxin, bị nhiễm virus cường độc, virus nhân lên thể thời gian thải virus môi trường ngắn (2 - tuần) so với lợn khơng tiêm phịng (21 ngày kết thúc thí nghiệm thải) Tuy nhiên, kết nghiên cứu lại tương đồng với kết nghiên cứu Yu cs (2015) nghiên cứu tính an tồn hiệu chủng virus vacxin nhược độc JXA1-R Kết theo dõi khối lượng lợn thí nghiệm tiêm vacxin đối chứng khơng tiêm vacxin bắt đầu sau 21 ngày công cường độc được thể hiện qua bảng Bảng Khối lượng lợn tiêm không tiêm vacxin sau công cường độc Khối lượng lợn (kg) Ngày bắt đầu Sau 21 ngày Tỷ lệ tăng so với lúc bắt đầu (%) Được tiêm vacxin 18,13 ±0,24 31,23 ±0,31 72,23 Không tiêm vacxin 18,35 ±0,14 21,28 ±0,59 15,97 Bảng cho thấy có sự khác biệt rõ rệt khối lượng 21 ngày sau công cường độc giữa lợn không tiêm lợn tiêm vacxin Do tiêm vacxin, lợn được bảo hộ hoàn toàn với virus cường độc nên khỏe mạnh bình thường, không sốt, không giảm ăn, bỏ ăn, không bị virus huyết, tăng cân bình thường với tỷ lệ tăng khối lượng so với ban đầu đạt 72,23% Trong đó lợn không tiêm có các biểu hiện bệnh lý rất trầm trọng sốt cao kéo dài liên tiếp ngày, ủ rũ, bỏ ăn, xuất huyết dưới da, virus huyết xuất hiện và kéo dài đến 14 ngày sau công cường độc 35 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Các biểu hiện bệnh lý làm cho lợn sinh trưởng kém, thậm chí có còn bị giảm cân sau 21 ngày theo dõi Kết mổ khám kết thúc thời gian theo dõi cho thấy: Tất lợn được tiêm vacxin đều không có biểu hiện bệnh tích, quan nội tạng đều ở trạng thái sinh lý bình thường Trong đó lợn không tiêm vacxin có bệnh tích rất đặc trưng, tập trung ở phổi xuất huyết phổi, viêm phổi hoại tử gây chắc đặc, phổi bị nhục hóa Các vùng phổi bị bệnh màu đỏ xám, mặt cắt lồi và khô, hạch lâm ba phổi xuất huyết Kết khác biệt với kết nghiên cứu Tô Long Thành cs (2014) đánh giá hiệu lực vacxin Amervac PRRS; Nguyễn Tùng cs (2011) khảo nghiệm vacxin PRRS nhược độc chủng JXA1-R Nhưng kết lại tương đồng với nghiên cứu Yu cs (2015) nghiên cứu tính an toàn hiệu chủng virus vacxin nhược độc PRRS JXA1-R Các bệnh tích đặc trưng của lợn không tiêm vacxin sau công cường độc thể hình 3, Hình Xuất huyết dưới da Hình Viêm kẽ phổi, viêm phế quản-phổi Hình Phổi chắc đặc, mặt cắt lồi 3.5 Độ tuổi thích hợp sử dụng vacxin Kết khảo sát độ tuổi thích hợp cho sử dụng vacxin lợn trình bày qua hình 36 Hình cho thấy: Ở lứa tuổi sử dụng vacxin, lợn sinh đáp ứng miễn dịch Tuy nhiên, sử dụng vacxin cho lợn tuần tuổi, khả KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Xác định kháng thể trung hoà Xác định IPMA Hình Hiệu giá kháng thể lợn độ tuổi (Ghi chú: a, b khác có ý nghĩa thống kê) đáp ứng miễn dịch khơng cao, hiệu giá kháng thể cịn thấp, kháng thể trung hòa gần chưa xuất Sử dụng vacxin cho lợn từ tuần tuổi trở lên, đáp ứng miễn dịch tốt, hiệu giá kháng thể trung bình 1/3225,4 1/2873,5 với IPMA 1/1,26 với kháng thể trung hịa Khơng nhận thấy khác đáp ứng miễn dịch nhóm lợn tuần tuổi tuần tuổi (P>0,05) Như vậy, độ tuổi sử dụng vacxin thích hợp cho lợn từ tuần tuổi trở lên Nên tiêm vacxin lúc tuần tuổi để lợn sớm bảo vệ với virus gây bệnh tai xanh 3.6 Đáp ứng miễn dịch dịch thể vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1.vn so với số vacxin lưu hành thị trường Kết so sánh hiệu sử dụng vacxin tai xanh nhược độc chủng Hanvet1.vn với số loại vacxin nhược đợc phịng bệnh PRRS khác thị trường được trình bày ở bảng Bảng Hiệu giá kháng thể lợn tiêm loại vacxin phòng bệnh PRRS Loại vacxin Hiệu giá kháng thể xác định bằng IPMA (X-1) Hiệu giá kháng thể trung hòa (X-1) Hanvet 2031,87 1,26 A 1280 1,12 B 100,79 C 507,97 Bảng cho thấy: cả loại vacxin đều gây đáp ứng miễn dịch cho lợn Tuy nhiên hiệu giá kháng thể khác các nhóm lợn được miễn dịch với các vacxin khác sử dụng virus PRRS cường độc để kiểm tra hiệu giá kháng thể IPMA Các vacxin Hanvet và Trung Quốc cho đáp ứng miễn dịch với hiệu giá kháng thể IPMA tương đối cao (1/2031,87 và 1/1280), đó loại vacxin của châu Âu cho hiệu giá kháng thể rất thấp Điều này có thể được lý giải bằng sự tương đồng kháng nguyên của các chủng virus vacxin với chủng virus cường độc tại Việt Nam Vacxin Hanvet được chọn lọc và làm nhược độc từ chủng virus phân lập tại Việt Nam nên tính tương đồng kháng nguyên với chủng cường độc là rất cao (98% giải trình tự gen theo phiếu xét nghiệm số: VILAS 618-270501PTNTT/ XN) Trong vacxin A sử dụng chủng virus có nguồn gốc từ chủng độc lực cao Trung Quốc thuộc dòng Bắc Mỹ, vacxin B sử dụng chủng virus từ chủng VP-046BIS thuộc dịng châu Âu, tính kháng ngun có khác biệt với virus cường độc Việt Nam, vốn virus dòng Bắc Mỹ 37 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 IV KẾT LUẬN TCVN 8400-21:2014 Vacxin tai xanh nhược đợc chủng PRRS Hanvet1.vn dùng theo đường tiêm bắp tiêm da cho lợn (hiệu giá kháng thể IPMA đạt 1/3417,19) Lopez O.J., Osorio F.A., 2004 Role of neutralizing antibodies in PRRSV protective immunity Veterinary Immunology and Immunopathology 102: 155-163 Lợn có đáp ứng miễn dịch ngày thứ sau tiêm (hiệu giá kháng IPMA đạt 1/45,95) sau tiêm tuần, lợn bảo hợ hồn tồn cơng cường độc (hiệu giá kháng thể IPMA đạt 1/3177,77; hiệu giá kháng thể trung hòa đạt 1/1,32) Lopez O.J., Olivera M F, Alvarez Garcia E., Kwon B.J., Doster A., and Osorio F.A.: 2007, Protection against Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) Infection through Passive Transfer of PRRSV-Neutralizing Antibodies Is Dose Dependent Clinical and Vaccine Immunology: 269-275 Kháng thể tồn tại tháng, sau tiêm tháng, hiệu giá kháng thể IPMA còn 1/670,27 và hiệu giá kháng thể trung hòa còn 1/2,76 Có thể tiêm cho lợn lúc tuần tuổi, nên tiêm lúc tuần tuổi để đạt hiệu miễn dịch cao Tiêm vacxin cho lợn mẹ, lợn nhận kháng thể thụ động, kháng thể này tồn tại đến 35 ngày tuổi sau sinh Tại thời điểm 28 ngày sau tiêm, vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1.vn có hiệu giá cao nhất so với vacxin khác thị trường Sử dụng vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1.vn phòng bệnh tai xanh cách hiệu TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Ngọc Tiến, Tình hình dịch bệnh Tai xanh (PRRS) Việt Nam phương hướng phòng trị bệnh http://www.vjol.info/index.php/kk-ty/ article/viewFile/8301/7734 Nguyễn Tùng, Tống Hữu Hiến, Nguyễn Trọng Cường, Nguyễn Văn Cảm, 2011 Khảo nghiệm vacxin nhược độc chủng JXA1-R (Trung Quốc) phòng Hội chứng rối loạn hơ hấp sinh sản (PRRS) Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập XVIII, số Tơ Long Thành, Nguyễn Hồng Đăng, Tống Hữu Hiến, Bạch Quốc Thắng, Daniel Torrents, 2014 Đánh giá hiệu lực vacxin Amervac PRRS chủng virus PRRS gây bệnh độc lực cao Việt Nam Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập XXI số 38 Molina R M., Cha S –H., Chittick W., Lawson S., Murtaugh M.P., Nelson E.A., ChristopherHennings J., Yoon K.J., Evan R., Rowland R.R.R., Wu W.-H., Zimmerman J.J., 2008 Immune response against porcine reproductive and respiratory syndrome virus during acute and chronic infection Vet Immunol Immunopathol, 126 (3-4) (2008) 283-292 Yoon I J., Joo H.S., Gyal S M., and Molitor T W., 1994.A modified serum neutralization test for the detection of antibody to porcine reproductive and respiratory syndrome virus in swine sera J Vet Diagn Invest 6:289-292 (1994) Yoon K., Jeffrey J Zimmerman, Sabrina L Swenson, Michael J McGinley, Ken A Eernisse, Andy Brevik, Lydia L Rhinehart, Merwin L Frey, Howard T Hill and Kenneth B Platt: 1995, Characterization of the Humoral Immune Response to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (PRRS) virus Infection J VET Diagn Invest 7: 305-312 10 Xiuling Yu, Zhi Zhou, Zhen Cao, Jiajun Wu, Zhangqiu Zhang, Baiwan Xu, Chuanbin Wang, Dongmei Hu, Xiaoyu Deng, Wei Han, Xiaoxu Gu, Shou Zhang, Xiaoxia Li, Baoyiu Wang, Xinyan Zhai, Kegong Tian, 2015 Assessment of safety and efficacy of attenuated live vaccine base on hight pathogenic porcine reproductive and respiratory syndroms virus Clinical and Vaccine Immunology, volume 22, number 5, May 2015 Ngày nhận 2-8-2018 Ngày phản biện 20-8-2018 Ngày đăng 1-1-2019 ... vacxin thích hợp cho lợn từ tuần tuổi trở lên Nên tiêm vacxin lúc tuần tuổi để lợn sớm bảo vệ với virus gây bệnh tai xanh 3.6 Đáp ứng miễn dịch dịch thể vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1 .vn... ngày sau tiêm, vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1 .vn có hiệu giá cao nhất so với vacxin khác thị trường Sử dụng vacxin tai xanh nhược độc chủng PRRS Hanvet1 .vn phòng bệnh tai xanh. .. nhóm Lợn nhóm tiêm liều (105TCID50) với loại vacxin tai xanh khác nhau: Vacxin Hanvet (từ chủng PRRS Hanvet1 vn), vacxin A (từ chủng JXA1 – R), vacxin B (từ chủng VP-046BIS) vacxin C (từ chủng nhược