Luận văn sư phạm Phân lập và tuyển chọn các chủng loại nấm mốc có khả năng sinh Cellulase cao ở Vĩnh Phúc

TR NG I H C S PH M HÀ N I KHOA SINH- KTNN _*** _ PHÙNG D NG M NH PHÂN L P VÀ TUY N CH N CÁC CH NG N M M C CÓ KH N NG V NH PHÚC SINH CELLULASE CAO KHÓA LU N T T NGHI P IH C CHUYÊN NGÀNH: VI SINH V T Ng ih TS PH HÀ N I - 2010 ng d n khoa h c NG PHÚ CỌNG Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p L IC M N Em xin bày t lòng bi t n sâu s c t i th y giáo, TS Ph Công ng i tr c ti p t n tình h ng Phú ng d n, ch b o em su t trình h c t p th c hi n đ tài Em c ng xin chân thành c m n th y cô t vi sinh v t h c tồn th th y khoa Sinh - KTNN, tr ng H S ph m Hà N i t o u ki n giúp đ em su t trình h c t p nghiên c u t i Cu i em xin c m n gia đình, b n bè đ ng viên giúp đ Em su t th i gian qua Hà N i, tháng 05 n m 2010 Sinh viên Phùng D ng M nh Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p L I CAM OAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên c u c a riêng Các s li u, k t qu thu đ đ c khoá lu n trung th c, ch a t ng c công b b t kì m t cơng trình khoa h c N u sai tơi xin hồn tồn ch u trách nhi m Hà N i, tháng 05 n m 2010 Sinh Viên Phùng D ng M nh Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p M CL C Trang M U…………………………………………………………………… CH NG T NG QUAN TÀI LI U………… …………………… ic 1.1 1.2 ng v n m m c……………….…… ……………………… Chi Aspergillus Micheli ex Fries……….………………………………6 1.2.1 Tình hình nghiên c u phân lo i Aspergillus th gi i…………….6 c m sinh h c c a Aspergillus………………………………… 1.2.2 1.3 S l c v chi Penicillium……………………………………………12 1.4 Cellulose cellulase…………………………………………………14 1.4.1 Cellulose……………………………………………………… ……14 1.4.2 Cellulase…………………………………………………………… 15 1.4.3 C ch tác đ ng c a ph c h cellulase…………………… .16 CH 2.1 NG 2: V T LI U VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U……….18 V t li u nghiên c u………………………………………………… 18 2.1.1 M u phân l p……………………………………………………… 18 2.1.2 Thi t b , d ng c , hóa ch t dung cho nghiên c u………………… 18 2.2 Môi tr 2.3 Ph ng………………………………………………………….…18 ng pháp nghiên c u………………………………………… .19 2.3.1 Ph ng pháp phân l p…………………………………………… 19 2.3.1.1 Thu th p m u………………………………………………… 19 2.3.1.2 Chu n b môi tr ng phân l p b o qu n…………………….19 2.3.1.3 Ti n hành phân l p…………………………………………… 20 Khóa lu n t t nghi p Phùng D ng M nh - K32D 2.3.2 Ph ng pháp th ho t tính……………………………………… 21 2.3.3 Ph ng pháp nghiên c u đ nh lo i (Maren A Klich, 2002)………21 2.3.3.1 Ph ng pháp c y ch m m ch ng n m m c lên môi tr ng Crapek-Dox c s đ nghiên c u đ c m v mô………….21 2.3.3.2 Ph ng pháp c y kh i th ch đ quan sát đ c m vi mô (Robert A Samson and Ellen S Hoekstra, Jens C Frisvad and Filtenborg, 1996)……………………………………………… 21 2.3.4 Ph ng pháp quan sát đ c m phân lo i…………………….22 2.3.4.1 Quan sát đ c m v mô sau b ng m t th ng ho c d i kính hi n vi soi n i…………………………………………… 22 2.3.4.2 Quan sát xác đ nh đ c m vi mô d i kính hi n vi quang h c ch p nh qua kính hi n vi (Axioskop)………………….23 CH NG 3: K T QU VÀ TH O LU N………………… …………24 3.1 K t qu phân l p………………………………………………………24 3.2 K t qu th ho t tính………………………………………………….25 3.3 K t qu đ nh lo i s b ……………………………………………….27 3.3.1 B n mô t ch ng M3……………………………………………… 27 3.3.2 B n mô t ch ng M5-3………………………………………………29 3.3.3 B n mô t ch ng M6-1………………………………………………31 K T LU N VÀ KI N NGH …………………………………………… 34 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p DANH M C CÁC HÌNH NH VÀ B NG TRONG LU N V N DANH M C HÌNH Hình 1.1 Các d ng b ng đ nh giá chi Aspergillus……………………… 10 Hình 1.2 C u t o c quan sinh bào t tr n Aspergillus………………… 11 Hình 1.3 C u t o khu n ty c quan sinh bào t tr n c a Penicillium… 13 Hình 1.4 C u trúc khơng gian l p th c a cellulose……………………… 15 Hình 1.5 S đ phân gi i cellulose theo Erikson CS (1974)…………….17 Hình 3.1 Ho t tính cellulase c a ch ng m nh nh t……………………….26 Hình 3.2 M t s đ c m hình thái c a ch ng M3……………………… 29 Hình 3.3 M t s đ c m hình thái c a ch ng M5-3………………………31 Hình 3.4 M t s đ c m hình thái c a ch ng M6-1………………………33 DANH M C B NG B ng 3.1 Các ch ng n m m c phân l p đ c………………………………23 B ng 3.2 Ho t tính cellulase c a ch ng n m m c…………………… 25 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p CÁC THU T NG VI T T T CBH Cellobiohydrolase CMC Cacboxyl methyl cellulose CMC-ase Cacboxymethylcellulase CS C ng s E1 Exoglucanase E2 Endoglucanase UV Tia c c tím Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p M U Lý ch n đ tài N m m c vi sinh v t hi u khí, nhân chu n, d d ng, chúng th ng có m t đ t, xác đ ng th c v t khơng khí, m t s ký sinh đ ng th c v t ng i M t s n m m c tác nhân gây b nh, làm h h ng s n ph m công, nơng nghi p nh ng c ng có nhi u lồi có ích nh t ng h p enzyme, axit h u c , thu c kháng sinh, vitamin, kích thích t t ng tr ng đ ng th c v t đ c ng d ng nhi u l nh v c nh công nghi p ch bi n th c ph m, công nghi p d c ph m, công ngh môi tr ng, nông nghi p Cellulase m t ph c h enzyme th y phân cellulose, đ c t ng h p ch y u b i vi sinh v t, có n m m c Cellulase đ c ng d ng r ng rãi nhi u l nh v c, hi n t i t ng lai ng i ta s d ng cellulase nh m hai m c đích chính: th nh t dùng cellulase tr c ti p đ phân h y ph th i c a công, nông nghi p có thành ph n ch y u cellulose công ngh môi tr ng, th hai thu phân cellulose t o c ch t lên men đ thu s n ph m cu i khác c bi t ch n nuôi, m t nh ng bi n pháp nâng cao n ng su t v t nuôi nâng cao hi u su t s d ng ch t dinh d đ này, ng ng có th c n m c cao nh t gi i quy t v n i ta có th dùng ch ph m enzyme (g m nhi u lo i enzyme g i multi-enzyme, có cellulase) đ b sung vào kh u ph n th c n c a v t ni Các enzyme v i enzyme có s n đ s phân gi i ch t dinh d ng tiêu hóa ng c a th c n giúp cho v t tiêu hóa đ c t t h n Vi c b sung ch ph m g m nhi u lo i enzyme s giúp v t nuôi h p th t t h n ngu n th c n khác Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p Hàng n m, ho t đ ng ngành nông nghi p th i môi tr ng hàng tr m ngàn t n ph ph m có thành ph n ch y u cellulose, hi n m t nh ng nguyên nhân gây ô nhi m môi tr ph ph m đ ng c x lý làm th c n gia súc ho c phân bón s m t ngu n l i l n v m t kinh t , đ ng th i l i gi i quy t đ môi tr ng N u l ng Trên th gi i c ng nh c v n đ v ô nhi m Vi t Nam, có nhi u nghiên c u v cellulose ng d ng th c n ch n ni nh : Chu Th Thanh Bình CS (2002) ng d ng ch ng n m men ch bi n bã th i hoa qu giàu cellulose làm th c n gia súc Theo tác gi Nguy n Lân D ng (1991) lên men x p s n b ng cách s d ng Aspergillus hennebergii, Aspergillus niger s n ph m dùng làm th c n cho gà, l n, bò k t qu cho nhi u tri n v ng Tuy nhiên c ng ch a có nhi u nghiên c u t p trung vào ch ng n m m c phân gi i cellulose, nguyên nhân có th t nhiên có nhi u nhóm vi sinh v t t u th h n so v i n m m c v kh n ng sinh cellulase Nh ng n u xét v kh n ng ch ng ch u pH, kh n ng s d ng ngu n cacbon, ngu n nit n m m c t u th h n so v i nhóm vi sinh v t khác T nh ng lý do, v i m c đích tìm hi u, làm quen v i ph ng pháp nghiên c u khoa h c, ch n đ tài “Phân l p n ch n ch ng n m m c có kh n ng sinh cellulase cao V nh Phúc” đ nghiên c u M c tiêu c a đ tài Phân l p n ch n ch ng n m m c có kh n ng t ng h p cellulase B c đ u phân lo i s b m t s ch ng có ho t tính cellulase cao nh t Ý ngh a c a đ tài B c đ u n ch n nh ng ch ng n m m c có ho t tính enzyme cellulase cao, cung c p ngu n gi ng vi sinh v t ph c v cho nghiên c u khác sâu h n vào ng d ng, h a h n cho nhi u ng d ng th c ti n Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p CH ic 1.1 NG 1: T NG QUAN TÀI LI U ng v n m m c Ph n l n n m m c thu c nhóm phân lo i Deuteromycetes, m t s d ng sinh s n vơ tính c a nhóm n m túi (Ascomycetes) ho c nhóm n m đ m (Basidiomycetes) Deuteromycota bao g m kho ng 2400 chi có 1700 chi thu c nhóm n m Hyphomycetes 700 chi thu c nhóm Coelomycetes Theo E Kiffer, M Morelet, 2000, s chi n m thu c t chi Phialoconidiae (l p ph Euhyphomycetidae, l p Hyphomycetes, ngành ph Deuteromycotina) chi Penicillium có s loài nhi u nh t kho ng 223 lồi, ti p theo chi Aspergillus có kho ng 185 loài Deutermycota (Basidiomycetes) đ v i n m túi (Ascomycetes), đ m c x p vào nhóm n m b c cao (Michael J Carlile et al 2001) Chúng nh ng sinh v t nhân chu n, d d ng, ph n l n s ng ho i sinh (saprophytism), m t s kí sinh (parasitism) ng m t s n m i đ ng th c v t, khác c ng sinh (symbiosis) Thành t bào có kitin, h s i (mycelium) m t t n phát tri n m nh d ng s i có vách ng n, nhân th đ n b i, ho c l ng b i, ho c th song nhân, sinh s n b ng bào t (bào t khơng có roi) Theo quan m c a nhà n m h c hi n nhóm n m b t tồn (Deuteromycetes) nhóm n m bao g m n m túi n m đ m m t kh n ng sinh s n h u tính (telemorph), ch hình th c sinh s n vơ tính (anamorph) đ c g i chung nhóm Mitosporic fungi (Michael J Carlie, Sarah C Watkinson, Graham, 1994; Noyd R.K, 2000) n m túi (Ascomycetes) n m đ m (Basidiomycetes), trình sinh s n h u tính x y m t giai đo n c a vòng đ i g i giai đo n hoàn thi n (perfect stage) hay d ng sinh s n h u tính (telemorph) Ng c l iđ c tr ng c a n m b t tồn Deuteromycetes hình th c sinh s n vơ tính Các bào t tr n vơ tính (conidia hay mitotic spores) đ c sinh b ng trình Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p - Chu n b h p l ng, lam kính, lamen, - môi tr t, khoan nút chai vô trùng ng đ nh lo i nghiên c u vào h p l ng cho đ dày đ t g n mm, dùng khoan nút chai khoan l y kh i th ch - t kh i th ch m cách đ u m t lam kính - C y m t bào t vào kh i th ch - y lamen lên t ng kh i th ch - t t vô trùng vào đ gi m cho m u Sau c y xong dùng kính hi n vi theo dõi t ng ngày s phát tri n c a h s i, h ch n m 2.3.4 Ph ng pháp quan sát đ c m phân lo i 2.3.4.1 Quan sát đ c m v mô sau đơy b ng m t th d ng ho c i kính hi n vi soi n i - Màu s c bào t (conidial color): màu s c c a n m, đ c m quan tr ng đ phân lo i đ n m c chi ph - ng kính khu n l c (colony diameter): kích th c l n nh t c a m t khu n l c nuôi m t h p l ng - Màu s c h s i (mycelial color): th ng có màu tr ng nh ng m t s lồi có màu khác - D ch ti t b m t h s i (exudate): gi t l ng nh , đ thành b m t h s i 22 c hình Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p - Màu c a m t sau khu n l c (reverse color): màu s c quan sát đ d i khu n l c b ng cách nhìn t phía d th ng ph thu c vào mơi tr c phía i đ a th ch Màu s c ng - S c t hòa tan (Soluble pigment): s c t khu ch tán vào agar theo vi n c a khu n l c - H ch n m (Sclerotia): kh i c ng g m s i n m, th ng hình c u, g n c u ho c elip, không ch a bào t - Th qu (cleistothecia): th qu khơng t m , ch a túi bào t mà bên bào t túi 2.3.4.2 Quan sát vƠ xác đ nh đ c m vi mơ d i kính hi n vi quang h c ch p nh qua kính hi n vi (Axioskop) - Giá bào t tr n (conidiophore, tipe): xác đ nh chi u dài, màu s c c u trúc b m t c a giá bào t tr n, đ c m quan tr ng đ phân lo i - B ng đ nh giá (versicle): đ nh ph ng lên c a cu ng bào t n m Quan sát hình d ng đo kích th c - Các l p th bình (Seriation): quan sát s t ng th bình - Bào t tr n (conidia): hình thái, kích th c c u trúc b m t đ c m quan tr ng - Bơng n m (conidial head): quan sát hình d ng n m - T bào Hulle: thành dày, có tính khúc x cao - Bào t túi: màu s c, kích th g n i, ho c đ c, cách trang trí c a bào t túi, bao g m ng rãnh bao xung quanh bào t túi c u trúc b m t c a thành l i 23 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p CH 3.1 NG 3: K T QU VÀ TH O LU N K t qu phân l p T m u thu th p đ c ti n hành phân l p môi tr Dox c s đ n ngày thu đ lpđ c trình bày c th b ng ng Crapek- c 30 ch ng n m m c K t qu phân b ng 3.1 B ng 3.1 Các ch ng n m m c phân l p đ STT M u Ch ng m c 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1 1 2 3 3 4 5 6 6 7 8 9 M1-1 M1-2 M1-3 M1-4 M2-1 M2-2 M2-3 M3 M3-2 M3-3 M3-6 M4-1 M4-2 M4-3 M5-1 M5-3 M5-6 M6-1 M6-2 M6-3 M6-4 M7-1 M7-2 M7-3 M8-1 M8-2 M8-3 M9-1 M9-2 M9-3 c c m c a ch ng M u c a khu n l c Th i gian xu t hi n en ngày Nâu nh t ngày Nâu đ m ngày Xanh rêu ngày en ngày en ngày Xám ngày Xanh l c ngày Nâu đ m ngày Xanh đen ngày en ngày Xanh rêu ngày Tr ng ngày Vàng nh t ngày Xanh rêu ngày Vàng hoa cau ngày Vàng hoa cau ngày en nâu ngày Nâu ngày Xám ngày Xám xanh ngày Tr ng ngày Xanh rêu ngày Nâu đ m ngày Nâu ngày Nâu nh t ngày Vàng nh t ngày Nâu ngày Tr ng m n ngày Xanh đen ngày 24 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p M i m u phân l p đ u thu đ c t đ n ch ng n m m c có hình thái khu n l c khác Các khu n l c c a ch ng ch y u xu t hi n sau đ n ngày, m t s xu t hi n sau ngày nuôi c y Trên môi tr ng Crapek-Dox, c n m m c, x khu n m t s vi khu n đ u có th m c đ c Nh ng ta có th phân bi t rõ ràng khu n l c c a n m m c v i khu n l c c a vi khu n x khu n: khu n l c c a n m m c th ng d ng x p h n kích th c s i n m to h n, phát tri n nhanh h n to h n nhi u l n so v i khu n l c c a x khu n vi khu n; khu n l c vi khu n th ng nhày, t nh n; khu n l c c a x khu n bơng, x p, khơ, r n ch c, xù xì, nh ng tr ng h p khơng có h s i khí sinh khu n l c có d ng màng d o K t qu th hi n b ng 3.1 cho th y ch ng n m m c V nh Phúc đa d ng, có ti m n ng cho nhi u ng d ng th c t nh s n xu t enzyme, s n xu t kháng sinh, x lý rác th i,… 3.2 K t qu th ho t tính M c tiêu c a đ tài n ch n ch ng n m có kh n ng sinh cellulase phân h y cellulose nên ti n hành th ho t tính mơi tr Crapek-Dox thay ngu n c ch t b ng CMC theo ph ng pháp khu ch tán đ a th ch: dùng khoan nút chai, khoan l môi tr (môi tr thu đ ng ng th ho t tính ng th ch ch a 1% CMC) Nh vào m i l khoan dung d ch enzyme c sau ni c y chìm vào môi tr t l nh 6-8 gi cho enzyme khu ch tán ng th ch sau cho vào t m 320C 24gi Hi n hình vòng phân gi i b ng dung d ch thu c th liugon đ 1% Ho t tính c a enzyme đ D: đ đ c xác đ nh b ng hi u s D - d (mm) Trong ng kính vòng phân gi i; d: đ c trình bày c th b ng 3.2 25 ng kính l đ c K t qu chi ti t Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p B ng 3.2 Ho t tính cellulase c a ch ng n m m c STT 10 11 12 13 14 15 Ch ng m c M1-1 M1-2 M1-3 M1-4 M2-1 M2-2 M2-3 M3 M3-2 M3-3 M3-6 M4-1 M4-2 M4-3 M5-1 K t qu Ho t tính cellulase STT (D-d, mm) 16 13 17 18 11 19 20 12 21 22 22 23 10 24 12 25 11 26 10 27 28 29 30 Ch ng m c M5-3 M5-6 M6-1 M6-2 M6-3 M6-4 M7-1 M7-2 M7-3 M8-1 M8-2 M8-3 M9-1 M9-2 M9-3 Ho t tính cellulase (D-d, mm) 20 13 18 11 10 13 15 12 13 14 b ng 3.2 cho th y t t c 30 ch ng n m m c phân l p đ u có ho t tính cellulase Trong đó, có 12 ch ng có ho t tính nh h n 10 mm, 15 ch ng có ho t tính t 10 – 15 mm ch ng có ho t tính l n h n 15 mm ch ng M3 (22 mm), M5-3 (20 mm), M6-1 (18 mm) M3 M5-3 M6-1 Hình 3.1 Ho t tính cellulase c a ch ng m nh nh t 26 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p Sau xác đ nh đ c ch ng M3, M5-3 M6-1 có ho t tính cellulase cao nh t v i ho t tính l n l t 22 mm, 20 mm 18mm, so sánh ho t tính c a ch ng v i k t qu c a nghiên c u khác đ c công b th y r ng ch ng có ho t tính cellulase t ng đ i m nh nên quy t đ nh ch n ch ng M3, M5-3 M6-1 đ nghiên c u đ nh lo i 3.3 K t qu đ nh lo i s b 3.3.1 B n mô t ch ng M3 B ng ph 2002), b ng pháp nh n di n n m m c truy n th ng (Maren A Klich, c đ u xác đ nh đ c ch ng M3 thu c chi Penicillium có đ c m hình thái r t gi ng v i đ c m hình thái c a chi Penicillium khóa phân lo i c a Samson CS (1995) Nh ng đ c m hình thái c a ch ng M3 đ c miêu t c th nh sau: c m hình thái khu n l c: - ng kính khu n l c (mm) môi tr ng Crapek-Dox c s : 30 mm sau ngày nuôi c y - c m m t tr c khu n l c: khu n l c có màu xanh l c gi a, rìa màu xám xanh - c m m t sau khu n l c: có màu nâu t i, không nh n C u t o c quan sinh s n vơ tính: - Giá bào t tr n (conidiophore, tipe): chia nhánh, d ng m nh, h i nh n - Bơng n m (conidial head): hình ch i - B ng đ nh giá (vesicle): hình đ , bàn chang - Các l p th bình (seriation): l ng t ng 27 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p - Bào t tr n (conidia): có hình ovan, c u, b m t h i ráp M t tr c khu n l c M t sau khu n l c Bông n m (X10) Bông n m (X40) B ng đ nh giá (X100) B ng đ nh giá (X100) 28 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p Bào t (X40) Bào t (X100) Hình 3.2 M t s đ c m hình thái c a ch ng M3 3.3.2 B n mô t ch ng M5-3 B ng ph 2002), b ng pháp nh n di n n m m c truy n th ng (Maren A Klich, c đ u xác đ nh đ c ch ng M5-3 thu c chi Aspergillus ch ng có nh ng đ c m hình thái r t gi ng v i đ c m hình thái c a chi Aspergillus khóa phân lo i c a Raper & Fennell (1965) Nh ng đ c m hình thái c a ch ng M5-3 đ c miêu t c th nh sau: c m hình thái khu n l c: - ng kính khu n l c (mm) môi tr ng Crapek-Dox c s : 40 mm sau ngày nuôi c y - c m m t tr c khu n l c: bào t màu vàng hoa cau, vàng t i, rìa khu n l c có màu vàng h i xanh, h s i khí sinh t tr ng đ n vàng nh t - c m m t sau khu n l c: màu vàng t i, không nh n C u t o c quan sinh s n vơ tính: 29 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p - Giá bào t tr n (conidiophore, tipe): không phân nhánh, h i ráp, thành dày - Bông n m (conidial head): hình bán c u, g n c u - B ng đ nh giá (versicle): hình bán c u, hình c u - Các l p th bình (seriation): đ n t ng bao ph 70-90% - Bào t tr n (conidia): hình c u M t tr c khu n l c M t sau khu n l c Bông n m (X10) Bông n m (X40) 30 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p B ng đ nh giá (X100) B ng đ nh giá (X100) Bào t (X40) Bào t (X100) Hình 3.3 M t s đ c m hình thái c a ch ng M5-3 3.3.3 B n mô t ch ng M6-1 B ng ph 2002), b ng pháp nh n di n n m m c truy n th ng (Maren A Klich, c đ u xác đ nh đ c đ c m v hình thái c a ch ng M6-1, ch ng có r t nhi u đ c m gi ng v i nhóm lồi Apergillus niger (theo khóa phân lo i c a Raper & Fennell, 1965) Do tơi xác đ nh ch ng M6-1 thu c nhóm lồi Apergillus niger, m t nh ng nhóm lồi đ c x p vào danh m c sinh v t an toàn đ c miêu t c th nh sau: 31 c m c a ch ng M6-1 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p c m hình thái khu n l c: - ng kính khu n l c (mm) môi tr ng Crapek-Dox c s : 55 mm sau ngày nuôi c y - c m m t tr c khu n l c: bào t màu đen h i nâu, có vòng tr ng ng n cách ph n gi a khu n l c v i ph n rìa khu n l c - c m m t sau khu n l c: màu cam, nâu, nh n C u t o c quan sinh s n vơ tính: - Giá bào t tr n (conidiophore, tipe): không phân nhánh, nh n, th ng r t dày - Bông n m (conidial head): hình c u - B ng đ nh giá (versicle): d ng c u, bán c u - Các l p th bình (seriation): đ n t ng, bao ph 50-80% - Bào t tr n (conidia): đa s hình ovan elip, m t s hình c u M t tr c khu n l c M t sau khu n l c 32 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p Bơng n m (X10) Bông n m (X40) B ng đ nh giá (X100) B ng đ nh giá (X100) Bào t (X40) Bào t (X100) Hình 3.4 M t s đ c m hình thái c a ch ng M6-1 33 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p K T LU N Các k t qu thu đ c đáp ng đ c m c tiêu nghiên c u ban đ u c a đ tài: T m u rác th i, cành g , cây, r m d m c, đ t mùn đ cl y vùng Yên L c, Xuân Hòa (Phúc Yên) thành ph V nh Yên c a t nh V nh Phúc, phân l p đ c 30 ch ng n m m c, t t c 30 ch ng n m m c đ u có kh n ng t ng h p cellulase phân gi i cellulose K t qu cho th y ch ng n m m c có kh n ng sinh cellulase V nh Phúc đa d ng, có ti m n ng cho nhi u ng d ng th c ti n Trong 30 ch ng có ho t tính cellulase có ch ng M3, M5-3 M6-1 có ho t tính cellulase cao nh t, ho t tính c a ch ng l n l t 22 mm, 20 mm 18 mm ãb c đ u đ nh lo i s b đ c ch ng M3, M5-3 M6-1 Trong ch ng M3 thu c chi Penicillium, ch ng M5-3 M6-1 thu c chi Aspergillus Riêng ch ng M6-1 đ c nghiên c u sâu h n đ nh lo i đ n lồi, theo ch ng M6-1 thu c nhóm loài Aspergillus niger m t nh ng loài thu c danh m c sinh v t an toàn, v y h a h n cho r t nhi u ng d ng th c t ph c v cho đ i s ng KI N NGH Các ch ng m i ch đ c phân lo i s b d a vào hình thái ch y u phân lo i m t cách xác ch ng n m c n ph i k t h p thêm ph ng pháp phân lo i b ng k thu t sinh h c phân t Ba ch ng M3, M5-3 M6-1 có ho t tính cellulase t ng đ i m nh nên c n có nghiên c u ti p theo đ đánh giá h t ti m n ng ng d ng c a ch ng này, đ c bi t ch ng M6-1 thu c loài Apergillus niger m t nh ng loài thu c danh m c sinh v t an toàn 34 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p TÀI LI U THAM KH O T NG VI T [1] Bùi Xuân ng, Nguy n Huy V n, (2001) Vi n m dùng công ngh sinh h c, NXB KH & KT Hà N i, trang: 13-16, 154-168 [2] Chu Th Thanh Bình, Nguy n Lân D ng, L ng Thùy D ng “Phân l p, n ch n nghiên c u ch ng n m men có kh n ng phân gi i cellulose nh m ng d ng x lý bã th i hoa qu làm th c n ch n nuôi” [3] Nguy n Lân D ng, oàn V n M u, Nguy n Phùng Ti n, Tr ch, Ph m V n Ty (1972) M t s ph ng c ng pháp nghiên c u vi sinh v t h c Nxb Khoa h c K thu t 325 – 378 [4] Nguy n Th Mai Hoa (2004) “Nghiên c u phân lo i ch ng thu c chi Aspergillus phân l p t r ng ng p m n Nam nh Thái Bình” Lu n v n th c s sinh h c [5] Tr nh ình Khá, Quy n ch n nghiên c u nh h ình Thi, Nguy n S Lê Thanh (2007) “Tuy n ng c a y u t môi tr ng lên kh n ng sinh t ng h p cellulase c a ch ng penicillium SP DTQ-HK1” T p chí Cơng ngh Sinh h c (3): 355 – 362 TI NG ANH [6] B Botton A Breton M Fevres Gauthier Ph Guy, (1990), Moisissures Utiles et Nuisibles Importance Industrielle, 2nd edition, Masson, Paris Milan Barcelone Mexico, p: 84, 101, 103, 109, 112, 118 [7] James M Jay, (1996), Modern Food Microbiology, International Thomson Publishing, p: 26,27 [8] Kiffer E., M Morelet, (2000), The Deuteromycetes (Mitosporic Fungi), Science Publishers TNC, U.S.A., 115pp [9] Maren A Klich, 2002 Identification of Common Aspergillus Species, Published by the Centralbureau voor Schimmelcultues, Utrecht, The Nethrlands, 107 pp 35 Phùng D ng M nh - K32D Khóa lu n t t nghi p [10] Mc Kenzie Erick H.C., (2004), Fungal Taxonomy Workshop, Landcare Research Private Bag 92170 Auckland New Zealand, p 3,6 [11] Michael J.Carlie, Sarah C Watkinson, Graham W Gooday, (1994), The fungi, Academic presss, p 68,70 [12] Noyd R.K., (2002), Mycology Reference Card, The American Phytopathological Society 3340 Pilot Knob Road St Paul, Minnesota 551212079, USA, 18pp [13] Raper Fennell (1965) The Genus Aspergillus, The williiams & Wikins Company 428 E Preston street Baltimore, Md 21202 U.S.A, 570pp [14] Robert A, Samson, (1999), The Genus Aspergillus with Special Regard the Aspergillus fumigatus Group, in: “Contributions to Microbiology”, vol.2: p [15] Robert A Samson and Ellen S.Hoekstra, Jens C Frisvad and Filtenborg (1996) Introductrion to Food-borne Fungi, Centraalbureau voor Schimmelcultues Baarn Delft, Pg : 3, 4, 52-83 [16] Robert A Samson, John I Pitt (2000) Integration of modern taxonomic methods for Penicillium and Aspergillus classification, p: 83- 113 [17] Tsuneo Watanabe, 2002 Soil and Seed Fungi, CRC Prees, P: 190-196 36 ... đ tài Phân l p n ch n ch ng n m m c có kh n ng t ng h p cellulase B c đ u phân lo i s b m t s ch ng có ho t tính cellulase cao nh t Ý ngh a c a đ tài B c đ u n ch n nh ng ch ng n m m c có ho... nhóm vi sinh v t khác T nh ng lý do, v i m c đích tìm hi u, làm quen v i ph ng pháp nghiên c u khoa h c, ch n đ tài Phân l p n ch n ch ng n m m c có kh n ng sinh cellulase cao V nh Phúc đ nghiên... nâng cao n ng su t v t nuôi nâng cao hi u su t s d ng ch t dinh d đ này, ng ng có th c n m c cao nh t gi i quy t v n i ta có th dùng ch ph m enzyme (g m nhi u lo i enzyme g i multi-enzyme, có cellulase)