Nghiên cứu đặc điểm sinh học và phân loại của nấm men sinh bào tử bắn (ballistosporous yeasts) phân loại từ lá cây ở vườn quốc gia cúc phương

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI VIỆN VI SINH VẬT VÀ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Đ Ể T À I Đ Ặ C B IỆ T C Ấ P Đ H Q G H N NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐlỂM s i n h h ọ c v p h â n LOẠI CỦA NẤM MEN SINH BÀO TỬ BẮN (BALLISTOSPOROUS YEASTS) PHÂN LẬP TỪ LÁ CÂY Ở VƯỜN QUỐC GIA cúc PHƯƠNG MÃ SỐ: QG-06-19 C h ủ trì đề tài: T h S Đ o T h ị L ơng C ác th àn h viên: G S T S P h m V ăn Ty T h S L ê T h ị H o n g Y ến T h S H o n g V ăn V in h ÙA HOC QUOC GIA HÀ NÔI ' r?ỊJNG TÃK/ rHÒNG TIN THƯ VIỆN J H N ội - 0 ự ỉ S S L - MỤC LỤC Trang M ục lục i Danh mục ký hiệu chữ viết tắt V Danh mục bảng vi Danh m ục hình vẽ, đồ thị vii Tóm tắt để tài ix M Ở Đ ẨU Chương TỔ N G Q U A N 1.1 Đa dạng sinh học đa dạng nấm men 1.1.1 Đ a dạn g sinh học 1.1.2 Đ a dạng vi sinh vật 1.1.3 Nghiên cứu đa dạng nấm men nấm men sinh bào tủ bắn 1.1.3 N ghiên cứu nấm men Thái Lan 1.1.3.2 N ghiên cứu nấm men Indonesia 1.1.3.3 Nấm men rừng Đài Loan 1.1.3.4 N ghiên cứu nấm men sinh bào tử bắn Trung Quốc 1.1.3.5 N ghiên cứu nấm men sinh bào tử bắn Nhật Bản 1.1.3.6 N ghiên cứu nấm men sinh bào tử bắn số nước khác 1.1.3.7 N ghiên cứu nấm men Việt Nam 10 1.2 Phân loại nấm men 11 1.2.1 Các nấm men túi 11 1.2 Các nấm men đảm 12 1.3 ứ n g dụng nấm men đời sông 13 1.3.1 Nấm men lên men etylic 13 1.3.2 Các nấm m en nhà sản xuất protein đơn bào 13 1.3.3 Các nấm m en nguồn sản xuất sản phẩm công nghiệp 14 khác 1.3.4 N ấm men dùng làm tác nhân probiotic liệu pháp sinh 16 học trị liệu 1.3.5 Nấm men dùng chuyển hoá Sinh học (bioconversion) 16 1.3.6 Sử đụng nấm men để hạn ch ế bệnh sau thu hoạch trái 17 i ngũ cốc 1.3.7 Nấm men tác nhân phục hồi sinh học 17 1.3.8 Cải biến nấm men đột biến, lai thể nguyên sinh kĩ 17 thuật ADN tái tổ hợp 1.3.9 Dùng nấm men làm sinh vậtbiểu ADN táitổ hợp 1.4 Các tiêu sử dụng phân loại nấm men 18 19 1.4.1 Các đặc điểm hình thái ni cấy 19 1.4.2 Các đặc điểm sinh lý sinh hoá 19 1.4.3 C ác đặc điểm hoá ph ân loại sinh hạc ph ân tử 20 1.4.4 Các bước định danh 20 1.4.4.1 Phương pháp phân loại thông thường 21 1.4.4.2 Phương pháp sử dụng sơ' liệu trình tự A DNr 21 1.4.5 Các ch ỉ tiêu dùng phân loại đại 22 1.4.5.1 Hoá phân loại 22 1.4.5.2 Sinh học phân tử 23 1.5 Nấm men sinh bào tử bắn 29 1.5.1 Đ ặc điểm nấm men sinh bào tử bắn 29 1.5.2 Lịch sử nghiên cứu nấm men sinh bào tử bấn 30 1.5.3 VỊ tr í nấm m en sinh bào tử bắn p h ả hệ 32 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNGPHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1 N guyên liệu 36 36 2.1.1 M ẫu thu thập 36 2.1.2 Vỉ sinh vật 36 2.1.2.1 Các vi sinh vật kiểm định 36 2.1.2.1 Các chủng nấm men chuẩn dùng lai ADN genom 36 2.1.3 Thiết bị m áy móc 36 2.1.4 Các loại m ôi trường 37 2.1.4.1 M ôi trường phân lập nuôi nấm men sinh bào tử bắn 37 2.1.4.2 M ôi trường phân loại 37 2.1 A M ôi trường nuôi vi sinh vậtkiểm định 39 2.1.4.4 M trường xác định hoạt tính enzym 39 2.1.4.5 M ôi trường cho sinh tổng hợp enzym 39 2.2 Phương pháp 39 ii 2.2.1 Phương p h p ph án lập 39 2.2.2 Phương p h p ph ân loại nấm m en sinh bào tử bắn 39 2.2.2.1 Các đặc điểm hình thái 40 2.2.2.2 Phương pháp xác định đặc tính sinh lý, sinh hố 40 2.2.2.3 Phương pháp xác định hoá phân loại 43 2.2.2.4 Phân loại nấm men phương pháp sinh học phân tử 46 2.2.3 Xác định hoạt tính enzym phương ph áp khuyếch tán 52 thạch 2.2.4 X ác định hoạt tính kháng sinh 52 2.2.5 Xác định sinh khối 53 2.2.6 X ác định p H 53 2.2.7 N ghiên cứu điều kiện ni cấy thích hợp cho trình 53 sinh tổng hợp enzym 2 Lựa chọn mơi trường thích hợp 53 2.2.7.2 Lựa chọn pH ni cấy thích hợp 53 2.2.7.3 Lựa chọn nhiệt độ thích hợp 53 2.2.7.4 Lựa chọn thời gian ni cấy thích hợp 54 Chương KẾT QUẢ VÀ TH Ả O LUẬN 55 3.1 Phân lập nấm men 55 3.1.1 Đ ịa điểm thu thập mẫu 55 3.1.2 Phân lập 55 3.2 Phân loại nấm men sinh bào tử bán 57 3.2.1 Phân loại đến ch i 57 3.2.1.1 Hệ thống ubiquinon chủ yếu 57 3.2.1.2 Xác định xyloza tế bào 58 3.2.1.3 Phân loại đến cấp độ chi 58 3.2.2 VỊ trí p h â n loại chủng nấm men sinh bào tử bấn thuộc 60 chi B ullera 3.2.2.1 Xác định phân tích trình tự ADNr 18S 60 3.2.2.2 Xác định phân tích trình tự ADNr ITS 62 3.2.2.3 Xác định phàn tích trình tự A DNr 26S đoạn D1/D2 67 3.2.2.4 Phân loại chủng nấm men thuộc chi Buỉlera đến lồi 72 3.2.2.5 M tả lồi 76 iii 3.3 H oạt tính sinh học chủng nấm men sinh bào tử bắn thuộc 86 chi B ullera 3.3.1 K h ả sinh enzym ngoại bào 86 3.3.2 K h ả sinh chất kháng sinh 87 3.3.3 C ác điều kiện nuôi cấy tối ưu cho sinh tổn g hợp enzytn ngoại 87 bào 3.3.3.1 Lựa chọn môi trường nuôi cấy thích hợp 87 3.3.3.2 Lựa chọn pH ni cấy thích hợp 89 3.3.3.3 Lựa chọn nhiệt độ thích hợp 90 3.3.3.4 Lựa chọn thời gian ni cấy thích hợp 91 KẾT LU ẬN VÀ K IẾN NGHỊ 93 TÀI LIỆU TH A M K H ẢO 95 PHỤ LỤC 106 iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIÊT TẮT A DN r A xit deoxyribonucleic riboxom ARNr A xit ribonucleic riboxom BCA Axit bacto casam ino bp Base pair (cặp bazơ) CMC Carboxy metyl xenluloza đtg Đồng tác giả DBB Diazonium Blue B (Xanh diazoni EDTA Ethylenediam inetetra acetic acid ETS Externally Transcripbed spacer G+C Guanin + cytozin HPLC High Performance Liquid Chrom atography (Sắc ký lỏng cao áp) IGS Inter - Genic Spacer ITS Internal Transcribed Spacer (Khoảng hai đoạn gen B) chép) JCM Japan Collection of M icroorganism s (Bảo tàng giống vi sinh vật Nhật Bản) NTS N on-Transcripbed Spacer PABA p - Aminobenzoic Acid (a xit p - am inobenzoic) PCR Polym erase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) PDA Potato-dextrose-A gar (Khoai tây - glucoza - thạch) TAE Tris- axit axetic- axit etylenediam inetetra axetic TFA Axit trifluoroaxetic TLC Thin- layer chrom atography (Sắc ký lóp m ỏng) VTCC Vietnam Type Culture Collection (Bảo tàng giống chuẩn Vi sinh vật Việt Nam) YCB Yeast carbon base YM Y east-m alt extract agar (thạch cao nấm men - cao m alt) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng T ên b ả n g Pha dung dịch vitamin 10X T n g 42 Nấm men sinh bào tử bắn phân lập từ bể mật rừng Quốc 56 gia Cúc Phương Sắp xếp chủng nấm men sinh bào tử bắn vào chi dựa 59 đặc điểm hố phân loại hình thái Số lượng nucleotit sai khác chủng nhóm A với lồi có quan 65 hệ họ hàng gần dựa vào trình tự ADNr vùng ITS (bao gồm 5,8S) Số lượng nucleotit sai khác chủng nhóm A với lồi có quan 70 hệ họ hàng gần dựa vào trình tự ADNr 26S đoạn D1/D2 Kết lai ADN genom chủng nấm men nghi ngờ lồi 74 thuộc nhóm A chi Bullera Phân loại đến loài chủng nấm men sinh bào tử bắn thuộc nhóm A 75 chi Buller Hoạt tính enzym ngoại bào chủng nấm men VY-69, VY-75, 87 VY-116 VY-142 M ôi trường nuôi cấy thích hợp cho sinh trưởng sinh tổng hợp enzym 88 chủng nấm men 10 pH ni cấy thích hợp cho sinh trưởng sinh tổng hợp enzym 89 chủng nấm men 11 N hiệt độ ni cấy thích hợp cho sinh trưởng sinh tổng hợp enzym 90 chủng nấm men 12 Thời gian ni cấy thích hợp cho sinh trưởng sinh tổng hợp enzym chủng nấm men VY-69, V Y -1 16 V Y -142 vi 91 DANH MỤC CÁC HÌNH H ìn h T ên h ìn h T n g Các bước tiến hành phương pháp phân loại thông thường 21 Các bưóc phương pháp sử dụng số liệu trinh tự ADNr 21 Cấu trúc nhóm gen ARNr 24 Cây phả hệ nấm men dựa vào trình tự A D N r 18S 25 Sơ đồ biểu diễn phả hệ 28 Cơ chế bắn bào tử 30 Cây phả hệ nấm men sinh bào tử bắn dựa vào phân tích trình 33 tự A D N r 18S Phân tích hệ thống ubiquinon chủ yếu chủng nấm men 57 Phân tích xyloza tế bào nấm men 58 10 Vị trí phân loại chủng nấm men sinh bào tử bắn thuộc chi 61 Bullera với lồi có quan hệ họ hàng gần dựa vào trình tự A DN r 18S 11 Vị trí phân loại chủng nấm men sinh bào tử bắn thuộc nhóm A 64 chi Buỉỉera với lồi có quan hệ họ hàng gần dựa vào trình tự ADNr ITS 12 Vị trí phân loại chủng nấm men thuộc nhóm A chi Buỉlera với 68 lồi có quan hệ họ hàng gần dựa vào trình tự A DNr doạn D1/D2 26S 13 T ế bào sinh dưỡng bào tử bắn Bullera cuulongensis VY-50T 77 14 T ế bào sinh dưỡng bào tử bắn Buỉlera nhoquanica V Y -55T 81 15 T ế bào sinh dưỡng bào tử bắn Bulỉera haininhensis V Y -86T 84 16 Khả sinh enzym ngoại bào 39 chủng nấm men sinh bào tử 86 bắn thuộc chi Bullera 17 Hình ảnh bắn bào tử VY-75 106 18 Hình dạng khuẩn lạc VY-55 106 VII 19 Màu sắc V Y -5, V Y-21, VY-23, V Y-69 VY-103 106 20 Màu sắc V Y-3, V Y-20, VY-85, VY-91 V Y-102 106 21 Màu sắc khuẩn lạc VY-42, VY-51, VY-75, 106 22 Màu sắc khuẩn lạc VY-55, VY-65 V Y -142 106 23 Phân tích thành phần G+C chủng nấm men HPLC 107 24 Phân tích hệ thống ubiquinon chủng nấm men HPLC 107 25 Hoạt tính enzym phân giải chất 108 26 Hình dạng bào tử bắn chủng nấm men 109 27 Điện di sản phẩm PCR A DNr 110 28 Trình tự ADNr 110 viii V Y -116 VY-143 BÁO CÁO TÓM TẮT a, T ên đề tài: “N ghiên cứu đạc điểm sinh học phân loại nấm men sinh bào tử bắn (ballistosporous) phân lập từ Vườn Quốc gia Cúc Phương” b, Chủ trì đề tài: ThS Đào Thị Lương c, Các cán tham gia: GS TS Phạm Van Ty, ThS Lê Thị Hoàng Yến, ThS Hoàng Văn Vinh d, Mục tiêu nội dung nghiên cứu để tài - Mục tiêu đề tải: + Tìm hiểu nấm men sinh bào từ bắn- nhóm vi sinh vật phong phú cư trú nhiều loại mà từ trước đến chưa biết đến Việt Nam- Khời nguổn cho nhánh nghiên cứu đa dạng sinh học + Tìm kiếm phát loài cho khoa học, bổ sung vào danh mục lồi giới + Tìm kiếm khả nãng sinh chất hoat độns sinh học (các loại enzim) - Nội dung nehiên cứu: + Phân lập chủng nấm men sinh bào tử bấn từ Vườn Quốc gia Cúc Phương + Phân loại chùnạ nấm men phân lặp đến lồi +Tìm hiểu khả sinh chất hoạt độna sinh học từ nhóm nấm men tìm kiếm khả ứna dụng e, Kết đề tài - Phân lập 121 chùno nấm men sinh bào từ bắn từ 20 mẫu câv thu thập Vườn Quốc gia Cúc Phươns - Trong số 85 chủng nấm men sinh bào từ bắn lựa chọn nghiên cứu thuộc chi dựa vào đặc điểm hoá phân loại (ubiquinone chủ yếu, tồn xyloza tronơ tế bào) kiểu sinh sản Có 44 chùns thuôc lớp H ym enom ycetes eổm chi Bullera ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI s& is CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM /k h c n Độc l ậ p ' T ự d ° - Hạnh phúc Hà N ội, ngày $ tháng nảm 2006 Q U Y ỆT ĐỊNH CỦA GIÁM Đốc ĐẠI HỌC QUỐC GIA H À NỘI Về việc phê duyệt danh mục đề tài* đặc biệt cấp ĐHQGHN năm 2006 T rung tâm Công nghệ Sinh học GIÁM ĐỐC ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Căn Nghị định số 07/2001/NĐ-CP ngày tháng nãm 2001 Chính phù Đại học Quốc gia; Căn Quyết định số 14/2001/QĐ-TTg ngày 12 tháng nãm 2001 cùa Thủ tướng Chính phù việc tổ chức lại Đại học Quốc gia Hà Nọi' Căn vào Quy chế Tổ chức Hoạt động Đại học Quốc gia ban hành theo Quyết định số 16/2001/QĐ-TTg ngày 12 tháng năm 2001 Thủ tướng Chính phủ; Căn Quyết định sô 419/TTg ngày 21 tháng nãm 1995 Thủ tướng Chính phủ chế quản lý hoạt động nghiên cứu khoa học phát triển công nghệ; Theo đẻ nghị Hội ngành/liên ngành ô n g Trường Ban Khoa học - Công nghệ, ĐHQGHN Q U Y Ế T ĐỊNH Đ iều : Phê duyệt d anh sách để tài đặc biệt cấp Đ H Q G H N nãm 2006 Trung tâm Công nghệ Sinh học (Phụ lục kèm theo) Điều : Kinh phí đề tài đặc biệt nói chuyển vào tài khoản Trung tâm Cồng nghệ Sinh học ' Điều : G iám đốc T rung tâm Công nghệ Sinh học có trách nhiệm: - Ký hợp với chủ nhiệm đề tài sau có đề cương chi tiết Đ H Q G H N phê duyệt - Cấp kinh phí cho chủ nhiệm đề tài theo Q uyết định - Theo dõi quản lý việc triển khai thực đề tài; Đ ánh giá tiến độ chất lượng triển khai đề tài sau năm thực - Báo cáo lãnh đạo Đ H Q G H N đề xuất kiến nghị cho phép đề tài tiếp tục đình chi việc nghiên cứu tiếp tục năm 2007 Đ iếu : Các Ống C hánh Vãn phòng, n g Trưởng Ban Khoa học - Công nghệ, G iám đốc Trung tâm Công nghệ Sinh học chù nhiệm đề tài có trách nhiệm thi hành định KT G I Nơi nhận: - Như Điều - Lưu VP, KHCN " — ~ -" À N Ộ I Đ ại học Q u ốc gia Hà Nội DANH SÁCH ĐỀ TÀI ĐẶC BIỆT ĐUỢC PHÊ DUYỆT NẢM 2006 (Kèm theo định số sfrfy /KHCN ngày tháng nãm 2006) TT M ã số/T ên đề tài/Chủ trì Thời gian thưc hiên K inh phí 2006 (trđ) Q G 06.19 N ghiẻn cứu đặc điểm sinh học phân loại nấm men bào tử bắn (ballistosporous yeast) phân lập từ ỏ Vườn Q uốc gia Cúc phương NCS Đ Thi Lương 24 tháng 30 Tổng cộng 30 o c QUÔC GIA HÀ NỘI CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA V Ệ T NAM v ' Đ ộc lập - Tự - Hạnh phúc BIÊN BẢN KIỂM TRA TIẾN ĐỘ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI TRỌNG ĐIỂM/ĐẬC BIỆT CẤP ĐHQGHN Ten đe tai Nghiên cứu đặc điem sinh học phân loai nấm men bào tử ban (balhstosporous yeast) phán láp từ cấy Vicờn Quốc gia Cúc phương Mã số: QG.06.19 Chủ nhiệm đề tài: NCS Đào Thị Lương Cơ quan chủ trì: Trung tăm Cơng nghệ Sinh học Thời gian thực hiện: 24 tháng ( /2006 - 6/2008) Ngày kiểm tra tiến độ: Địa điểm: £$/05 12 00 Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành viên đồn kiểm tra: Về phía ĐHQGHN: - TSKH Nguyễn Đình Đức, Trưởng Ban Khoa học - Cơng nghệ - ThS Lê Yên Dung, chuyên viên Ban Khoa học - Cơng nghệ Về phía Trung tâm Cơng nghệ Sinh học: - /ì\ ÍẰxò?Ỹ - GịS Ce ÍC lh 7s L c ìo ìi^ ộ s i rt-ỳỉỆ Tài/71 /4 p / Đoàn kiểm tra nghe chủ trì đề tài trình bày tóm tắt tiến độ triển khai thực hiện, nội dung, kết đạt từ tháng 6/2006 đến tháng 5/2007, tình hình kinh phí, khó khăn thuận lợi thực - 'dổ ẬỈIU Ẩ cĩp 8-0 rnCuị L Á h r Ự&& Cue Ptu-L^Aỹ ' „ r , ( / ^ Ị)Iron /I D ' c ù -lA iỉc ^ Cc y {cơ đ ì ÌẤU( rw p h a > A ic h ^ ' ‘k-OCĩh fa c in g a / l d im ò ù ỉị CKữ Ạ in J j t ỵ r đ f CÁ / Jầ-Ị Ậ c ù 'ê c t c /ể c t £ J u io \ c fe 'fa f oc k Ă * * C ịU ũ t $ ' fa r / IIIỚ^n Ctrl 7Un, Jf l& r o ỹ h y U tỉ ẽừ /^ Ả v [q S 'é < z / Ể C íí -f)n ẹ k ( đùi t^ iC iy ' d b 'i :.px>rLCj L ị i U c Ù Ả tÍỀ i c J Hà Nội, n gày/ỹ tháng năm 2007 Đại học Quốc gia Hà Nội Trung tâm Chủ nhiệm đề tài Công nghệ Sinh học {■ vư ýp li e ỔUD T h e T SK H N guyễn Đ ình Đ ức fh i~ c Ỵ \rap- L ìổ lộ [ỌC Q UỐ C G IA H À NỘI ; tâm Công nghệ Sinh học PHIÉU ĐÈ NGHỊ HAY ĐOI TRONG QUÁ TRÌNH THỰC HIỆN ĐÈ TÀI KHCN CỦA ĐHQGHN Ten đe tai: N ghiên cứu đặc điểm sinh học phân loại nấm men sinh bào tử bắn ịb a lh sto sp o ì ou s ỵea st) phân lập từ câ y Vườn Q uốc gia C úc Phương M ã số đề tài: Q G Đ B 06.19 Họ tên , h o c vị, c danh k h o a h ọ c cùa chù nhiệm đề tài: Đ T hị L n g - T hạc sĩ C quan ch ủ trì: T ru n g tâm C n g n g h ệ Sinh học N hững th a y đ ổi đề nghị nội d u n g ng h iên cứu tên đề tài: K h ô n g N hững th a y đ ổi đề ngh ị tiến độ, th i gian nghiên cứu: K hông N hững th a y đổ i v ề d ự to án kin h p h í : K h n g N hững th a y đổ i khác: íết đ o tạo: •ăng ký tro n g đ ề cư n g : cử n h ân , th ạc s ĩ n g h iên u sinh ;in điều ch ỉn h : n g h iê n u sinh /ì chủ trì đ ề tài n g h iê n u sin h nên k ết cần p h ụ c vụ ch o luận án T iến sĩ Ỹ tháng năm lan chủ q u ản d u y ệt TL G IÁ M Đ Ố C ỈỌC Q U Ố C G IA H À N Ộ I J NG B A N K H C N N g y j.\ tháng s năm v c - C quan ch ủ trì N gày a^ th án g yn ăm t o o ~h C hủ n h iệm đ ề tài IAƯi c o c ThS Đào Thị Lương ĐẠI HỌC QUOC GIA HA NỘI s6-./US4 /QĐ-KHCN CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHÙ NGHĨA VIÊT NAM Độc lap ■Tự d° - Hanh Phúc H N ội, ngày eầ/í tháng năm 2008 QUYẾT ĐỊNH Về việc thành Ịập Hội đồng khoa học đánh giá, nghiệm thu đề tài Đại học Quốc gia Hà Nọi, mã sô QG.06.19 GIÁM ĐỐC ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI C ăn N ghị đ ịn h số 07/2001/N Đ -C P ngày 01/02/2001 Chính phủ Đ học Q uốc gia; C ăn vào Q uy c h ế T ổ chức H oạt động Đ ại hoc Q uốc gia ban hành theo Q u y ết định số /2 0 /Q Đ -T T g n g ày 12/02/2001 cua Thủ tướng Chính p h ủ ' Căn Hướng dẫn số 973/K H CN ngày 19/3/2007 G iám đôc Đại học Quốc gia Hà Nội “Q uản lý đề tài khoa học công nghệ Đ ại học Q uốc gia Hà Nội” Căn cóng vãn số 31/CNSH ngày 17/3/2008 V iện trưởng Vi Sinh vật Công nghệ Sinh học việc đề nghị nghiệm thu đề tài; T heo đề nghị củ a ô n g Trưởng Ban K hoa học - Công nghệ, Q U Y Ế T Đ ỊN H Đ iểu 1: T hành lập H ội đ ổ n g k h o a học đánh giá nghiệm thu đề tài Đ H Q G H N , m ã số Q G 06.19 “ N g hiên cứu đ ặc điểm sinh học phần loại nấm m en sinh bào tử bẳn (ballistosporous y east) p h ân lập từ V ườn Q uốc gia Cúc Phương” ThS Đ Thị Lương, Viện Vi Sinh vật Công nghệ Sinh học chủ trì Hội đồng gồm thành viẽn (có danh sách kèm theo) Đ iều 2: H ội đồng có n h iệm vụ đánh giá, k ết luận để nghiêm thu kết nghiên cứu đề tài tự giải thể sau hoàn thành n h iệm vụ Đ iều 3: Các ông (bà) C h án h V ăn phòng, T rưởng Ban K hoa học - C ông nghệ, Viện trưởng Vi Sinh vật C ông nghệ Sinh học thành viên Hội đồng có trách nhiệm thi hành q u y ết đ ịn h KT CHÁM -Đôk.ĐẠI HỌC ỌUCỊC GIA HÀ NỘI Noi nhận: - Như Điéu 3; - Chù nhiệm để tài; - Lưu: VP, KHCN GIA HÀ NỘI ĩ l BIÊN BẢN HỌP HỘI ĐỔNG KHOA HỌC NGHIỆM THƯ ĐỂ TÀI ĐẶC BIỆT CẤP ĐHQGHN Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân loại nấm men sinh bào tử băn (ballistosporous yeast) phân lập từ Vườn Quốc gia Cúc Phương QG.06.19 ThS Đào Thị Lương Viện Vi Sinh vật Công nghệ Sinh học M ã số C h ủ trì Q u yết đ ịn h th n h lậ p H ộ i đ n g K h o a h ọ c nghiệm thu đề tài số 121/K H CN ngày 21/03/2008 N g y h ọ p H ộ i đ n g : /4 /2 0 V iện V i Sinh vật CNSH D a n h sá c h cá c th n h viên củ a H ộ i đ n g : TS D ương V ăn H ọp, V iện V i Sinh vật C ông nghệ Sinh học C hủ tịch H Đ TS N guyễn Q u ỳ n h U yển , V iện V i Sinh vật C ông nghệ Sinh học GS TSKH T rịnh T am K iệt, V iện V i Sinh vật C ông nghệ Sinh học uv Thư ký uv phản biện uv phản biện ThS Lê Y ên D ung, B an K hoa học - C ông nghệ Đ H Q G H N Uỷ viên TS N ghiêm N g ọc M in h, V iện C ông nghệ Sinh học, V iện K H C N V N Uỷ viên TS Bùi T hị V iệt H à, T rư ờng Đ ại học K hoa học Tự nhiên u ỷ viên PGS.TS Lê M H ươ ng, V iện H ó a học hợp ch ất thiên nhiên a C ó m ặt: V-f người b V ắng m ặt: người Người trình bày báo cáo: ThS Đào Thị Lương Viện Vi Sinh vật CNSH K ết q u ả đ n h g iá : Số phiếu p h át ra: C1f Số phiếu hợ p lệ: -f K ết quả: K Ịịô& g-ttạr T ốt Thảo luận cuả H ội đồng: \._ tâ tĩì - {tù mărvr i , h n /i - i í i uV m \ vKl r m H vũC i ĩ t ị t 'KCV'CC W V \M _ / Aả Ỵ H \C C \ c a -c (pc\ k- A , V \X J 5ÓV1à t r tb i : "j v f) ifCl i n / n I c /D , Uiii-IA I ) ÌLILI Sac /1 n’ i'n \a c 4'i-ví I ì ỊÍ ctirxl-ị ,-c t ICĨĨ (TAC / a đU vyn car - c , ^ Jitcc d i-t-y-ÍA w f * \ i y\Cirtn r r s in tủ ; vt ke\-> (fi'yxCi yịcvo XQC , \r jr ự v \( \j Ỵ Ỉ rl(XV ì / 'í c C l I r y iir t' dà ^OíVi s $Ì2^4ÂW1 $ ?ip c h ị/tn ,l) ‘ ụ ự f |Ci ổýAA / ^ u./] Jcurtf Sí?c Cvưyv) x£~i n'l-uc hic (ÌầÂì d u r u c \ja \j£ 'k.lxA r\4rÌỊ Uný * /vLty (Jaif Ậ ỉc c 'ể ílV i ,£+1 ỈXỊyyi Kết luận Chủ tịch H ội ỉíĩ- i íỊựìO iu )C ^ • _ s $tC í $C\A lA p a X'Ua t 50 c - ị/f r-Ị - - h ỉ, n hí hurvỊ éư^ựì i t ĩ rọ V ùíiợ s ã Jy ?Ị> k-ivvt) c ^ e i7 'in ^ u r ìn Chủ tịch Hội đồng s u ió " c ~ il _ỷ^vi ỉti eỵctCl t~ SUMMARY y e c t T itle' T h e stu d ies o f taxonom y and biological properties o f ballistoconidiogenous yeasts lated fro m p la n t leav es co llected at Cue Phuong N ational P ark” de number Q G D B -06-19 Iordinator: D a o T h i L u on g plem enting In stitu tio n : In stitu te o f M icrobiology and B iotechnology jp erratin g In stitu tio n (s): ration: F ro m M ay 0 to A pril/2008 m bers: Prof P h am V an T y, M Sc Le Thi H oang Y ến, M Sc H oang Van Vinh Objectives vestigation o f b allisto c o n id io g en o u s yeasts, a group o f m icro o rg an ism s that present on plant 'es and have n ot b een stu d ied in V ietnam This initiates a new study approach on biodiversity jlation and id e n tificatio n o f new species reening fo r strain s th at have ab ility to p roduce bioactive com pounds (especially enzym es) Main co n ten s Dlation o f b a llisto c o n id io g e n o u s yeast strains from plant leaves collected in Cue P huong onal Park entification to sp ecies level o f b allisto co n id io g en o u s yeast strains vestigation o f b allisto c o n id io g en o u s yeast strain s that have ability to produce bioactive pounds (esp ecially en zy m es) and screen in g for ap p licatio n esults o b ta in ed hundred an d tw enty one b allisto c o n id io g en o u s y east strains w ere isolated from 20 plant :s co llected at C ue P h u o n g N atio n al Park iễghty ^1Ve s*ra in s w ere selected fo r study T hey w ere classifed into genera based on m otaxonom y (su c h as m ajo r ubiquinone type, presence o f xyloza) and dividing m ode F orty r strains b elo n g to g en era o f H ym enom ycetes class as Bullera (39 strains), K ockovaella (5 ins); 39 strain s b elo n g to g en era o f U rediniom yces class as Sporobolom yces (34 strains) , MOO (5 strain s) an d strains belo n g to T illetio p sis genus o f U stilaginom yces class wenty seven strains o f A group o f Bullera genus, based on the partial seq uence an alyses o f ! rD N A , in tern a l tran scrib ed sp a cer regions (IT S ), D 1/D dom ain and D N A -D N A sso ciatio n e x p e r im e n ts , w ere classified into species in which species have been know n, rains w ere n ew species O u t o f new strains, species (B ullera cu u lo n g en sis, B nhoquanica, laininhensis) w ere p u blish ed , the rem ain in g will be published in the future l11 39 b allisto c o n id io g en o u s yeast strains belong to B ullera have ability to degrade at least strates am ong th e tested su b strates (starch, cazein, CM C, kitin, lipid) M oreover, they have ability to p ro d u ce an tib io tics ag ain st tested pathogenic m icrobes 3ur strains V Y -6 , V Y -7 , V Y -1 , V Y -142 produce m ultiple enzym es They are able to rade effic ien tly all tested su b trates O ptim al culture condition for grow th and enzym e luction o f th ese strain s is pH 6-7, 20-25°C , days ilications a n d tra in in g a ctivity I P u b licatio n ,uong D T , T a k a sim a M , T y P V , D ung N L , N ak ase T (2007), “Bullera h a in in h en sis sp [10 V a new b allisto co n id iu rri-fo rm in g yeast species from Cue Phuong N ational Park , V N U ĩournaỉ o f Science, N a t., Sci., & Tech., Vol 23, No IS, pp 38-46 Dào T hị L ơng, P h ạm V ăn T y (2007), “ N g h iên cứu đặc điểm sinh học khả nãng sinh inzym ngoại b củ a hai ch ủ n g nấm m en sinh bào tử bắn thuộc chi Bullera ”, T ạp c h í C ơn g ĩghệ Sinh học, (1), tr 1-10 .u o n g D T , T a k a sim a M , T y P V , D ung N L , N ak ase T (2007), “Bitllera cu u lo n g en sis sp ÌOV and B u ỉlera n h o q u a n i c a tw o new b a llisto c o m d iu m -fo rm in g yeast species from C ue ^huong N atio n al P ark o f N in h B inh P rovince, V ie tn a m ” , Ini J Syst Evol M icio b io i (in >ress) [ Training activity: doctoral thesis com pleted in 2007 Thi Luong- “The studies o f taxonom y and biological properties o f ballistoconidiogenous ts isolated from plant leaves collected at Cue Phuong National Park” sarch g n t - Supplied expenditure : ,000,000 vnd - U sed expenditure : 60 ,0 0 ,0 0 vnd P R O JE C T C O O R D IN A T O R D ao Thi Luong IN S T IT U T E O F M IC R O B IO L O G Y A N D B IO T E C H N O L O G Y I Ò //(ỉn V IE T N A M N A T IO N A L U N IV E R S IT Y , H A N O I PHIẾU ĐẢNG KÝ KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u CÁC ĐỂ TÀI KHCN đề tài: ‘ N g h iên cứu đặc điểm sinh học phân loại nấm m en sinh bào tử bắn Ihstosporous) ph ân lập từ V ườn Q uốc gia Cúc Phương” số: Q G Đ B -0 -I9 quan q u ản lý đề tài: Đ ại học Q uốc gia H Nội chỉ: 144 X u ân T h u ỷ , C ầu G iấy, H N ội n thoại: 6 quan chủ trì đ ề tài: V iện vi sinh vật C ông nghệ Sinh học chỉ: 144 X u ân T h u ỷ , C ầu G iấy, H Nội n thoại: 7 [g kinh p h í th ự c chi: 0 0 0 đ Ìg đó: - T n g ân sách N h nước: 0 0 0 đ - N g u n k h ác: i gian n gh iên cứu: í gian bắt đầu: /2 0 [ gian k ết th ú c : / 2008 cán p h ố i hợp n g h iên cứu: &trì đề tài: ThS Đ T hị L ng ững người th a m gia: G S.TS P hạm V ăn T y, ThS Lê T hị H o àn g Y ến ThS H oàng V ăn V inh ãng ký đề tài : Sô ch ứ n g nhân đ ă n g k ý K Q N C B ảo m ật: A Phổ biến rộng rãi B Phổ biến hạn ch ế N gày c Bảo m ât m tắt ý n g h ĩa , k ế t q u ả n g h iên cứu (kể kết đào tạo): 'rnghĩa: Là g trìn h n g h iê n cứu đa dạng sinh học nấm m en sinh bào tử bắn V iệt m P hát h iện đư ợc lồi m ới cơng bố loài Đ ưa địa danh V iệt N am vào danh c loài củ a th ế giới L n g trìn h tìm hiểu k h ả sinh chất hoạt động sinh ; nhóm n ấm m e n sin h bào tử bắn ết quả: Phân lập 121 ch ủ n g nấm m en sinh bào tử bắn từ 20 m ẫu thu thập Vườn Q uốc Cue Phương, D ựa vào đặc điểm hình thái khuẩn lạc, tê bào bào tử, chọn 85 ng làm đại diện 85 ch ủ n g nấm m en lựa chọn nghiên cứu thuộc chi, dựa vào điểm hoa phân loại (u b iq u in o n e chủ yếu, sư tồn xyloza tế bào) kiểu san Co 4 ch u n g thu ộc lớp H y m en o m y cetes gồm chi B ullera (39 chủng) K ockovaella chung) Có 39 ch ủ n g th u ộ c lớp U rediniom yces gồm chi B annoa (5 chủng), roboỉom yces (3 ch ủ n g ) H ch ủ n g cò n lại thuộc chi T illetio p sis lớp U stilaginom yces Trong số 39 ch ủ n g th u ộ c chi B uỉlera, dựa vào phương pháp phân loại sinh học phân tử (trật J ) N r 18S, vù ng ITS, 26S đoạn D 1/D 2, tỷ lệ G +C , lai A D N genom ), 27 chủng : phân loại th n h loài, loài th u ộ c lồi biết, lồi thuộc lồi Có B cu u ỉo n g en sis, B n h o q u a n ica , B h aininhensis, cơng bố thức, số lại cơng b ố tiếp tron g thời g ian tới Tất 39 ch ủ n g n ấm m en sinh bào tử bắn thuộc chi B u llera có khả phân giải ch ất tro ng s ố c ch ất là: tinh bột, cazein, C M C , kitin lipit C húng kh n g có chất k h án g sin h đ ối với vi sinh vật kiểm định Bốn ch ủ n g V Y -69, V Y -75, V Y -116, 142 có phứ c hệ en zy m k h phong phú C húng có khả phán giải tốt đồng thời nãm chất Đ iều k iệ n nu ô i cấy thích hợp cho sinh trưởng sinh tổng hợp enzym củ a g m ôi trư n g Y M , p H -7 , nh iệt độ 20-25°C , thời g ian ngày Đ tạo: yề tài góp phần hồn thiện luận án tiến sĩ NCS Đ Thị Lương : “N ghiên cứu đặc điểm sinh phân loại nấm m en sinh bào tử bắn phần lập từ Vườn Quốc gia Cúc Phương” n n gh ị q u y m ô đ ố i tư ợng áp dụng kết nghiên cứu: Được tiep tục n g h ie n cưu tìm hiéu khả ứng d ụ n g chủng có khả sinh en zy m ngoại b ao cao, đe p h an giai chất hữu tạo sinh khối cao làm thức ãn chăn nuôi T iếp tụ c đ ịn h tê n 58 ch ủ n g nấm m en sinh bào tử bắn lại nhằm tìm thê T iêp tụ c n g h iê n cứu khả sản sinh chất có hoạt tính sinh học tìm hiêu phương hư ớng ứng d ụn g chúng thực tiễn ức vụ C hủ n h iệm đề tài rà tên Đ T hị L ương vị T hạc sĩ T hủ trưởng quan chủ trì đề tài Chủ tịch hội đồng đánh giá thức Duữ)uj Vau ị-ì'ùj) O -Uk^Vo/7 TS 1^ Thủ trưởng quan quản lý đề tài tlgiầm ĐĨC B A TRUỎNG NKHOAHỌC- CỊNGNGHị ên ỉỉỈ K - m ị dấu ị cong"NG^c/e II SINH Họ í jo jj ỵ ~' ằ í r Ể PW.TSKH Ă/ỹUỷé/l d ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI , ^ PH IẾ U C H Ứ N G N H Ậ N HOAN THÀNH ĐỀ TÀI NGHIÊN c ứ u KHOA HỌC CỦA ĐHQGHN Đ i h ọ c Q u ố c g ia H N ộ i c h ứ n g n h ậ n : ThS Đào Thị Lương Sinh ng ày 09 th n g 05 n ăm 1964 Tại H oà B ình Cơ quan n g tác: V iện Vi sinh vật C ông nghệ Sinh học - Đ H Q G H N Đ ã th ự c h iện đề tài cẩp B ộ Đ H Q G H N (m ã số, tên đề tài): Q G -06-19 Tên đê tài: “ N g h iên u đặc điểm sinh học phân loại nấm m en sinh bào tử bắn (ballisto sp orou s y easts) phân lập từ V ườn Q uốc gia C úc Phương” theo q u y ết định số 178/K H C N ngày 18 tháng năm 2006 G iám đốc Đ H Q G H N ; thời g ian 24 th n g (2 0 -2 0 ) Và n g h iệm thu n gày th án g năm 2008 theo Q uyết định v iệc thành lộp H ội đồng khoa h ọc đánh giá, n eh iệm thu đê tài Đ ại học Q uôc gia H N ội m ã sô Q G 06.19 ( sô 1121 /Q Đ -K H C N ng ày 21 th án g năm 2008 G iám đốc Đ H Q G H N ) Đ ánh g iá hội đ n g n g h iệm thu (Tốt, khá, đạt, kh ô n g đạty T ốt V sổ s ố C N /K H C N H Nội, n g y th n g năm 2008 TL GIÁM ĐỐC ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯƠNG BAN KHOA HỌC- CỒNG NGHỆ ... dùng phân loại đại 22 1.4.5.1 Hoá phân loại 22 1.4.5.2 Sinh học phân tử 23 1.5 Nấm men sinh bào tử bắn 29 1.5.1 Đ ặc điểm nấm men sinh bào tử bắn 29 1.5.2 Lịch sử nghiên cứu nấm men sinh bào tử. .. 121 chùno nấm men sinh bào từ bắn từ 20 mẫu câv thu thập Vườn Quốc gia Cúc Phươns - Trong số 85 chủng nấm men sinh bào từ bắn lựa chọn nghiên cứu thuộc chi dựa vào đặc điểm hoá phân loại (ubiquinone... ghiên cứu nấm men Thái Lan 1.1.3.2 N ghiên cứu nấm men Indonesia 1.1.3.3 Nấm men rừng Đài Loan 1.1.3.4 N ghiên cứu nấm men sinh bào tử bắn Trung Quốc 1.1.3.5 N ghiên cứu nấm men sinh bào tử bắn Nhật