Nghiên cứu đặc điểm sinh học và công nghệ nuôi trồng nấm búp agaricus blazei nhập ngoại có khả năng chống u

ĐẠI HOC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HOC T ự NHIÊN TÊN ĐỂ TÀI: NGHIÊN cứu ĐẶC ĐĨEM « SINH HOC VÀ CƠNG NGHỆ NI T R ổ N G NẤM BÚP AGARICƯS BLAZEI NHẬP NGOẠI CỚ KHẢ NĂNG CHONG u M ã số: Q G C H Ủ TR Ì ĐỂ TẢI PG S TS N G U Y Ễ N T H I C H ÍN H C Á C C Á N BỔ T H A M GIA: 1.Lý Lan Phương: Học viên cao 2.Lý Ngọc Oanh: hực Cử nhân Phạm Thị Thùv Linh: Học viên cao 4.VQ Nguyen Hồng Anh: Cử nhãn Nguyễn Anh Hoàng : học Cử nhân Đ AI H O C Q U Õ C G I A HÀ N ỏ i TRUNG T I/ '■■!■•/[ TIM THƯ VIÉN j)ĩ Ị Í Ã I HÀ NỘI - 2007 BÁO CÁO TÓ M TẮT ĐỂ TÀI Tên đề tài: “ Nghiên cứu đặc điểm sinh học cơng nghệ ni trồng nấm búp Agarícus blazei nhập ngoại có khả chống u” Mã số: QG.05.26 Chủ trì đề tài: PGS.TS Nguyễn Thị Chính- mỏn vi sinh khoa sinh học Các cán tham gia: Lý Lan Phương, Bệnh viện Giao thông I - HN (Học viên cao học) Cử nhân Lý Ngọc Oanh, Bộ môn vi sinh Trường Đại học KHTN Phạm Thuỳ Linh, Bộ môn vi sinh Trường Đại học KHTN ( chuyển tiếp cao học) Cử nhân Vũ Nguyễn Hồng Anh, Công ty TNHH Nấm Linh Chi Cử nhân Nguyễn Anh Hồng, Cơng ty TNHH Nấm Linh Chi M ục tiêu nội dung nghiên cún 4.1 M ụ c tiêu: Nghiên cứu đặc điểm sinh học VL công nghệ nuôi trồng chủng nấm búp Agaricus blazei Cộng hồ Séc đế sản xuất đại trà, ứng dụng làm nguồn thực phẩm cao cấp tăng cường sức khoẻ phòng chống khối u 4.2 N ộ i d u n g nghiên cứu: -Thuần khiết tuyển chọn lại chủng Agaricus bỉaiei nhập ngoại - Nấm búp màu vàng Aạaricits blazei ( Cộng hồ Séc) 4.2.1 Các yếu tơ ảnh hưởng tới sinh trưởng p h t triển sợi nấm củng nh hình thành th ể A garicus blazei - Ảnh hưởng nhiệt độ pH tới sinh trưởng sợi hình thành thể lồi nấm - Ảnh hưởng chất lượng loại nguyên liệu tới phát triển sợi suất nấm - Ảnh hưởng độ ẩm nguyên liệu để nuôi trổng nấm búp - Ảnh hưởng nguồn c N tới phát triển sợi hình thành thể - Ánh hưởng ngun tố khống bổ sung 4.2.2 C ơng nghệ ni trồng lồi nám A garicus blazei Cơng nghệ ni trồng nấm búp (Agaricus blazei) nguồn rơm rạ Năm đầu nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm, năm thứ nghiên cứu công nghệ cho sản xuất thử nphiệm loài nấm - 4.2.3 Nghiên cứu m ột sơ hoạt tính sinh học lồi nấm - Hoạt tính kháng sinh, enzym số thành phần khác Các kết qua đạt Trong năm thực đề tài thực đầy đủ vượt mức mục tiêu nội dung đề : 5.1 Đ ã nghiên cứu m ột sô n h â n tô ảnh hư ởn g tới sinh trưởng ph át triển sợi nấm hình thành qủa thê điều kiện Việt Nam *Ảnh hưởng môi trường, nhiệt độ pH đến sinh trưởng phát triển sợi A Blazei : - Môi trường : MT4 MT6, Nhiệt độ: 10-30°c thích hợp : -2 5'c ; pH từ 5-7,5, thích hợp 7,5 5.2 N g u n Cacbon N itơ thích hợp cho n ấm búp p h t triển sợi : glucoza, m altoza , mạch nha, N hưng tốt nguồn mạch nha m altoza 3% - Nguồn Nitơ sử dụng : cao nấm men, pepton, (NH4)2S04, NaNOv Nhưng nguồn Nitơ tốt (NH4)2S04 pepton 0,2% 5.3 N g u n kh o n g : KH2P04, C11SO4, CaCl2, CuCl2, MgS04, ZnS04, Na3P04 không ảnh hưởng nhiều tới sinh trưởng phát triển sợi nấm, so với đối chứng, MnSo4 lại ức chế phát triển sợi nấm 5.4 Đ ã hồn thiện m trường nhản giống cấp l , cấp ch o A b la ze i: - Công nghệ nuôi Agaricus blazei thu sinh khối sợi : Thời gian lên men ngày nhiệt độ 25°c, mỏi trường có pH = 5,0 ; tốc độ quay: 200 vòng/ phút nồi lên men lít chuẩn Đạt suất 8,65g/lít 5.5 Cơng nghệ cho nuôi trồng nấm A garicus blazei trén rơm lên men : Ở chất sau lên men có pH = 7-7,5 ; Ở lớp đất phủ pH =7-7,2 ; Nhiệt độ thể thích hợp : 15-24%, Thời gian lên men : 12-16 ngày đảo lần, chất dinh dưỡng sử dụng cho vào rơm trình lên men gồm (%): (NH4)2S04: 2; Urê : 1; Lân: 3; CaC03: ; tinh bột ; chế phẩm vi sinh lk g/ nguyên liệu khơ, 5.6 Đ ã phân tích m ột sơ thành phần hoạt chất sinh học khác A garicus blazei - Có amylaza, xenlulaza proteaza Kháng sinh từ sợi ức chế vi khuẩn Bacillus subtilis (G+) Kháng sinh từ thể ức chế nấm mốc Fusarium oxysporum gây bệnh thực vật -A blazei có khả khử gốc oxy tự (với liều 173|ig/ml đạt 86,9%, ngãn ngừa đột biến gen, báo vệ tế bào nấm men Saccharomvces cerevisiac nồng độ dịch chiết nấm 3% môi t r n g ) - Thành phần nấm búp khơ có (%): Protein 40,7, Lipid: 4,4, Đường khử : 3,93, tro: 7,54, Ca: 21,6mg; Fe: 16,2mg; P: 0,51mg Vitamin C: 37,5 mg 5.7 Các báo k h o a học đ ã đ ă n g : ( đăng tạp chí nước (phần báo cáo chính)) 5.8 C ông tác đào tạo hướn£ dẫn thạc sĩ, cử nhân, sinh viên nghiên cứu khoa học có báo cáo hội nghị 5.9 Có sán phẩm nấm búp sấy khỏ tham gia lại hội chợ Techmart năm 2005 TP HCM, tham gia diễn đàn APEC hội nhập phút triến háo tàng Cách Mạng Việt Nam năm 2006 Đạt kết trcn nhờ quan tâm giúp đỡ cúa lãnh đạo Đại Học Quốc Gia, Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, Khoa sinh học cán hộ tham gia etc tài Tỏi xin irân thành cám ơn giúp đỡ q háu TÌNH HÌNH KINH PHÍ ĐỂ TÀI - Năm 2005 cấp kinh phí 30.000.000 đỏng, toán xong, thời hạn quy định - Năm 2006 cấp 30.000.000 Jong trcn, dã gửi giai trình tốn kinh phí cho phòng lài vụ cứa trường thời hạn quy định KHOA Q UẢN LÝ ( HỦ TRÌ ĐỂ TÀI (Ký ghi rõ họ tèn) ( KÝ ị>hi rõ họ tên) PGS.TS, Phan Tuân Nghĩa PGS.TS Níiuvén Thị Chính TRƯỜNG ĐAI HOC KHOA HOC T ự NHIÊN BRIEF REPORT OF PROJECT The project’s name: “ Research on biological character and cultivation technology of antitum or squam uie button m ushroom Agaricus blazei im ported.” * Code: QG0526 Project’s director: Aso Prof Dr Nguyen Thi Chinh- Departm ent of M icrobiology, falcuty of biology Individuals partcipated in the project: Ly Lan Fhuong, Hospital of transportation I- Hn( M.s course) Ly Ngoe Oanh, Department of Microbiology, Ha noi University of Science ’ Pham Thuy Linh, Derpartment of Microbiology, Ha noi University of Science Vu Nguyen Hong Anh, Linh Chih mushroom limited company Nguyen Anh Hoang, Linh Chih mushroom limited company Goal and Research 4.1 Goal: Reseach on biological characteristics and cultivation technology of Agariais blazei imported from Republic of Czech is to produce in largescale apply for high- quality food and support to anti- tumor prevention 4.2 Research: - Pure culture and isolation of imported Agaric US blazei strain - Yellow squamule button mushroom ( Republic of Czech) 4.2.1 Effects o f media culture factors on mycelial qrowth and fruit ■ body formation o f Aqaricits bktzei - Effects of temperature and pH on mycelial growth and fruit body formation - Effects of substrate components on mycelial growth and vields of mushroom - Effects of substrate humidity on squamule button mushroom - Effects of carbon source and nitrogen source on mycelial growth and fruit body formation - Effects of mineral elements supplied 4.2.2 Cultivation technology o f Agaric US hiazci - Cultivation technology of squamule button mushroom ( Agaricus blazci on strain substrate Investigation of mushroom characteristics in the first year and cultivation technology in the year later 4.2.3 Research on some biological activities o f the mushroom - Antimicrobical and enzyme activities and others Results: We have completed the project and received the following result 5.1 Investigation o f effects o f cultivation media factors on mvceliai growth as well as fruit body formation in Vietnamese conditions * Effects o f cultivation media, temperature and pH on mycelial growth o f Agaricus blazei - Culture media: MT4 and M T6, temperature: 10-30°c, optimal temperature; 20-25(1C; pH: 5-7,5; optimal pH: 5or 7,5 5.2 Carbon and nitrogen source which are suitable for mycelial growth include glucose, maltose, malt extract, 3% malt extract and 3% maltose are among the best sources Nitrogen sources used include yeast extract, peptone, ( NH^SO*}, NaNO,, the best nitrogen source is 0,2% (NH4)2S04 and 0,2% peptone 5.3 Mineral sources' KH2P 4, C u S 4, CaCh, CuCl->, M g S 4, Z n S 4, Na^POj have a little effect on mycelial growth, M n S inhibits the growth o f mycelial compared with control medium 5.4 Completion of the primary and secondary seed cultures o f A blazei.: - Cultivation technology o f A gancus blazei in fermentor: days at 25°c, pH: 5,0; speed: 200 rpm in 21it fermentor Yield o f biomass: 8,65 g/1 5.5 Cultivation technology o f Agaricus blazei on strain substrate - pH: 7-7,5 after fermention substrate; pH: 7-7,5 on covering soil surface, optimal temperatures for fruit body formation: 15-24°c Fermentative duration: 12-16 days, stirring times per day, supplied nutrients into strain substrate consists o f (%): (NH4)2S04 :2; u rea: 1; superphosphate: 3; CaCCh: starch: 1; 1kg microbiological preparation per ton o f dried substrate 5.6 Determination of som e biological- active compounds in Agaricus blazei: - Contain amylase, cellulase, and protease Mushroom mycelium inhibits Bacillus subtilis (G+) Compounds from fruit body inhibit Fusarium oxysponim, a plant pathogenic mold -A blazei is able to reduce antioxydant ( 86,9 at dose o f 173 |ag/ml), prevent gene mutation, support Saccharomvces cerevisiae with mushroom extract o f 3% Components o f dried mushroom( %): protein: 40,7, lipid: 4,4; reduced sugar: 3,93; minerals: 7,54; Ca: 21,6mg; Fe: 16,2mg; P: 0,51 mg and vitamins: 37,5mg repo 5.7 Published reports: 5.8 Training: individuals taking M s degrees, a graduated student and students reported in the conference o f science 5.9 Products o f dried Agaricus blazei displayed in Techmart, HCM city,2005 and APEC summit, Museum of Vietnamese Revolution, 2006 We are grateful to the leaders o f National University o f Vietnam, Ha Noi, Hanoi University o f science, Department o f Microbiology and persons engaging to the project for their supports Budget condition o f the project: - In 2005 received 30.000.000 VND and settled - In 2006 received 30.000.000 VND All extenses and doquiment sent to finance department for settlement HEAD OF FACULTY HEAD PRO JECT Asso.Prof.Dr Nguyen Thi Chinh HANOI UN IVERSITY OF SC IEN CE MỤC LỤC Trang Mớ đáu Tổng quan tài liệu 1.1 Khái quát chung nấm thượng đẳng 1.1.1 Cấu trúc tế bào nấm thượng đảng 1.1.2 Hình thái thể sinh bào tử nấm thượng đắng 1.1.3 Chu trình phát triển chung cúa nấm thượng đáng 1.2 Vai trò nấm thượng đắng thiên nhiên 1.3 Vai trò nấm thượng đắng đời sống người 1.3.1 Giá trị dinh đường nấm ăn nấm dược liệu 1.3.2 Giá trị nấm dược liệu làm thuốc chữa bệnh 10 1.3.2.1 Nấm Linh Chi: Ganoderma ỉucidum ( Lcyss ex Fr ) Krast 11 1.3.2.2 Nấm đầu khí (Hericium erinaceus) 13 1.3.2.3 Nấm hương ( Lcntinula edodes) 15 1.3.3 Vai trị cơng nghiệp trồng nấm kinh tế, xã hội 18 1.3.3.ỉ Nền công nghiệp nấm giới 18 1.3.3.2 Nghề trổng nấm Việt Nam 20 Nấm búp Aqciricus biazei Murrill 22 1.4.1 Phân ỉoại học 22 1.4.2 Đãc điếm hình thái cấu tạo cúa nấm búp A blazei 23 1.4.3 Thành phần dinh dưỡng nấm búp 23 1.4.4 Giá trị dược liệu nấm búp A blaiei 23 1.4.5 Công nghệ nuôi trồng nấm búp A blazei giới 24 Phần Nguyên liệu phương pháp 28 Nguyên liệu 28 1.1 Các chủns vi sinh vật 28 1.2 Hóa chất sứ dụng 29 Phần 1.4 ■ 2.1.3 Nguyên liệu cho nuôi trồng nấm 29 2.1.4 Máy móc thiết bị 29 2.2 Các công thức môi trường (g/1) 29 2.3 Phương pháp 32 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm sinh học cúa nấm búp ,4 blazei 32 2.3.1.1 Lựa chọn môi trường nuôi cấy thích hợp 32 2.3.1.2 Xác định ánh hướng cúa nhàn tỏ đến sinh trướng phát triến sợi cúa nấm 32 2.3.1.2.1 Ảnh hướng nhiệt độ nuôi cấy 2.3.1.2.2 Ánh hướng pH ban đầu 32 2.3.1.2.3 Ánh hướng cua nguồn Cacbon nổng độ khác 32 2.3.1.2.4 Anh hướng cúa nguổn Nitơ nồng độ khác 32 2.3.1.2.5 Anh hướng cúa nguycn tị khống 33 2.3.2 Cơng nghệ ni trồng nấm búp A blazei 33 2.3.2.1 Lựa chọn chất thích hợp cho nhãn giống cấp hai 33 3.2.2 Nuôi trổng nấm b ú p /4 blaze ì 34 3.2 Nuôi trồng nấm búp A.blưiei rơm 32 34 2.3.2.3 Công nghệ nuôi cấy A blazei thu sinh khối sợi 35 2.4 Xác định thành phần hoạt tính sinh học cúa nấm 36 2.4.1 Một số thành phần có nấm búp /4, blazei 36 2.4.2 Hoạt tính enzim nấm 36 2.4.3 Xác định hoạt tính amylaza 36 2.4.4 Hoạt tính kháng sinh 37 2.4.5 Hoạt tính khử gốc oxy A blaiei (Khá ngừa khối u hay đột biến gen 37 2.4.6 Khá sửa chữa đột biên gen cua A bỉazei{ chống u) 37 2.4.7 Xác định ánh hướng cúa dịch chiết nấm búp A blazei độ sống sót nấm men s cerevisiae chúng LE 15 sau chiếu uv 38 Kết lìghièn cứu 39 Phần ... trồng lồi nám A garicus blazei Công nghệ nuôi trồng nấm búp (Agaricus blazei) nguồn rơm rạ Năm đ? ?u nghiên c? ?u đặc điểm sinh học nấm, năm thứ nghiên c? ?u cơng nghệ cho sản xuất thử nphiệm lồi nấm. .. Nguyễn Anh Hồng, Cơng ty TNHH Nấm Linh Chi M ục ti? ?u nội dung nghiên cún 4.1 M ụ c ti? ?u: Nghiên c? ?u đặc điểm sinh học VL công nghệ nuôi trồng chủng nấm búp Agaricus blazei Cộng hồ Séc đế sản xuất... tài: “ Nghiên c? ?u đặc điểm sinh học công nghệ ni trồng nấm búp Agarícus blazei nhập ngoại có khả chống u? ?? Mã số: QG.05.26 Chủ trì đề tài: PGS.TS Nguyễn Thị Chính- mỏn vi sinh khoa sinh học Các