NGHIÊN cứu xây DỰNG QUI TRÌNH PHÁT HIỆN và ĐỊNH LƯỢNG một số KHÁNG SINH TRONG mỹ PHẨM LUẬN văn THẠC sĩ dược học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ (chữ in hoa thẳng, không in đậm cỡ 16) TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI (chữ in hoa thẳng, in đậm cỡ 16) (cỡ 4,0 cm x 4,0 cm) ĐỚI HẢI LINH (chữ in hoa thẳng, in đậm cỡ 16) NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH TRONG MỸ PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC (chữ in hoa thẳng, in đậm cỡ 16) HÀ NỘI 2019 (chữ in hoa thẳng, in đậm BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ (chữ in hoa thẳng, không in đậm cỡ 16) TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI (chữ in hoa thẳng, in đậm cỡ 16) ĐỚI HẢI LINH (chữ in hoa thẳng, in đậm cỡ 16) NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH TRONG MỸ PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC (chữ in hoa thẳng, in đậm cỡ 16) CHUYÊN NGÀNH:KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Hường Hoa GS TS Thái Nguyễn Hùng Thu (chữ in thường thẳng, in thường đậm cỡ 16) HÀ NỘI 2019 (chữ in hoa thẳng, cỡ 16) LỜI CẢM ƠN Lời muốn gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Lê Thị Hường Hoa GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu - người thầy hướng dẫn, bảo tận tình truyền đạt kinh nghiệm quý báu cho suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương, Khoa kiểm nghiệm Mỹ phẩm tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành việc học làm đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ mơn Hóa phân tích cho môi trường học tập nghiêm túc, giúp tơi bồi đắp kiến thức hồn thiện thân Cuối tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình ln u thương, động viên để tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 08 tháng 03 năm 2019 Học viên Đới Hải Linh MỤC LỤC Lời cảm ơn Danh mu ̣c các kí hiêu, ̣ các từ viế t tắ t Danh mu ̣c các bảng Danh mu ̣c các hin ̀ h ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ KHÁNG SINH NGHIÊN CỨU 1.1.1 Clindamycin 1.1.1.1 Tên khoa học, công thức cấu tạo số đặc điểm 1.1.1.2 Dược lí chế tác dụng 1.1.1.3 Chỉ định 1.1.1.4 Độc tính tác dụng phụ 1.1.1.5 Một số nghiên cứu phân tích kháng sinh Clindamycin 1.1.2 Lincomycin hydroclorid 1.1.2.1 Tên khoa học công thức cấu tạo 1.1.2.2 Dược lý chế tác dụng 1.1.2.3 Chỉ định 1.1.2.4 Độc tính tác dụng phụ 1.1.2.5 Một số nghiên cứu phân tích kháng sinh Lincomycin 1.1.3 Tetracyclin hydroclorid 1.1.3.1 Tên khoa học công thức cấu tạo 1.1.3.2 Dược lý chế tác dụng 1.1.3.3 Chỉ định 1.1.3.4 Độc tính tác dụng phụ 10 1.1.3.5 Một số nghiên cứu phân tích kháng sinh Tetracyclin 10 1.2 PHƯƠNG PHÁP HPLC 11 1.2.1 Nguyên tắc 11 1.2.2 Cấu tạo 11 1.2.3 Detector phận ghi tín hiệu 11 1.2.4 Các thơng số đặc trưng q trình sắc kí 12 1.2.5 Ứng dụng 13 1.2.6 Kĩ thuật HPLC với detector DAD 15 CHƯƠNG 16 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 16 2.2.THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 16 2.2.1 Thiết bị dụng cụ 16 2.2.2 Dung môi hóa chất 17 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 17 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.5 XỬ LÝ THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 21 CHƯƠNG 22 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 22 3.1 Khảo sát điều kiện xây dựng quy trình 22 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc kí 22 3.1.2 Khảo sát điều kiện xử lí mẫu 25 3.2 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI LINCOMYCIN VÀ TETRACYCLIN 26 3.2.1 Điều kiện sắc kí 26 3.2.2 Điều kiện xử lí mẫu 26 3.2.3 Thẩm định phương pháp 27 3.3 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI CÁC DẠNG MUỐI CỦA CLINDAMYCIN 41 3.3.1 Điều kiện sắc kí 41 3.3.2 Điều kiện xử lí mẫu 41 3.3.3 Thẩm định phương pháp 42 3.4 ÁP DỤNG KIỂM TRA MẪU TRÊN THỊ TRƯỜNG 54 CHƯƠNG 59 BÀN LUẬN 59 4.1 VỀ CÁC KHÁNG SINH NGHIÊN CỨU 59 4.2 VỀ XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 59 4.2.1 Về phương pháp xử lí mẫu 59 4.2.2 Về xây dựng phương pháp phân tích thẩm định 60 4.3 VỀ KIỂM TRA CÁC MẪU MỸ PHẨM 61 KẾT LUẬN 62 KIẾN NGHỊ 62 Tài liêụ tham khảo Phu ̣ lu ̣c 1: Một số sắc kí đồ điển hình phân tích đồng thời kháng sinh Lincomycin hydroclorid, Tetracyclin hydroclorid Phu ̣ lu ̣c 2: Một số sắc kí đồ điển hình phân tích đồng thời kháng sinh Clindamycin hydroclorid, Clindamycin phosphat DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tên tiếng Việt (tiếng Anh) ACN Acetonitril AOAC Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức (Association of Official Analytical Chemists) Linco HCl Lincomycin hydroclorid Clinda HCl Clindamycin hydroclorid Clinda PO4 Clindamycin phosphat DMPM Dung môi pha mẫu HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao (High performance liquid chromatography) LOD Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of Quantification) Mẫu M1 Kem tẩy trang chiết xuất từ Trà xanh Mẫu M1’ Mẫu M1 thêm chuẩn Mẫu M2 Sữa rửa mặt sâu Eveline Skincare 360º Mẫu M2’ Mẫu M2 thêm chuẩn MeOH Methanol ppm Phần triệu (parts per million) r Hệ số tương quan (Relative coefficient) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) SKĐ Sắc kí đồ Tetra HCl Tetracyclin hydroclorid UV-VIS Tử ngoại- khả kiến (Ultraviolet-visible) log P Hệ số phân tán octanol/nước DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số tính chất vật lý hóa học dạng muối Clindamycin Bảng 2.1 Các mẫu sử dụng để xác định phương pháp phân tích 16 Bảng 2.2 Giá trị độ xác độ thu hồi yêu cầu theo AOAC 20 Bảng 3.1 Độ thích hợp hệ thống sắc kí của Linco HCl Tetra HCl 27 Bảng 3.2 Chuẩn bị dung dịch chuẩn hỗn hợp Linco HCl Tetra HCl 32 Bảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Linco HCl Tetra HCl 33 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp Linco HCl Tetra HCl kem 35 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp Linco HCl Tetra HCl sữa rửa mặt 35 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp Linco HCl Tetra HCl kem 37 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp Linco HCl Tetra HCl sữa rửa mặt 37 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ phương pháp Linco HCl Tetra HCl kem 39 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ phương pháp Linco HCl Tetra HCl sữa rửa mặt 40 Bảng 3.10 LOD LOQ Linco HCl Tetra HCl 41 Bảng 3.11 Độ thích hợp hệ thống sắc kí Clinda HCl Clinda PO4 43 Bảng 3.12 Chuẩn bị dung dịch chuẩn hỗn hợp Clinda HCl Clinda PO4 46 Bảng 3.13 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Clinda HCl Clinda PO4 46 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp Clinda HCl Clinda PO4 kem 48 Bảng 3.15 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp Clinda HCl Clinda PO4 sữa rửa mặt 49 Bảng 3.16 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp Clinda HCl Clinda PO4 kem 50 Bảng 3.17 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp Clinda HCl Clinda PO4 sữa rửa mặt 51 Bảng 3.18 Kết khảo sát độ phương pháp Clinda HCl Clinda PO4 kem 53 Bảng 3.19 Kết khảo sát độ phương pháp Clinda HCl Clinda PO4 sữa rửa mặt 53 Bảng 3.20 LOD LOQ Clinda HCl Clinda PO4 54 Bảng 3.21 Kết phân tích kháng sinh mẫu mỹ phẩm thị trường 56 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Clinda HCl Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo Clinda PO4 Hình 1.3 Công thức cấu tạo Linco HCl Hình 1.4 Công thức cấu tạo Tetra HCl Hình 1.5 Sơ đồ nguyên lý máy HPLC 11 Hình 1.6 Cấu tạo detector mảng diod (DAD) 15 Hình 3.1 SKĐ phân tích hỡn hơ ̣p chuẩ n kháng sinh nghiên cứu sử dụng pha động MeOH - đệm pH 3,0 với tỉ lệ 40 : 60 (a), tỉ lệ 35 : 65 (b) tỉ lệ 30 : 70 (c) 22 Hình 3.2 SKĐ phân tích hỡn hơ ̣p ch̉ n kháng sinh Linco HCl Tetra HCl sử dụng pha động MeOH - đệm pH 3,0 với tỉ lệ 27 : 73 23 Hình 3.3 SKĐ phân tích hỡn hơ ̣p ch̉ n kháng sinh Clinda HCl Clinda PO4 sử dụng pha động ACN - đệm pH 2,5 với tỉ lệ 23 : 77 23 Hình 3.4 Phổ hấp thụ UV-VIS Linco HCl (a), Clinda HCl (b), Clinda PO4 (c) Tetra HCl (d) 24 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu hỗn hợp chuẩn với dung mơi pha mẫu Methanol 25 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu hỗn hợp chuẩn với dung môi pha mẫu hỗn hợp MeOH : đệm amoni dihydrophosphat pH 3,0 (30 : 70) 25 Hình 3.7 Sắc kí đồ đánh giá độ đặc hiệu Linco HCl mẫu nghiên cứu so với mẫu chuẩn 29 Hình 3.8 So sánh phổ UV – VIS Linco HCl mẫu nghiên cứu so với mẫu chuẩn 30 Hình 3.9 Sắc kí đồ đánh giá độ đặc hiệu Tetra HCl mẫu nghiên cứu so với mẫu chuẩn 31 Hình 3.10 So sánh phổ UV - VIS Tetra HCl mẫu nghiên cứu so với mẫu chuẩn 31 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích píc nồng độ Linco HCl 33 Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích píc nồng độ Tetra HCl 34 Hình 3.13 Sắc kí đồ đánh giá độ đặc hiệu Clinda HCl Clinda PO4 mẫu nghiên cứu so với mẫu chuẩn 44 PHỤ LỤC Một số sắc kí đồ điển hình phân tích đồng thời kháng sinh Clindamycin hydroclorid, Clindamycin phosphat ... DỰNG QUI TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH TRONG MỸ PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC (chữ in hoa thẳng, in đậm cỡ 16) CHUYÊN NGÀNH:KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người... thiết bị nước ta Trên sở đó, nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình phát định lượng số kháng sinh mỹ phẩm với mục tiêu: Xây dựng quy trình phân tích kháng sinh Lincomycin hydroclorid, Clindamycin hydroclorid,... tetracyclin kháng sinh hay trộn vào sản phẩm mỹ phẩm kem, sữa rửa mặt…với mục đích trị mụn trứng cá [4], [21], [24] Ở Việt nam chưa có qui trình phân tích kháng sinh mỹ phẩm mà có số nghiên cứu phân