Phùng thị hồng nghiên cứu xây dựng quy trình phát hiện và định lượng đồng thời natri benzoat, benzyl alcohol và acid salicylic trong dầu gội đầu bằng phương pháp hplc luận văn thạc sĩ dược học hà nội 2023

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHÙNG THỊ HỒNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI NATRI BENZOAT, BENZYL ALCOHOL VÀ ACID SALICYLIC TRONG DẦU GỘI ĐẦU BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHÙNG THỊ HỒNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI NATRI BENZOAT, BENZYL ALCOHOL VÀ ACID SALICYLIC TRONG DẦU GỘI ĐẦU BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS Tống Thị Thanh Vượng PGS TS Lê Đình Chi HÀ NỘI 2023 LỜI CẢM ƠN Tơi muốn bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến tập thể thầy hướng dẫn, TS Tống Thị Thanh Vượng PGS TS Lê Đình Chi – người thầy khơng quản ngại khó khăn, dành nhiều thời gian q báu giúp đỡ tận tình cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Trung Ương, Khoa Kiểm Nghiệm Mỹ Phẩm tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành việc học làm đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn trường Đại Học Dược Hà Nội, Khoa Hóa Phân Tích Kiểm Nghiệm Thuốc cho môi trường học tập nghiêm túc, giúp tơi bồi đắp kiến thức chun mơn hồn thiện thân Khơng thể nói hết cảm kích tơi đồng nghiệp gia đình ln yêu thương, động viên, nhường nhịn để đến chặng cuối chương trình học Thạc sĩ Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 03 năm 2023 Học viên Phùng Thị Hồng MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM CÁC CHẤT BẢO QUẢN NGHIÊN CỨU 1.1.1 Natri benzoat a Cơng thức hóa học b Tính chất c Ứng dụng d Độ an toàn 1.1.2 Acid salicylic a Công thức hóa học b Tính chất c Ứng dụng d Độ an toàn 1.1.3 Benzyl alcohol a Cơng thức hóa học b Tính chất c Ứng dụng d Độ an toàn 1.2 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC CHẤT BẢO QUẢN NGHIÊN CỨU 1.2.1 Một số phương pháp phân tích natri benzoat 10 1.2.2 Một số phương pháp phân tích acid salicylic 12 1.2.3 Một số phương pháp phân tích benzyl alcohol 13 1.3 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP HPLC 13 1.3.1 Nguyên tắc sắc ký lỏng hiệu cao 13 1.3.2 Cấu tạo máy HPLC 14 1.3.3 Detector phận ghi nhận tín hiệu 14 1.3.4 Các thơng số đặc trưng q trình sắc ký 15 1.3.4.1 Thời gian lưu 15 1.3.4.2 Độ phân giải 15 1.3.4.3 Tính đối xứng pic sắc ký 15 1.3.4.4 Số đĩa lý thuyết chiều cao đĩa lý thuyết 16 1.3.5 Ứng dụng HPLC 16 1.3.5.1 Định tính 16 1.3.5.2 Định lượng 16 1.3.6 Kỹ thuật HPLC với detector DAD 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 20 2.2 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 20 2.2.1 Thiết bị dụng cụ 20 2.2.2.Dung mơi hóa chất 21 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.3.1 Khảo sát, lựa chọn quy trình xử lý mẫu 21 2.3.2 Khảo sát, lựa chọn điều kiện sắc ký phù hợp 22 2.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích 22 2.3.4 Áp dụng số chế phẩm 24 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 25 3.1 XỬ LÝ MẪU 25 3.1.1 Điều kiện xử lý mẫu 25 3.1.2 Cách chuẩn bị mẫu 26 3.1.2.1 Chuẩn bị mẫu thử 26 3.1.2.2 Chuẩn bị mẫu chuẩn 26 3.2 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 27 3.2.1 Xây dựng quy trình phân tích 27 3.2.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 27 3.2.1.2 Khảo sát độ ổn định chất nghiên cứu dung môi pha mẫu 33 3.2.2 Kết xây dựng phương pháp 34 3.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 36 3.3.1 Đánh giá độ thích hợp hệ thống 36 3.3.2 Độ đặc hiệu 37 3.3.3 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng 42 3.3.4 Độ tuyến tính 44 3.3.5 Độ phương pháp 47 3.3.6 Độ lặp lại 49 3.3.7 Độ xác trung gian 50 3.4 ÁP DỤNG KIỂM TRA CÁC MẪU TRÊN THỊ TRƯỜNG 52 CHƯƠNG BÀN LUẬN 55 4.1 VỀ CÁC CHẤT BẢO QUẢN NGHIÊN CỨU 55 4.2 VỀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 55 4.2.1 Về phương pháp xử lý mẫu 56 4.2.2 Về xây dựng quy trình phân tích 57 4.2.3 Về thẩm định phương pháp 58 4.3 VỀ KIỂM TRA CÁC MẪU DẦU GỘI 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 Tài liệu tham khảo Phụ lục Phụ lục Các mẫu dầu gội sử dụng để xác định có mặt chất bảo quản Phụ lục Một số sắc ký đồ phân tích natri benzoat, acid salicylic benzyl alcohol Phụ lục Chứng chất chuẩn sử dụng nghiên cứu DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tên tiếng Việt (tiếng Anh) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High performance liquid chromatography) EU Liên minh châu Âu (European Union) UV-VIS Tử ngoại-khả kiến (Ultraviolet-visible) DAD Diod array detector IR Hồng ngoại (Infrared Radiation) MS Phổ khối (Mass spectrum) AOAC Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức (Association of Official Analytical Chemists) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) LOD Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of Quantification) r Hệ số tương quan (Relative coefficient) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số phương pháp định lượng natri benzoat, acid salicylic benzyl alcohol……………………………………………………………… 10 Bảng 2.1 Các mẫu sử dụng để xác định phương pháp phân tích……………………………………………………………………20 Bảng 3.1 Các điều kiện đánh giá sơ để lựa chọn cột sắc ký pha động………………………………………………………………… 27 Bảng 3.2 Kết độ ổn định chất nghiên cứu dung môi pha mẫu………………………………………………………………… 34 Bảng 3.3 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký…………………36 Bảng 3.4 Giá trị LOD, LOQ benzyl alcohol, acid salicylic natri benzoat dung dịch……………………………………………………….42 Bảng 3.5 Giá trị LOD, LOQ benzyl alcohol, acid salicylic natri benzoat phương pháp…………………………………………………… 42 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ tuyến tính benzy alcohol, acid salicylic natri benzoat………………………………………………………….45 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ benzyl alcohol……………………… 47 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ acid salicylic………………………….48 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ natri benzoat………………………….48 Bảng 3.10 Kết độ lặp lại phương pháp………………………………….49 Bảng 3.11 Độ xác trung gian benzyl alcohol……………………… 50 Bảng 3.12 Kết độ xác trung gian acid salicylic…… 51 Bảng 3.13 Kết độ xác trung gian natri benzoat…… 51 Bảng 3.14 Hàm lượng benzyl alcohol, acid salicylic, natri benzoat mẫu dầu gội thị trường……………………………………………….53 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ ngun lý máy HPLC………………………………………14 Hình 3.1 Sắc ký đồ mẫu thử…………………………………………………….26 Hình 3.2 Sắc ký đồ số pha động khảo sát………………………………29 Hình 3.3 Phổ UV-VIS natri benzoat acid salicylic………………………30 Hình 3.4 Sắc ký đồ phân tích natri benzoat acid salicylic………………… 31 Hình 3.5 Phổ UV-VIS benzyl alcohol………………………………………32 Hình 3.6 Sắc kí đồ phân tích benzyl alcohol …………………….…………… 33 Hình 3.7 Một số sắc ký đồ tiêu biểu thẩm định độ đặc hiệu……………… 40 Hình 3.8 Độ tinh khiết pic………………………………………………………41 Hình 3.9 Phổ UV-VIS………………………………………………………… 41 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ benzyl alcohol……………………………………………………43 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ acid salicylic…………………………………………………… 44 Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ natri benzoat…………………………………………………… 45 Hình 3.13 Sắc ký đồ xác định LOD benzyl alcohol, acid salicylic natri benzoat………………………………………………………………46 Hình 3.14 Sắc ký đồ xác định LOQ benzyl alcohol, acid salicylic natri benzoat………………………………………………………………46 Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 04/04/2023 16:55:40 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed dd3.1.lcd : detai014 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\28.10.do dung\dd3.1.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : dd.lcb :9 : Unknown : 20 uL : 28/10/2022 22:16:08 Acquired by : tammp : 29/10/2022 16:57:45 Processed by : tammp dd3.1.lcd 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 15 / / 15.276 PDA Multi 208nm,4nm 14 / / 14.223 13 / / 12.157 12 / / 11.299 11 / benzyl alcohol / 8.277 10 / / 7.192 / / 5.955 / / 4.418 / / 4.982 1/ 2/ 3/ 4/ 250 / 1.762 / 1.873 / 2.282 / 2.679 / / 3.004 / / 3.165 mAU 17.5 20.0 dd3.1.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Ret Time 1.762 1.873 2.282 2.679 3.004 3.165 4.418 4.982 5.955 10 7.192 11 benzyl alcohol 8.277 12 11.299 13 12.157 14 14.223 15 15.276 Total Area 35657 73445 82696 48877 15825 29684 53833 10875 24146 23393 6110134 4851498 5651695 52354 4325424 21389536 Tailing.F 1.347 0.898 1.673 1.111 1.288 1.272 1.251 -1.293 Theoretical 2721 2980 1318 416 52 717 4574 2737 2163 8185 8797 9068 7682 5249 8580 Resolution -0.814 2.104 1.023 0.297 0.151 3.413 1.758 2.179 2.979 3.236 7.301 1.668 3.083 1.457 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\28.10.do dung\dd3.1.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 22/03/2023 15:35:27 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu 1.lcd : detai007 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\15.10.22\thu 1.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : lap lai.lcb : 12 : Unknown : 20 uL : 15/10/2022 18:45:34 Acquired by : tammp : 28/10/2022 14:48:27 Processed by : tammp thu 1.lcd mAU / natri benzoat / 15.728 PDA Multi 230nm,4nm / acid salicylic / 12.529 125 100 75 0.0 2.5 5.0 / / 9.811 / / 7.318 / / 4.435 25 / / 1.864 50 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 thu 1.lcd PDA Ch1 230nm Peak# Name Ret Time 1.864 4.435 7.318 9.811 acid salicylic 12.529 natri benzoat 15.728 Total Area 24670 31169 27429 18314 760319 2941718 3803618 Tailing.F 1.798 0.941 1.241 1.277 1.333 1.303 Theoretical 4668 2178 8226 9384 9817 10852 Resolution -10.511 8.205 6.848 5.968 5.766 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\15.10.22\thu 1.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 04/04/2023 11:52:38 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu 1.lcd : detai007 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\15.10.22\thu 1.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : lap lai.lcb : 12 : Unknown : 20 uL : 15/10/2022 18:45:34 Acquired by : tammp : 04/04/2023 11:49:08 Processed by : tammp thu 1.lcd 0.0 2.5 5.0 7.5 13 / / 15.728 12 / / 12.529 PDA Multi 208nm,4nm 11 / / 9.797 10 / benzyl alcohol / 8.405 / / 7.314 / / 6.011 / / 4.421 / / 2.278 / / 2.680 / / 3.040 / / 3.184 / / 1.723 / / 1.864 mAU 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 thu 1.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Ret Time 1.723 1.864 2.278 2.680 3.040 3.184 4.421 6.011 7.314 10 benzyl alcohol 8.405 11 9.797 12 12.529 13 15.728 Total Area 27301 110323 73928 50893 15034 10927 32537 25299 24773 30778 22579 2683926 1329276 4437573 Tailing.F 1.138 1.487 1.143 1.240 0.973 1.333 1.304 Theoretical 3284 3988 880 519 179 1361 2169 2230 8937 10618 13047 9689 10667 Resolution -1.182 1.948 1.034 0.521 0.230 3.412 3.577 3.184 3.432 4.159 6.411 5.722 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\15.10.22\thu 1.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 22/03/2023 15:38:59 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu 1.lcd : detai014 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\16.10.22\thu 1.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : cxtg.lcb : 21 : Unknown : 20 uL : 16/10/2022 13:51:29 Acquired by : tammp : 16/10/2022 14:11:30 Processed by : tammp thu 1.lcd mAU / natri benzoat / 15.637 PDA Multi 230nm,4nm / acid salicylic / 12.428 125 100 75 0.0 2.5 5.0 / / 9.772 / / 7.290 / / 4.403 25 / / 1.862 50 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 thu 1.lcd PDA Ch1 230nm Peak# Name Ret Time 1.862 4.403 7.290 9.772 acid salicylic 12.428 natri benzoat 15.637 Total Area 15009 10024 27979 17915 757335 2933444 3761706 Tailing.F 1.495 -1.206 1.109 1.207 1.182 Theoretical 4537 1850 8492 10144 9841 10958 Resolution -9.773 7.953 7.048 5.973 5.842 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\16.10.22\thu 1.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary 04/04/2023 11:43:03 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed chuan 3tp.2.lcd : detai015 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\15.10.22\chuan 3tp.2.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : lap lai.lcb : 11 : Unknown : 20 uL : 15/10/2022 21:28:47 Acquired by : tammp : 22/03/2023 11:33:54 Processed by : tammp chuan 3tp.2.lcd -1 0.0 / / 2.437 / / 2.831 2.5 5.0 7.5 PDA Multi 208nm,4nm 10.0 12.5 10 / / 15.641 / / 12.439 / benzyl alcohol / 8.379 / / 3.407 / / 5.986 / / 4.395 / / 1.716 / / 1.866 mAU 15.0 17.5 20.0 chuan 3tp.2.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Ret Time 1.716 1.866 2.437 2.831 3.407 4.395 5.986 benzyl alcohol 8.379 12.439 10 15.641 Total Area 13807 62694 11689 70927 302856 52884 31403 41149 3125430 1630292 5343129 Tailing.F 1.246 1.532 0.906 1.602 2.021 1.305 1.393 1.365 Theoretical 6202 4636 3577 149 30 2609 1666 10680 10002 11017 Resolution -1.525 4.190 0.723 0.338 0.699 3.419 5.255 9.880 5.855 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\15.10.22\chuan 3tp.2.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration 04/04/2023 12:11:30 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu 1.lcd : detai014 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\16.10.22\thu 1.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : cxtg.lcb : 21 : Unknown : 20 uL : 16/10/2022 13:51:29 Acquired by : tammp : 04/04/2023 12:08:07 Processed by : tammp thu 1.lcd 0.0 2.5 14 / / 15.637 13 / / 12.428 12 / / 9.767 11 / benzyl alcohol / 8.391 10 / / 7.287 / / 5.992 / / 4.401 PDA Multi 208nm,4nm / / 5.028 / / 2.278 / / 2.725 / / 3.040 / / 3.182 / / 1.727 / / 1.865 mAU 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 thu 1.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Ret Time 1.727 1.865 2.278 2.725 3.040 3.182 4.401 5.028 5.992 10 7.287 11 benzyl alcohol 8.391 12 9.767 13 12.428 14 15.637 Total Area 31365 106209 80972 53804 16358 10418 25813 17605 24614 24077 31307 29046 2667338 1323026 4441953 Tailing.F -0.810 1.383 1.071 1.193 0.967 1.211 1.184 Theoretical 3339 3848 846 491 109 1199 1621 3293 2512 9639 10504 11303 9703 10770 Resolution -1.152 1.907 1.111 0.380 0.186 3.029 1.591 2.327 3.341 3.536 3.960 6.103 5.796 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\16.10.22\thu 1.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 22/03/2023 15:44:51 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu M1.7.lcd : de tai021 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M1.7.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : lam mau.lcb :7 : Unknown : 20 uL : 09/10/2022 18:03:16 Acquired by : tammp : 09/10/2022 18:23:18 Processed by : tammp thu M1.7.lcd mAU 100 / natri benzoat / 15.610 PDA Multi 230nm,4nm 0.0 / / 9.693 / / 4.639 25 / / 1.675 / / 1.863 50 2.5 5.0 7.5 10.0 / acid salicylic / 12.449 75 12.5 15.0 17.5 20.0 thu M1.7.lcd PDA Ch1 230nm Peak# Name Ret Time 1.675 1.863 4.639 9.693 acid salicylic 12.449 natri benzoat 15.610 Total Area 20537 17983 44979 32118 392655 1831060 2339331 Height 3478 4454 1071 2314 22662 89530 123508 Tailing.F 0.717 1.122 1.094 1.095 Theoretical 2635 4633 1092 11272 11813 13321 Resolution -1.567 8.275 10.908 6.694 6.328 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M1.7.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 04/04/2023 17:05:39 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu M1.7.lcd : de tai021 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M1.7.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : lam mau.lcb :7 : Unknown : 20 uL : 09/10/2022 18:03:16 Acquired by : tammp : 22/03/2023 15:57:58 Processed by : tammp thu M1.7.lcd mAU 0.0 2.5 5.0 / / 9.693 / / 6.015 / / 4.488 / / 4.996 / / 1.675 / / 1.760 / / 1.863 / / 2.405 / / 2.775 7.5 10.0 12 / natri benzoat / 15.611 50 11 / / 14.130 75 25 PDA Multi 208nm,4nm 10 / acid salicylic / 12.449 100 12.5 15.0 17.5 20.0 thu M1.7.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Ret Time 1.675 1.760 1.863 2.405 2.775 4.488 4.996 6.015 9.693 10 acid salicylic 12.449 11 14.130 12 natri benzoat 15.611 Total Area 33519 29341 60389 13560 37097 59522 28335 28821 60870 1388448 25064 835046 2600011 Height 7065 8993 14976 1605 1561 2088 1328 1286 3895 79789 1390 40557 164533 Tailing.F -1.422 0.763 2.071 1.475 1.096 1.149 1.096 Theoretical 2204 4868 4797 3404 880 652 715 2046 10271 11719 13889 13147 Resolution -0.703 0.984 3.978 1.374 3.180 0.702 1.593 8.043 6.541 3.580 2.891 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M1.7.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 04/04/2023 17:09:00 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu M3.1.lcd : de tai018 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M3.1.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : lam mau.lcb : 12 : Unknown : 20 uL : 09/10/2022 16:54:44 Acquired by : tammp : 22/03/2023 16:11:59 Processed by : tammp thu M3.1.lcd 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 16 / natri benzoat / 15.513 PDA Multi 208nm,4nm 15 / / 13.097 14 / acid salicylic / 12.390 13 / benzylalcohol / 8.427 10 / / 5.961 / / 4.432 / / 4.637 / / 5.110 0.0 / / 2.452 / / 2.802 / / 3.016 / / 3.356 2.5 11 / / 6.830 12 / / 7.166 5.0 / / 1.769 / / 1.868 mAU 12.5 15.0 thu M3.1.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Ret Time 1.769 1.868 2.452 2.802 3.016 3.356 4.432 4.637 5.110 10 5.961 11 6.830 12 7.166 13 benzylalcohol 8.427 14 acid salicylic 12.390 15 13.097 16 natri benzoat 15.513 Total Area 73344 62015 12621 65412 29121 14023 33934 30914 30281 33668 28224 18513 27489 71849 146982 1494015 2172404 Height 13437 14591 2086 3110 1960 850 2358 2143 1209 1886 2699 1375 2363 3802 3520 73143 130532 Tailing.F 0.854 -1.182 1.095 Theoretical 4130 4651 2931 469 62 -86 14 472 1824 10116 7559 12670 9342 1888 13189 Resolution -0.898 4.017 1.003 0.208 0.059 0.159 1.135 2.093 1.120 4.006 9.759 0.823 2.767 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M3.1.lcd Report(Report Editor) Status:Manual Integration/Temporary 22/03/2023 16:01:21 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed thu M3.1.lcd : de tai018 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M3.1.lcd : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : lam mau.lcb : 12 : Unknown : 20 uL : 09/10/2022 16:54:44 Acquired by : tammp : 22/03/2023 15:59:46 Processed by : tammp thu M3.1.lcd mAU 200 / natri benzoat / 15.513 PDA Multi 230nm,4nm 150 / acid salicylic / 12.388 100 0.0 / / 7.165 / / 4.472 / / 4.634 / / 1.868 50 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 thu M3.1.lcd PDA Ch1 230nm Peak# Name Ret Time 1.868 4.472 4.634 7.165 acid salicylic 12.388 natri benzoat 15.513 Total Area 17300 29731 17540 13804 57656 3326774 3462805 Height 4312 2067 1353 1275 3341 164371 176719 Tailing.F 1.102 1.099 Theoretical 4643 976 -10157 11773 13433 Resolution -7.632 14.096 6.299 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\thu M3.1.lcd Report(Report Editor) 04/04/2023 12:18:36 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed trang 1.lcd : detai019 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\trang : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : dac hieu1.lcb :3 : Unknown : 20 uL : 21/10/2022 22:26:17 Acquired by : tammp : 04/04/2023 12:16:26 Processed by : tammp trang 1.lcd mAU PDA Multi 208nm,4nm / / 1.870 20 15 -5 0.0 2.5 / / 5.974 / / 4.732 / / 5.058 / / 2.437 / / 2.767 10 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 trang 1.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Total Ret Time 1.870 2.437 2.767 4.732 5.058 5.974 Area 113981 12099 41003 64283 20770 29878 282014 Tailing.F 0.994 1.054 0.858 1.768 Theoretical 3447 3882 633 485 270 1728 Resolution -3.997 1.106 3.023 0.312 1.015 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\trang 1.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary 22/03/2023 11:36:28 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed trang 1.lcd : detai019 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\trang : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : dac hieu1.lcb :3 : Unknown : 20 uL : 21/10/2022 22:26:17 Acquired by : tammp : 22/03/2023 11:36:00 Processed by : tammp trang 1.lcd mAU / / 1.871 5.0 PDA Multi 230nm,4nm 2.5 0.0 -2.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 trang 1.lcd PDA Ch1 230nm Peak# Name Total Ret Time 1.871 Area 29413 29413 Tailing.F 1.343 Theoretical 3501 Resolution E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\trang 1.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary 04/04/2023 12:20:00 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed placebo7.lcd : detai006 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\place : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : dac hieu1.lcb : 15 : Unknown : 20 uL : 21/10/2022 18:00:58 Acquired by : tammp : 22/03/2023 11:49:29 Processed by : tammp placebo7.lcd PDA Multi 208nm,4nm / / 3.697 10 / / 1.696 / / 1.879 mAU / / 2.363 / / 2.846 / / 5.982 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 placebo7.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Total Ret Time 1.696 1.879 2.363 2.846 3.697 5.982 Area 69514 86896 39231 30170 111032 20165 357007 Tailing.F -0.653 2.979 1.404 Theoretical 2242 2789 250 874 4741 1950 Resolution -1.277 1.307 0.983 2.839 6.039 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\placebo7.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary 22/03/2023 11:42:37 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed placebo7.lcd : detai006 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\place : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : dac hieu1.lcb : 15 : Unknown : 20 uL : 21/10/2022 18:00:58 Acquired by : tammp : 22/03/2023 11:41:58 Processed by : tammp placebo7.lcd mAU 5.0 PDA Multi 230nm,4nm / / 3.697 / / 1.699 / / 1.880 7.5 2.5 0.0 -2.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 placebo7.lcd PDA Ch1 230nm Peak# Name Total Ret Time 1.699 1.880 3.697 Area 26825 14420 60722 101967 Tailing.F 1.314 Theoretical 2053 3406 5040 Resolution -1.300 10.781 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\placebo7.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary 04/04/2023 12:21:48 Page / Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Sample Type Injection Volume Date Acquired Date Processed placebo them chuan 1.lcd : detai015 : : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\place : E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\09.10.22\dinh luong.lcm : dac hieu1.lcb : 18 : Unknown : 20 uL : 21/10/2022 21:04:42 Acquired by : tammp : 04/04/2023 12:17:35 Processed by : tammp placebo them chuan 1.lcd -1 0.0 2.5 / / 4.096 / / 2.326 / / 2.835 13 / / 16.449 12 / / 13.407 11 / benzyl alcohol / 8.624 10 / / 5.973 / / 4.695 PDA Multi 208nm,4nm / / 5.456 / / 3.678 / / 1.691 / / 1.775 / / 1.873 mAU 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 placebo them chuan 1.lcd PDA Ch1 208nm Peak# Name Ret Time Area Tailing.F Theoretical 1.691 62210 -2478 1.775 36957 -2333 1.873 90218 -2634 2.326 47618 -94 2.835 30995 0.661 877 3.678 107633 -4653 4.096 14605 -323 4.695 45134 0.738 3498 5.456 13315 -32 10 5.973 36736 -920 11 benzyl alcohol 8.624 39527 1.205 9154 12 13.407 3156964 1.279 8064 13 16.449 1630316 1.276 8917 Total 5312229 17.5 20.0 Resolution -0.598 0.670 0.817 0.758 2.815 0.742 0.974 0.362 0.221 4.617 9.987 4.703 E:\Kiem nghiem my pham\VKN.MP.06.40\2022\Thang 10\Thanh Tam\de tai\21.10.22 ddawcj hieeuj\placebo them chuan 1.lcd