Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa của các phân đoạn peptide thu nhận từ dịch thủy phân protein của phụ phẩm cá hồi

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA -—oOo-— NGUYỄN THÀNH PHƯƠNG KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN PEPTIDE THU NHẬN TỪ DỊCH THUỶ PHÂN PROTEIN CỦA PHỤ PHẨM CÁ HỒI Chuyên ngành: Công Nghệ Thực Phẩm Mã số : 60540101 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, 01/2018 i CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA -ĐHQG -TP.HCM Cán hướng dẫn khoa học: TS VÕ ĐÌNH LỆ TÂM Cán chấm nhận xét 1: PGS TS: Hoàng Thị Kim Anh Cán chấm nhận xét 2: TS: Lê Thị Nga Luận vãn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM Ngày 12 tháng 01 năm 2018 Thành phần Hội đồng đánh giá luận vãn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) Chủ Tịch: GS TS Lê Vãn Việt Mẩn Phản biện 1: PSG.TS Hoàng Thị Kim Anh Phản biện 2: TS Lê Thị Nga ủy viên: TS: Tôn Nữ Minh Nguyệt ủy viên, Thư ký: TS Trần Thị Ngọc Yên Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá luận vãn Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận vãn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự do- Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Thành Phương MSHV: 1570436 Nơi sinh:Ninh Thuận Mã số: 60540101 Ngày, tháng, năm sinh: 06/06/1987 Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm I TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN PEPTIDE THU NHẬN TỪ DỊCH THỦY PHÂN PROTEIN PHỤ PHẨM CÁ HỒI II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Nhiệm vụ: Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa phân đoạn peptide thu nhận từ dịch thủy phân protein phụ phẩm cá Hồi Nội dung: Khảo sát thành phần hóa học phụ phẩm cá Hồi Khảo sát điều kiện thủy phân nhằm thu dịch thủy phân có hoạt tính kháng oxy hóa cao Tối ưu hóa điều kiện thủy phân nhằm thu dịch thủy phân có hoạt tính kháng oxy hóa cao Tách phân đoạn dịch thủy phân khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa phân đoạn II NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 10-7-2017 III NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 03-12-2017 IV CÁN BỘ HƯỚNG DẴN: TS : Võ Đình Lệ Tâm Tp HCM, ngày 03 tháng 01 năm 2018 CÁN BỘ HƯỚNG DẴN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) TRƯỞNG KHOA (Họ tên chữ ký) LỜI CẢM ƠN Sau học ngày hôm nay, em xin chân thành cảm ơn tới quý thầy cô môn Công nghệ thực phẩm thầy cô giảng dạy em thời gian qua Thầy cô truyền đạt nhiều kiến thức chun mơn mà có kiến thức xã hội Thầy cô nguồn cảm hứng để khơi dạy sáng tạo, mới, tạo môi trường động kỹ làm việc nhóm mà thầy có để dậy cho chúng em Em muốn cám ơn đặt biệt tới cô TS.VÕ Đình Lệ Tâm, ln tận tình theo sát hướng dẫn giúp đỡ em để em hoàn thành luận văn cách tốt Qua em muốn cám ơn tới nhóm thí nghiệm Tâm hướng dẫn Các bạn người cộng tốt nhất, nhiệt tình giỏi kiến thức chun mơn Em xin chân thành cảm ơn q thầy phòng thí nghiệm, đặt biệt cô KS Nguyễn Thị Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện trang thiết bị, dụng cụ, hóa chất suốt thời gian thực luận văn Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình bạn bè hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ thời gian học tập nghiên cứu vừa qua Mặt dù có nhiều khó khăng thiếu xót nhờ có giúp đỡ thầy cơ, bạn, quan tâm từ gia đình em hồn thành luận văn cách tốt Em xin gửi lời chúc sức khỏe đến tất thầy cô bạn bè TP Hồ Chí Minh, 25 tháng 12 năm 2017 Học viên thực Nguyễn Thành Phương TÓM TẮT Hoạt phân đoạn peptide thu nhận từ dụng dịch chế thủy phẩm phân enzyme protein khảo phụ phẩm sát ửong cá Hồi nghiên (Salmo cứu salar) sử Thành độ ẩm phần khoảng hóa 61,9%, học hàm phụ lượng phẩm protein cá Hồi khoảng (Saỉmo 44,37%, salar) hàm gồm có lượng theo hàm lipid lượng khoảng chất 45,4% khơ) Sau hàm đó, lượng điều tro kiện khoảng thủy 10,2% phân (tính khảo hóa cao sát nhằm thu Kết nhận cho dịch thấy thủy hoạt phân tính có hoạt kháng tính oxy kháng hóa oxy dịch enzyme thủy Flavourzyme phân đạt giá ởhóa pH trị 7, cao nhiệt độ 50°C, sử tỉ dụng lệ chế enzyme/cơ phẩm chất theo, (E/S) điều 50Ư/g kiện thủy protein, phân thời tối gian ưu thủy hóa sử dụng phương Tiếp pháp (E/S) bề mặt thời đáp gian ứng thủy (RSM) phân với theo yếu phương tố tỉ pháp lệ enzyme/cơ bắt gốc tự chất DPPH thủy (2,2-diphenyl-l-picrylhydrazyl) phân có khả bắt 35,4% gốc DPPH, Sau (cao tối ưu, 1,01 dịch lần so thời với gian trước thủy tối phân ưu hóa) 7,97 giờ, tỉ nhiệt lệ E/S độ 49,83 50°C, Ư/g pH protein, Cuối cùng, thiết dịch bị ly thủy tâm phân siêu lọc theo tách kích phân thước đoạn phân peptide tử sử peptide dụng hoạt tính 30 kháng kDa, 10 oxy kDa, kDa phân đoạn kDa < Kết kDa cao cho nhất, thấy giá trị FRAP IC50 thấp cao hơn 270 250 lần lần so với so với giá IC50 trị FRAP vitamin vitamin c, giá c trị Kết nguồn protein cho thấy tự tiềm nhiên nhằm sử thu dụng nhận phụ phẩm cá đoạn Hồi peptide có hoạt tính kháng oxy hóa ABSTRACT The antioxidant activity of peptide fractions isolated from protein hydrolysate of salmon by - product (Salmo salar) using enzyme preparation was investigated in this study The chemical composition of the by - product includded moisture of 61.9%, the protein contnet of 44.4%, the lipid content of 45.4% and the mianeral content of 10.2% (on dry weight basis) After that, the hydrolysis condition was examined to obtain the proteolysate with highest antioxidant activity The result revealed reached the highest value when using Flavourzyme at pH 7, 50°C, enzyme/subtrate (E/S) ratio of 50 u/g protein and hydrolysis time of hours (h) Then, the hydrolysis condition was optimized using reponse suface methodology (RSM) via enzyme/subtrate ratio and hydrolysis time using DPPH (2,2-diphenyl-l-picrylhydrazyl) free radical scavenging assay (DPPH method) After optimization, the hydrolysate could scavenge 35.4% DPPH, higher 1.13% than before optimization with E/S ratio of 49.83 u/g protein, hydrolysis time of 7.97 hours, at 50°C, pH Finally, the hydrolysate was fractionated using centrifugal ultrfiltration devices with molecular sizes of 30kDa, lOkDa, 3kDa and kDa The result showed that the < lkDa peptide fractions showed highest antioxidant activity, with the IC50 250 - fold higher than that of vitamin c, FRAP value 270 - fold lower than that of vitamin c These findings indicated that the potential in using salmon by - product as a natural protein source to obtain the antioxidative peptide fractions 1.1 vii 1.4.1 1.3.1 1.4.2 1.3.2 viii 4.2 1.3.3 Kiến nghị 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính kháng oxy hố dịch thuỷ phân sử dụng phương pháp bắt gốc tự DPPH phương pháp FRAP47 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ E/S đến hoạt tính kháng oxy hố dịch thuỷ phân sử dụng phương pháp bắt gốc tự DPPH phương pháp FRAP49 3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian thủy phân đến hoạt tính kháng oxy hoá dịch thuỷ phân sử dụng phương pháp bắt gốc tự DPPH phương pháp 1.3.4 1.3.5 1.3.6 PHỤ LỤC 69 1.3.7 DPP 1.3.9 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT 1.3.8 2,2-diphenyl-1 -picrylhydrazyl H: 1.3.10 FRA 1.3.11 Ferric Reducing Ability of Plasma P: 1.3.12 Trolo 1.3.13 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic x: acid 1.3.14 IC50: 1.3.15 Nồng độ ức chế 50% gốc tự 1.3.16 BHT: 1.3.17 Butylated hydroxytoluene 1.3.18 ACE: 1.3.19 Enzyme chuyển hoá Angiotensin 1.3.20 E/S: 1.3.21 Tỉ lệ enzyme/cơ chất 1.3.22 ANO 1.3.23 Analysis of variance VA: 1.3.24 AOA 1.3.25 Association of Official Analytical Chemists C: 1.3.26 ORA 1.3.27 Oxygen radical absorbance capacity C: 1.3.28 TBA: 1.3.29 Thiobarbituric acid 1.3.30 CPP: 1.3.31 Casein Phospho Peptide 1.3.32 RP- 1.3.33 Reverse Phase - High Performance Liquid HPLC: Chromatography 1.3.34 OPA: 1.3.35 oriAo-Phthalaldehyde 1.3.36 DTT: 1.3.37 1,4 - Dithiothreitol 1.3.38 SDS: 1.3.39 Sodium Dodecyl Sulfate 1.3.40 AOA 1.3.41 Association of Official Analytical Chemists C: 1.3.42 CCC: 1.3.43 Central Composite Chcumscribed 1.3.44 FFD: 1.3.45 Fractional factorial designs 1.3.714 1.3.715 Hoạt tính kháng oxy hóa dịch thuỷ phân tăng dần từ pH đạt cực trị pH theo hai phương pháp bắt gốc tự DPPH phương pháp FRAP với giá trị cực đại tương ứng 34,8% 113,9 pM Trolox Trong kết khảo sát Qian Sun cộng ảnh hưởng pH đến hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân Hemoglobin (2010) cho thấy pH 2, dịch thủy phân sử dụng chế phẩm enzyme pepsin có hoạt tính kháng oxy hóa cao [60], Như pH tối ưu chế phẩm enzyme khác ảnh hưởng trực tiếp đến hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân pH ảnh hưởng đến độ hòa tan protein, mức độ ion hóa enzyme chất 1.3.716 DPPH Như khả vậy, ởpH giá khử trị sắt pH (III) 7, hoạt FRAP tính đạt bắt cực đại Do cho đó, giá thí trị nghiệm 7sau để khảo chọn sát làm hoạt pH tính thủygốc phân kháng oxy hóa 1.3.717 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính kháng oxy hố dịch thuỷ phân sử dụng phương pháp bắt gốc tự DPPH phưong pháp FRAP 60 1.3.718 1.3.719 1.3.720 Hình 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính bắt gấc tự DPPH dịch thuỷ phân 1.3.721 Hình 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng loại enzyme thủy phân đến hoạt tính kháng oxy hóa theo phương pháp FRAP 1.3.722 Ket khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính kháng oxy hố dịch thuỷ phân từ phụ phẩm chế biến cá hồi sử dụng phương pháp DPPH trình bày hình 3.5 phương pháp FRAP hình 3.6 1.3.723 Kết cho thấy nhiệt độ thuỷ phân tăng lên từ 40°C đến 50°C, hoạt tính bắt gốc DPPH tăng từ 24,8% đạt giá trị cực đại 35,6% (tăng 10,2%) 50°C theo phương pháp bắt gốc tự DPPH Kết hoạt tính khử sắt FRAP tăng từ 48,2 pM Trolox đến giá trị cực đại 110,4 pM Trolox (tăng 129,0%) 50°C Nghiên cứu Jiaoyan Ren cộng (2008) khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân cá Trắm cỏ cho thấy nhiệt độ 52,5°c khả bắt gốc tự DPPH cao [47], Nhiệt độ thủy phân ảnh hưởng đến tốc độ phản ứng hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân Khi tăng nhiệt độ từ 50°C đến 60°C hoạt tính bắt gốc tự DPPH giảm từ 35,6% xuống 30,02% (giảm 5,33%), hoạt tính khử sắt FRAP giảm từ 110,4pM Trolox xuống 55,34 pM Trolox (giảm 49,9%) Khi tăng nhiệt độ phản ứng đến nhiệt độ cao nhiệt độ tối ưu, ezyme bị biến tính, làm giảm tốc độ phản ứng làm giảm hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân 1.3.724 sát hoạt Vậy tính nhiệtkháng độ 50°C oxysẽ hóa sử dụngthí để nghiệm khảo sau 62 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ E/S đến hoạt tính kháng oxy hố dịch thuỷ phân sử dụng phương pháp bắt gốc tự DPPH phưong pháp FRAP 1.3.725 1.3.726 1.3.727 Hình 3.7 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ E/S đến hoạt tính bắt gấc tự DPPH dịch thuỷ phân 1.3.728 1.3.729 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ E/S đến hoạt tính kháng oxy hố dịch thuỷ phân từ phụ phẩm chế biến cá hồi sử dụng phương pháp DPPH trình bày hình 3.7 phương pháp FRAP hình 3.8 1.3.730 Kết cho thấy tỉ lệ E/S tăng từ 30 đến 50 Ư/g protein, dịch thuỷ phân có hoạt tính bắt gốc DPPH hoạt tính khử sắt FRAP tăng dần đạt cực đại 35,4% 105,6 pM Trolox, tương ứng tỉ lệ E/S 50 Ư/g protein Nghiên cứu Zhu cộng (2015) khảo sát ảnh hưởng điều kiện thủy phân protein cá Bơn vỉ (Paralichthys olivaceus) sử dụng chế phẩm enzyme Trypsin đến hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân cho thấy tỉ lệ E/S 25 Ư/g protein hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân đạt giá trị cao [61], Khi tăng tỉ lệ E/S, hàm lượng enzyme tăng lên, làm tăng tốc độ phản ứng thủy phân làm tăng hoạt tính kháng oxy hóa Khi giá trị E/S tăng từ 50 lên 70 Ư/g protein, hoạt tính bắt gốc DPPH giảm từ 35,4% giảm xuống đến 30,0% (giảm 5,4%) giá trị FRAP giảm từ từ 105,6 pM Trolox giảm xuống đến 35,2 pM Trolox (giảm 66,7%) Khi hàm lượng enzyme nhiều, mức độ thủy phân cao, sản phẩm dịch thủy phân bị phân cắt nhiều ảnh hưởng đến hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân 1.3.731 Do đó, 50 u/g protein chọn tỉ lệ E/S để khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa thí nghiệm sau 3.6 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian thủy phân đến hoạt tính kháng oxy hoá dịch thuỷ phân sử dụng phương pháp bắt gốc tự DPPH phương pháp FRAP 1.3.732 1.3.733 1.3.734 Hình 3.9 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian thủy phân đến hoạt tính bắt gốc tự DPPH dịch thuỷ phân Hình 3.10 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian thủy phân đến hoạt tính dịch thuỷ phân theo phương pháp FRAP 6 1.3.735 Ket cho thấy, thòi gian thủy phân đạt hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân đạt cực đại theo phương pháp bắt gốc tự DPPH (35,0%) phương pháp khử sắt FRAP (108,6 pM Trolox) Nghiên cứu Kuo-Chiang Hsu (2010) hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân protein cá Ngừ đen sử dụng loại enzyme Orientase 90N Protease XXIII cho thấy hoạt tính bắt gốc tự DPPH dịch thủy phân đạt cực đại sau thủy phân [51], Nghiên cứu Sara Bordbar cộng (2013) hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân cá Đá (Ạctinopyga lecanorà) sử dụng loại enzyme Alcalase, Flavozyme, papain, trypsin, pepsin, bromelain cho thấy khả bắt gốc tự DPPH enzyme dịch thủy phân đạt cực đại 10 [62], Thời gian thủy phân kéo dài làm tăng mức độ thủy phân làm tăng hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân Khi thời gian thủy phân tăng từ đến 10 giờ, hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân giảm Thời gian thủy phân kéo dài làm enzyme bị biến tính ảnh hưởng đến hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân Do khả kháng oxy hóa cao phân đoạn peptide định nên thời gian thủy phân dài 67 peptide có khả tiếp tục bị phân cắt làm giảm hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân 1.3.736 Như vậy, thời gian chọn để khảo sát hoạt tính kháng oxy hố dịch thuỷ phân cho thí nghiệm sàng lọc 1.3.737 3.7 Tối ưu hóa điều kiện thủy phân để thu dịch thủy phân có hoạt tính kháng oxi hóa cao 3.7.1 Thí nghiệm sàng lọc yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân 1.3.738 Kết thí nghiệm sàng lọc yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính kháng oxy hóa 1.3.739 dịch thủy phân trình bày bảng 3.2 3.3 1.3.740 Bảng 3.2 Kết thí nghiệm sàng lọc yếu tố đến phần trăm bắt gốc tự 1.3.741 1.3.742 1.3.743 1.3.744 SỐTN TênTN hiệt độ(°C) 1.3.749 1.3.750 1.3.751 NI 1.3.756 1.3.757 1.3.758 N4 1.3.763 1.3.764 1.3.765 N3 1.3.770 1.3.771 1.3.772 N2 1.3.777 1.3.778 1.3.779 N9 1.3.784 1.3.785 1.3.786 N10 1.3.791 1.3.792 1.3.793 Nil 1.3.798 1.3.799 1.3.800 N7 1.3.805 1.3.806 1.3.807 N6 1.3.812 1.3.813 1.3.814 10 N5 1.3.819 1.3.820 11 N8 1.3.826 DPPH N1.3.7451.3.746 1.3.747 T 1.3.748 pH E/S(Ư/g) hời gian(h) DPPH(%) 41.3.752 1.3.753 1.3.755 1.3.754 40 29,241 51.3.759 1.3.760 1.3.762 1.3.761 7 40 30,884 41.3.766 1.3.767 1.3.769 1.3.768 40 35,141 51.3.773 1.3.774 1.3.776 1.3.775 40 35,144 51.3.780 1.3.781 1.3.783 1.3.782 6.5 50 35,009 51.3.787 1.3.788 1.3.790 1.3.789 6.5 50 34,285 51.3.794 1.3.795 1.3.797 1.3.796 6.5 50 34,618 41.3.801 1.3.802 1.3.804 1.3.803 7 60 34,917 1.3.808 1.3.809 1.3.811 1.3.810 60 34,153 1.3.815 1.3.816 1.3.818 1.3.817 60 39,178 1.3.821 51.3.822 68 1.3.823 60 1.3.824 1.3.825 39,383 1.3.827 pH Bảng 3.3 Mức độ ảnh hưởng thông số điều kiện thủy phân sử dụng phương pháp giai thừa phân số (FFD) 1.3.828 X2 0,0658908 6,5 0,291694 1.3.829 Kết cho thấy yếu tố có mức ảnh hưởng dương lớn (P < 0,05) tỉ lệ E/S thời gian thủy phân Bảng 3.3 cho thấy thời gian có ảnh hưởng mạnh tới hoạt tình bắt gốc tự DPPH với mức ảnh hưởng 2,20, tỉ lệ E/S với mức ảnh hưởng 1,92 Hai yếu tố nhiệt độ pH ảnh hưởng không đáng kể đến hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân (P > 0,05) Giá trị R = 0,988 > 0,8 Q = 0,785 > 0,5 cho thấy giá trị có ý nghĩa mơ hình đáng tin cậy Investigation: screening.DPPH (PLS, comp.=1) Scaled & Centered Coefficients for DPPH 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 1.3.830 1.3.831 1.3.832 X 1.3.836 1.3.837 1.3.838 R2=0.988 1.3.844 1.3.840 1.3.841 1.3.842 OJ N=ll 69 1.3.834 X R2 Adj.=0.981 RSD=0.4109 Conf 1.3.835 X 1.3.839 1.3.843 1.3.845 Hình 3.11 Biểu đồ thể mức độ ảnh hưởng yếu tố điều kiện thủy phân đến hoạt tính kháng oxy hóa theo phương pháp bắt gốc tự DPPH 1.3.846 Như từ kết thí nghiệm sàng lọc, hai yếu tố tỉ lệ E/S thời gian thuỷ phân chọn để tiến hành thí nghiệm tối ưu hố sử dụng phương pháp bề mặt đáp ứng RSM 70 3.7.2 Thí nghiệm tối ưu hóa 3.7.2.1 Xây dựng phương trình hồi quy 1.3.847 Tối ưu hố điều kiện thuỷ phân để thu dịch thủy phân có hoạt tính kháng oxy hóa cao Các biến sử dụng mơ hình gồm: thời gian (X1), tỉ lệ E/S (X 2), hàm mục tiêu khả bắt gốc tự DPPH (Y) Kết thí nghiêm trình bày bảng 3.4 Kết thí nghiệm tối ưu phân tích chương trình Modde (MKS Umetrics AB, Malmõ, Sweden) 1.3.848 Bảng 3.4 Ma trận thực nghiệm 1.3.850 Bien 1.3.851 Bi 1.3.849 L mã hố ần thí nghiệm 1.3.854 1.3.855 Xi 1.3.883 1.3.860 -1 1.3.866 1.3.872 -1 1.3.878 1.3.884 1.3.889 1.3.895 1.3.901 1.3.907 1.3.913 1.3.919 1.3.859 1.3.865 1.3.871 1.3.877 1 1.3.925 1.3.931 1.3.937 1.3.852 ến thực 1.3.856 Zi x1.3.861 -1 1.3.867 -1 1.3.873 1.3.879 1.3.885 -A/2 1.3.890 1.3.891 A/2 1.3.896 1.3.897 -A/2 1.3.902 1.3.903 V2 1.3.908 1.3.909 0 1.3.914 1.3.915 0 1.3.920 1.3.921 0 1.3.926 1.3.927 0 1.3.862 1.3.868 1.3.874 1.3.880 1.3.886 6,586 1.3.892 9,414 1.3.898 1.3.904 1.3.910 1.3.916 1.3.922 1.3.928 1.3.932 1.3.933 0 1.3.934 71 Y 1.3.857 z1.3.863 1.3.858 DPP H(%) 1.3.864 29,99 1.3.870 33,75 1.3.876 33,15 1.3.882 28,60 1.3.888 30,31 1.3.894 29,96 1.3.900 32,26 1.3.906 32,82 1.3.912 35,52 1.3.918 35,62 1.3.924 34,98 1.3.930 34,99 1.3.935 1.3.936 50 35,25 40 1.3.869 40 1.3.875 60 1.3.881 60 1.3.887 50 1.3.893 50 1.3.899 35,86 1.3.905 64,14 1.3.911 50 1.3.917 50 1.3.923 50 1.3.929 50 1 64 6 1.3.938 Bảng 3.5 Hệ số phương trình hồi quy độ tin cậy hệ số tương ứng vói thơng số trình thuỷ phân 1.3.940 Giá trị 1.3.941 Hệ số phương trình hồi Mức ý hệ số quy nghĩa p 1.3.939 1.3.942 bo 1.3.945 bi 1.3.948 b2 1.3.951 bi2 1.3.954 b22 1.3.957 bib2 1.3.960 1.3.943 35,3198 1.3.946 -0,152162 1.3.949 -0,14038 1.3.952 -2,0271 1.3.955 -1,12489 1.3.958 -1,75461 1.3.961 1.3.963 1.3.944 ,72763e-010 1.3.947 ,389783 1.3.950 ,424893 1.3.953 ,76116e-005 1.3.956 ,00125468 1.3.959 ,000354115 RSD1.3.962 1.3.964 0 0 =0,5112 Conf lev =0,95 1.3.965 1.3.966 Phương trình hồi quy thu là: 1.3.967 Y = 35.3198 - 2.0271X12 - 1.12489X22 - 1.75461 XjX2 (1) 1.3.968 Tro ng đó: 1.3.970 1.3.969 1.3.971 Xi^Zi-8) x2 = (Z2 -50)/10 Thay giá trị Z] z2 vào phương trình (1) thu phương trình hồi quy với biến thực là: 1.3.972 DPPH (%) = -2,027 1ZJ2 - 0,01125Z22 + 38,31 1ZJ + 2,06526Z2 - 0,1 17546ZJZ2 - 75,51841 1.3.973 Tro ng đó: 1.3.974 Z1 biến thực giá trị thời gian thuỷ phân (giờ) z2 biến thực giá trị tỉ lệ E/S (U/g protein) 72 1.3.975 Phương trình (1) có p < 0,0001, hệ số hồi quy R2 = 0,942 > 0,8, giá trị biến thiên ảo Q2 = 0,770 > 0,5 độ sai lệch R2 - Q2 0,208 thuộc [0,2 ; 0,3] cho thấy phương trình hồi quy tương thích với thực nghiệm 1.3.976 Bảng 3.6 Kết kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy so với thực nghiệm 1.3.978 1.3.977 Source Degree of Freedom (DF) 1.3.990 Regressi 1.3.997 on 1.3.1004 Residual 1.3.1011 Lack of 1.3.1012 Fit 1.3.1020 Pure 1.3.1027 Error 1.3.991 1.3.1005 1.3.1013 1.3.1021 1.3.1028 1.3.1030 Total1.3.1036 11 1.3.979 Sum of 1.3.980 Square 1.3.982 Mean 1.3.986 1.3.988 1.3.989 p value Squares F value 1.3.987 1.3.981 (MS) s(SS) 1.3.992 1.3.993 1.3.994 1.3.995 1.3.996 0.00 58,6318 11,7264 44,8722 Có ý nghĩa 1.3.998 1.3.999 1.3.1000 1.3.1001 1.3.10021.3.1003 1.3.1008 1.3.10091.3.1010 1.3.1006 1.3.1007 1,30664 0,261328 1.3.1018 1.3.1014 1.3.1015 1.3.1016 1.3.1017 Khơng có 0,256 1,07251 0,357503 3,05388 1.3.1019 ý nghĩa 1.3.1024 1.3.10251.3.1026 1.3.1022 1.3.1023 0,23413 0,117065 1.3.1033 1.3.10341.3.1035 1.3.1031 1.3.1032 59,9385 5,99385 1.3.1037 Theo kết phân tích ANOVA (Bảng 3.6) cho thấy mơ hình hồi quy có mức độ tin cậy cao (P-Value < 0,01) Giá trị kiểm định Lack of Fit (0,256 > 0,05) cho thấy mơ hình hồi quy phù hợp thực nghiệm 1.3.1038 1.3.1039 73 Insistig.ỊtI»n Toi_ụụ |PLS MW =2} Response Surface Flat 1.3.1040 1.3.1041 1.3.1042 Hình 3.12 Đồ thị bề mặt đáp ứng cho hoạt tính kháng oxy hóa dịch thuỷ phân phụ phẩm cá Hồi với phương pháp bắt gấc tự DPPH 1.3.1043 Điều kiện thủy phân tối ưu gồm có: tì lệ E/S 49,83 u/g protein thời gian thủy phân 7,97 Khi hoạt tính bắt gốc tự DPPH dụ đốn theo phương trình hồi quy 35,4% 1.3.1044 Đe kiểm ưa tương thích phương trình hồi quy so với thực nghiệm, hoạt tính kháng oxy hóa dịch thủy phân xác định thực nghiệm vớỉ điều kiện thủy phân xác định từ phươn trình hồi quy Thí nghiệm lặp lại lần Kết cho thấy hoạt tính bắt gốc tự DPPH dịch thủy phân thu đạt 34,6 ± 0,7% Sự khác biệt kết thực nghiệm kết dự đốn phương trình hồi quy 2,2% Như phương trình hồi quy phù hợp với thực nghiệm 74 ... hóa học phụ phẩm cá Hồi Khảo sát điều kiện thủy phân nhằm thu dịch thủy phân có hoạt tính kháng oxy hóa cao Tối ưu hóa điều kiện thủy phân nhằm thu dịch thủy phân có hoạt tính kháng oxy hóa cao... PROTEIN PHỤ PHẨM CÁ HỒI II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Nhiệm vụ: Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa phân đoạn peptide thu nhận từ dịch thủy phân protein phụ phẩm cá Hồi Nội dung: Khảo sát thành phần hóa. .. kiện khoảng thủy 10,2% phân (tính khảo hóa cao sát nhằm thu Kết nhận cho dịch thấy thủy hoạt phân tính có hoạt kháng tính oxy kháng hóa oxy dịch enzyme thủy Flavourzyme phân đạt giá hóa pH trị