Nghiên cứu sự tồn tại và nảy mầm của bào tử bacillus aquimaris SH6 trong ruột tôm thẻ chân trắng và ảnh hưởng của bào tử lên một số chỉ tiêu miễn dịch của tôm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Nhung TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Hương NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỒN TẠI VÀ NẢY MẦM CỦA BÀO TỬ Bacillus aquimaris SH6 TRONG RUỘT TÔM THẺ CHÂN TRẮNG VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA BÀO TỬ LÊN MỘT SỐ CHỈ TIÊU MIỄN DỊCH Ở TÔM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Hương NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỒN TẠI VÀ NẢY MẦM CỦA BÀO TỬ Bacillus aquimaris SH6 TRONG RUỘT TÔM THẺ CHÂN TRẮNG VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA BÀO TỬ LÊN MỘT SỐ CHỈ TIÊU MIỄN DỊCH Ở TÔM Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 8420101.07 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Phạm Thị Thu Hường PSG.TS Nguyễn Thị Vân Anh Hà Nội - 2018 Luận văn thạc sĩ khoa học 2018 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực luận văn tốt nghiệp, nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ dẫn tận tình từ phía thầy cơ, đồng nghiệp, bạn bè gia đình Trước tiên tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Phạm Thị Thu Hường PGS TS Nguyễn Thị Vân Anh tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn cán bộ, tập thể nhóm nghiên cứu bạn sinh viên phòng Sinh học Nano Ứng dụng, phòng Protein tái tổ hợp thuộc Phòng Thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ Enzym & Protein Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội, người giúp đỡ, động viên khích lệ tơi nhiều suốt thời gian thực luận văn thạc sĩ; thầy cô giáo Bộ môn Vi sinh vật học thầy cô thuộc Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu trường Luận văn thực tài trợ kinh phí Quỹ TWAS (Viện Hàn lâm Khoa học Thế giới), đề tài mã số 16-549 RG/BIO/AS_G - FR3240293311 PGS.TS Nguyễn Thị Vân Anh làm chủ nhiệm Sau cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè ln động viên, khích lệ giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Học viên Nguyễn Thị Hương Luận văn thạc sĩ khoa học 2018 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CHỮ, KÝ HIỆU VIẾT TẮT CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tôm thẻ chân trắng 1.2 Probiotic vai trò chúng nuôi trồng thủy sản 1.2.1 Giới thiệu chung probiotic 1.2.2 Các nghiên cứu vai trò ứng dụng Bacillus probiotic nuôi tôm 1.3 Nghiên cứu carotenoid vi khuẩn sinh carotenoid 11 1.3.1 Carotenoid 11 1.3.2 Vi khuẩn sinh carotenoid 12 1.3.3 Astaxanthin 12 1.4 Hệ thống miễn dịch tôm thẻ chân trắng 13 1.5 Bào tử B aquimaris SH6 tác dụng probiotic chúng tôm thẻ chân trắng 15 1.5.1 Thực trạng nghiên cứu vai trò probiotic bào từ B aquimaris 15 1.5.2 Khả nảy mầm bào tử B aquimaris 16 1.6 Đặt vấn đề nghiên cứu thiét kế thí nghiệm 17 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 19 2.1 Nguyên liệu 19 2.1.1 Tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) 19 2.1.2 Bào tử B aquimaris SH6 19 Luận văn thạc sĩ khoa học 2018 2.1.3 Thức ăn cho tôm 20 2.1.4 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 20 2.1.5 Hóa chất 21 2.1.6 Dụng cụ thiết bị 23 2.2 Phương pháp 23 2.2.1 Chuẩn bị bào tử B aquimaris SH6 tách chiết carotenoid 23 2.2.2 Chuẩn bị thức ăn cho tôm 26 2.2.3 Bố trí nhóm thi ghiệm quy trình ni tôm 26 2.2.4 Xác định số lượng B aquimaris SH6 tổng số vi sinh vật hiếu khí ruột tơm 28 2.2.5 Đánh giá khả nảy mầm bào tử B aquimaris SH6 ruột tôm 29 2.2.6 Đánh giá số miễn dịch tôm 34 2.2.7 Xác định tốc độ tăng trưởng, nồng độ astaxanthin màu sắc tơm 38 2.2.8 Phân tích liệu 39 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Khả lưu trú bào tử B aquimaris SH6 ruột tôm thẻ chân trắng 40 3.2 Thiết kế mồi probe đặc hiệu cho Real-time PCR gen BaqA-SH6 43 3.3 Khả nảy mầm bào tử B aquimaris SH6 ruột tơm thẻ chân trắng 45 3.4 Vai trò bào tử B aquimaris SH6 tăng cường miễn dịch tôm thẻ chân trắng 48 3.5 Tăng trưởng trọng lượng tôm ăn bào tử B aquimaris SH6 53 3.6 Nồng độ astaxanthin màu sắc tôm 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 Luận văn thạc sĩ khoa học 2018 Kết luận 58 Kiến nghị 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 Luận văn thạc sĩ khoa học 2018 Luận văn thạc sĩ khoa học 2018 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Bào tử B aquimaris SH6 19 Hình 2.2: Thức ăn cho tôm thẻ chân trắng 20 Hình 2.3: Đường chuẩn nồng độ Astaxanthin 25 Hình 2.4 : Mơ hình bể ni tơm quy mơ phòng thí nghiệm 27 Hình 2.5: Bể ni tơm điều kiện phòng thí nghiệm 28 Hình 2.6: Trình tự tương đồng đoạn gen BaqA chủng B aquimaris MKSC 6.2 số chủng Anoxybacillus spp 31 Hình 2.7: Mơ hình vector biến nạp pTOP TA V2 (3807 bp) [80] 32 Hình 3.1: Số lượng B aquimaris SH6 ruột tơm thẻ chân trắng sau 28 ngày (CFU × 105/g ruột tôm) 40 Hình 3.2: Tổng số vi sinh vật hiếu khí ruột tơm thẻ chân trắng sau 28 ngày (CFU × 106/g ruột tơm) *P