Báo cáo thực hành tốt nghiệp vi sinh ký sinh trùng tại Bệnh viện Đống Đa, Hà NộiVậy là hai năm học tại trường Cao Đẳng Y Tế Hà Nội đã sắp trôi qua, sau nhiều nỗ lực và rèn luyện của bản thân cùng sự chỉ bảo dẫn dắt của các thầy cô giáo, chúng em đã nhận được sự chỉ dạy tận tình, tâm huyết của thầy cô cùng với sự đầu tư nhiều trang thiết bị cơ sở vật chất hiện đại của nhà trường giờ đây em đã tích lũy được cho bản thân những kiến thức quý báu giúp em có thể tự tin áp dụng kiến thức đó vào công việc sau này.Thấu hiểu được rằng “học đi đôi với hành” nhà trường không chỉ tạo điều kiện cho chúng em được học và thực hành tại trường mà còn cho chúng em cơ hội thực tập tại khoa Vi Sinh tại Bệnh viện Đống Đa Hà Nội. Nắm bắt cơ hội này em đã luôn cố gắng học hỏi, trau dồi kinh nghiệm thực tế để phục vụ cho công việc sau này và em đã thu được nhiều kiến thức bổ ích. Để có được điều này em xin chân thành cám ơn:....
TRƯỜNG CAO ĐẲNG Y TẾ HÀ NỘI BÁO CÁO THỰC TẬP SINH LÂM SÀNG VI Giáo viên hướng dẫn: ThS Hà Thị Nguyệt Minh Sinh viên: Nguyễn Đức Chính Ngày sinh: 20/02/1989 Lớp: CĐLT Xét nghiệm Địa điểm thực tập: Khoa Vi Sinh Bệnh viện đa khoa Đống Đa, Hà Nội Thời gian thực tập: Từ ngày 25 tháng 11 năm 2019 Đến ngày 20 tháng 12 năm 2019 LỜI CẢM ƠN Kính thưa ban giám hiệu nhà trường thầy cô giáo! Vậy hai năm học trường Cao Đẳng Y Tế Hà Nội trôi qua, sau nhiều nỗ lực rèn luyện thân bảo dẫn dắt thầy cô giáo, chúng em nhận dạy tận tình, tâm huyết thầy với đầu tư nhiều trang thiết bị - sở vật chất đại nhà trường em tích lũy cho thân kiến thức quý báu giúp em tự tin áp dụng kiến thức vào cơng việc sau Thấu hiểu “học đôi với hành” nhà trường không tạo điều kiện cho chúng em học thực hành trường mà cho chúng em hội thực tập khoa Vi Sinh Bệnh viện Đống Đa Hà Nội Nắm bắt hội em cố gắng học hỏi, trau dồi kinh nghiệm thực tế để phục vụ cho công việc sau em thu nhiều kiến thức bổ ích Để có điều em xin chân thành cám ơn: - Ban giám hiệu nhà trường, Phòng Đào Tạo - Trường Cao Đẳng Y Tế Hà Nội - Bộ môn Vi – Ký sinh - Trường Cao Đẳng Y Tế Hà Nội - Cô giáo ThS Hà Thị Nguyệt Minh tận tình giảng quan tâm chúng em thực tập - Ban lãnh đạo Bệnh viện Đống Đa Hà Nội - BS Trương Minh Huy, ThS Nguyễn Công Trịnh anh chị hướng dẫn dạy chúng em thực tập Khoa Vi Sinh Bệnh viện Đống Đa Hà Nội Đã tạo điều kiện cho chúng em có kinh nghiệm thực tế, với kiến thức học em viết thành thu hoạch Vì kiến thức nhiều hạn chế nên thu hoạch khơng thể tránh khỏi thiếu sót Nên em mong thầy góp ý chỉnh sửa để thu hoạch em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 20 Sinh viên thực Nguyễn Đức Chính MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC TIÊU HỌC TẬP SƠ ĐỒ TỔ CHỨC NHÂN SỰ KHOA VI SINH BỆNH VIỆN ĐỐNG ĐA .2 NỘI DUNG TRÌNH BÀY I Quy trình hoạt động chun mơn khoa .3 II Trang thiết bị phận: III Quy trình nhận, trả kết xét nghiệm Quy trình nhận bệnh phẩm Quy trình trả kết quả: III Quy trình số kỹ thuật xét nghiệm thường dùng: Xét nghiệm huyết học HBsAg/HBeAg SD Bioline test nhanh: .6 Xét nghiệm huyết học Dengue NS1 Dengue IgG/IgM: Xét nghiệm HCV Ab test nhanh: Xét nghiệm Rapid TP (giang mai): .8 Xét nghiệm SD Bioline Rapid TB (Lao) Soi phân tươi .10 Quy trình chạy mẫu Procalcitonin 11 Soi cặn nước tiểu 11 Xét nghiệm da, tóc, móng tìm nấm 12 10 Xét nghiệm AFB nhuộm Ziehl-Neelsen (đờm) 13 11 Nhuộm Gram: Xét nghiệm phân tìm cặn dư; Xét nghiệm bệnh phẩm đường sinh dục, Nhuộm loại dịch 13 IV Một số kỹ thuật nuôi cấy 14 Cấy môi trường thạch đĩa: 14 Quy trình cấy máu: 15 Quy trình định danh vi khuẩn bang máy tự động (làm KSĐ) 15 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng MỤC TIÊU HỌC TẬP Nắm cáá́ch tổ chức,quản lý phòng xét nghiệm,nắm cơng việc xét nghiệm khoa, số nguyên vi sinh vật thường gặp,… Vận dụng kiến thức khoa học bản, y học sở, nguyên lý kỹ thuật kiến thức chuyên ngàà̀nh để giải độc lập sáá́ng tạo vấn đề thuộc ngành kỹ thuật Xét nghiệm y học Vận dụng cáá́c nguyên lý, quy tắc, quy trình vận hàà̀nh, bảo quản, bảo dưỡng số trang thiết bị thuộc ngành xét nghiệm y học Thực thành thạo kỹ thuật xét nghiệm lâm sàng thông thường ứng dụng kỹ thuật khoa Thực hiện, kiểm tra giám sát quy tắc vơ khuẩn,quy định sử dung hóa chất,sinh phẩm chun dụng an tồn sinh học phòng xét nghiệm Thực biện pháp đảm bảo chất lượng kiểm tra chất lượng xét nghiệm Học tập kỹ giao tiếp, ứng xử bệnh nhân Có nhiều kinh nghiệm hiểu biết phục vụ cơng việc sau SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng SƠ ĐỒ TỔ CHỨC NHÂN SỰ KHOA VI SINH BỆNH VIỆN ĐỐNG ĐA TRƯỞNG KHOA Bs Trương Minh Huy PHÒNG HIV PHÒNG HÀNH CHÍNH PHÓ KHOA KTV TRƯỞNG Ths Nguyễn Cơng Thịnh KTV Nguyễn Thị Nhung Bích PHÒNG PCR PHÒNG KST PHÒNG VK Bs Lê Thị Ngọc KTV Nguyễn Thị Thúy KTV Chu Thị Chanh PHÒNG HUYẾT THANH-MIỄN DỊCH PHÒNG DỤNG CỤ KTV Lê Kim Oanh Hộ Lý Nguyễn Thị Ngừng SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng NỘI DUNG TRÌNH BÀY I Quy trình hoạt động chuyên môn của khoa Tiếp nhận mẫu bệnh phẩm tại tổ lấy mẫu hoặc lấy mẫu trực tiếp tại khoa vi sinh (kiểm tra thông tin bệnh nhân phiếu định bệnh phẩm, đảm bảo số lượng chất lượng bệnh phẩm trước thực xét nghiệm.Trường hợp phát sai sót cần báá́o lại để giải kịp thời ) Xử lý bệnh phẩm Sau tiếp nhận mẫu bệnh phẩm,lưu lại vào sổ nhận bệnh phẩm,các thông tin bệnh phẩm, tiến hành xử lý theo yêu cầu từng loại bệnh phẩm(ly tâm,bảo quản, lưu trữ, ) Tiến hành kỹ thuật xét nghiệm Thực kỹ thuật xét nghiệm theo quy trình xét nghiệm khoa vi sinh ( đảm bảo xácvề thao tác thời gian thực kỹ thuật từng loại xéá́t nghiệm) Đọc kết qua Đọc giải thích kết theo tiêu kỹ thuật,nếu kết bất thường cần báo lại để tìm nguyên nhân hướng giải phù hợp Xác nhận tra kết qua Sau lãnh đạo ký xác nhận đóng dấu phiếu kết ,tiến hành phân loại kết theo khoa phòng gửi yêu cầu, vàà̀o sổ trả kết giao kết xét nghiệm SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng II Trang thiết bị tại phận: Phòng vi khuẩn: - Tủ ATSH cấp - Máy định danh vi khuẩn - Máy cấy máu tự động BACT/ALERT 3D-60 - Kính hiển vi - Máy tính nhận in kết - Máy đếm tế bào CD4-CyFlow SL3 - Máy ly tâm Khu vực làm test Khu vực nhuộm bệnh phẩm Phòng HIV: - Máy định lượng Procalcitonin - Khu vực làm test HIV Ngoài khu vực để thiết bị như: - Tủ ấm - Tủ sấy - Tủ bảo quản môi trường - Tủ lạnh lưu mẫu bệnh phẩm Phòng rửa dụng cụ III Quy trình nhận, tra kết qua xét nghiệm Quy trình nhận bệnh phẩm 1.1 Đối với bệnh nhân lấy bệnh phẩm phòng lấy mẫu - Kiểm tra thông tin bện nhân: tên tuổi mã bệnh nhân (nếu chưa có mã hướng dẫn bệnh nhân dán mã) - Lấy bệnh phẩm: + Với xét nghiệm đờm: Ghi thông tin bệnh nhân lên ống/dụng cụ lấy bệnh phẩm, giải thích qui trình Hướng dẫn bệnh nhân: cho bệnh nhân súc miệng sạch, không súc miệng nước súc miệng có chất sát trùng, bệnh nhân hít sâu cố khạc đờm ra, khạc vào lọ vô trùng rộng miệng nắp chặt, tránh lẫn nước bọt + Với xét nghiệm cần lấy bệnh phẩm dịch niệu đạo: Rửa tay xà phòng, lau khơ tay, kéo bao quy đẩu phía sau, dùng cồn 70 lau da quy đầu đợi khô, bệnh nhân vuốt nhẹ dương vật lên để có giọt mủ thấm lên lam kính SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMơn: Vi Sinh – Ký sinh trùng + Với xét nghiệm làm test Cúm: lấy bệnh phẩm họng miệng/họng mũi Kỹ thuật lấy bệnh phẩm họng miệng:ghi thông tin bệnh nhân lên tube chứa buffer làm test, giải thích cho bệnh nhân kỹ thuật thực hiện, cho bệnh nhân ngồi xuống ghế, đầu ngửa sau, mở to miệng (với trẻ em < tuổi người nhà ẵm ngửa bé), đưa tăm vô trùng quyệt vào thành sau họng hai bên amidan tránh chạm vào mặt má, lưỡi, răng, lưỡi gà gây kích thích phản xạ nôn, đưa tăm vào tube chuẩn bị chuyển vào phòng test, cắm test đọc kết sau 10 - 15 phút Kỹ thuật lấy bệnh phẩm họng mũi: ghi thông tin bệnh nhân lên tube chứa buffer làm test, giải thích cho bệnh nhân kỹ thuật thực hiện, cho bệnh nhân ngồi cao tầm ngực, ngửa đầu sau khoảng 45 (đối với trẻ nhỏ người lớn bế ngồi lên đùi, kẹp chặt hai chân trẻ vào đùi người bế, tay giữ hai tay, tay ôm lấy chán ghỉ chặt vào ngực mình), tay giữ cằm cố định, tay đưa tăm qua lỗ mũi bệnh nhân hướng chếch xuống dưới, đưa tăm bơng ngập vào khoảng ½ từ dái tai đến cánh mũi, xoay nhẹ tăm - lần để dịch ngấm vào tăm từ từ rút ra, cho tăm vào tube chuẩn bị chuyển vào phòng làm test, cắm test đọc kết sau 10-15 phút + Với xét nghiệm soi tươi nấm da, tóc, móng, nấm lưỡi, nấm mắt…: Chuẩn bị lam kính ghi mã bệnh nhân, giải thích quy trình cho bệnh nhân, dùng dao cạo chuyên biệt cạo vị trí nghi ngờ nấm, cho lên lam kính, nhỏ KOH 30% lên lam kính, đậy lamen soi tiêu sau 30 phút Vào sổ xét nghiệm: đóng dấu, ghi giờ, ngày nhận, kiểm tra xét nghiệm, phân loại xét nghiệm nhập vào máy tính 1.2 Đối với bệnh nhân trực tiếp đến khoa vi sinh: - Kiểm tra thơng tin hành chính: tên, tuổi, mã bệnh nhân, khoa phòng mẫu bệnh phẩm phiếu định có khớp khơng - Kiểm tra chất lượng, số lượng mẫu bệnh phẩm: quan sát đánh giá đại thể Đối với bệnh phẩm máu, quan sát có chất chống đơng hay chưa (chất chống đơng ETDA dùng định lượng HBV), thể tích, có bị đông dây không Đối với bệnh phẩm đờm có bị lẫn nước bọt khơng, có nhày mủ khơng… - Nếu khơng đạt bước trả lại bệnh phẩm Với bệnh phẩm máu sau ly tâm có vỡ hồng cầu u cầu lấy lại bệnh phẩm Các loại bệnh phẩm phải đựng dụng cụ đóng nắp, vận chuyển hộp có nắp - Vào sổ xét nghiệm: đóng dấu, ghi giờ, ngày nhận - Nhập phiếu xét nghiệm vào máy tính Quy trình tra kết qua: - Kết test nhanh làm trực tiếp trả sau 1h - Kết Nấm trả sau 3h SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng - Kết xét nghiệm AFB đờm: Bệnh phẩm nhận trước 10h sáng trả vào 15h30 phút ngày Nhận sau 10h trả vào 15h30 ngày hôm sau - Kết nuôi cấy, định danh làm kháng sinh đồ trả sau 2-3 ngày - Cấy máu trả kết âm tính sau ngày, dương tính định danh - Viêm gan B trả lần/ tuần - Viêm gan C trả lần/tuần - Kết Miễn dịch trả 15h30 ngày hơm đó, bệnh phẩm nhận sau 11h30 trả vào 15h30 ngày hôm sau * Lưu ý: - Bệnh phẩm lấy vị trí nghi ngờ nhiễm trùng - Bệnh phẩm làm sinh học phân tử bảo quản lưu trữ -20℃ chưa tiến hành làm III Quy trình số kỹ thuật xét nghiệm thường dùng: Xét nghiệm huyết học HBsAg/HBeAg SD Bioline test nhanh: * Nguyên tắc nguyên lý: Dựa nguyên lý sắc ký miễn dịch invitro, bước định tính HbsAg huyết huyết tương.khay xét nghiệm có màng dược gắn trước với kháng thể đơn dòng kháng HbsAg từ chuẩn mẫu huyết dịch chuyển sắc ký kháng thử (T) tạo thành vạch nhìn thấy, di kết hợp kháng thể - kháng nguyên kháng thể * Chuẩn bị: - Bệnh phẩm - Thanh test - Đầu côn * Tiến hành: - Xé bao bảo vệ xét nghiệm, ghi mã tên bệnh nhân - Nhỏ 100 mẫu huyết huyết tương vào vùng nhỏ mẫu phẩm (S) - Đợi tối thiểu 20 phút đọc kết vùng (T) * Diễn giải báo cáo kết quả: - Âm tính: vạch đỏ xuất vùng đọc chứng (C) khơng có vạch đỏ xuất vùng đọc kết bệnh nhân (T) - Dương tính có vạch đỏ xuất vùng đọc chứng (C) vùng đọc kết bệnh nhân (T) * Giá trị báo động: kết giá trị (khơng vạch): khơng có vạch đỏ xuất vùng đọc chứng (C) dù có vạch đỏ vùng đọc kết bệnh nhân (T) Kết khơng có giá trị cần phải thử lại mẫu phẩm SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng * Lưu ý: Xét nghiệm cần thực vòng 02 sau xé lớp phủ bảo vệ từng xét nghiệm Xét nghiệm huyết học Dengue NS1 Dengue IgG/IgM: * Nguyên lý nguyên tắc: Dựa nguyên lý sắc ký miễn dịch phát kháng nguyên Ns1 kháng thể IgG/IgM khang nguyên Ns1 phát sau ngày bị sốt, giai đoạn cửa sổ * Chuẩn bị: Dụng cụ, bệnh phẩm, test thử, đầu côn pipet tự động, khay đựng ống nghiệm * Tiến hành: - Lấy test XN khỏi túi đựng đặt lên mặt khô, phẳng - Test Dengue NS1: Dùng pipet nhỏ 100µl huyết thanh, huyết tương vào giếng mẫu thử (S) - Test IgG/IgM: Dùng pipet nhỏ 10µl huyết thanh, huyết tương vào giếng mẫu thử (S) - Nhỏ them giọt dung dịch đệm vào giếng mẫu thử (S) test Dengue IgG/IgM - Đọc kết cửa sổ vạch (T) với test Dengue NS1 đọc kết cửa sổ vạch (G) (M) với test Dengue IgG/IgM - Đọc kết vòng 15-20 phút * Diễn giải báo cáo kết quả: - Âm tính: Chỉ vạch màu hồng (C) cửa sổ đọc kết quả, nhận định kết âm tính - Dương tính test Dengue NS1: Xuất vạch màu vị trí (T) (C) cửa sổ kết vạch xuất trước - Dương tính test Dengue IgG/IgM: Xuất vạch màu vị trí (M) (C) chúng tỏ có nhiễm Dengue tiên phát Xuất vạch màu vị trí (M) (C) chúng tỏ có nhiễm Dengue thứ phát Xuất vạch màu vị trí (M),(G) (C) dương tính kháng thể IgM IgG chứng tỏ có nhiễm virus Dengue tiên phát muộn thứ phát sớm * Giá trị báo động: Kết khơng có giá trị vạch (C) khơng xuất vạch màu Lượng mẫu không đủ kỹ thuật thực sai làm vạch chứng không xuất Phải làm xét nghiệm dụng cụ xét nghiệm Xét nghiệm HCV Ab test nhanh: SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng * Nguyên tắc nguyên lý: Dựa theo nguyên lý sắc ký miễn dịch (nhanh)để phát định tính kháng thể đặc hiệu với HCV huyết huyết tương máu toàn phần * Chuẩn bị: - Dụng cụ bệnh phẩm (huyết huyết tương bệnh nhân) - Đầu côn - Pipet tự động - Giá đựng test - Test làm * Tiến hành: - Lấy test XN khỏi túi đựng đặt lên mặt khơ, phẳng - Dùng pipet nhỏ 10µl huyết huyết tương máu toàn phần vào giếng thử (S) - Nhỏ them giọt dung dịch đệm vào giếng mẫu thử (S) - Ngay sau nhỏ mẫu thử, thấy màu hồng di chuyển đến cửa sổ đọc kết nằm phần dụng cụ xét nghiệm - Đọc kết vòng 10-20 phút * Diễn giảivà báo cáo kết quả: - Âm tính: Chỉ xuất vạch màu hồng (C) cửa sổ đọc kết nhận định âm tính - Dương tính: xuất vạch màu hồng (T) vad (C) cửa sổ đọc kết quả, không kể đến vạch xuất trước, kết nhận định dương tính * Giá trị báo động: Nếu khơng có vạch màu hồng (C) cửa sổ đọc kết sau tiến hành xong trình xét nghiệm kết coi khơng có giá trị Mẫu thử cần xét nghiệm lại dụng cụ * Kết khơng có giá trị cần phải thử lại mẫu phẩm Xét nghiệm Rapid TP (giang mai): * Nguyên tắc nguyên lý: Dựa nguyên lý phản ứng ngưng kết Tế bào (hồng cầu) gắn kháng nguyên xoắn khuẩn giang mai, cho tiếp xúc huyết (huyết tương) người bệnh giang mai bị ngưng kết * Chuẩn bị: - Bệnh phẩm - Test nhanh - Khay đựng SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMơn: Vi Sinh – Ký sinh trùng - Ớng hút * Tiến hành: - Lấy dụng cụ xét nghiệm khỏi túi đựng đặt lên mặt bàn khô, phẳng - Dùng pipet nhỏ 10µl huyets vào giếng (S) - Nhỏ thêm giọt dung môi vào giếng (S) - Ngay sau nhỏ mẫu thử, thấy màu hồng di chuyển đến cửa sổ đọc kết nằm dụng cụ xét nghiệm - Đọc kết vong 10-20 phút * Diễn giải báo cáo kết quả: - Âm tính: Chỉ vạch màu hồng cửa sổ đọc kết nhận định âm tính - Dương tính: Hiển thị vạch màu hồng vùng cửa sổ đọc kết (T) vùng (C), kết nhận định dương tính * Giá trị báo động: - Kết khơng có giá trị khơng xuất vạch màu hồng cửa sổ đọc kết (C) sau tiến hành xong trình xét nghiệm (vạch chứng) Mẫu thử cần xét nghiệm lại tên test - Kết qủa khơng có giá trị đọc kết thời gian cho phép (20 phút) Xét nghiệm SD Bioline Rapid TB (Lao) * Nguyên tắc nguyên lý: Test nhanh chẩn đoán bệnh lao để phát định tính kháng thể trực khuẩn mycobacterium * Chuẩn bị: - Bệnh phẩm - Test nhanh - Khay đựng - Ống hút * Tiến hành: - Lấy dụng cụ xét nghiệm khỏi túi đựng đặt lên mặt khơ, phẳng - Dùng pipet nhỏ 100µl huyết vào giếng mẫu thử (S) - Ngay sau nhỏ mẫu thử, thấy màu hồng di chuyển đến sổ đọc kết nằm dụng cụ xét nghiệm - Đọc kết sau 15 phút * Diễn giải kết báo cáo: - Âm tính: Chỉ hiển diện vạch màu hồng (C) cửa sổ đọc kết quả, kết nhận ddihj âm tính SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 10 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng - Dương tính: diện vạch màu hồng vùng T C cửa sổ đọc kết nhận định dương tính * Giá trị báo động: kết khơng có giá trị: - Nếu không xuất vạch màu hồng (C) cửa sổ đọc kết sau tiến hành xong trình xét nghiệm kết coi khơng có giá trị Ngun nhân thực không theo hướng dẫn, dựng cụ xét nghiệm bị hỏng hạn dùng Mẫu thử cần xét nghiệm lại dụng cụ - Kết khơng có giá trị cần phải thử lại mẫu phẩm - Nếu vạch chứng không chuyển thành màu hồng xét nghiệm hồn tất, kết xét nghueemj khơng có giá trị mẫu phẩm cần phải thử lại Soi phân tươi * Nguyên tắc nguyên lý: Tìm yếu tố bất thường phân sử dụng kính hiển vi quang học * Chuẩn bị: - Lam kinh - La men - Khay đựng bệnh phẩm - Nước muối sinh lý - Que lấy phân - Kính hiển vi - Bệnh phẩm * Tiến hành: - So tên tuối bệnh nhân lọ phân với giấy định - Ghi mã số, tên bệnh nhân lên lam kính - Nhỏ giọt nước muối sinh lý lên lam - Lấy que lấy phân, ta lấy bừng hạt đậu nhỏ hòa vào nước muối sinh lý lam kinh - Đậy la men soi vật kính 40 * Đọc nhận định kết quả: - Khảo sát: Có (+) mức độ (+)/(++)/(+++) , khơng có (-) vào bảng tùy từng mức độ đánh giá nhiều hay ta tính tốn để đánh giá theo số: Hồng cầu Bạch cầu Sợi SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 11 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMơn: Vi Sinh – Ký sinh trùng Hạt mỡ Amip Giardia Trichomonas Blastocysts Nấm men Quy trình chạy mẫu Procalcitonin * Chuẩn bị mẫu: - Đưa hóa chất vào máy cho kim nhựa hút mẫu vào phận nhận kim tương ứng với vị trí hóa chất (thứ tự từ 1-6 : từ trái qua phải) - Cho 200µl huyết tương huyết BN vào giếng hóa chất (gần tay cầm) * Chạy mẫu: - Từ hình chọn Startus Screen Chọn B Available - Muốn chạy hóa chất vị trí chọn số tương ứng với hình (chọn số 1) - Chọn Assay máy chọn PCT Select Assay - Chọn Sample ID - Ấn chọn test XN = mũi tên thân quét mã vạch thân máy lần - Ấn số thân máy potition only chọn Assay chọn Clear chọn Clear this - Ấn phím trắng thân máy lần - Chọn Start Soi cặn nước tiểu * Kiểm tra thông tin bệnh phẩm giấy định - Quan sát lượng tính chất bệnh phẩm (trong/đục, có máu, mủ, ) - Ly tâm 2500 vòng/ phút phút lấy cặn Đổ bỏ phần dịch phía - Ghi thơng tin bệnh nhân lên lam kính - Đổ cặn lam dùng đũa thủy tinh hớt cặn lam kính - Đậy lamen * Chú ý: Đậy tránh tạo bọt - Soi kính hiển vi vật kính x40 đọc kết SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 12 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMơn: Vi Sinh – Ký sinh trùng - Trả kết quả: Đánh giá mức độ (-)/ (+)/ (++)/ (+++) + Hồng cầu + Bạch cầu + Nấm + Trụ niệu: trụ trong, trụ mỡ, trụ hạt, trụ xơ, trụ sáp,… Tinh thể: Calci oxalate (hay gặp), calci sulphate, calci carbonate, cặn phosphate, acid uric, amonia urate, phosphate tricalci,… Xét nghiệm da, tóc, móng tìm nấm * Lấy bệnh phẩm: - Lấy bệnh phẩm da: + Cạo vẩy da rìa thương tổn Cạo nhiều vị trí + Cạo từ thương tổn da lành để lấy vẩy ranh giới da bệnh da lành, cho vẩy da rơi lên tiêu vào đĩa petri vô khuẩn + Lấy vẩy da vẩy tiết + Không cạo bệnh phẩm thương tổn cấp tính: chàm cấp, bội nhiễm - Lấy bệnh phẩm móng: + Nếu thương tổn móng đầy mủn bờ tự do: dùng dao, kéo cạo cắt lớp sừng mủn móng + Nếu thương tổn móng tách móng bàn móng dùng dao nhọn cạo chất sừng mủn móng + Nếu viêm quanh móng: Cạo vẩy da rãnh quanh móng - Cho lớp sừng vào tiêu * Kỹ thuật làm tiêu bản: - Nhỏ 1- giọt KOH 10-30% lên tiêu Đậy lamen - Để 15- 30 phút để bệnh phẩm ngấm KOH, muốn quan sát hơ nóng lửa đèn cồn - Soi kính hiển vi vật kính 10x 40x * Chú ý: Trước soi nên dàn mỏng tiêu Sử dụng vật kính 10 xác định vi trường xem sơ bộ, sau dùng vật kính 40 để nhận định * Ghi kết vào phiếu XN * Xử lý dụng cụ, bệnh phẩm * Nhận định kết quả: - Nấm xám: Thường gặp lòng bàn tay, sợi nấm có vách ngăn, ngắn chia nhanh, bắt màu tối SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 13 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng - Nấm da: Thấy sợi nấm suốt, có vách ngăn, thấy bào tử đốt - Nấm lang ben: Thấy sợi nấm thô, ngắn giống sợi miến vụn đám tế bào tròn dạng hình túi trứng cóc - Nấm tóc: + Thấy sợi bào tử nấm lòng sợi tóc (Endothrix): Phát nội + Thấy sợi bào tử nấm nằm quanh sợi tóc (Ectothrix): Phát ngoại * Một số yếu tố có liên quan đến kết xét nghiệm - Bệnh phẩm: trước làm xét nghiệm bệnh nhân phải ngừng thuốc điều trị kháng nấm - tuần - Nếu khơng ngừng thuốc nấm tạm thời “biến mất”, “thể lặn” làm cho kỹ thuật viên tìm khơng - Các thuốc mỡ tồn da khiến vi trường có nhiều hạt mỡ khó xem, làm cản trở tầm nhìn người quan sát - Các thuốc màu làm cho da bị nhuộm màu xanh hay tím, đỏ, làm che khuất cấu trúc vi nấm - Người KTV soi phải có định hướng sở tóm tắt lâm sàng 10 Xét nghiệm AFB nhuộm Ziehl-Neelsen (đờm) * Nguyên tắc nguyên lý: Nhuộm soi trực khuẩn lao bắt màu tiêu * Chuẩn bị: + Dụng cụ: Lam kính, que cấy giá nhuộm, cồn + Hóa chất: Thuốc nhuộm Ziehl-Neelsen + Bệnh phẩm: Đờm * Tiến hành: - Dàn tiêu bản: + Phủ đầy dung dịch carbon Fuchsin lên bề mặt tiêu + Hơ nóng bốc hơi, để phút (chú ý không để thuốc nhuộm sôi khô) + Rửa dung dịch carbon Fuchsin nước - Tẩy màu: + Phủ đầy dung dịch cồn axit lên bề mặt tiêu Để phút + Rửa nước cồn axit - Nhuộm nền: + Phủ dung dịch xanh methylene 0.3% lên tiêu Để phút + Rửa thuốc nhuộm để khơ tiêu nhiệt độ phòng SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 14 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMơn: Vi Sinh – Ký sinh trùng + Để khô tiêu nhiệt độ phòng * Diễn giải nhận định kết quả: Kết Số lượng AFB Âm tính Khơng thấy AFB 100 vi trường Dương tính: Cụ thể số lượng - AFB 100 vi trường 1+ 10 – 99 AFB 100 vi trường 2+ - 10 AFB vi trường, đọc 50 vi trường 3+ >10 AFB/1 vi trường, đọc 20 vi trường Các vi khuẩn khác bắt mầu xanh 11 Nhuộm Gram: Xét nghiệm phân tìm cặn dư; Xét nghiệm bệnh phẩm đường sinh dục, Nhuộm loại dịch * Nguyên lý: Dựa khác cấu trúc vách tế bào nên trình nhuộm Gram, vi khuẩn Gram dương giữ phức hợp tím gentians-iod khơng bị tẩy màu alcohol, vi khuẩn Gram âm không giữ phức hợp Do vậy, kết sau nhuộm vi khuẩn Gram dương giữ màu tím gentians, vi khuẩn Gram âm bắt màu hồng fucshin * Chuẩn bị: - Dụng cụ: Lam kính sạch, que cấy, đèn cồn, giá nhuộm, bocan, kính hiển vi - Hóa chất: + Dung dịch tím gentians + Dung dịch Lugol + Dung dịch cồn 90o + Dung dịch fucshin - Bệnh phẩm * Các bước tiến hành: - Dàn bệnh phẩm: Làm phết mỏng bệnh phẩm vi khuẩn lên lam kính, để khơ tự nhiên sau cố định tiêu cách hơ qua lửa đèn cồn lần (chú ý không hơ nóng q để tránh ánh hưởng đến hình dạng vi khuẩn) - Kỹ thuật nhuộm: + Đặt lam lên giá nhuộm, phủ dung dịch Carbolic Gentian Violet (tím gentian) phủ lên lam kính, để yên phút sau đổ thuốc nhuộm rửa lam vòi nước chảy nhẹ SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 15 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng + Đặt lại lam lên giá nhuộm, phủ dung dịch Lugol,PVP-Stabilized Solution lên lam kính, để yên 30 giây đến phút sau đổ dung dịch Lugol rửa lam vòi nước chảy nhẹ + Tẩy màu cách nhỏ dung dịch Fast Differentiaton (cồn - aceton) lên góc lam kính, tẩy khơng thấy màu tím thơi dừng lại, rửa lam vòi nước chảy nhẹ + Để lam lại giá nhuộm, phủ dung dịch Ziehl Carbolic Fuchsin 1/10 lên tiêu bản, để yên phút Đổ thuốc nhuộm rửa lam vòi nước chảy nhẹ + Để lam khơ sau quan sát hình thể vi khuẩn độ phóng đại khác * Đọc nhận định kết qua - Vi khuẩn gram (+) bắt màu tím - Vi khuẩn gram (-) bắt màu hồng đỏ - Quan sát vật kính dầu 100x - Với bệnh phẩm dịch đường sinh dục thường gặp lậu cầu (Neisseria gonorrhoeae): Vi khuẩn hình hạt cà phê, đứng thành đôi, gram âm, nằm tế bào bạch cầu, đơi lúc nằm ngồi bạch cầu - Với xét nghiệm tìm cặn dư phân đánh giá tỷ lệ vi khuẩn chí IV Một số kỹ thuật ni cấy Cấy môi trường thạch đĩa: * Cấy chuyển từ ống máu vào môi trường thạch máu: Mẫu 1625 ngày 02/12/2019 - Lấy bơm kim tiêm chọc vào ống máu hút lượng nhỏ máu vào bơm rút bơm vào đĩa thạch máu lượng nhỏ - Sau bơm lam kính lượng nhỏ rỗi dàn để nhuộm soi - Dùng que cấy có đầu ăng hơ lửa để tiệt khuẩn - Cấy phân vùng đĩa thạch máu cho máu vào: + Dùng que cấy ria qua nơi đặt mẫu tạo vùng nguyên thủy khoảng 1/3 đĩa môi trường + Sau ria vùng thứ Đường cấy vùng thứ chạm vào đường cấy thứ từ 2-3 đường cấy + Đường cấy vùng thứ chạm vào đường cấy vùng thứ từ 2-3 đường cấy * Lưu ý: Vùng thứ vùng tạo khuẩn lạc riêng rẽ - Sau đem lam kính nhuộm gram SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 16 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng - Sau cấy xong mang đĩa thạch máu để vào tủ ấm Ngày hôm sau mang đĩa cấy đọc kết Quy trình cấy máu: - Lấy máu tĩnh mạch phương pháp vô trùng (sát trùng da cồn 70o để khô chọc kim lấy máu) - Thể tích máu đưuọc lấy để chấy nên chiếm 1/10 hay tối đa 1/5 thể tích mơi trường cấy máu Thông thường lấy 3-10ml máu để cấy vào mơi trường cấy máu tích 50ml.Đối với trường hợp bệnh nhân trẻ em lấy 2-3ml máu để cấy tích 50ml * Quy trình cấy máu máy cấy máu tự động BACT/ALERT 3D-60: - Chuẩn bị chai cấy máu chứa bệnh phẩm để kiểm tra: + Chuẩn bị mẫu bệnh phẩm: Máu, dịch não tủy, dịch vô khuẩn khác thể + Lấy chai cấy máu, mở nắp chai, sát trùng đầu chai + Lấy máu tĩnh mạch dịch vô khuẩn khác vào xy lanh, sau cắm vào chai cấy máu, chai tự hút dịch từ xy lanh vào chai - Chú ý: Người lớn lấy khoảng 5ml-10ml máu, trẻ em khoảng 4ml - Nhập chai cấy máu vào máy - Nhấn vào biểu tượng chai cấy máu - Quét mã vạch chai cấy máu (Barcode Scanner) - Nhập thông tin bệnh nhân họ, tên, tuổi, khoa điều trị - Nhập họ tên nhân viên cấy máu - Cho chai cấy máu vào lỗ có đèn vàng - Nhấn biểu tượng v - Đóng cửa máy lại để hồn tất việc đưa chai cấy máu vào máy BTA 3D-60 Quy trình định danh vi khuẩn bang máy tự động (làm KSĐ) - B1: Lấy tuýp vô trùng hang cung cấp đặt vào khay quy định (Nếu chạy ĐDVK lấy tuýp, Nếu chạy ĐDVK KSĐ lấy tuýp) - B2: Cho 0.5 ml NaCl 0.45% vào tuýp 1- ĐDVK, nghiền khuẩn lạc cần định danh lắc để tạo hỗn dịch vi khuẩn - B3: Vặn tháo nút đỏ bình nước muối vơ trùng, nhấc tay cầm chia lên cao đến 3ml, đẩy nhẹ chia xuống để phân phối nước muối vào tuýp - B4: So sánh mẫu bệnh phẩm với độ đục chuẩn máy đo độ đục DensiCheck * Kỹ thuật đo máy đo độ đục DensiCheck: SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 17 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng Trước làm đo mẫu bệnh phẩm, cần đo chuẩn không cách bấm nút Power on, đưa tuýp nước muối (chưa pha vi khuẩn) vào máy bấm số Để đo huyền dịch, đưa tuýp nước muối vào máy xoay vòng, ấn nút màu xanh Điều chỉnh độ đục hỗn dịch VK cho đạt 0.55-0.65 - B5: Làm KSĐ hút 145µl với VK gram (-) pipet màu đỏ, 280µl với VK gram (+) pipet màu xanh hỗn dịch vi khuẩn chuyển sang tuýp làm KSĐ (tuýp có 3ml NaCl 0.45%) - B6: Lấy card làm ĐDVK cắm vào ống 1, card làm KSĐ cắm vào ống theo loại VK cần xác định GP với VK gram (+), GN với VK gram (-), AST-GP: KSĐ VK gram (+), AST-GN: KSĐ VK gram (-) * Chú ý: Để đảm bảo vô trùng, xé bao bì lấy card, khơng chạm tay vào vòi hút card Cắm card vào giá đỡ có tuýp đựng hỗn dịch vi khuẩn pha loãng cho vòi hút card ngập vào phần hỗn dịch vi khuẩn tuýp - B7: Đưa khay bệnh phẩm vào buồng hút phía trên, trái, đóng cửa lại nhấn nút Start Fill để máy hút hỗn dịch vi khuẩn Khi máy báo Complete hút xong Mở cửa buồng vaanh hành phía dưới, phải chuyển khay bệnh phẩm từ buồng hút bệnh phẩm xuống buồng vận hành * Lưu ý: Trong 10 phút phải vận chuyển khay bệnh phẩm từ buồng hút xuống buồng vận hành, 10 phút, mẫu bị hủy - B8: Buồng vận hành hoạt động khoảng phút Khi xuất Remove cửa buồng vận hành đưa khay bệnh phẩm ngồi đóng cửa buồng lại (Trong q trình vận hành tuyệt đối khơng hở cửa nào, khơng kết bị hủy) SVTH: Nguyễn Đức Chính Page 18 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc GIẤY XÁC NHẬN THỰC TẬP Họ tên sinh viên: Nguyễn Đức Chính Ngày sinh: 20/02/1989 Lớp: Cao đẳng liên thông Xét nghiệm Trường: Cao đẳng y tế Hà Nội Được giới thiệu Trường Cao đẳng y tế Hà Nội, thời gian từ ngày 25/11/2019 đến ngày 20/12/2019 em thực tập lâm sàng tốt nghiệp Khoa Vi Sinh Bệnh viện đa khoa Đống Đa, Hà Nội Trong trình thực tập tốt nghiệp, em cốá́ gắng thực tốt nội quy, quy định bệnh viện Khoa Vi Sinh - Bệnh viện đa khoa Đống Đa Đã biết thực số quy trìnhá́ kỹ thuật thông thường; Biết sử dụng, bảo quản trang thiết bị dụng cụ; Biết nhận định đọc kết số thủ thuật test HIV, HCV, HBsAg, HBeAg, Lao… Cải thiện khả giao tiếp với bệnh nhân cán viện Theo yêu cầu nhà trường, để đánh giá trình thực tập kính mong Khoa Vi Sinh, Ban lãnh đạo Bệnh viện đa khoa Đống Đa xác nhận nhận xét trình thực tập em bệnh viện Em xin chân thành cảm ơn! XÁC NHẬN CƠ SỞ THỰC TẬP ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Hà Nội, ngày tháng Đơn vị thực tập năm 20 ... nghiệm hiểu biết phục vụ cơng vi c sau SVTH: Nguyễn Đức Chính Page Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng SƠ ĐỒ TỔ CHỨC NHÂN SỰ KHOA VI SINH BỆNH VI ̣N ĐỐNG ĐA TRƯỞNG KHOA... em thực tập lâm sàng tốt nghiệp Khoa Vi Sinh Bệnh vi n đa khoa Đống Đa, Hà Nội Trong trình thực tập tốt nghiệp, em cốá́ gắng thực tốt nội quy, quy định bệnh vi n Khoa Vi Sinh - Bệnh vi n đa khoa... KSĐ) 15 Báo cáo thực tập tốt nghiệpMôn: Vi Sinh – Ký sinh trùng MỤC TIÊU HỌC TẬP Nắm cáá́ch tổ chức,quản lý phòng xét nghiệm,nắm cơng vi c xét nghiệm khoa, số nguyên vi sinh vật thường