Bài viết bước đầu đánh giá hiệu quả triển khai kỹ thuật tế bào dòng chảy trong việc chẩn đoán, phân loại các bệnh lý huyết học ác tính tại bệnh viện Huyết học – Truyền máu thành phố Cần Thơ.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6* 2019 BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ TRIỂN KHAI KỸ THUẬT TẾ BÀO DÒNG CHẢY (FLOW CYTOMETRY) TẠI BỆNH VIỆN HUYẾT HỌC – TRUYỀN MÁU THÀNH PHỐ CẦN THƠ Lâm Hoàng Xuyên*, Phạm Văn Nghĩa*, Nguyễn Anh Tữ*, Nguyễn Xuân Việt* TÓM TẮT Mục tiêu: bước đầu đánh giá hiệu triển khai kỹ thuật tế bào dòng chảy việc chẩn đốn, phân loại bệnh lý huyết học ác tính bệnh viện Huyết học – Truyền máu thành phố Cần Thơ Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu cắt ngang hồi cứu bệnh nhân nghi ngờ mắc bệnh lý huyết học ác tính có định xét nghiệm tế bào dòng chảy hình thái học (huyết đồ, tủy đồ) bệnh viện Huyết học – Truyền máu thành phố Cần Thơ từ tháng 1/2018 đến 06/2019 Kết quả: Kỹ thuật tế bào dòng chảy có hiệu chẩn đoán phân loại bệnh lý huyết học ác tính (78,4%) Đa số trường hợp bạch cầu cấp (67,2%) Trong đó: 44,0% bạch cầu cấp dòng tủy, 16,8% bạch cầu cấp dòng lympho B, 6,4% bạch cầu cấp dòng lympho T, 8,0% tăng sinh lympho B trưởng thành bất thường, 2,4% plasmocyte, 0,8% hematogones, 21,6% trường hợp khác Có 11,2% trường hợp khơng tương đồng kết tế bào dòng chảy kết hình thái học Kết luận: Kỹ thuật tế bào dòng chảy trở thành cơng cụ hiệu việc chẩn đoán, phân loại bệnh lý huyết học ác tính bệnh viện Huyết học – Truyền máu thành phố Cần Thơ Việc bổ sung kỹ thuật tế bào dòng chảy giúp việc chẩn đốn bệnh lý huyết học ác tính trở nên xác, hiệu Từ khóa: tế bào dòng chảy, dấu ấn tế bào, bạch cầu cấp ABSTRACT INITIAL EVALUATION OF EFFECTIVENESS OF FLOW CYTOMETRY IN CAN THO HEMATOLOGY – BLOOD TRANSFUSTION HOSPITAL Lam Hoang Xuyen, Pham Van Nghia, Nguyen Anh Tu, Nguyen Xuan Viet * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 396 - 399 Objectives: Can Tho Hematology – Blood Transfusion Hospital is the only hospital in the Mekong Delta that specializes hematology, including treatment of malignant hematologic diseases In the past few years, the diagnosis of malignant hematologic diseases was primarily based on morphology (hemogram and myelogram) However, this technique is limited in some certain cases which had transfered to high level hospitals for reevaluation, causing many difficulties in our work Therefore, flow cytometry has been deployed since 2018, which aims to support the diagnosis and treatment of malignant hematologic diseases We conducted this research to initially evaluate the effectiveness of this method Methods: the retrospective cross-sectional method on patients who have been assigned to take the flow cytometry and morphology tests at Can Tho Hematology – Blood Transfusion Hospital from January 2018 to June 2019 Results: the flow cytometry technique is effective in the diagnosis and analysis of malignant hematologic diseases (78.4%) Acute leukemia is the most item (67.2%) Based on the analysis result: 44.0% acute myeloid leukemia (AML), 16.8% B - acute lymphoblastic leukemia (B-ALL), 6.4% of T- acute lymphoblastic leukemia (TALL), 2.4% of plasmocyte, 0.8% of hematogones, 8.0% of single cell B-lymphocyte proliferation, 21.6% of others There are 11.2% cases of the mismatch report of the flow cytometry and morphology *Bệnh viện Huyết học Truyền máu Cần Thơ Tác giả liên lạc: CN Lâm Hoàng Xuyên ĐT: 09410003642 396 Email: lamhoangxuyen@outlook.com.vn Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Conclusion: The research indicated that the flow cytometry is an effective technique applied in the diagnosis, analysis and treatment of malignant hematologic diseases at Can Tho Hematology – Blood Transfusion Hospital Adding of this technic help diagnosis of malignant hematologic diseases more accurate and effective Key words: correlation between flow cytometry and morphology trưng cho dòng tế bào(2) ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh viện Huyết học – Truyền máu thành phố Cần Thơ bệnh viện chuyên khoa huyết học khu vực đồng sơng Cửu Long chẩn đốn điều trị bệnh lý huyết học ác tính, đặc biệt bệnh viện triển khai hóa trị từ năm 2017 Trước đây, việc chẩn đốn chủ yếu dựa vào hình thái học (huyết đồ, tủy đồ), nhiên, kỹ thuật bị giới hạn nhiều trường hợp nên tỉ lệ chẩn đốn xác khơng cao, phải gửi mẫu lên tuyến để xác định lại, gây khó khăn cho việc chẩn đốn điều trị Kỹ thuật tế bào dòng chảy triển khai từ năm 2018 nhằm hỗ trợ chẩn đoán, theo dõi điều trị bệnh lý huyết học ác tính Chúng tơi tiến hành nghiên cứu nhằm bước đầu đánh giá hiệu triển khai kỹ thuật tế bào dòng chảy việc chẩn đốn, phân loại bệnh lý huyết học ác tính Với mục tiêu cụ thể sau: Khảo sát tỉ lệ chẩn đốn, phân loại bệnh lý huyết học ác tính kỹ thuật tế bào dòng chảy So sánh tương đồng kết tế bào dòng chảy hình thái học (huyết đồ, tủy đồ) ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Tất bệnh nhân nghi ngờ mắc bệnh lý huyết học ác tính có định xét nghiệm tế bào dòng chảy hình thái học (huyết đồ, tủy đồ) bệnh viện Huyết học – Truyền máu thành phố Cần Thơ từ tháng 1/2018 đến 06/2019 Phương pháp nghiên cứu Panel sử dụng cho dòng tủy bao gồm dấu ấn: MPO, cyCD79a, cyCD3, CD45, CD7, CD34, CD19, HLA-DR, CD117, CD15, CD38, CD2, CD36, CD64, CD14, CD4, CD56, CD33, CD13, CD16, CD11b, CD71, CD61(3) Panel sử dụng cho dòng lympho B bao gồm dấu ấn: MPO, cyCD79a, cyCD3, CD45, CD7, CD34, CD19, TdT, CD10, CD20, CD38, CD123, CD13, CD117, Kappa, Lambda(3) Panel sử dụng cho dòng lympho T bao gồm dấu ấn: MPO, cyCD79a, cyCD3, CD45, CD7, CD34, CD19, CD3, CD4, CD8, CD1a, TdT, CD2, CD5, CD10, CD38, CD56, CD117, CD13(3) Panel plasmocyte bao gồm dấu ấn: CD38, CD138, CD19, CD56, Kappa, Lambda(6,8) Các trường hợp phân chia vào nhóm “các trường hợp khác” bao gồm: mẫu tủy lẫn máu, khơng ghi nhận quần thể tế bào ác tính không nhận diện, phân loại quần thể tế bào bất thường, khơng đủ tiêu chuẩn chẩn đốn bạch cầu cấp, … Đặc điểm mẫu, quy trình xử lý, thu thập mẫu sử dụng nghiên cứu Mẫu sử dụng nghiên cứu mẫu tủy máu ngoại vi Hệ thống tế bào sử dụng nghiên cứu: BD FACSVia (4 màu huỳnh quang) KẾT QUẢ Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu Bảng Phân bố đối tượng nghiên cứu theo tuổi Dựa vào kết hình thái học tế bào dòng chảy đối tượng nghiên cứu để thống kê, phân tích tỉ lệ chẩn đốn tương đồng kết hai phương pháp Các trường hợp bạch cầu cấp chẩn đoán blast >20%, quần thể blast mang nhiều dấu ấn non mang dấu ấn đặc Loại mẫu Tủy Máu ngoại vi Tổng Số lượng (n) 91 34 125 Tỷ lệ (%) 72,8 27,2 100,0 Mẫu nghiên cứu mẫu tủy chiếm ưu so với mẫu máu ngoại vi (72,8% so với 27,2%) (Bảng 1) Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 397 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6* 2019 Nghiên cứu Y học Bảng Phân bố đối tượng nghiên cứu theo tuổi Tuổi 60 Tổng Số lượng (n) 27 43 55 125 dòng chảy hình thái học Tỷ lệ (%) 21,6 34,4 44,0 100,0 Sự tương đồng cao mẫu tủy (94,5) so với mẫu máu ngoại biên (73,5%) (Bảng 6) Bảng So sánh tương đồng kết tế bào dòng chảy hình thái học Nhóm tuổi 60 tuổi chiếm tỉ lệ cao (44,0%) tiếp đến nhóm tuổi từ 16 đến 60 tuổi (34,4%), 16 tuổi 21,6% (Bảng 2) Loại mẫu Huyết đồ Bảng Phân bố đối tượng nghiên cứu theo giới tính Giới tính Nam Nữ Tổng Số lượng (n) 63 62 125 Tủy đồ Tỷ lệ (%) 50,4 49,6 100,0 Bảng So sánh tương đồng nhóm chẩn đốn bạch cầu cấp Tỉ lệ nam/nữ nhóm nghiên cứu 50,4% /49,6% (Bảng 3) Tỉ lệ chẩn đốn, phân loại bệnh lý huyết học ác tính kỹ thuật tế bào dòng chảy Bảng Kết chẩn đoán phân loại bệnh lý huyết học ác tính kỹ thuật tế bào dòng chảy Đã phân loại Không phân loại Tổng Số lượng (n) 98 27 125 Tỷ lệ (%) 78,4 21,6 100,0 78,4% đối tượng nghiên cứu chẩn đoán phân loại kỹ thuật tế bào dòng chảy 21,6% đối tượng nghiên cứu không phân loại (Bảng 4) Bảng Kết chẩn đoán, phân loại bệnh lý huyết học ác tính kỹ thuật tế bào dòng chảy Huyết-tủy đồ AML ALL Không xác định Tổng Flow cytometry AML ALL Không xác định 49 24 1 55 29 Tổng 55 25 87 Có 4/53 trường hợp hình thái học chẩn đốn AML Flow cytometry ALL Tương tự có 1/25 trường hợp hình thái học ALL flow cytometry AML Như có tổng cơng 5/85 (5,8%) trường hợp bạch cầu cấp khơng có tương đồng Đặc biệt có 6/7 trường hợp Flow cytometry giúp xác định dòng bạch cầu cấp hình thái học khơng xác định (Bảng 7) BÀN LUẬN Bệnh lý Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Bạch cầu cấp dòng tủy 55 44,0 Bạch cầu cấp dòng lympho B 21 16,8 Bạch cầu cấp dòng lympho T 6,4 Plasmocyte 2,4 Tăng sinh Lympho B trưởng thành 10 8,0 Hematogones 0,8 Các trường hợp khác 27 21,6 Tổng 125 100,0 Nhóm bệnh bạch cầu cấp chiếm ưu (67,2%) bạch cầu cấp dòng tủy chiếm 65,5% trường hợp bạch cầu cấp Bên cạnh chúng tơi ghi nhận bệnh lý khác như: plasmocyte, tăng sinh Lympho B trưởng thành, hematogones (Bảng 5) So sánh tương đồng kết tế bào 398 Tương đồng Không tương đồng Tổng Tương đồng Không tương đồng Tổng Số lượng (n) Tỷ lệ (%) 25 73,5 26,5 34 100,0 86 94,5 5,5 91 100,0 Hiệu phân loại bệnh lý huyết học ác tính kỹ thuật tế bào dòng chảy Kỹ thuật tế bào dòng chảy có hiệu việc nhận diện, phân loại quần thể tế bào bất thường, ác tính bệnh lý huyết học ác tính (78,4% đối tượng nghiên cứu chẩn đốn, phân loại) Nhóm bệnh lý bạch cầu cấp chiếm ưu 67,2%, tỉ lệ bạch cầu cấp dòng tủy cao chiếm 65,5%, sau bạch cầu cấp dòng Lympho chiếm 34,5% (Bạch cầu cấp lympho B chiếm 72,4%, bạch cầu cấp dòng lympho T chiếm 27,6%) So với nghiên cứu tác giả Surendra Koju cộng tỉ lệ bạch cầu cấp dòng tủy bạch cầu cấp dòng Lympho có khác biệt (36,3% bạch cầu cấp tủy, 60,4% bạch Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 cầu cấp lympho, 3,3% mang kiểu hình hỗn hợp) Sự khác biệt khác biệt quần thể nghiên cứu, tỉ lệ trẻ em nghiên cứu chiếm 43,8%(5) Tỉ lệ bạch cầu cấp lympho B bạch cầu cấp Lympho T có tương đồng với nghiên cứu tác giả Surendra Koju cộng (83,9% bạch cầu cấp dòng lympho B 16,1% bạch cầu cấp lympho T)(5) Qua nghiên cứu cho thấy kỹ thuật tế bào dòng chảy có nhiều ưu điểm nhận diện phân loại bệnh lý huyết học ác tính phân biệt trường hợp bạch cầu cấp dòng Lympho bạch cầu cấp dòng tủy thể (AML M0); lympho B lympho T; hematogones trường hợp bệnh lý ác tính dòng lympho; nhận diện plasmocyte bình thường ác tính dựa vào kiểu hình miễn dịch Sự tương đồng kết tế bào dòng chảy hình thái học Trong nghiên cứu ghi nhận tương đồng kết tế bào dòng chảy kết tủy đồ 94,5%, kết tế bào dòng chảy kết huyết đồ 73,5% Điều phù hợp với đặc điểm tế bào học tủy đồ dễ nhận diện hình thái so với tế bào máu ngoại vị Phân dòng bạch cầu cấp quan trọng điều trị tiên lượng bệnh nhân Bảng ta nhận thấy chẩn đoán mặt hình thái học nhiều bất cập, thiếu xác Sai lệch dòng chiếm đến 5,8% Do hình thái học khảo sát hình dạng tế bào quan sát kính hiển vi nên độ xác không cao Tỷ lệ thấp nhiều so với tác giả Ấn Độ với độ sai lệnh chiếm khoảng từ 12 đến 20%(1,4,7) Điều nghiên nghiên cứu tác giả đánh giá tương đồng đến mức độ nhóm chúng tơi phân dòng nói chung Trong khơng tương đồng nhóm bạch cầu cấp dòng tủy chiếm nhiều thể M0 khó phân biệt hình thái học với lympho non tương đồng ghi nhận khoảng 50% báo cáo Shailendra(4) Kỹ thuật tế bào dòng chảy Nghiên cứu Y học khảo sát CD tế bào nhận diện phản ứng kháng nguyên kháng thể gắn huỳnh quang nên nhận diện 6/7 trường hợp mà hình thái học không kết luận (Bảng 7) KẾT LUẬN Sau khảo sát 125 trường hợp bệnh nhân nghi ngờ bệnh lý huyết học ác tính có định xét nghiệm tế bào dòng chảy hình thái học chúng tơi đưa kết luận sau: Kỹ thuật tế bào dòng chảy có hiểu việc chẩn đốn, phân loại bệnh lý huyết học ác tính bệnh viện (78,4%) Nhóm ngiên cứu tiến hành so sánh tương đồng kết tế bào dòng chảy kết hình thái học (huyết đồ, tủy đồ) ghi nhận có 5,5% trường hợp khơng tương đồng kết tế bào dòng chảy kết tủy đồ, 26,5% trường hợp không tương đồng kết tế bào dòng chảy kết huyết đồ TÀI LIỆU THAM KHẢO Belurkar S, Mantravadi H, Manohar C et al (2013) Correlation of morphologic and cytochemical diagnosis with flowcytometric analysis in acute leukemia J Can Res The, 9:71-9 Bộ Y tế (2016) Hướng dẫn chẩn đoán điều trị số bệnh lý huyết học NXB Y học, pp.6-12 Ikoma MR (2015) First Proposed Panels on Acute Leukemia for Four-Color Immunophenotyping by Flow Cytometry from the Brazilian Group of Flow Cytometry-GBCFLUX Cytometry, 88:194-203 Jambhulkar S, et al (2019) Correlation of cytomorphology with flowcytometric immunophenotyping of acute myeloid leukemia in tertiary care hospital International Journal of Contemporary Medical Research, 6(2):19-22 Koju S, et al (2015) Spectrum of acute leukemias diagonsed on flow cytometry: Analysis from tertiary care centre from North India ACCLM, 1:12-15 Lin P, Owens R, et al (2004) Flow cytometric immunophenotypic analysis of 306 cases of multiple myeloma American Journal of Clinical Pathology, 121:482–88 Marsán Suárez V, et al (2016) Correlation between morphology and flow cytometry in Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) Revista Cubana de Hematologia, Inmunologia Hemoterapia, 32:483-493 Nguyễn Đặng Thuận An cộng (2014) Một số ứng dụng triển khai máy đếm tế bào dòng chảy BD FACS CANTO II năm 2013 Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 18(S2):44-49 Ngày nhận báo: 18/07/2019 Ngày phản biện nhận xét báo: 15/08/2019 Ngày báo đăng: 15/10/2019 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 399 ... 91 100,0 Hiệu phân loại bệnh lý huyết học ác tính kỹ thuật tế bào dòng chảy Kỹ thuật tế bào dòng chảy có hiệu việc nhận diện, phân loại quần thể tế bào bất thường, ác tính bệnh lý huyết học ác... morphology trưng cho dòng tế bào( 2) ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh viện Huyết học – Truyền máu thành phố Cần Thơ bệnh viện chuyên khoa huyết học khu vực đồng sông Cửu Long chẩn đoán điều trị bệnh lý huyết học ác tính,... trị Kỹ thuật tế bào dòng chảy triển khai từ năm 2018 nhằm hỗ trợ chẩn đoán, theo dõi điều trị bệnh lý huyết học ác tính Chúng tơi tiến hành nghiên cứu nhằm bước đầu đánh giá hiệu triển khai kỹ thuật