Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8424-1:2010 - EN 12393-1:2008. Tiêu chuẩn về Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật – phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật – phần 1: xem xét chung. Mời các bạn cùng tham khảo.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8424-1 : 2010 EN 12393-1 : 2008 THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ THỰC VẬT – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT – PHẦN 1: XEM XÉT CHUNG Foods of plant origin - Multiresidue methods for the gas chromatographic determination of pesticide residues Part 1: General considerations Lời nói đầu TCVN 8424-1:2010 hồn tồn tương đương với EN 12393-1:2008, TCVN 8424-1:2010 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ TCVN 8424 (EN 12393), Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật - Phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật bao gồm phần sau: - TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008), Phần 1: Xem xét chung; - TCVN 8424-2:2010 (EN 12393-2:2008), Phần 2: Phương pháp chiết làm sạch; - TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008), Phần Phương pháp xác định phép thử khẳng định Lời giới thiệu Tiêu chuẩn đưa loạt phương pháp xác định đa dư lượng có giá trị ngang nhau: khơng có phương pháp coi phương pháp chính, phương pháp tiếp tục xây dựng Các phương pháp chọn tiêu chuẩn xác nhận hiệu lực và/hoặc sử dụng rộng rãi tồn châu Âu Vì phương pháp áp dụng cho phạm vi rộng hàng hoá thực phẩm/các hỗn hợp thuốc bảo vệ thực vật, có sử dụng hệ thống khác để xác định, có thay đổi thiết bị, cách chiết, phương pháp làm điều kiện sắc ký phù hợp để tăng hiệu phương pháp, xem 3.1 THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ THỰC VẬT – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT – PHẦN 1: XEM XÉT CHUNG Foods of plant origin - Multiresidue methods for the gas chromatographic determination of pesticide residues Part 1: General considerations Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn đưa xem xét chung việc xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật Mỗi phương pháp quy định tiêu chuẩn phù hợp để nhận biết định lượng giới hạn định halogen hữu và/hoặc phospho hữu và/hoặc thuốc bảo vệ thực vật nhóm nitơ hữu dạng dư lượng thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật Tiêu chuẩn bao gồm phương pháp sau qua nghiên cứu liên phòng thử nghiệm và/hoặc chấp nhận toàn Châu Âu: - Phương pháp L: Chiết axeton, chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclorometan làm cột silica-gel/than hoạt tính [1]; - Phương pháp M: Chiết axeton chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclorometan/dầu nhẹ, cần làm Florisil ®1);[2], [3], [4]; - Phương pháp N: Chiết axeton, chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclorometan xyclohexan/etyl axetat làm thẩm thấu gel sắc ký silica gel [5], [6]; - Phương pháp P: Chiết etyl axetat, làm sắc ký thẩm thấu gel, cần [7] Khả áp dụng bốn phương pháp từ L đến P để phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm halogen hữu cơ, phospho hữu nitơ hữu đưa tương ứng cho phương pháp Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8424-2:2010 (EN 12393-2:2008), Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật - Phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật - Phần 2: Phương pháp chiết làm TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008), Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật- Phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật – Phần 3: Phương pháp xác định phép thử khẳng định Nguyên tắc 3.1 Yêu cầu chung Như nêu phần giới thiệu, tùy trường hợp cụ thể, thay đổi thiết bị sử dụng, điều kiện chiết, làm sắc ký để nâng cao hiệu phương pháp Những điều chỉnh phải lập thành văn rõ ràng chứng minh cho kết hợp lệ Các phương pháp mô tả tiêu chuẩn dựa qui trình gồm bốn giai đoạn (trong số trường hợp hai giai đoạn kết hợp, tồn phần), 3.2 đến 3.5 Qui trình kiểm sốt chất lượng phép phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật, ví dụ: Ủy ban châu Âu xuất [8], cần tuân theo phiên 3.2 Chiết Chiết dư lượng thuốc bảo vệ thực vật khỏi chất mẫu cách sử dụng dung mơi thích hợp, cho thu hiệu suất chiết tối đa dư lượng giảm thiểu chất bị chiết mà làm tăng gây nhiễu cho phép xác định 3.3 Làm Loại bỏ chất gây nhiễu khỏi dịch chiết mẫu để thu dung dịch dư lượng chiết dung môi phù hợp cho phép xác định chọn 3.4 Xác định Có thể sử dụng máy sắc ký khí (GC) có detector chọn lọc: Detector bắt giữ electron (ECD) dùng để xác định hợp chất halogen hữu cơ, detector ion hóa nhiệt (kiểu NPD, P kiểu N/P) dùng để xác định hợp chất phospho hữu hợp chất nitơ hữu cơ, detector quang phổ lửa (FPD) dùng để xác định thuốc bảo vệ thực vật nhóm phospho hữu sulfurơ hữu Cũng sử dụng detector điện hóa (ECHD), detector phát xạ nguyên tử (AED) phổ khối lượng (MS) để xác định nhiều loại thuốc bảo vệ thực vật 3.5 Khẳng định Các quy trình khẳng định việc nhận biết định lượng dư lượng quan sát được, đặc biệt trường hợp dư lượng vượt giới hạn tối đa Thuốc thử 4.1 Yêu cầu chung Sử dụng thuốc thử có độ tinh khiết phù hợp để phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật kiểm tra độ tinh khiết chúng (xem 4.2) Kiểm tra độ tinh khiết (4.2) nước dung mơi sử 1) Florisil ® ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn CEN không ấn định phải sử dụng chúng dụng, ví dụ: theo mơ tả Phụ lục A Làm định kỳ hoạt hóa chất hấp phụ theo yêu cầu phương pháp phân tích khác nhau, kiểm tra độ tinh khiết chúng (xem 4.2) Chú ý để tránh vật liệu chất dẻo vật liệu cao su nhiễm bẩn nước, dung môi, chất hấp phụ, v.v 4.2 Kiểm tra độ tinh khiết thuốc thử 4.2.1 Dung môi Cô đặc dung môi theo hệ số liên quan đến phương pháp tương ứng sử dụng Kiểm tra độ tinh khiết dùng cho GC theo điều kiện tương tự sử dụng phương pháp Sắc đồ không cho thấy tạp chất gây nhiễu Chiết cô đặc axetonitril, axeton, etyl axetat, hexan, dầu nhẹ diclorometan thể tích sử dụng phương pháp kiểm tra dung dịch tạo thành GC 4.2.2 Nước Chiết 10 phần thể tích nước với phần thể tich n-hexan dầu nhẹ, diclorometan dung mơi khác khơng hòa tan nước sử dụng phương pháp Tách pha hữu cơ, cô đặc dung dịch theo hệ số nêu phương pháp tương ứng kiểm tra độ tinh khiết GC theo điều kiện tương tự sử dụng phương pháp Sắc đồ khơng có tạp chất gây nhiễu 4.2.3 Muối vô Chiết muối vơ cơ, ví dụ: natri clorua, sau tinh theo Phụ lục A yêu cầu phương pháp phân tích khác Chiết muối dung dịch nước sử dụng, với nhexan dầu nhẹ, diclorometan dung mơi khác khơng hòa tan nước sử dụng phương pháp Cô đặc dịch chiết theo hệ số liên quan đến phương pháp tương ứng kiểm tra độ tinh khiết GC theo điều kiện tương tự sử dụng phương pháp, sắc đồ không cho thấy tạp chất gây nhiễu 4.2.4 Chất hấp phụ Rửa giải lượng chất hấp phụ với lượng sử dụng phương pháp phân tích tương ứng với loại thể tích dung môi hỗn hợp dung môi Cô đặc dịch rửa giải phương pháp phân tích kiểm tra độ tinh khiết GC Sắc đồ không cho thấy tạp chất gây nhiễu Kiểm tra hoạt tính chất hấp phụ thường xuyên mô tả phương pháp từ L đến P [xem TCVN 8424-2:2010 (EN 12393-2) 4.2.5 Chất chuẩn dung dịch chuẩn Sử dụng chất chuẩn có độ tinh khiết 95 % đạt tiêu chuẩn để phân tích dư lượng Chuẩn bị dung dịch pha loãng, kiểm tra thường xuyên, bảo quản dung dịch chuẩn chai thủy tinh để tủ lạnh ý tránh vật liệu chất dẻo cao su làm nhiễm bẩn dung dịch Đảm bảo dung dịch chuẩn không tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời ánh sáng tia cực tím khoảng thời gian dài Kiểm tra độ tinh khiết chất chuẩn phân tích CHÚ THÍCH 1: Khi bảo quản - 20 oC chất chuẩn thường bền năm Để cân bằng, nên để chất chuẩn đến nhiệt độ phòng trước mở vật chứa Các dung dịch gốc có nồng độ mg/ml, giữ tủ lạnh đơng sâu (ở khoảng - 20 °C), thường bền sáu tháng CHÚ THÍCH 2: Sự thay đổi thể tích dung mơi bay hơi, ví dụ: qua khoảng trống nắp đậy thủy tinh cố định, nguồn gây lỗi Vì nên sử dụng bình có nắp vặn polytetrafluoroetybơng (PTFE) để bảo quản dung dịch gốc dung dịch chuẩn CHÚ THÍCH 3: Kinh nghiệm cho thấy lỗi trình chuẩn bị, xử lý bảo quản chất chuẩn, dung dịch chuẩn nguồn độ khơng xác Cần theo kinh nghiệm tổ chức quốc tế, khu vực quốc gia khác [8], [9] 4.3 Khía cạnh an tồn liên quan đến thuốc thử 4.3.1 Yêu cầu chung Phép phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật chất thực phẩm sử dụng số hóa chất độc hại Phải tuân thủ biện pháp phòng ngừa an tồn nêu 4.3.2 4.3.3 thời điểm 4.3.2 Thuốc bảo vệ thực vật Nhiều loại thuốc bảo vệ thực vật độc hại qua nhiều đường phơi nhiễm khác nhau, đặc biệt chúng dạng đậm đặc Ví dụ, thuốc bảo vệ thực vật nhóm phospho hữu có độc tính cao, khơng qua đường tiêu hóa, mà qua da (dermally) đường hô hấp Khi làm việc với chất chuẩn, dung dịch chuẩn, v.v cần tuân thủ biện pháp phòng ngừa thời điểm (xem bảng cảnh báo an tồn nhãn để biết thơng tin bổ sung): a) Thực tất công việc lấy mẫu phòng thử nghiệm, pha trộn, cân v.v tủ hút khói có hiệu khu vực thơng gió cưỡng khơng tuần hồn khơng khí; đeo mặt nạ chống khí thích hợp Nếu sử dụng mặt nạ, nên thay lọc sử dụng mặt nạ bị nhiễm bẩn nguy hiểm không mang b) Bảo vệ da khỏi thuốc bảo vệ thực vật Mặc quần áo bảo hộ đeo găng tay không thấm nước (như găng tay polyetylen), cần Rửa tay kỹ xà phòng nước để tránh nhiễm bẩn thực phẩm; c) Ghi rõ ràng nhãn tất vật chứa: tên nồng độ thuốc bảo vệ thực vật; d) Nghiên cứu, cần có thơng tin sẵn triệu chứng ngộ độc điều trị cấp cứu loại thuốc bảo vệ thực vật xử lý; e) Tham khảo ý kiến bác sĩ biện pháp phòng ngừa thuốc giải độc để sử dụng trường hợp khẩn cấp nghi ngờ bị ngộ độc thuốc bảo vệ thực vật; f) Thực qui trình thải bỏ thuốc bảo vệ thực vật theo qui định Người sản xuất đưa tư vấn việc thải bỏ; g) Không vào phòng thử nghiệm làm việc với dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phòng thử nghiệm khác sau xử lý thuốc bảo vệ thực vật, quần áo bảo hộ găng tay tháo bỏ rửa tay kỹ xà phòng với nước 4.3.3 Thuốc thử độc hại Khơng để tập trung đến mức độ dễ cháy khu vực làm việc, khơng thể loại bỏ tất cả, nguy tia tĩnh điện thiết bị điện có dây tiếp đất (ví dụ: sử dụng tủ lạnh chống tia lửa tủ đông) Khi làm việc với dung môi dễ cháy, cần sử dụng tủ hút khói có hiệu để loại bỏ giải phóng Hơi từ số dung mơi dễ bay có độc tính cao Một số dung mơi dễ dàng hấp thụ qua da Sử dụng tủ hút khói có hiệu để loại bỏ dung môi giải phóng Trong Bảng đưa danh mục số thuốc thử độc hại Việc sử dụng dung môi độc hại đề cập Hiệp định Montreal (như dung mơi clo hóa) nên giảm thiểu nhiều tốt Bảng - Thuốc thử độc hại, ảnh hưởng chúng cách giải Tên thuốc thử Axeton Axetonitril Xyclohexan Dichlorometan Ete dietyl Nguy Nhận xét Giải Rất dễ cháy Tạo thành peroxit dễ gây nổ với chất oxi hóa Sử dụng tủ hút khói có hiệu Độc Tránh tiếp xúc với mắt da Sử dụng tủ hút khói có hiệu Rất dễ cháy Độc Sử dụng tủ hút khói có hiệu Tránh tiếp xúc với mắt tránh hít phải Sừ dụng tủ hút khói có hiệu Cực kỳ dễ cháy Các peroxit khơng bền có Bảo quản tránh ánh sáng Sử dụng thể hình thành tủ hút khói có hiệu Xem thêm bảo quản chai lâu phần cảnh báo peroxit dài tiếp xúc với ánh sáng Etanol Dễ cháy Sử dụng tủ hút khói có hiệu gia nhiệt làm bay Etyl axetat Dễ cháy, đặc biệt bay Dây vào mắt qua đường hô hấp n-Hexan Dễ cháy Độc Sử dụng tủ hút khói có hiệu Iso-octan Rất dễ cháy Sử dụng tủ hút khói có hiệu Dầu nhẹ Cực kỳ dễ cháy Sử dụng tủ hủt khói có hiệu Metanol Dễ cháy Độc Tránh tiếp xúc với mắt tránh hít phải Sử dụng tủ hút khói có hiệu Sử dụng tủ hút khói có hiệu BIỆN PHÁP AN TỒN: Các peroxit tạo thành ete dietyl, dioxan ete khác trình bảo quản Chúng chất nổ cần phá hủy trước chưng cất bay Tiếp xúc với ánh sáng làm tăng hình thành peroxit ete Lọc qua nhóm oxit hoạt hóa cho thấy hiệu việc loại bỏ peroxit Thiết bị, dụng cụ 5.1 Dụng cụ thủy tinh: Yêu cầu chung Các dụng cụ thủy tinh cần rửa để phân tích dư lượng Có nguy thuốc bảo vệ thực vật bị mang sang qua việc sử dụng dụng cụ thủy tinh thiết bi khác phòng thử nghiệm Đặc biệt sử dụng máy rửa phòng thử nghiệm, cần tính đến vấn đề Có thể sử dụng chất tẩy rửa nóng (khơng chứa hợp chất gây nhiễu) để làm sạch, sau dụng cụ thủy tinh phải rửa kỹ nước cất axeton trước sấy khô Trước cho vào máy rửa, dụng cụ thủy tinh phải tráng axeton, sau tráng nước Rửa dụng cụ thủy tinh máy chất tẩy rửa không chứa clo, sau tráng nước sấy khơ Trong hai trường hợp, cần kiểm tra xác nhận chất tẩy rửa không để lại tạp chất gây nhiễu Cũng nên tráng lại dụng cụ thủy tinh dung mơi sử dụng trước dùng Các dụng cụ thủy tinh thiết bị phòng thử nghiệm thơng thường, cốc cỏ mỏ, bình cầu đáy tròn, mặt kính đồng hồ, pipet, giấy lọc, thủy tinh, đũa thủy tinh bi thủy tinh, v.v không liệt kê chi tiết điều qui định thiết bị, dụng cụ phương pháp 5.2 Dụng cụ thủy tinh đặc biệt 5.2.1 Ống nghiệm hình cơn, thích hợp cho việc bốc hơi, gắn khớp nối thủy tinh mài dài 14 mm, có dung tích khoảng 15 ml, dài khoảng từ 80 mm đến 90 mm, cần thiết cho việc cô đặc cuối Các ống nghiệm tốt hiệu chuẩn trang bị cột microSnyder®2) [10] 5.2.2 Cột sắc ký, chế tạo đặc biệt có nút đậy PTFE thủy tinh quy định hầu hết phương pháp Các đỉnh cột phải có khớp nối thủy tinh mài để gắn bể đựng dung môi khớp nối áp lực 5.3 Vật liệu phụ trợ Rửa giấy lọc, đũa thủy tinh viên bi thủy tinh dung môi tinh khiết trước sử dụng, cần Chiết sợi, thuỷ tinh, thạch anh n-hexan, axeton dung mơi thích hợp khác sử dụng chiết Soxhlet, hết chất gây nhiễu Các dung dịch thường giảm đến thể tích nhỏ cuối cách cho dòng khí nitơ thổi qua Khơng dùng ống nối cao su polyvinyl clorua (PVC) cho mục đích Các ống nối PTFE nylon thường cho thấy nguy nhiễm bẩn Không sử dụng nắp đậy chất dẻo thông thường, ví dụ PVC, bình bảo quản chất chuẩn dung dịch chúng làm nhiễm bẩn Cần dùng nắp đậy thủy tinh PTFE Tương tự, không sử dụng phễu chiết có nắp nút đật chất dẻo Thay nắp 2) Các cột Micro-Snyder ® ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng chúng chất dẻo thông thường nắp thủy tinh PTFE 5.4 Bộ phận làm bay dung môi 5.4.1 Yêu cầu chung Các phận làm bay dung mơi phải có nồi cách thủy (có thể kiểm sốt nhiệt độ mơi trường đến 100°C) tốt có phận kiểm sốt chân khơng Ảnh hưởng phận làm bay đến thất thoát dư lượng dễ bay cần kiểm tra định kỳ Trong số trường hợp định cần sử dụng phận lưu giữ (ví dụ glycol propylen, nundecan hexadecan) để giảm thiểu hao hụt thuốc bảo vệ thực vật Có thể sử dụng phận làm bay dung môi để cô đặc thể tích lớn dung mơi (đối với thể tích nhỏ, nên sử dụng dòng nhẹ khí nitơ tinh khiết, khô), như: 5.4.2 Bộ bay Kuderna-Danish3) [11] (hoặc tương đương) có khơng có cột phân đoạn, làm nóng nồi cách thủy ổn định nhiệt độ 5.4.3 Bộ quay màng (có bán sẵn thị trường), đòi hỏi có nguồn chân khơng làm nóng đến nhiệt độ khoảng 50 oC 5.4.4 Bộ quay chân khơng (có bán sẵn thị trường) quay tốc độ lên đến 300 r/min, u cầu nguồn chân khơng có nồi cách thủy ổn định nhiệt độ 5.5 Bộ đồng hóa Nếu sử dụng đồng hóa, cần ý để đảm bảo chúng tiếp đất (ngăn tia lửa điện) giữ không bị nhiễm bẩn Kiểm tra đĩa đáy chuyển động rò rỉ xung quanh đĩa Các mối hàn khác nguồn gốc gây nhiễm bẩn 5.6 Máy ly tâm, chống nổ, ống ly tâm với vài trăm mililit nhũ tương quay với tần số quay từ 000 min-1 đến 000 min-1 cao hơn, cần 5.7 Máy sắc ký khí Máy sắc ký mô tả 4.1 TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008) Cách tiến hành 6.1 Yêu cầu chung Người thực cần hiểu rõ phương pháp trước bắt đầu phân tích: phải thực phép thử trắng thuốc thử đáp ứng yêu cầu Cũng cần thực thực nghiệm độ thu hồi mẫu thêm chuẩn bao trùm dải mức gồm giới hạn dư lượng tối đa (MRL) đáp ứng yêu cầu (xem Điều 9) Ngồi ra, cần phân tích chất chuẩn có sẵn Cần tuân theo qui định hành Thực hành tốt phòng thử nghiệm phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật [9] Khơng phải lúc hồn thành phép phân tích ngày đơi cần phải bảo quản dịch chiết mẫu qua đêm Trong trường hợp đó, phải đảm bảo dịch chiết mẫu dạng dung dịch dung môi khan), bảo quản ở: a) tủ lạnh (khoảng °C) bình có nắp đậy kín để nơi tối, b) tủ lạnh đông sâu khoảng -20 oC nơi tối Khi dịch chiết mẫu bảo quản qua đêm, kiểm tra dịch chiết mẫu để đảm bảo chúng ổn định thời gian bảo quản qua đêm Không làm gián đoạn bước làm sạch, sắc ký cột, v.v 6.2 Các qui trình với quy mô nhỏ Trong số trường hợp, việc chiết dư lượng thực với lượng nhỏ mẫu, dung môi nguyên liệu (quy mô nhỏ), chọn quy trình tương thích quy mô nhỏ để làm Tuy nhiên, kết thu quy trình với quy mơ nhỏ cho thấy dư lượng đạt đến 3) Bộ bay Kuderna-Danish ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng chúng vượt giới hạn dư lượng tối đa, nên chọn việc chiết quy trình làm lần hai để khẳng định với lượng lớn mẫu, dung môi vật liệu 6.3 Chuẩn bị bảo quản mẫu 6.3.1 Yêu cầu chung Các quy trình xử lý bảo quản mẫu cần chứng minh không ảnh hưởng đáng kể đến dư lượng mẫu thử nghiệm (còn gọi "mẫu phân tích") Việc xử lý cần đảm bảo mẫu thử nghiệm đủ đồng cho thay đổi mẫu chấp nhận Nếu phần mẫu thử riêng lẻ khơng thể đại diện cho mẫu thử nghiệm, phải lấy phần mẫu lớn phần lặp lại để phân tích, để đánh giá giá trị đích thực Sự nghiền nhỏ mẫu hỗ trợ cho việc chiết phần dư lượng 6.3.2 Mẫu phòng thử nghiệm Khi mẫu phòng thử nghiệm cho thấy bị hỏng nhiều tồn khơng phân tích Khi có thể, chuẩn bị mẫu phòng thử nghiệm sau gửi đến trước cho thấy dấu hiệu thay đổi đáng kể vật lý hóa học Nếu mẫu phòng thử nghiệm khơng thể chuẩn bị ngay, mẫu cần bảo quản điều kiện thích hợp để giữ cho mẫu tươi tránh bị hư hỏng Nói chung, mẫu phòng thử nghiệm khơng nên bảo quản ngày trước chuẩn bị Các mẫu xử lí tương tự khơ cần phân tích hạn sử dụng chúng 6.3.3 Mẫu thử xử lý phần Để chuẩn bị mẫu thử nghiệm xử lý phần, lấy phần mẫu phòng thử nghiệm mà áp dụng mức dư lượng tối đa Có thể khơng cần phải lấy thêm phận khác thực vật Việc giảm mẫu phòng thử nghiệm phải thực theo cách cho thu phần đại diện (ví dụ cách chia bốn chọn hai phần đối chéo) Đối với mẫu đơn vị nhỏ (ví dụ loại trái nhỏ mọng, đậu đỗ, ngũ cốc), mẫu phải trộn kỹ trước cân phần mẫu thử chuẩn bị Khi mẫu tạo thành từ đơn vị lớn hơn, lấy phần hình nêm (ví dụ dưa hấu), phần cắt khoanh ngang (ví dụ dưa chuột) gồm vỏ (lớp ngoài) từ đơn vị [12] 6.3.4 Mẫu thử Từ mẫu thử nghiệm chuẩn bị sơ bộ, cần loại bỏ nốt phần gây khó khăn cho q trình đồng hóa Trong trường hợp loại có hạt cứng, cần loại bỏ hạt Ghi lưu lại phần thực vật loại bỏ Cần có biện pháp để tránh làm hao hụt nước thịt Phần thu mẫu thử Việc tính dư lượng phải dựa khối lượng mẫu thử ban đầu (bao gồm hạt) Khi việc đồng hóa mẫu thử chưa đủ việc chiết dư lượng bị tổn thất đáng kể cỡ hạt lớn cần nghiền nhỏ dụng cụ thích hợp Việc nghiền mẫu thực nhiệt độ môi trường, việc tách thịt nước phân hủy thuốc bảo vệ thực vật không xảy đến mức độ đáng kể Việc nghiền nhỏ mẫu trạng thái đơng lạnh làm giảm đáng kể thất chất phân tích hóa học không bền thường thu cỡ hạt nhỏ đạt độ đồng cao Cắt thơ mẫu (ví dụ: cm x cm) dao đặt vào tủ đơng (ví dụ để qua đêm -18 °C) trước nghiền mẫu Q trình nghiền mẫu cải thiện cách xay lạnh (sử dụng đá lạnh khô nitơ lỏng) cách giữ nhiệt độ oC Đặc biệt trường hợp rau quả, việc xay lạnh cho hiệu đồng hóa cao sản phẩm có lớp da mỏng (ví dụ cà chua nho) so với hiệu xay nhiệt độ môi trường Thực tế cho thấy, với thuốc bảo vệ thực vật không thấm, thường chủ yếu xảy vỏ, việc xay lạnh làm giảm đáng kể khả biến đổi lấy mẫu Khi trình xử lý mẫu thử nhiệt độ thấp cần tránh ngưng tụ độ ẩm cao Cho phép có dư lượng cacbon dioxit không đáng kể 6.3.5 Phần mẫu thử Từ mẫu thử nghiền lấy phần mẫu thử riêng lẻ, phần đủ cho phép phân tích Các phần mẫu thử cần phân tích Nếu phần mẫu thử chưa phân tích ngay, mẫu thử phần mẫu thử phải bảo quản đông lạnh yêu cầu Nếu phần mẫu thử lấy từ mẫu thử sau bảo quản đơng lạnh, mẫu thử phải trộn trước lấy phần mẫu thử để đảm bảo tính đồng mẫu 6.4 Chiết Đối với việc chiết mẫu thực phẩm không chứa chất béo, trộn mẫu với dung mơi thích hợp Làm rã đơng phần mẫu thử dung mơi chiết, Mỗi giai đoạn trộn cần Trong TCVN 8424-2 (ISO 12393-2) có đưa số qui trình chiết thích hợp 6.5 Làm Ngồi dư lượng, chất chiết thu theo phương pháp TCVN 8424-2 (EN 123932), có chứa chất chiết gây nhiễu cho phép phân tích Để tinh chất chiết thơ, sử dụng số phương pháp, bao gồm chiết phân đoạn lỏng-lỏng, sắc ký cột hấp phụ sắc ký gel thẩm thấu Trong TCVN 8424-2 (EN 12393-2) có quy định chi tiết cho phương pháp từ L đến P việc làm loại thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật Mỗi phép chiết phân đoạn lỏng-lỏng cần thực phễu chiết riêng có lắc min, giải phóng áp suất cách nới mở nắp với phễu chiết lật ngược Nếu lắc mạnh tạo nhũ tương bền, lắc nhẹ thời gian dài thích hợp Các nhũ tương bị phá vỡ cách thêm ml đến ml natri clorua bão hòa dung dịch natri sulfat cách làm ấm vòi nước nóng cho li tâm Khi tách lớp, cho lớp phân tách nhũ hóa chiết lại bỏ Các dung dịch hữu có chứa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật không nên cho tiếp xúc với natri sulfat khan 30 min, làm thất hợp chất Tốc độ rửa giải cột sắc ký thường quy định thông thường khoảng từ ml/min đến ml/min Trong phân tích thuốc bảo vệ thực vật nhóm clo hữu cơ, giai đoạn quy trình, nên bổ sung lượng biết chất dễ bay (ví dụ 1,7-dibromoheptan pentaclorobenzen) hợp chất thị bay (ví dụ 1,2,3,4-tetracloronaptalen (isodrin4)) Sử dụng chất dễ bay làm thị thất thoát thuốc bảo vệ thực vật giai đoạn bay cách so sánh diện tích pic chiều cao pic chúng với diện tích pic chiều cao pic hợp chất thị bay Hợp chất thị bổ sung sử dụng làm chất chuẩn nội (thời gian lưu giữ tương đối) mục đích định lượng Việc làm bay dung môi hữu không cho phép đến khơ hẳn điều làm thất thuốc bảo vệ thực vật, trừ có qui định khác Phép xác định Để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật, hầu hết trường hợp sử dụng GC Cần sử dụng hệ thống GC phù hợp, tốt trang bị phận gia nhiệt riêng biệt cho bơm, detector lò cột Các máy bơm trực tiếp vào cột GC thường khuyến cáo Mặc dù lựa chọn phần khác hệ thống GC kinh nghiệm lựa chọn nhà phân tích, khuyến nghị chung sau: Các loại detector khác cho thấy thích hợp để xác định thuốc bảo vệ thực vật nhóm halogen hữu cơ, phosho hữu nitơ hữu Các detector cần điều chỉnh theo hướng dẫn nhà sản xuất Sự biến đổi độ nhạy detector cần kiểm tra định kỳ cách kiểm tra độ tuyến tính đường chuẩn sử dụng dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật Bộ phận định lượng máy sắc ký khí cần bao gồm hệ thống tích phân cho phép tính tốn khơng chiều cao pic mà diện tích pic Thực tế cho thấy rằng, sử dụng điều kiện GC khác dụng cụ hãng khác cho kết tương đương Mặt khác, việc quy định thông số GC chuẩn thu kết giống hệt Đối với điều kiện GC điển hình, xem Phụ lục A TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008) Phép thử khẳng định 4) = 1, 2, 3, 4, 10, 10’ Hexachloro -1,4, 4', 5, 8,8’ - hexahydro-1,4 - endo - 5, 8- endodimetanoNaphtalen Cần thực phép phân tích để khẳng định việc nhận biết định lượng dư lượng thuốc bảo vệ thực vật quan sát được, đặc biệt trường hợp dư lượng thu vượt mức giới hạn dư lượng tối đa (MRL) Các phương pháp mô tả tiêu chuẩn cho phép nhận biết dư lượng theo thời gian lưu hợp chất cột GC; cần sử dụng hai cột có độ phân cực khác Các qui trình nêu TCVN 8424-3 (EN 12393-3) sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), GC sản phẩm oxy hóa sản phẩm chuyển hóa khác kỹ thuật tương tự, có giá trị Các kết thu phổ khối lượng (MS) đưa chứng cho mục đích khẳng định/nhận dạng TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008) có đưa số kỹ thuật khuyến cáo để khẳng định kết Đánh giá kết 9.1 Tính tốn Trung bình độ thu hồi từ phép xác định lặp lại nên dải từ 70 % đến 110 % với độ lệch chuẩn tương đối 20 % CHÚ THÍCH 1: Trong số trường hơp (phụ thuộc vào loại thuốc bảo vệ thực vật, mức chúng chất nền) khơng đạt dải Tính nồng độ dư lượng thuốc bảo vệ thực vật mẫu từ tỷ lệ tín hiệu mẫu mẫu chuẩn loạt mẫu chuẩn Biểu thị nồng độ phần mẫu phòng thử nghiệm áp dụng mức dư lượng tối đa CHÚ THÍCH 2: Ví dụ trường hợp loại có hạt cứng, khối lượng hạt đưa vào phần tính kết quả, phân tích phải loại bỏ hạt Trong trường hợp có nhiều mức dư lượng đạt đến vượt mức dư lượng tối đa (MRL), cần phân tích thêm phần mẫu thử 9.2 Độ chụm Độ chụm phương pháp phân tích cần đánh giá theo yêu cầu TCVN 6910 (ISO 5725) [13] Một số tiêu chí chúng dựa kinh nghiệm nêu [8] 9.3 Giới hạn thực phép xác định Về lí thuyết, giới hạn thực phép xác định mẫu có liên quan xác định nồng độ dư lượng thuốc bảo vệ thực vật tính miligam kilogam, thể sắc đồ dịch chiết mẫu, ứng với diện tích pic chiều cao pic thấp đo được, với độ tin cậy chấp nhận kết Giới hạn thực phép xác định phụ thuộc vào độ tinh khiết, chất chất điều kiện sắc ký khí (đặc biệt kiểu loại nhiệt độ cột, khí mang độ nhạy detector) Vì điều kiện khơng thể qui định xác được, nên giới hạn thực phép xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật cần thiết lập cho phương pháp cho phòng thử nghiệm Về nguyên tắc chung, giới hạn thực phép xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phải phần mười mức dư lượng tối đa Tuy nhiên, mức dư lượng tối đa nhỏ 0,05 mg/kg, giới hạn thực phép xác định phần năm giá trị đủ, trừ giới hạn dư lượng tối đa qui định gần giới hạn phép xác định 9.4 Biểu thị kết Biểu thị hàm lượng thuốc bảo vệ thực vật theo qui định hành liên quan đến loại thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật Không hiệu chỉnh giá trị nồng độ trung bình theo phần trăm độ thu hồi dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Khi khơng có dư lượng vượt mức dư lượng tối đa, báo cáo giá trị thu từ phép xác định đơn lẻ Nêu nồng độ trung bình kết thu theo miligam kilogam Nếu có xuất giá trị mẫu trắng chất chúng phải báo cáo riêng rẽ mà không hiệu chỉnh trung bình nồng độ dư lượng 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - viện dẫn tiêu chuẩn này; - kết thu đơn vị tính; - ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu (nếu biết); - ngày nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; - độ không đảm bảo đo, yêu cầu; - điểm đặc biệt quan sát trình thử nghiệm; - chi tiết thao tác không quy định phương pháp tuỳ chọn ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (Tham khảo) Tinh số dung môi thuốc thử Axeton Được chưng cất viên bi thủy tinh Axetonitril Trộn lít axetonitril với ml axit odophosphoric 30 g phospho pentoxit bình thủy tinh đáy tròn Các viên bi thủy tinh bổ sung hỗn hợp chưng cất 81 oC đến 82 oC (không để nhiệt độ cao 82 °C) Xyclohexan Được chưng cất natri hydroxit Diclometan Được chưng cất viên bi thủy tinh Dietyl ete Được chưng cất viên bi thủy tinh Etanol Được chưng cất viên bi thủy tinh Etyl axetat Được chưng cất viên bi thủy tinh n-hexan Được chưng cất natri hydroxit iso-octan Được chưng cất natri hydroxit Dầu nhẹ Được chưng cất kali hydroxit natri hydroxit Metanol Được chưng cất viên bi thủy tinh Natri clorua Được nung 500 oC h làm nguội tủ hút ẩm Natri sulfat Được nung 500 oC h làm nguội tủ hút ẩm THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Becker, G.: Organohalogen, organophosphorus and triazine compounds In DFG Manual of Pesticide Residue Analysis, VCH Weinheim, Method s in Vol (1987), pp 283 and Vol (1992), pp 313 [2] Luke, Milton A.; Froberg, Jerry E.; Masumoto, Herbert T Extraction and clean-up of organochlorine, organophosphate, organonitrogen and hydrocarbon pesticides in produce for determination by gasliquid chromatography J Assoc Off Anal Chem 58.1020 -1026,1975 [3] Luke, Milton A.; Froberg, Jerry E.; Doose, Gregory M.; Masumoto, Herbert T Improved multiresidue gas chromatographic determination of organophosphorus, organonitrogen and organohalogen pesticides in produce, using flame photometric and electrolytic conductivity detectors J Assoc Off Anal Chem 64,1187 -1195 (1981) [4] Pesticide Analytical Manual - Vol.I, Multiresidue methods, Section 302, rd Edition, 1994 [5] Specht, W.: Organochlorine, organophosphorus, nitrogen-containing and other pesticides in DFG Manual of Pesticide Residue Analysis, VCH Weinheim Method S 19 in Vol (1987), pp 383, and Vol (1992), pp 317 [6] Specht W., Pelz, S., Gilsbach, W.: Gas-chromatographic determination of pesticide residues after clean-up by gel-permeation chromatography and mini-silica gel-column chromatography Replacement of dichloromethane by ethyl acetate/xydohexan in liquid-liquid partition and simplified conditions for extraction and liquid-liquid partition, Fresenius J Anal Chem 353,183-190 (1995) [7] Analytical Methods for Residues of Pesticides in Foodstuffs, Sixth Edition, The Hague (1996) [8] DG-SANCO: Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed, Document N° SANCO/2007/3131,31/October/2007 [9] Recommended Methods of Analysis, Codex Alimentarius Commission In: Codex Alimentarius Volume Two Pesticide residues in food - Rome; Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) World Health Organization (WHO) 1993 Part 4.3, pp 417-455, as amended by Supplement to Volume 2,1993 pp 171-172 [10] Burke, Jerry A.; Mills, Paul A.; Bostwick, David C Experiments with evaporation of solutions of chlorinated pesticides J Assoc Off Anal Chem 49,999 -1003 (1966) [11] Gunther, F A.; Blinn, R C; Kolbezen, M J.; Barkley, J H.; Harris, W D.; Simon, H S Microestima-tion of 2-(p-tert-butylphenoxy)isopropyl 2-chloroethyl sulfite residues, Anal Chem 23,1835 (1951) [12] Arbeitsgruppe, Pestizide": Empfehlung: Kriterien zur Vorbereitung und Reduzierung von Proben pflanzlicher Lebensmittel fiir die RUckstandsanalyse von Pflanzenschutz- und Schadlingsbekampfungsmitteln, Lebensmittelchemie 49, 40-42 (1995) [13] TCVN 6910 (ISO 5725) (tất phần), Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results ... phương pháp từ L đến P [xem TCVN 842 4-2 :2010 (EN 1239 3-2 ) 4.2.5 Chất chuẩn dung dịch chuẩn Sử dụng chất chuẩn có độ tinh khiết 95 % đạt tiêu chuẩn để phân tích dư lượng Chuẩn bị dung dịch pha loãng,... có) TCVN 842 4-2 :2010 (EN 1239 3-2 :2008), Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật - Phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật - Phần 2: Phương pháp chiết làm TCVN 842 4-3 :2010 (EN. .. rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - viện dẫn tiêu chuẩn này; - kết thu đơn vị tính; - ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu (nếu biết); - ngày nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; - độ