Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9524:2012 - EN 14133:2009

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9524:2012 - EN 14133:2009 trình bày về Thực phẩm - xác định hàm lượng Ochratoxin A trong rượu vang và bia - phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) có làm sạch bằng cột ái lực miễn nhiễm. Mời các bạn tham khảo.

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9524:2012 EN 14133:2009 THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG OCHRATOXIN A TRONG RƯỢU VANG VÀ BIA - PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CÓ LÀM SẠCH BẰNG CỘT ÁI LỰC MIỄN NHIỄM Foodstuffs - Determination of ochratoxin A in wine and beer - HPLC method with immunoaffinity column clean-up Lời nói đầu TCVN 9524:2012 hoàn toàn tương đương với EN 14133:2009; TCVN 9524:2012 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố; THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG OCHRATOXIN A TRONG RƯỢU VANG VÀ BIA - PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CÓ LÀM SẠCH BẰNG CỘT ÁI LỰC MIỄN NHIỄM Foodstuffs - Determination of ochratoxin A in wine and beer - HPLC method with immunoaffinity column clean-up Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng ochratoxin A rượu vang bia sử dụng sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) có làm cột lực miễn nhiễm, xem [2] [3] Phương pháp đánh giá xác nhận nghiên cứu liên phòng thử nghiệm theo Hướng dẫn AOAC [4] thủ tục nghiên cứu cộng tác để đánh giá xác nhận phương pháp phân tích hàm lượng ochratoxin A rượu vang bia qua việc phân tích mẫu nhiễm tự nhiên mẫu rượu vang bia thêm chuẩn mức khác dải từ 0,1 ng/ml đến ng/ml Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - u cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Mẫu rượu vang bia pha loãng dung dịch chứa polyetylen glycol (PEG) natri hydro cacbonat, sau lọc làm cột lực miễn nhiễm Ochratoxin A rửa giải metanol định lượng HPLC pha đảo, phát detector huỳnh quang CHÚ THÍCH: Sử dụng PEG cần thiết để tăng độ thu hồi ochratoxin A giảm số lượng cường độ pic sắc kí khác Thuốc thử 4.1 Yêu cầu chung Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích sử dụng nước cất nước loại TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có quy định khác Có thể sử dụng thuốc thử có bán sẵn thị trường có đặc tính tương đương với loại liệt kê 4.2 Natri clorua 4.3 Natri hydro cacbonat 4.4 Polyetylen glycol (khối lượng phân tử trung bình 000) 4.5 Metanol, loại dùng cho HPLC 4.6 Axetonitril, loại dùng cho HPLC 4.7 Nước, loại dùng cho HPLC 4.8 Axit axetic băng, (CH3COOH) 99 % 4.9 Dung dịch pha lỗng Hòa tan 10 g polyetylen glycol (4.4) 50 g natri hydro cacbonat (4.3) khoảng 950 ml nước thêm nước đến 000 ml 4.10 Dung dịch rửa Hòa tan 25 g natri clorua (4.2) g natri hydro cacbonat (4.3) khoảng 950 ml nước thêm nước đến 000 ml 4.11 Pha động dùng cho HPLC Trộn 990 ml nước dùng cho HPLC (4.7) với 990 ml axetonitril (4.6) 20 ml axit axetic băng (4.8), lọc qua lọc cỡ lỗ 0,45 m khử khí (ví dụ: khí heli) 4.12 Toluen 4.13 Hỗn hợp dung môi toluen axit axetic băng Trộn 99 phần thể tích toluen (4.12) với phần thể tích axit axetic băng (4.8) 4.14 Dung dịch gốc ochratoxin A Hòa tan mg ochratoxin A (dạng tinh thể) lượng chứa ampoule (nếu ochratoxin A dạng màng mỏng) hỗn hợp dung môi (4.13) để thu dung dịch chứa khoảng từ 20 g/ml đến 30 g/ml ochratoxin A Để xác định nồng độ xác, ghi lại đường hấp thụ bước sóng từ 300 nm đến 370 nm với khoảng nm cuvet thạch anh cm (5.10) sử dụng hỗn hợp dung môi (4.13) để so sánh Xác định bước sóng có độ hấp thụ tối đa tính nồng độ khối lượng ochratoxin A, OTA, microgram mililit, theo Công thức (1): ota = A max M 100 b (1) Trong đó: Amax độ hấp thụ tối đa xác định đường hấp thụ (trong trường hợp 333 nm); M khối lượng mol ochratoxin A (M = 403,8 g/mol); hệ số hấp thụ mol ochratoxin A hỗn hợp dung môi (4.13) (trong trường hợp 544 m2/mol); b chiều dài đường quang cuvet thạch anh, tính centimet (cm) Dung dịch bảo quản - 18 oC bền năm 4.15 Dung dịch chuẩn ochratoxin A Pha loãng dung dịch gốc (4.14) hỗn hợp dung môi (4.13) để thu dung dịch chuẩn có nồng độ khối lượng ochratoxin A g/ml Bảo quản dung dịch tủ lạnh nhiệt độ khoảng oC kiểm tra tính ổn định dung dịch 4.16 Dung dịch hiệu chuẩn ochratoxin A Dùng pipet lấy 0,5 ml dung dịch chuẩn ochratoxin A nồng độ g/ml (4.15) cho vào bình định mức 10 ml (5.3) cho bay dung mơi dòng nitơ Hòa tan lại 10 ml pha động (4.11) Dung dịch có nồng độ khối lượng ochratoxin A 100 ng/ml Chuẩn bị sáu dung dịch hiệu chuẩn HPLC bình định mức ml (5.3) riêng rẽ theo Bảng Pha loãng dung dịch pha động dùng cho HPLC (4.11) đến ml Bảng - Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn Dung dịch Dung dịch Dung dịch Dung dịch Dung dịch Dung dịch hiệu chuẩn hiệu chuẩn hiệu hiệu hiệu hiệu chuẩn chuẩn chuẩn chuẩn Thể tích pha động lọc (4.11), l 970 900 700 000 000 000 Thể tích dung dịch OTA 100 ng/ml, l 30 100 300 000 000 000 Nồng độ khối lượng OTA, ng/ml 0,6 2,0 6,0 20 40 60 Khối lượng OTA lấy để bơm, ng 0,06 0,20 0,60 2,00 4,00 6,00 Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn ngày phân tích 4.17 Cột lực miễn nhiễm Cột lực miễn nhiễm phải chứa kháng thể ochratoxin A Cột phải có khả chứa không nhỏ 100 ng ochratoxin A có độ thu hồi khơng nhỏ 85 % sử dụng dung dịch rượu vang pha lỗng có chứa 100 ng ochratoxin A Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 5.1 Cân vi lượng, cân xác đến 0,01 mg 5.2 Lọ thủy tinh, dung tích khoảng ml, có nắp vặn lót polytetrafloetylen (PTFE), nắp vặn kín thích hợp khác Một số lọ định làm thất ochratoxin A q trình làm bay Để tránh điều này, áp dụng silan hóa Chuẩn bị lọ cách đổ đầy dung dịch silan để yên Sau tráng lọ hai lần dung mơi thích hợp (toluen, axeton hexan) rửa nước (hai lần) để khơ 5.3 Bình định mức, dung tích ml 10 ml 5.4 Ống chân không, dùng cho cột lực miễn nhiễm 5.5 Bình chứa phụ kiện thích hợp với cột lực miễn nhiễm 5.6 Bộ lọc sợi thủy tinh, cỡ lỗ 1,6 m, (ví dụ: loại Whatman GF/A1) tương đương) 5.7 Bộ làm bay dung môi 5.8 Xyranh microlit hiệu chuẩn pipet microlit hiệu chuẩn 5.9 Máy sắc kí lỏng hiệu cao, gồm có: 5.9.1 Hệ thống bơm, van bơm dạng xyranh có vòng bơm 100 l loại tương đương 5.9.2 Bơm dùng cho HPLC, đẳng dòng, trì tốc độ dòng thể tích 1,0 ml/min 1) Whatman tên thương mại sản phẩm phù hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn khơng ấn định phải sử dụng chúng Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương 5.9.3 Cột phân tích pha đảo, ví dụ thép khơng gỉ (dài 150 mm, đường kính 4,6 mm) nhồi vật liệu pha đảo C18, cỡ hạt m, trước cột có cột bảo vệ pha đảo thích hợp lọc bảo vệ (cỡ lỗ 0,5 m) Có thể sử dụng cột có kích thước khác cột đáp ứng độ phân giải đường pic ochratoxin A khỏi pic khác 5.9.4 Detector huỳnh quang, trang bị cuvet dòng chảy cài đặt bước sóng kích thích 333 nm bước sóng phát xạ 460 nm Detector phải phát ochratoxin A nồng độ nhỏ 0,02 ng 5.9.5 Hệ thống liệu 5.10 Máy đo phổ UV, có cuvet thạch anh thích hợp Cách tiến hành 6.1 Chuẩn bị mẫu Khử khí rượu vang nổ bia trước pha lỗng Rót 10 ml rượu vang (hoặc bia) vào bình nón dung tích 100 ml đậy kín Thêm 10 ml dung dịch pha lỗng (4.9) trộn kỹ Lọc qua lọc sợi thủy tinh (5.6) dung dịch vẩn đục có cặn rắn hình thành sau pha lỗng Nếu gặp phải vấn đề khử khí tiến hành siêu âm mẫu h, mẫu làm nguội trước 30 + oC để tránh tạo bọt nhanh 6.2 Làm cột lực miễn nhiễm Chuẩn bị cột lực miễn nhiễm theo hướng dẫn nhà cung cấp Nối cột lực miễn nhiễm (4.17) với ống chân khơng (5.4) nối bình chứa (5.5) với cột lực miễn nhiễm Cho 10 ml dung dịch pha loãng (tương đương ml rượu vang bia) vào bể cho qua cột lực miễn nhiễm tốc độ dòng khoảng giọt giây Không để cột chảy đến khô Rửa cột ml dung dịch rửa (4.10) sau rửa ml nước với tốc độ dòng từ giọt đến giọt giây Cho khơng khí qua cột để làm khô cột Tách cột khỏi ống chân không đặt lên lọ (5.2) 6.3 Chuẩn bị dung dịch mẫu thử Rửa giải ochratoxin A vào lọ cách cho ml metanol (4.5) qua cột tốc độ giọt giây Cho bay dịch rửa giải đến khơ dòng khí nitơ nhiệt độ khoảng 50 oC Hòa tan lại 250 l pha động dùng cho HPLC (4.11) bảo quản oC phân tích HPLC Dung dịch dung dịch thử Phân tích HPLC 7.1 Phân tích mẫu Bơm 100 l dịch chiết (6.3) (tương đương với ml rượu vang bia) vào máy sắc kí sử dụng pha động (4.11) tốc độ dòng 1,0 ml/min 7.2 Chuẩn bị đường chuẩn Chuẩn bị đường chuẩn ngày phân tích có thay đổi điều kiện sắc kí Bơm 100 l dung dịch hiệu chuẩn (4.16) vào máy HPLC dựng đồ thị giá trị chiều cao pic diện tích pic dung dịch hiệu chuẩn ochratoxin A theo khối lượng ochratoxin A tính nanogam Nếu hàm lượng ochratoxin A mẫu nằm ngồi dải hiệu chuẩn, tiến hành pha lỗng sử dụng thể tích bơm nhỏ hơn; trường hợp này, phần tính kết phải điều chỉnh tương ứng Do dải nồng độ rộng, nên đường chuẩn cần phải qua điểm "zero" để định lượng xác nồng độ ochratoxin A thấp (< 0,1 ng/ml) 7.3 Nhận biết Nhận biết chất phân tích cách so sánh thời gian lưu pic tương ứng mẫu với thời gian lưu pic chất chuẩn sắc phổ Đôi cần phải nhận biết pic cách bơm đồng thời dung dịch mẫu thử dung dịch chuẩn 7.4 Xác định Tiến hành xác định phương pháp ngoại chuẩn, tích phân diện tích pic xác định chiều cao pic so sánh kết với giá trị tương ứng chất chuẩn có diện tích chiều cao pic gần nhất, sử dụng đường chuẩn Khi sử dụng đường chuẩn, chuẩn bị thêm dung dịch bổ sung với nồng độ nằm dải tuyến tính Bơm thể tích dung dịch mẫu thử dung dịch chuẩn để dựng đường chuẩn Nếu độ đáp ứng ochratoxin A mẫu thử nằm dải hiệu chuẩn, điều chỉnh lượng mẫu bơm vào cách pha lỗng dung dịch mẫu thử Tính kết Đọc từ đường chuẩn khối lượng ochratoxin A phần dung dịch mẫu thử bơm vào cột HPLC, tính nanogam Tính nồng độ khối lượng ochratoxin A, OTA = mOTA V3 V1 V2 OTA , nanogram mililit, theo Cơng thức (2): (2) Trong đó: mOTA khối lượng ochratoxin A phần dung dịch mẫu thử bơm vào cột HPLC xác định từ đường chuẩn, tính nanogam (ng); hệ số pha lỗng; V1 thể tích mẫu thử cần phân tích, tính mililit (trong trường hợp 10 ml); V2 thể tích dung dịch thử bơm lên cột, tính microlit (trong trường hợp 100 l); V3 thể tích pha động dùng để hòa tan chất rửa giải làm khơ, tính microlit (trong trường hợp 250 l) Độ chụm 9.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp nêu Phụ lục A Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu Phụ lục A 9.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ thu vật liệu thử giống hệt người thực sử dụng thiết bị khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt giá trị giới hạn lặp lại r Các giá trị rượu vang trắng là: x = 0,105 ng/ml r = 0,028 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,998 ng/m r = 0,196 ng/ml có thêm chuẩn x = 1,764 ng/ml r = 0,420 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,283 ng/ml r = 0,084 ng/ml nhiễm tự nhiên r = 0,028 ng/ml có thêm chuẩn Các giá trị rượu vang đỏ là: x = 0,186 ng/ml x = 0,813 ng/m r = 0,224 ng/ml có thêm chuẩn x = 2,530 ng/ml r = 0,616 ng/ml có thêm chuẩn x = 1,690 ng/ml r = 0,504 ng/ml nhiễm tự nhiên x = 0,190 ng/ml r = 0,056 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,696 ng/m r = 0,140 ng/ml có thêm chuẩn x = 1,403 ng/ml r = 0,196 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,070 ng/ml r = 0,028 ng/ml nhiễm tự nhiên Các giá trị bia là: 9.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ, thu vật liệu thử giống hệt báo cáo từ hai phòng thử nghiệm, không % trường hợp vượt giá trị giới hạn tái lập R Các giá trị rượu vang trắng là: x = 0,105 ng/ml R = 0,056 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,998 ng/m R = 0,364 ng/ml có thêm chuẩn x = 1,764 ng/ml R = 0,644 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,283 ng/ml R = 0,112 ng/ml nhiễm tự nhiên x = 0,186 ng/ml R = 0,056 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,813 ng/m R = 0,280 ng/ml có thêm chuẩn x = 2,530 ng/ml R = 0,980 ng/ml có thêm chuẩn x = 1,690 ng/ml R = 0,644 ng/ml nhiễm tự nhiên x = 0,190 ng/ml R = 0,112 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,696 ng/m R = 0,364 ng/ml có thêm chuẩn x = 1,403 ng/ml R = 0,588 ng/ml có thêm chuẩn x = 0,070 ng/ml R = 0,056 ng/ml nhiễm tự nhiên Các giá trị rượu vang đỏ là: Các giá trị bia là: 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin sau: a) thông tin cần thiết để nhận biết mẫu thử (kiểu loại mẫu, nguồn gốc mẫu, tên gọi); b) viện dẫn tiêu chuẩn này; c) ngày loại quy trình lấy mẫu (nếu biết); d) ngày nhận mẫu; e) ngày thử nghiệm; f) kết thử đơn vị biểu thị kết quả; g) chi tiết bất thường quan sát tiến hành thử nghiệm; h) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn tùy chọn ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (Tham khảo) Dữ liệu độ chụm Các liệu nêu Bảng A.1 đến Bảng A.3 thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm [5] phù hợp với Hướng dẫn AOAC thủ tục nghiên cứu cộng tác để đánh giá xác nhận phương pháp phân tích [4] Bảng A.1 - Dữ liệu độ chụm rượu vang trắng Rượu vang trắng Mẫu trắng Mẫu thêm OTA (ng/ml) Mẫu nhiễm tự nhiênb 0,100 1,100 2,000 1999 1999 1999 1999 1999 Số lượng phòng thử nghiệm 16 16 16 16 16 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 14a 13a 14 14 15 - 2 28 26 28 28 30 < 0,01 0,105 0,998 1,764 0,283 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, ng/ml - 0,01 0,07 0,15 0,03 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr, % - 7,9 6,6 8,4 10,8 Giới hạn lặp lại, r (r = 2,8 x sr), ng/ml - 0,028 0,196 0,420 0,084 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, ng/ml - 0,02 0,13 0,23 0,04 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR, % - 15,9 13,3 13,1 14,6 Giới hạn tái lập, R (R = 2,8 x sR), ng/ml - 0,056 0,364 0,644 0,112 Độ thu hồi, % - 105,4 90,7 88,2 - Năm tiến hành phép thử liên phòng thử nghiệm Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ Số lượng kết chấp nhận Giá trị trung bình, ng/ml a Hai phòng thử nghiệm loại khỏi đánh giá thống kê có giới hạn phát cao (= 0,2 ng/ml) b n.c mẫu nhiễm tự nhiên Bảng A.2 - Dữ liệu độ chụm rượu vang đỏ Rượu vang đỏ Năm tiến hành phép thử liên phòng thử nghiệm Mẫu trắng 1999 Mẫu thêm OTA (ng/ml) 0,200 0,900 3,000 1999 1999 1999 Mẫu nhiễm tự nhiênb 1999 Số lượng phòng thử nghiệm 15 15 15 15 15 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 14a 12a 14 15 14 - - 28 24 28 30 28 < 0,01 0,186 0,813 2,530 1,690 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, ng/ml - 0,01 0,08 0,22 0,18 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr,% - 6,5 9,9 8,9 10,8 Giới hạn lặp lại, r (r = 2,8 x sr), ng/ml - 0,028 0,224 0,616 0,504 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, ng/ml - 0,02 0,10 0,35 0,23 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR,% - 11,9 12,5 13,6 13,6 Giới hạn tái lập, R (R = 2,8 x sR), ng/ml - 0,056 0,280 0,980 0,644 Độ thu hồi, % - 93,1 90,3 84,3 - Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ Số lượng kết chấp nhận Giá trị trung bình, ng/ml a Một phòng thử nghiệm loại khỏi đánh giá thống kê có giới hạn phát cao (= 0,2 ng/ml) b n.c mẫu nhiễm tự nhiên Bảng A.3 - Dữ liệu độ chụm bia Bia Mẫu trắng Mẫu thêm OTA (ng/ml) Mẫu nhiễm tự nhiênb 0,200 0,800 1,500 1999 1999 1999 1999 1999 Số lượng phòng thử nghiệm 15 15 15 15 15 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 14a 13a 15 13 14a - - - 28 26 30 26 28 < 0,01 0,190 0,696 1,403 0,070 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, ng/ml - 0,02 0,05 0,07 0,01 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr,% - 10,6 7,2 4,7 16,5 Giới hạn lặp lại, r (r = 2,8 x sr), ng/ml - 0,056 0,140 0,196 0,028 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, ng/ml - 0,04 0,13 0,21 0,02 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR,% - 20,9 18,3 15,2 26,1 Giới hạn tái lập, R (R = 2,8 x sR), ng/ml - 0,112 0,364 0,588 0,056 Độ thu hồi, % - 95,0 87,0 93,6 - Năm tiến hành phép thử liên phòng thử nghiệm Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ Số lượng kết chấp nhận Giá trị trung bình, ng/ml a Một phòng thử nghiệm loại khỏi đánh giá thống kê có giới hạn phát cao (= 0,2 ng/ml) b n.c mẫu nhiễm tự nhiên THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Castegnaro M., Barek J., Fremy J.M., Lafontaine M., Miraglia M., Sansone E.B and Telling G.M Laboratory decontamination and destruction of carcinogens in laboratory wastes: some mycotoxins IARC Scientific Publication No 113, International Agency for Research on Cancer, Lyon (France), 1991, 63 p [2] Visconti, A., Pascale, M., and Centonze, G.: Determination of ochratoxin A in wine by means of immunoaffinity column clean-up and high-performance liquid chromatography Journal of Chromatography A, 864, 1999, 89-101 [3] Visconti, A., Pascale, M., and Centonze, G.: Determination of ochratoxin A in domestic and imported beers in Italy by immunoaffinity clean-up and liquid chromatography Journal of Chromatography A, 2000, 888, 321-326 [4] Guidelines for Collaborative Study to Validate Characteristics of a Method of Analysis" J.AOAC Int 72, 1989, 694-704 [5] Visconti A, Pascale M, Centonze G.: (2001) Determination of ochratoxin A in wine and beer by immunoaffinity column clean-up and liquid chromatographic analysis with flurometric detection: Collaborative study J AOAC Int 84:1818-1827  ... ngoại lệ 14a 13a 15 13 14a - - - 28 26 30 26 28 < 0,01 0,190 0,696 1,403 0,070 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, ng/ml - 0,02 0,05 0,07 0,01 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr,% - 10,6 7,2 4,7 16,5 Giới... ng/ml - 0,028 0,196 0,420 0,084 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, ng/ml - 0,02 0,13 0,23 0,04 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR, % - 15,9 13,3 13,1 14,6 Giới hạn tái lập, R (R = 2,8 x sR), ng/ml - 0,056... ngoại lệ 14a 12a 14 15 14 - - 28 24 28 30 28 < 0,01 0,186 0,813 2,530 1,690 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, ng/ml - 0,01 0,08 0,22 0,18 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr,% - 6,5 9,9 8,9 10,8 Giới