Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9523:2012 - EN 15890:2010. Tiêu chuẩn về Thực phẩm - xác định Patulin trong nước quả và Puree quả dành cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ - phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) có làm sạch phân đoạn lỏng/lỏng, chiết pha rắn và detector UV. Mời các bạn cùng tham khảo.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9523:2012 EN 15890:2010 THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH PATULIN TRONG NƯỚC QUẢ VÀ PUREE QUẢ DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH VÀ TRẺ NHỎ - PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CĨ LÀM SẠCH PHÂN ĐOẠN LỎNG/LỎNG, CHIẾT PHA RẮN VÀ DETECTOR UV Foodstuffs - Determination of patulin in fruit juice and fruit based puree for infants and young children - HPLC method with liquid/liquid partition cleanup and solid phase extraction and UV detection Lời nói đầu TCVN 9523:2012 hồn tồn tương đương với EN 15890:2010; TCVN 9523:2012 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH PATULIN TRONG NƯỚC QUẢ VÀ PUREE QUẢ DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH VÀ TRẺ NHỎ - PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CÓ LÀM SẠCH PHÂN ĐOẠN LỎNG/LỎNG, CHIẾT PHA RẮN VÀ DETECTOR UV Foodstuffs - Determination of patulin in fruit juice and fruit based puree for infants and young children - HPLC method with liquid/liquid partition cleanup and solid phase extraction and UV detection CẢNH BÁO - Khi áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn không đưa tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định patulin nước puree quả, ví dụ puree thực phẩm dành cho trẻ nhỏ, sử dụng sắc kí lỏng hiệu cao có detector UV (HPLC-UV) Phương pháp đánh giá xác nhận mẫu nhiễm tự nhiên mẫu thêm chuẩn để xác định patulin nước táo mức từ 3,0 g/kg đến 15,5 g/kg puree dành cho trẻ nhỏ mức từ 3,4 g/kg đến 17,9 g/kg Puree dành cho trẻ nhỏ sử dụng nghiên cứu liên phòng thử nghiệm bán sẵn thị trường Châu Âu có chứa hỗn hợp thành phần sau đây: việt quất, táo, chuối, chanh, bánh quy, xirơ lúa mì, sữa bột ngun chất dầu thực vật Danh mục chi tiết, bao gồm thành phần cụ thể sản phẩm sử dụng nghiên cứu nêu Tài liệu tham khảo [1] Thông tin thêm việc đánh giá xác nhận, xem Điều Phụ lục B Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - Yêu cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Patulin chiết khỏi nước táo, puree quả, hỗn hợp etyl-axetat hexan có mặt natri sulfat natri hydro cacbonat Phần dịch chiết tính chiết pha rắn cho bay Cặn hòa tan lại nước có pH = 4, patulin tách HPLC pha đảo [(RP)HPLC] hàm lượng patulin xác định detector UV Thuốc thử 4.1 Yêu cầu chung Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước đáp ứng yêu cầu loại quy định TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987) trừ có quy định khác Các dung môi phải đạt chất lượng để phân tích HPLC, trừ có quy định khác Có thể sử dụng loại dung dịch bán sẵn có đặc tính tương tự với thuốc thử liệt kê 4.2 Axit percloric, w(HClO4) ≥ 60% khối lượng nước 4.3 Cát, cỡ hạt 50 mesh đến 70 mesh 4.4 Cột chiết pha rắn silicagel (SPE) (500 mg SiO 2) 4.5 Natri sulfat khan, Na2SO4 4.6 Natri hydro cacbonat, NaHCO3 4.7 Axit axetic băng, w(CH3COOH) ≈ 98% nước 4.8 Nước có pH = Chỉnh pH nước axit axetic băng (4.7) 4.9 Etanol tuyệt đối, w(CH3CH2OH) ≥ 99,7% nước 4.10 Axetonitril CẢNH BÁO: Axetonitril chất độc trộn mẫu phải dùng máy nghiền trộn chống nổ đặt tủ hút Sau trộn, mẫu phải lọc bên tủ hút 4.11 Etyl axetat 4.12 n-Hexan 4.13 Dung môi chiết Cho 60 ml etyl axetat (4.11) vào 40 ml n-hexan (4.12) 4.14 Hỗn hợp axit axetic băng etyl axetat Cho ml axit axetic băng (4.7) vào 97 ml etyl axetat (4.11) 4.15 Pha động HPLC Trộn 990 phần thể tích nước với mười phần thể tích axetonitril (4.10) phần thể tích axit percloric (4.2) Hàm lượng axetonitril phụ thuộc vào loại mẫu phân tích dạng gây nhiễu đặc trưng chúng sau làm (xem Phụ lục A sắc đồ điển hình) cột HPLC chọn để phân tích Khử dung dịch trước sử dụng CHÚ THÍCH: Pha động gồm 990 phần thể tích nước với phần thể tích axit percloric cho thấy đủ để tách patulin khỏi chất gây nhiễu khác [cụ thể sử dụng 5-hydroxymetylfurfural kết hợp với cột Synergy® 1) dài 250 mm đường kính 4,6 mm cỡ hạt m độ xốp nm (xem 5.13.4)] 4.16 Patulin CẢNH BÁO - Patulin bị nghi ngờ chất gây đột biến ghi nhận có đặc trưng gây độc miễn dịch gây độc cho hệ thần kinh Luôn phải mang găng tay, kính bảo vệ tất bước chuẩn bị mẫu, chuẩn bị chất chuẩn phải thực tủ hút 4.17 Dung dịch gốc patulin Hòa tan mg patulin lượng chứa ống (nếu patulin dạng màng) etyl axetat (4.11) Chuyển dung dịch sang bình định mức 25 ml pha loãng etyl axetat đến vạch để thu dung dịch có chứa khoảng 200 g/ml patulin Bảo quản dung dịch tủ đông khoảng -18 0C Khi bảo quản sáu tuần khẳng định nồng độ khối lượng dung dịch Trước sử dụng, đưa dung dịch nhiệt độ phòng để tránh nước bị lẫn vào ngưng tụ 1) Synergy® tên thương mại sản phẩm phù hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng chúng Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương 4.18 Dung dịch chuẩn patulin Cho bay 000 l dung dịch gốc (4.17) đến khơ dòng khí nitơ hòa tan 20 ml etanol (4.9) để thu nồng độ khối lượng khoảng 10 g/ml patulin Để xác định xác nồng độ khối lượng, ghi lại phổ hấp thụ bước sóng từ 250 nm đến 350 nm cuvet thạch anh cm có etanol làm chất đối chứng Xác định bước sóng có độ hấp thụ cực đại Tính nồng độ khối lượng patulin, ρpat, microgam mililit, theo công thức (1): pat A max M 100 b (1) Trong Amax độ hấp thụ xác định điểm hấp thụ cực đại phổ hấp thụ (trong trường hợp này: khoảng 276 nm); M khối lượng mol patulin (M = 154 g/mol), tính gam mol (g/mol); ε hệ số hấp thụ mol patulin etanol, tính mét vng mol (m 2/mol), (trong trường hợp này: 460 m2/mol, xem [2]); b chiều dài đường quang cuvet thạch anh, tính centimet (cm) Bảo quản dung dịch tủ đông khoảng -18 0C Dung dịch bảo quản theo cách bền vài tháng Trước sử dụng, đưa dung dịch nhiệt độ phòng để tránh bị lẫn vào ngưng tụ Khi dung dịch bảo quản sáu tuần khẳng định lại nồng độ dung dịch 4.19 Dung dịch thêm chuẩn Đối với phép thực nghiệm thêm chuẩn patulin vào mẫu mức 10 ng/ml 25 ng/ml, chuẩn bị dung dịch thêm chuẩn patulin nước có pH = (4.8) nồng độ khối lượng 200 ng/ml 500 ng/ml, tương ứng Các dung dịch thu cách cho bay đến khô dung dịch chứa 100 l 250 l dung dịch gốc tương ứng (4.17) dòng khí nitơ bình định mức 100 ml, hòa tan nước có pH = (4.8) để thu dung dịch có nồng độ khối lượng patulin khoảng 200 ng/ml 500 ng/ml tương ứng, tùy thuộc vào nồng độ khối lượng xác patulin dung dịch gốc Đảm bảo patulin hòa tan hết nước có pH = trước thêm nước đầy đến vạch Trong trường hợp dung dịch chuẩn patulin (4.18) có nồng độ khối lượng khác với 10 g/ml, chỉnh dung dịch thêm chuẩn cách tính phần dịch lỏng xác, có tính đến nồng độ khối lượng thực dung dịch chuẩn xác định 4.18 Bảo quản dung dịch tủ lạnh 40C Dung dịch bảo quản cách bền tám tuần Thiết bị, dụng cụ 5.1 Yêu cầu chung Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 5.2 Pipet phân phối, ví dụ dung tích ml, ml, 200 l 50 l với đầu tip thích hợp 5.3 Cân phân tích, cân đến 0,1 mg 5.4 Máy đo phổ UV, hai chùm tia ghi bước sóng 250 nm đến 350 nm 5.5 Cuvet thạch anh, có chiều dài đường quang cm 5.6 Máy ly tâm, có khả hoạt động 400 g 5.7 Ống ly tâm, dung tích 25 ml có nắp vặn 5.8 Máy lắc học 5.9 Thiết bị làm bay hơi, có khả trì nhiệt độ 400C, có nguồn cấp nitơ 5.10 Lọ thủy tinh, dung tích ml có nắp vặn 5.11 Xyranh, kín khí có pittơng polytetrafloroetylen (PTFE), thể tích ml đến ml 5.12 Bộ lọc dạng xyranh dùng lần, cỡ lỗ 0,2 m (tùy chọn) Thử nghiệm mẻ sản phẩm trước sử dụng, để đảm bảo patulin không bị hấp phụ lên lọc 5.13 Thiết bị HPLC, gồm có phận sau: 5.13.1 Hệ thống bơm, hệ thống bơm van có vòng bơm 200 l 5.13.2 Bơm đẳng dòng, khơng xung, có khả trì tốc độ dòng ml/min 5.13.3 Detector UV, gắn với cuvet dòng chảy dùng cho phân tích cài đặt bước sóng 276 nm 5.13.4 Cột tách HPLC pha đảo, có khả chạy dùng 100 % nước làm pha động, ví dụ pha alkyl phân cực (ví dụ cột loại Synergy® 2), Atlantis® 2) Luna® 2) loại tương tự) Kích thước cột thay đổi tùy theo việc tách pic patulin thu khỏi pic gây nhiễu 5hydroxymetylfurfural (5-HMF) Chiều cao tối đa vai pic chồng phải nhỏ 10 % chiều cao pic tối đa Cần thiết phải điều chỉnh pha động để có phân giải đường tốt Nên sử dụng tiền cột thích hợp Cột có chiều dài 250 mm, đường kính 4,6 mm cỡ hạt khoảng m, có độ xốp nm cho thấy đáp ứng yêu cầu sử dụng kết hợp với pha động nêu Chú thích 4.15 5.13.5 Hệ thống phân tích liệu 5.13.6 Van chuyển mạch bơm HPLC thứ cấp, tùy chọn, để rửa cột phân tích lần bơm Cách tiến hành 6.1 Chiết Cho g cát (4.3), 15 g natri sulfat (4.5), g natri hydro cacbonat (4.6) vào ống ly tâm (5.7) lắc Thêm 10 ml (V1) dung môi chiết (4.13) vào ống chuẩn bị đậy kín Với cách này, chuẩn bị ống ly tâm trước phân tích Cân 10 g mẫu, xác đến 0,1 g, chuyển vào ống ly tâm chuẩn bị lắc mạnh tay vài giây lắc máy lắc học (5.8) đến Sau đó, ly tâm hỗn hợp chiết tốc độ thấp (khoảng 50 g đến 100 g tùy thuộc vào kiểu loại độ bền ống ly tâm sử dụng) 30s để tách lớp Patulin không bền dung dịch kiềm (ví dụ natri hydro cacbonat), giai đoạn cần tiến hành nhanh tốt để tránh thất thoát 6.2 Làm chiết pha rắn Bước để loại bỏ hợp chất có tính axit gây nhiễu có mẫu Cho 50 l hỗn hợp axit axetic etyl axetat (4.14) vào lọ thủy tinh có nắp vặn dung tích ml (5.10) đặt cột SPE silicagel chưa ổn định (4.4) Chuyển xác 2,50 ml (V 2) dịch chiết ly tâm lên cột SPE chưa ổn định (4.4) Thu lấy dịch rửa giải vào lọ thủy tinh (5.10) tốc độ giọt giây (ví dụ, trọng lực nén nhẹ khơng khí) Rửa cột SPE 3ml dung môi chiết (4.13) để rửa giải hết patulin khỏi cột Khi gần tất dịch rửa giải chảy qua hết, dùng xyranh chứa đầy khơng khí đẩy dung mơi lại khỏi cột vào lọ Cho bay dịch rửa giải thu nhiệt độ tối đa 40 0C vừa đến khơ dòng nitơ nhẹ, dùng thiết bị làm bay (5.9) Quá trình không nên kéo dài 10 Không kéo dài q trình bay sau khơ, để tránh làm thất thoát patulin Thêm ml (V 3) nước có pH = (4.8) vào lọ (5.10) vặn chặt nắp Lắc (hoặc lắc xốy) lọ để đảm bảo patulin hòa tan lại hồn tồn Nếu dung dịch trong, chuyển trực tiếp vào lọ bơm thích hợp (ví dụ dung tích nhỏ ml) bơm dung dịch bị đục, lọc lọc dạng xylanh thích hợp (5.12) trước bơm vào HPLC 2) Synergy®, Atlantis® Luna® tên thương mại sản phẩm phù hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn khơng ấn định phải sử dụng chúng Có thể sử dụng sản phẩm tương ứng cho kết tương đương 6.3 Quy trình thêm chuẩn 6.3.1 Nước Cân 19 g nước quả, xác đến 0,1 g, cho vào cốc có mỏ 50 ml Thêm xác 1,00 ml dung dịch thêm chuẩn nồng độ 200 ng/ml 500 ng/ml (4.19) để thu mức thêm chuẩn 10 g/kg 25 g/kg tương ứng Khuấy trộn dung dịch Từ dung dịch thêm chuẩn 20,0 g này, dùng xác 10,0 g để phân tích theo 6.1 6.2 6.3.2 Puree Cân 19 g puree, xác đến 0,1 g, cho vào cốc có mỏ 50 ml Thêm xác 1,00 ml dung dịch thêm chuẩn nồng độ 200 ng/ml 500 ng/ml (4.19) để thu mức chuẩn 10 g/kg 25 g/kg tương ứng Trộn thìa vét hết puree thành cốc cho vào trộn Sau khuấy trộn sơ thìa, dùng xyranh chất dẻo trộn puree thêm chuẩn cách lặp lại việc hút nhả nhanh Đảm bảo tất trộn Từ 20,0 g puree thêm chuẩn này, dùng xác 10,0 g để phân tích theo 6.1 6.2 6.3.3 Tính mẫu thêm chuẩn Đối với phép thực nghiệm thêm chuẩn, dùng 10 g nước puree để tính Phân tích HPLC 7.1 Các điều kiện vận hành HPLC Khi sử dụng cột quy định 5.13.4 pha động quy định 4.15, việc cài đặt thích hợp sau, xem thêm Hình A.1 Hình A.2: - Tốc độ dòng pha động (cột): 0,6 ml/min đến 1,0 ml/min; - Bước sóng detector UV: 276 nm; - Thể tích bơm: 100 l đến 200 l 7.2 Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn dùng cho HPLC Dùng pipet, ví dụ lấy lượng 60 l, 120 l, 180 l, 240 l, 300 l, 360 l 420 l dung dịch chuẩn patulin (4.18) cho vào bình định mức dung tích 50 ml khác Thêm nước có pH = (4.8) đến vạch lắc Các dung dịch patulin có nồng độ khối lượng 12 ng/ml, 24 ng/ml, 36 ng/ml, 48 ng/ml, 60 ng/ml, 72 ng/ml 84 ng/ml tương ứng Các nồng độ khối lượng phản ánh mức nhiễm patulin mẫu 4,8 g/kg, 9,6 g/kg, 14,4 g/kg, 19,2 g/kg, 24,0 g/kg, 28,8 g/kg 33,6 g/kg dựa vào giả định dung dịch chuẩn patulin 10 g/ml (4.18) dùng để chuẩn bị chúng dùng trực tiếp để bơm vào hệ thống HPLC Trong trường hợp dung dịch chuẩn patulin (4.18) có nồng độ khác với 10 g/ml, chỉnh dung dịch hiệu chuẩn cách tính xác phần dịch lỏng có tính đến nồng độ khối lượng thực dung dịch chuẩn xác định 4.18 Bảo quản dung dịch tủ lạnh 40C Các dung dịch bảo quản cách bền tám tuần 7.3 Đường chuẩn Chuẩn bị đường chuẩn cách bơm 100 l dung dịch hiệu chuẩn (7.2) bắt đầu ngày phân tích Dựng đường chuẩn theo diện tích pic theo khối lượng patulin bơm kiểm tra độ tuyến tính đường chuẩn Trong trường hợp hàm lượng patulin mẫu nằm ngồi đường chuẩn, chuẩn bị đường chuẩn khác có dải thích hợp bao trùm nồng độ khối lượng mẫu Cách khác, đường chuẩn thiết lập, dung dịch bơm để phân tích HPLC pha lỗng đến hàm lượng patulin thích hợp 7.4 Xác định patulin dung dịch mẫu thử Bơm phần dịch lỏng dung dịch mẫu thử chuẩn bị mô tả 6.1 6.2 vào máy sắc kí, áp dụng điều kiện để chuẩn bị đường chuẩn Tính kết Phép định lượng tiến hành cách tích phân chiều cao pic diện tích pic thu Xác định phần khối lượng, wpat, patulin mẫu thử, tính microgam kilogam, trực tiếp từ đường chuẩn (7.3) tính từ nồng độ khối lượng dung dịch bơm, dùng Công thức (2): w pat pat V2 V1 V3 ms (2) Trong nồng độ khối lượng patulin dung dịch mẫu thử bơm, tính từ hồi quy tuyến tính, biểu thị nanogam mililit (ng/ml); pat V1 ml); thể tích dung mơi lấy để chiết, tính mililit (ml) (trong trường hợp này: 10 V2 thể tích phần dịch lỏng dịch chiết mẫu dùng để làm SPE, tính mililit (ml) (trong trường hợp này: 2,5 ml); V3 thể tích nước có pH = (4.8) dùng để hồ tan lại, tính mililit (ml) (trong trường hợp này: 10 ml); ms khối lượng vật liệu mẫu lấy để phân tích, tính gam (g) (trong trường hợp này: 10 g) Báo cáo kết đến ba chữ số có nghĩa Độ chụm 9.1 Yêu cầu chung Các chi tiết phép thử liên phòng thừ nghiệm độ chụm phương pháp nêu Phụ lục B Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm không áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu Phụ lục B 9.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm độc lập, riêng rẽ thu sử dụng phương pháp, vật liệu giống thử hệt nhau, người thử nghiệm, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt giá trị giới hạn lặp lại, r Các giá trị nước táo là: x = 7,4 g/kg r = 0,73 g/kg x = 15,5 g/kg r = 5,07 g/kg x = 3,0 g/kg r = 1,01 g/kg x = 6,0 g/kg r = 2,40 g/kg x = 10,7 g/kg r = 3,61 g/kg Các giá trị puree thực phẩm dành cho trẻ nhỏ là: x = 7,4 g/kg r = 0,73 g/kg x = 17,9 g/kg r = 2,91 g/kg x = 3,4 g/kg r = 0,90 g/kg x = 7,1 g/kg r = 1,06 g/kg x = 10,1 g/kg r = 2,13 g/kg 9.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm riêng rẽ thu sử dụng phương pháp, tiến hành thử vật liệu giống thử hệt nhau, hai phòng thử nghiệm, khơng q % trường hợp vượt giá trị giới hạn tái lập R Các giá trị nước táo là: x = 7,4 g/kg r = 6,54 g/kg x = 15,5 g/kg r = 12,29 g/kg x = 3,0 g/kg r = 3,28 g/kg x = 6,0 g/kg r = 3,30 g/kg x = 10,7 g/kg r = 7,28 g/kg Các giá trị puree thực phẩm dành cho trẻ nhỏ là: x = 7,4 g/kg r = 3,05 g/kg x = 17,9 g/kg r = 6,30 g/kg x = 3,4 g/kg r = 3,39 g/kg x = 7,1 g/kg r = 3,61 g/kg x = 10,1 g/kg r = 5,54 g/kg 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin sau: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu (loại mẫu, nguồn gốc mẫu, tên gọi); b) viện dẫn tiêu chuẩn này; c) ngày hình thức tiến hành lấy mẫu (nếu biết); d) ngày nhận mẫu; e) ngày thử nghiệm; f) kết thử nghiệm đơn vị biểu thị kết quả; g) điểm đặc biệt quan sát thử nghiệm; h) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn tùy chọn cố bất thường khác ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (Tham khảo) Sắc đồ điển hình CHÚ DẪN: x thời gian, tính phút y tín hiệu, tính milivolt patulin Hình A.1 - Sắc đồ điển hình nước táo có patulin khoảng 13 g/kg CHÚ DẪN: x thời gian, tính phút y tín hiệu, tính milivolt patulin Hình A.2 - Sắc đồ điển hình nước táo có patulin khoảng 15 g/kg Phụ lục B (Tham khảo) Dữ liệu độ chụm Dữ liệu nêu Bảng B.1 B.2 thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm [1] theo thủ tục IUPAC nghiên cứu hiệu phương pháp [3] Bảng B.1 - Dữ liệu độ chụm nghiên cứu liên phòng thử nghiệm nước táo Mẫu 10 25 3,6a 8,1a 12,2a 2003 2003 2003 2003 2003 Số lượng phòng thử nghiệm 14 14 13 13 15 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 14 14 12 11 15 Số lượng ngoại lệ (phòng thử nghiệm) 0 Số lượng kết chấp nhận 14 14 12 11 15 Giá trị trung bình, x , g/kg 7,4 15,5 3,0 6,0 10,7 Độ lệch chuẩn lặp lại, s, g/kg 0,57 1,81 0,36 0,86 1,29 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr, % 7,7 11,7 12,2 14,3 12,1 Giới hạn lặp lại r [r=2,8 x sr], g/kg 1,60 5,07 1,01 2,40 3,61 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, g/kg 2,34 4,39 1,17 1,18 2,60 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR, % 31,6 28,3 39,5 19,8 24,3 Giới hạn tái lập R [R = 2,8 x sR], g/kg 6,54 12,29 3,28 3,30 7,28 74 62 - - - Giá trị HorRat, theo [4] 0,94 0,94 1,03 0,57 0,77 Giá trị HorRat R, theo [5] 1,44 1,29 1,80 0,90 1,10 Các mức đích, g/kg Năm tiến hành liên phòng thử nghiệm Độ thu hồi, % a mẫu nhiễm tự nhiên, giá trị đích xác định nghiên cứu đồng hóa mẫu Bảng B.2 - Dữ liệu độ chụm nghiên cứu liên phòng thử nghiệm puree nước dành cho trẻ nhỏ Mẫu 10 10 25 2,8a 6,5a 10,5a 2003 2003 2003 2003 2003 Số lượng phòng thử nghiệm 15 15 13 15 14 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 13 13 11 14 14 Số lượng ngoại lệ (phòng thử nghiệm) 2 Số lượng kết chấp nhận 13 13 11 14 14 Giá trị trung bình, x , g/kg 7,4 17,9 3,4 7,1 10,1 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, g/kg 0,26 1,04 0,32 0,38 0,76 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr, % 3,5 5,8 9,3 5,3 7,5 Giới hạn lặp lại r [r=2,8 x sr], g/kg 0,73 2,91 0,90 1,06 2,13 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, g/kg 1,09 2,25 1,21 1,29 1,98 Các mức đích, g/kg Năm tiến hành liên phòng thử nghiệm Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR, % 14,7 12,5 35,2 18 19,6 Giới hạn tái lập R [R = 2,8 x sR], g/kg 3,05 6,30 3,39 3,61 5,54 74 72 - - - Giá trị HorRat, theo [4] 0,44 0,43 0,94 0,53 0,61 Giá trị HorRat R, theo [5] 0,67 0,57 1,60 0,82 0,89 Độ thu hồi, % a mẫu nhiễm tự nhiên, giá trị đích xác định nghiên cứu đồng hóa mẫu THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] EUR Report 21008 EN (2004) Validation of an Analytical Method to Determine the Content of Patulin in Apple Juice Fruit Puree [2] AOAC Official Methods, 1995, Natural Toxins, Patulin, 49.6.01.C(d) [3] IUPAC (1995) Protocol for the Design, Conduct and Interpretation of Method Performance Studies, Pure & Applied Chem 67, 331-343 [4] Horwitz W and Albert R, 2006, The Horwitz Ratio (HorRat): A useful index of Method Performance with Respect to Precision, Journal of AOAC International, vol 89 1095-1109 [5] Thompson M., 2000, Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations in relation to fitness for purpose criteria in proficiency testing, Analyst, vol 125:385-386 ... Thompson M., 2000, Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations in relation to fitness for purpose criteria in proficiency testing, Analyst, vol 125:38 5-3 86 ... lượng thực dung dịch chuẩn xác định 4.18 Bảo quản dung dịch tủ lạnh 40C Các dung dịch bảo quản cách bền tám tuần 7.3 Đường chuẩn Chuẩn bị đường chuẩn cách bơm 100 l dung dịch hiệu chuẩn (7.2) bắt... tích Dựng đường chuẩn theo diện tích pic theo khối lượng patulin bơm kiểm tra độ tuyến tính đường chuẩn Trong trường hợp hàm lượng patulin mẫu nằm đường chuẩn, chuẩn bị đường chuẩn khác có dải