Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học trong cao chiết n hexane lá cây tầm gửi trên cây khế chua

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA HỌC  TRẦN THI ̣ THỤC HẠNH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐINH THÀNH PHẦN HÓA HỌC ̣ TRONG CAO CHIẾT N–HEXANE LÁ CÂY TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC CHUYÊN NGÀ NH SƯ PHẠM HÓA Đà Nẵng - 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trầ n Thi Thu ̣ ̣c Ha ̣nh Lớp : 14SHH Tên đề tài: “Nghiên cứu chiế t tách và xác đinh ̣ thành phần hóa học cao chiế t n-hexane của lá tầ m gửi khế chua” Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị - Nguyên liệu: Lá tầ m gửi đươ ̣c thu hái ta ̣i quâ ̣n Liên Chiể u, thành phố Đà Nẵng - Dụng cụ, thiết bị: + Bộ chiết chưng ninh, bình tam giác, cột sắc ký, mỏng sắc ký, đèn UV, cân phân tích, bếp cách thủy, tủ sấy, lò nung … + Thiế t bi ̣sắ c ký ghép khố i phổ 7890A/5975C, Agilent technology, USA (Trung tâm kỹ thuâ ̣t tiêu chuẩ n đo lường chấ t lươ ̣ng – Đà Nẵng) Nội dung nghiên cứu - Phân lập số hợp chất cao tổng n – hexane phương pháp sắc ký cột sắc ký mỏng - Xác định thành phần hóa học phân đoạn phương pháp GC – MS Giáo viên hướng dẫn: GS.TS Đào Hùng Cường Ngày giao đề tài: 01/08/2017 Ngày hoàn thành:15/03/2018 Chủ nhiệm khoa PGS.TS Lê Tự Hải Giáo viên hướng dẫn GS.TS Đào Hùng Cường Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày 22 tháng 04 năm 2018 Kết điểm đánh giá:…… Đà Nẵng, ngày … tháng … năm 2018 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo GS.TS Đào Hùng Cường tận tình hướng dẫn, giúp đỡ cho em suốt thời gian nghiên cứu hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo môn thầy phụ trách phòng thí nghiệm khoa Hóa trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho chúng em thời gian vừa qua Bước đầu làm quen với việc nghiên cứu nên báo cáo khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp, bổ sung thầy để em thu nhận thêm nhiều kiến thức kinh nghiệm cho thân sau Cuối cùng, em xin chúc quý thầy cô sức khỏe, hạnh phúc thành công sống nghiệp giảng dạy Em xin chân thành cảm ơn Đà Nẵng, tháng 04 năm 2018 Sinh viên Trầ n Thi Thu ̣ ̣c Ha ̣nh MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN .4 1.1 GIỚI THIỆU VỀ HỌ TẦM GỬI .4 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ CÂY TẦM GỬI 1.2.1 Tên gọi 1.2.2 Mô tả thực vật .4 1.2.3 Phân bố cách trồng 1.3 CÔNG DỤNG VÀ CÁCH SỬ DỤNG CÂY TẦM GỬI 1.4 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HỌ TẦM GỬI 1.4.1 Các cơng trình nghiên cứu giới .7 1.4.2 Các cơng trình nghiên cứu Việt Nam CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 10 2.1 NGUYÊN LIỆU, DỤNG CỤ, HÓA CHẤT 10 2.1.1 Nguyên liê ̣u .10 2.1.2 Thiế t bi,̣ du ̣ng cu ̣, hóa chấ t .10 2.1.3 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiê ̣m 12 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGÂM DẦM TẠO TỔNG CAO ETHANOL TỪ BỘT CÂY TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA………………………… ……………13 2.2.1 Nguyên tắ c 13 2.2.2 Cách tiế n hành 13 2.3 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT PHÂN BỐ LỎNG – LỎNG TỪ TỔNG CAO ETHANOL 13 2.3.1 Nguyên tắ c 13 2.3.2 Cách tiến hành 14 2.4 PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN BẰNG SẮC KÝ CỘT VÀ SẮC KÝ BẢN MỎNG 14 2.4.1 Sắ c ký cô ̣t 14 2.4.2 Sắ c ký bản mỏng .16 2.5 PHƯƠNG PHÁP ĐINH ̣ TÍNH THÀNH PHẦN NHÓM CHỨC TRONG DICH ̣ CHIẾT 21 2.6 XÁC ĐINH ̣ THÀNH PHẦN HÓA HỌC BẰNG PHƯƠNG PHÁP GC/MS 24 2.6.1 Nguyên tắ c 24 2.6.2.Cấ u ta ̣o thiế t bi 25 ̣ 2.6.3 Chương trình cha ̣y GC/MS .26 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .288 3.1 KẾT QUẢ ĐIỀU CHÉ TỔNG CAO ETHANOL BẰNG PHƯƠNG PHÁP NGÂM CHIẾT 288 3.2 KẾT QUẢ XÁC ĐINH ̣ THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DICH ̣ CHIẾT N-HEXAN TỪ CAO TỔNG ETHANOL CỦA LÁ CÂY TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA 29 3.2.1 Kết chiết phân bố lỏng–lỏng tổng cao ethanol bằ ng n-hexan 29 3.2.2 Định tính định danh thành phần hóa học chất phân đoạn cao hexane tách từ tổng cao ethanol 300 3.3 KẾT QUẢ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO N-HEXANE TỪ TỔNG CAO ETHANOL CỦA CÂY TÂM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA 39 3.3.1 Kế t quả cha ̣y sắ c ký cô ̣t cao n-hexane (13,45g) tách từ tổ ng cao ethanol 39 3.3.2 Kết chạy sắc ký cột phân đoạn TH.I (3,718g) 422 3.3.3 Đinh ̣ danh thành phầ n hóa ho ̣c phân đoa ̣n TH.I1 466 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 499 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO .50 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT GC : Gas Chromatography MS : Mass Spectrometry STT : Số thứ tự TCCS : Tiêu chuẩn sở USA : The United States of America C : Chloroform D : Dichloromethane DANH MỤC CÁC BẢNG Sớ Tên bảng hiêụ Trang 2.1 Các hóa chất sử dụng 10 3.1 Thể tích dịch chiết ethanol sau ngâm chiết 28 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 Khối lượng cao thu sau cô quay chân không dịch chiết ethanol Khối lượng cao thu sau cô quay chân không dịch chiết n-hexan Thành phần nhóm chức cao chiết n- hexane Tổng hợp kết định tính thành phần hóa học cao chiế t n-hexane Thành phần hóa học dịch chiết tầm gửi dung môi n-hexan Thành phầ n hóa ho ̣c phân đoa ̣n TH.I1 29 30 31 34 35 46 DANH MỤC CÁC HÌ NH Số Tên hin ̀ h hiêụ Trang 1.1 Lá, hoa, Tầ m gửi 1.2 Cấ u trúc quercitrin querceti 1.3 Cấ u trúc hơ ̣p chấ t MM1 và MM2 2.1 Cây tầ m gửi tươi đươ ̣c thu hái, phơi khô và nghiề n bô ̣t 10 Thiế t bi ̣sắ c ký ghép khố i phổ 7890A/5975C, Agilent technology, 11 2.2 USA 2.3 Đèn soi sắ c ký bản mỏng model: WFH – 203B 12 2.4 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiê ̣m 12 2.5 Hô ̣p bản mỏng có kić h thước 20 x 20 cm 18 2.6 Bình triển khai dạng hình khối trụ có nắp đậy 18 2.7 Sơ đồ thiế t bi sắ ̣ c ký khí ghép khố i phổ 25 2.8 Chương trình nhiê ̣t đô ̣ lò cô ̣t 27 3.1 Mẫu dịch chiết ethanol (5 ml) sau lần thay dung môi 28 3.2 Cao ethanol 29 Mẫu dịch chiết n-hexane (5 ml) sau lần thay dung môi n– 30 3.3 3.4 3.5 hexane Sắc ký đồ GC-MS từ dịch chiết n-hexane của tầm gửi 35 Kết chạy sắc ký mỏng với dung môi đơn n-hexane, 39 dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, methanol (từ trái sang phải) 3.6 Kết chạy sắc ký mỏng với hệ dung môi diclomethane: 40 chloroform theo tỉ lệ 2:8, 4:6, 6:4, 8:2 (từ trái sang phải) 3.7 Cột sắc ký (d=4,5cm, h=50cm) và các lọ dung dịch hứng (15ml) 40 3.8 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ đế n lo ̣ 87 41 3.9 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 88 đế n 183 41 3.10 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 184 đế n lo ̣ 269 41 3.11 Các vế t chấ t các bản mỏng của phân đoa ̣n TH.I, TH.II, 42 TH.III Kết chạy sắc ký mỏng với dung môi đơn n-hexane, 42 3.12 benzen, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, acetone (từ trái sang phải) 3.13 Cột sắc ký (d=3,5cm, h=50cm) và các lọ dung dịch hứng (15ml) 43 3.14 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ đế n lo ̣ 35 44 3.15 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 36 đế n 88 44 3.16 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 89 đế n lo ̣ 115 44 3.17 Các vế t chấ t các bản mỏng của phân đoa ̣n TH.I1, TH.I2, 45 TH.I3 (từ trái sang phải) 3.18 Sơ đồ phân lập phân đoạn cao n-hexane 45 3.19 Sắc ký đồ GC-MS của phân đoa ̣n TH.I1 từ tầm gửi 46 14 40,96 13,49 15 43,26 15,32 Stigmaterol (C29H48O) Amyrin (C30H50O) Lup-20(29)-en-3-ol, 16 43,84 22,47 actate (C32H52O2) 17 44,94 4,13 Neophytadiene (C20H38) Nhâ ̣n xét: Từ kế t quả ở Bảng 3.6 cho thấ y phương pháp GC-MS đã đinh ̣ danh đươ ̣c 17 cấ u tử dich ̣ chiế t lỏng-lỏng với dung môi n-hexane từ tổ ng cao ethanol của lá tầ m gửi khế chua, chiế m 94,43% tổ ng số các cấ u tử phát hiê ̣n Các cấ u tử có hàm lươ ̣ng lớn Lup-20(29)-en-3-ol, actate (22,47%), Amyrin (15,32%), Stigmaterol (13,49%), n-hexadecanoic acid (9,17%) Trong 17 cấu tử định danh này, chúng tơi quan tâm chủ yếu đến nhóm chất sau: acid béo, phytosterol, saponin triterpenoid, tocopherol ➢ Tocopherol: gồ m Vitamin E và -Tocopherol (C28H48O2) Vitamin E: là mô ̣t vitamin tan dầ u mỡ, phân bố rô ̣ng raĩ thức ăn, nó đươ ̣c xem là mô ̣t chấ t chố ng oxi hóa Vitamin E ngăn chă ̣n sự oxi hóa các acid béo cao phân tử chưa baõ hòa (các acid này là thành phầ n của màng tế bào và huyế t tương) cũng các chấ t nha ̣y cảm với oxi khác vitamin A và vitamin C 37 Vitamin E phản ứng với các gố c tự mà không làm ta ̣o thêm các gố c tự khác Do tin ́ h oxi hóa của vitamin E, nó đươ ̣c dùng viê ̣c điề u tri ̣ các bê ̣nh về thoái hóa liên quan đế n tuổ i tác, bê ̣nh Alzeimer và bê ̣nh đô ̣ng ma ̣ch vành Ngoài khả làm chấ t chố ng oxi hóa thì vitamin E còn có tác du ̣ng ngăn chố ng tan hồ ng cầ u các chấ t oxi hóa và làm tăng đáp ứng miễn dich ̣ ở người cao tuổ i, làm giảm kế t tu ̣ tiể u cầ u [18] ➢ Saponin triterpenoid: gồm Amyrin Là hoạt chất có tác dụng kháng khuẩn, chống viêm Các nhà khoa học Nhật Bản, Hàn Quốc chứng minh sapponin có tác dụng kiềm chế phát triển tế bào ung thư, tái tạo tế bào ung thư hóa, đồng thời có khả phòng chống xâm lấn di tế bào ung thư ác tính [10] ➢ Nhóm phytosterol chiết Stigmaterol Nhiều nghiên cứu hợp chất phytosterol có ích việc ức chế ung thư phổi, dày, buồng trứng ung thư vú Các nghiên cứu phytosterol ức chế hấp thụ cholesterol, làm giảm nồng độ cholesterol máu giảm nguy bệnh tim mạch Stigmasterol hữu ích việc ngăn ngừa số bệnh ung thư, bao gồm buồng trứng, tuyến tiền liệt, vú ung thư ruột kết, ức chế suy thoái viêm xương khớp thối hóa sụn chất chống oxi hóa mạnh [2] ➢ Nhóm axit: gồm n-hexadecanoic acid thường đươ ̣c go ̣i là Axit Palmitic Axit palmitic sử dụng để sản xuất xà phòng, mỹ phẩm, chất tẩy rửa Sodium palmitate sử dụng chất phụ gia tự nhiên sản phẩm hữu Acid béo no: giá trị sinh học thấp acid khơng no, có tác dụng xấu đến q trình chuyển mỡ, chức phận vai trò gan cung cấp liều Tuy nhiên, có vai trò lớn cấu tạo màng tế bào, hỗ trợ phát triển xương Acid béo không no: có chức điều hòa thành mạch máu Khi kết hợp với chotesterol tạo ester động, giảm nguy xơ vữa động mạch, tạo điều kiện chuyển hóa cholesterol, xuất khỏi thể Có tác dụng chống oxy hóa cao [11] 38 3.3 KẾT QUẢ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO N-HEXANE TỪ TỔNG CAO ETHANOL CỦ A CÂY TÂM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA 3.3.1 Kế t quả cha ̣y sắ c ký cô ̣t cao n-hexane (13,45g) tách từ tổ ng cao ethanol Trước cho ̣n dung môi để nhồ i cô ̣t, ta dùng phương pháp sắ c ký bản mỏng với các dung mơi đơn có độ phân cực tăng dần là: n-hexane, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, methanol Kết chạy sắc ký mỏng dung môi đơn đưa Hình 3.5 Hình 3.5 Kết chạy sắc ký mỏng với dung môi đơn n-hexane, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, methanol (từ trái sang phải) Nhận xét: - Với dung môi n-hexane cấu tử tách - Với dung môi dichloromethane cấu tử tách khá rõ, các vế t tròn, nhiên vẫn còn tượng kéo vết - Với dung môi chloroform cấu tử tách rõ, có tượng kéo vết - Với dung môi etyl acetate cấu tử tách kém, có hiê ̣n tươ ̣ng kéo vế t - Với dung môi methanol cấu tử tách kém, có hiê ̣n tươ ̣ng kéo vế t Trên sở hệ dung mơi đơn đó, tổng hợp chọn tỉ lệ hệ dung môi dichlomethane: chloroform trình bày dựa kết sắc ký mỏng Kết sắc ký mỏng với hệ dung môi dichlomethane: chloroform theo tỉ lệ 2:8, 4:6, 6:4, 8:2, (từ trái sang phải) đưa Hình 3.6 39 Hình 3.6 Kết chạy sắc ký mỏng với hệ dung môi dichlomethane: chloroform theo tỉ lệ 2:8, 4:6, 6:4, 8:2 (từ trái sang phải) Từ kết mỏng ta thấy tỉ lệ dung mơi khác tách cấu tử có chấm đậm tỉ lệ dung môi dichlomethane: chloroform = 8:2 vẫn còn hiê ̣n tươ ̣ng kéo lại nhanh, rõ, các vế t tròn và khoảng cách giữa các vế t xa Nên định chọn hệ dung môi rửa giải dichlomethane: chloroform = 8:2 Sử dụng cột sắc ký có đường kính ngồi 4,5 cm chiều cao làm việc cột 50 cm, lượng silicagel cho vào cột 140 g, dung môi ổn định cột n-hexane Lấ y 13,45 gam cao n-hexane trộn với 15 gam silicagel nghiền mịn, cho chạy cột với tốc độ hứng – giọt/phút với ̣ dung môi giải ly là dichlomethane: chloroform = 8:2, ta thu 269 lọ kí hiệu từ L1 đến L269 Kết sắc ký mỏng dung dịch giải ly lọ thể Hình 3.7, 3.8, 3.9, 3.10 Hình 3.7 Cột sắc ký (d=4,5cm, h=50cm) và lọ dung dịch hứng (15ml) 40 Hình 3.8 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ đế n lo ̣ 87 Hình 3.9 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 88 đế n 183 Hình 3.10 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 184 đế n lo ̣ 269 Dựa theo kết thu từ sắc ký mỏng ta gộp lại thành phân đoạn, kí hiệu là: TH.I (gô ̣p lo ̣ đế n lo ̣ 87), TH.II (gô ̣p lo ̣ 88 đế n lo ̣ 183), TH.III (gô ̣p lo ̣ 184 đế n lo ̣ 269), gộp lọ phân đoạn lại với nhau, cho bay tự nhiên thu cao phân đoạn 41 - Phân đoạn TH.I: 3,718g - Phân đoạn TH.II: 0,851g - Phân đoạn TH.III: 2,007g Kế t quả sắ c ký bản mỏng dung dich ̣ giải ly của phân đoa ̣n đươ ̣c thể hiê ̣n Hình 3.11 Hin ̀ h 3.11 Các vế t chấ t các bản mỏng của phân đoa ̣n TH.I, TH.II, TH.III Nhâ ̣n xét: Cha ̣y sắ c ký bản mỏng của phân đoa ̣n, ta thấ y phân đoa ̣n (TH.III) có hiê ̣n tươ ̣ng kéo vế t, phân đoa ̣n (TH.II) có vê ̣t xanh rõ ràng, phân đoa ̣n (TH.I) có vê ̣t rõ, tròn, có kéo đuôi mờ, các vê ̣t tương đố i cách nên ta cho ̣n phân đoa ̣n này để cha ̣y sắ c ký tiế p tu ̣c 3.3.2 Kết chạy sắc ký cột phân đoạn TH.I (3,718g) Trước cho ̣n dung môi để nhồ i cô ̣t, ta dùng phương pháp sắ c ký bản mỏng với các dung mơi đơn có độ phân cực tăng dần là: n-hexane, benzen, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, acetone Kết chạy sắc ký mỏng dung mơi đơn đưa Hình 3.12 Hình 3.12 Kết chạy sắc ký mỏng với dung môi đơn n-hexane, benzen, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, acetone (từ trái qua phải) 42 Nhận xét: - Với dung môi n-hexane cấu tử tách - Với dung môi benzen tách đươ ̣c cấ u tử rõ có hiê ̣n tươ ̣ng kéo vế t - Với dung môi dichloromethane cấu tử tách kém, có hiê ̣n tươ ̣ng kéo vế t - Với dung môi chloroform cấu tử tách rõ, các vế t tròn, cách và hầ u không có hiê ̣n tươ ̣ng kéo vế t - Với dung môi etyl acetate cấu tử tách - Với dung môi methanol cấu tử tách Từ kết mỏng ta thấy dung mơi khác tách cấu tử có chấm đậm dung mơi chloroform lại nhanh, rõ, các vế t tròn và khoảng cách giữa các vế t xa Nên định chọn chloroform là dung môi rửa giải Sử dụng cột sắc ký có đường kính ngồi 3,5 cm chiều cao làm việc cột 50 cm, lượng silicagel cho vào cột 100g, dung môi ổn định cột n-hexane Cao phân đoạn TH.I trộn với g silicagel nghiền mịn, cho chạy cột với tốc độ hứng – giọt/phút với dung môi giải ly là chloroform, ta thu đươ ̣c 115 lo ̣ kí hiê ̣u từ LI1 đế n LI115 Kết sắc ký mỏng dung dịch giải ly lọ thể Hình 3.13, 3.14, 3.15, 3.16, 3.17 Hình 3.13 Cột sắc ký (d=3,5cm, h=50cm) và lọ dung dịch hứng (15ml) 43 Hình 3.14 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ đế n lo ̣ 35 Hình 3.15 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 36 đế n 88 Hình 3.16 Các vế t chấ t bản mỏng của lo ̣ 89 đế n lo ̣ 115 Dựa theo kết thu từ sắc ký mỏng ta gộp lại thành phân đoạn, kí hiệu là: TH.I (gô ̣p lo ̣ đế n lo ̣ 35), TH.I2 (gô ̣p lo ̣ 36 đế n lo ̣ 88), TH.I3 (gô ̣p lo ̣ 89 đế n lo ̣ 115), gộp lọ phân đoạn lại với nhau, cho bay tự nhiên thu cao phân đoạn - Phân đoạn TH.I1: 2,404g - Phân đoạn TH.I2: 0,758g - Phân đoạn TH.I3: 0,042g Kế t quả sắ c ký bản mỏng dung dich ̣ giải ly của phân đoa ̣n đươ ̣c thể hiê ̣n Hình 3.17 44 Hin ̀ h 3.17 Các vế t chấ t các bản mỏng của phân đoa ̣n TH.I1, TH.I2, TH.I3 (từ trái sang phải) Nhâ ̣n xét: Dựa vào kế t quả cha ̣y sắ c ký, ta nhâ ̣n thấ y rằ ng phân đoa ̣n bản mỏng còn vế t nhiề u chấ t mờ, phân đoa ̣n lươ ̣ng cao it́ nên không tiế n hành khảo sát tiế p tu ̣c Phân đoa ̣n cho vế t chấ t rõ và lươ ̣ng chấ t thu đươ ̣c nhiề u nên tiế n hành đo GC/MS để xác đinh ̣ các chấ t có phân đoa ̣n đã đươ ̣c làm giàu này Kế t quả quá trình phân lâ ̣p phân đoa ̣n cao n-hexane từ tổ ng cao ethanol của lá tầ m gửi khế chua đươ ̣c tóm tắ t và thể hiê ̣n sơ đồ của Hin ̀ h 3.18 Cao n-hexane (13,450g) Đo GC-MS Chạy sắc ký cột lần D:C=8:2 TH.I (L1-L87) (3,718g) TH.II (L88-L183) (0,851g) TH.III (L184-L269) (2,007g) Chạy cột sắc ký lần Chloroform TH.I1 (LI1-LI35) (2,404g) TH.I2 (LI36-LI88) (0,758g) Đo GC-MS Hình 3.18 Sơ đồ phân lập phân đoạn cao n-hexane 45 TH.I3 (LI89-LI115) (0,042g) 3.3.3 Đinh ̣ danh thành phầ n hóa ho ̣c phân đoa ̣n TH.I1 Sắ c ký đồ GC-MS của phân đoa ̣n TH.I1 lá tầ m gửi đươ ̣c thể hiê ̣n ở Hin ̀ h 3.19 Kế t quả xác đinh ̣ thành phầ n hóa ho ̣c phân đoa ̣n TH.I1 từ lá tầ m gửi đươ ̣c tổ ng hơ ̣p ở Bảng 3.7 Hình 3.19 Sắc ký đồ GC-MS của phân đoa ̣n TH.I1 từ tầm gửi Bảng 3.7 Thành phầ n hóa ho ̣c phân đoa ̣n TH.I1 ST T Thời gian lưu Diện tích pick Tên gọi Cơng thức (%) 2-Myristynoyl 14,69 12,00 pantetheine (C25H44N2O5S) 16,46 12,37 n-Butyl ricinoleate (C22H42O3) 46 16,62 3,78 1-Heptatriacotanol (C37H76O) 28,12 Lupeol 3,38 (C30H50O) Lup-20(29)-en-3-ol, 28,81 9,35 acetate, (3β)(C32H52O2) 13,27-Cycloursan-36 29,71 13,75 ol, acetate, (3β,13β,14β)(C32H52O2) Nhâ ̣n xét: Từ kế t quả ở Bảng 3.7 cho thấ y phương pháp GC-MS đã đinh ̣ danh đươ ̣c cấ u tử và chiế m 54,63% tổ ng số các cấ u tử phát hiê ̣n đươ ̣c Trong đó, có cấ u tử 2-Myristynoyl pantetheine, n-Butyl ricinoleate, 1Heptatriacotanol, Lupeol, 13,27-Cycloursan-3-ol, acetate, (3β,13β,14β)- không xuấ t hiê ̣n dich ̣ chiế t lỏng – lỏng bằ ng dung môi n-hexane từ tổ ng cao ethanol của lá tầ m gửi khế chua Các cấ u tử có hoa ̣t tiń h sinh ho ̣c có giá tri ̣là: - 1-Heptatriacotanol: có tác du ̣ng chố ng la ̣i sự tăng cholesterol máu [16] 47 - Lupeol: Qua các nghiên cứu, người ta nhâ ̣n thấ y rằ ng lupeol là mô ̣t chấ t có khả ức chế sự tăng trưởng của các tế bào u ác tính [21] Nhiều nghiên cứu động vật in vitro tiền lâm sàng cho thấy lupeol có khả hoạt động chất chống viêm, chống vi sinh vật, chống protozoal, chống tăng sinh, chống xâm lấn, chống tạo mạch giảm cholesterol Đáng ý lupeol báo cáo là có khả chọn lọc tế bào mắ c bệnh không lành mạnh, không làm ảnh hưởng đế n tế bào bình thường khỏe mạnh [20] Tuy các nghiên cứu vẫn chưa hoàn chỉnh vẫn là mô ̣t hướng nghiên cứu có nhiề u triể n vo ̣ng, có ý nghiã khoa ho ̣c và thực tiễn cao 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ❖ Kết luận Qua trình nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học cao chiết của cao n-hexane từ lá tầ m gửi khế chua ở Đà Nẵng”, thu kết sau: Bằng phương pháp GC–MS định danh 17 cấu tử có dịch chiết n-hexane cẩ u lá tầ m gửi khế chua Trong đó, có số cấu tử chiếm thành phần lớn như: Lup-20(29)-en-3-ol, actate (22,47%), Amyrin (15,32%), Stigmaterol (13,49%), n-hexadecanoic acid (9,17%) Một số cấu tử chiếm thành phần lớn có nhiều ứng dụng thực tế: gồm có Stigmaterol, Amyrin, axit palmitic, n-hexadecanoic acid Theo kết định tính sơ bộ, thành phần cao n-hexane có chứa nhóm chức chức flavonoid, steroid, lipid, alkanoid, glycosid sesquiterpen–lacton; khơng có tanin phenol Đã tiến hành phân lập phân đoạn cao n-hexane (từ tổng cao ethanol) lá Tầ m gửi phương pháp sắc ký cột với chất hấp phụ silicagel thu phân đoa ̣n TH.I1, TH.I2, TH.I3 Sử dụng phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ (GC-MS) định danh số cấu tử có hàm lượng lớn phân đoạn TH.I1 là: 2-Myristynoyl pantetheine, n-Butyl ricinoleate, 1-Heptatriacotanol, Lupeol, 13,27-Cycloursan-3-ol, acetate, (3β,13β,14β)-, Lup-20(29)-en-3-ol, acetate, (3β)- ❖ Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn, thơng qua kết đề tài, mong muốn đề tài phát triển rộng số vấn đề sau: – Lá Tầ m gửi có chứa số chất có ứng dụng y học như: Vitamin E, Stigmaterol, Amyrin… với hàm lượng tương đối cao Vì vậy, cần nghiên cứu tách, làm giàu cấu tử phương pháp khác để đạt hiệu tốt nhằm đáp ứng nhu cầu sống – Thử hoạt tính sinh ho ̣c và dươ ̣c lực của các phân đoa ̣n có chứa các cấ u tử có dươ ̣c tính cao, từ đó phát triể n mô ̣t số chế phẩ m phu ̣c vu ̣ cho mu ̣c đić h y ho ̣c 49 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiế ng Viêṭ [1] Võ Văn Chi, “Danh mục tra cứu cỏ Việt Nam”, NXB Giáo dục, 2008 [2] Huỳnh Thi ̣ Diê ̣u, ”Khảo sát thành phầ n hóa học của lá xuân hoa (Pseuderanthemum palatiferum”, Ta ̣p chí khoa ho ̣c, 2008 [3] Nguyễn Hoàng Hạt cộng sự, “β-sitosterol, β-sitosteryl arachidate este mộc ý ngũ hùng ký sinh mít”, Tạp chí khoa học ĐHSP TP HCM, (số 24), 2010 [4] Nguyễn Hoàng Hạt, Phạm Văn Ngọt, Phạm Xuân Bằng, “Hoạt tính kháng khuẩn kháng ung thư loài Tầm gửi năm nhị (Dendrophthoe pentandra (L.) Blume in Chult F.) thuộc họ Tầm gửi (Loranthaceae)”, Hội nghị Khoa học toàn quốc lần thứ tư – Viện Sinh thái & Tài nguyên sinh vật, 2011 [5] Pha ̣m Hoàng Hô ̣, “Cây cỏ Viê ̣t Nam, tập 2", NXB Trẻ, 2000 [6] Đỗ Tất Lợi, “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, NXB Y học, 2003 [7] Bùi Nguyên Lý, “Khảo sát đặc điể m sinh học và chu trình phát triể n của loài tầ m gửi Macrosolen cochinchinensis cao su (Hevea brasiliensis")”, Khóa luâ ̣n tố t nghiê ̣p văn bằ ng kỹ sư, đại học Nông lâm thành phố Hồ Chí Minh, 2007 [8] Phạm Văn Ngọt, Quách Văn Toàn Em, Hoàng Văn Tới, “Nghiên cứu khả kháng khuẩn loài Mộc ký ngũ hùng Dendrophthoe pentandra (L.) Miq thuộc họ Tầm gửi Loranthaceae”, Tạp chí khoa học - Phòng Khoa học Cơng nghệ Tạp chí khoa học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh, (Sớ 24), 2010 [9] Nguyễn Kim Phi Phụng, ”Các phương pháp cô lập hợp chất tự nhiên”, NXB Đại học Quốc gia TP HCM, 2007 [10] Lê Thi ̣Thủy, ”Đại cương về Saponin”, Trường cao đẳ ng Y tế Thanh Hóa [11] Các axit béo, Thư viện học liệu mở Việt Nam [12] Công hiê ̣u chữa bê ̣nh từ tầ m gửi, Sức khỏe và Đời số ng, Cơ quan ngôn luâ ̣n của Bô ̣ Y tế , 2017 [13] Họ Chùm gởi Loranthacea, Trung tâm dữ liê ̣u thực vâ ̣t Viê ̣t Nam Tiế ng Anh 50 [14] Carl Eugster Richen, “Spontaneously disperrsible concentrates compringsing esters of baccatin - II compounds having antitumor and antiviral activity”, Switerland, Patent, 2000 [15] John H Wiersema, Blanca León, “Word economic plants”, CRC Press, 2016 [16] Juntao Chen, Changyu Ni, Junwei Lou, Wanxi Peng, ”Molecules and functions of rosewood: Pterocarpus cambodianus”, Arabian Journal of Chemistry, King Saud University, 2017 [17] Michael G Gilbert, “Flora of china 5”, Missouri Botanical Garden Press, 2003 [18] Monica López-Torres, Jens J Thiele, Yasuko Shindo, L Packer, “Topical application of alpha-tocopherol modulates the antioxidant network and diminishes ultraviolet-induced oxidative damage in murine skin”, University of California, USA, 1998 [19] Nina Artani, Yelli Ma’arifa Muhammad Hanafi, “Isolation and Identification of Active Antioxidant Compound from Star Fruit (Averrhoa carambola) Mistletoe (Dendrophthoe pentandra (L.) Miq.) Ethanol Extract”, Journal of Applied Sciences, 2006 [20] Saleem Mohammad, “Beneficial health effects of lupeol triterpene: a review of preclinical studies”, University of Minnesota, USA, 2011 [21] Saleem Mohammad, Maddodi Nityanand, Abu Zaid Mohammad, Khan N, bin Hafeez B, Asim M, Suh Y, Yun JM, Setaluri V, Mukhtar H, “Lupeol inhibits growth of highly aggressive human metastatic melanoma cells in vitro and in vivo by inducing apoptosis”, University of Wisconsin, USA, 2008 [22] Wahyu Widowati, Tjandrawati Mozet, Chandra Risdian, Hana Ratnawati, Susy Tjahani, Ferry Sandra, “The comparision of antioxidative and proliferation Inhibitions properties of Piper betle L., Catharanthus roseus (L.) G Don, Dendrophthie pentandra L and Curcuma mangga Val Extracts on T47D Cancer Cell Line”, International Research Jouunal of Biochemistry and Bioinformatics, 2001 51 ... Tên đề tài: Nghiên cứu chiế t tách và xác đinh ̣ thành phần hóa học cao chiế t n-hexane của lá tầ m gửi khế chua Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị - Nguyên liệu: Lá tầ m gửi đươ ̣c... DỤNG CÂY TẦM GỬI 1.4 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HỌ TẦM GỬI 1.4.1 Các cơng trình nghiên cứu giới .7 1.4.2 Các cơng trình nghiên cứu Việt Nam CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN... TỪ CAO TỔNG ETHANOL CỦA LÁ CÂY TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA 29 3.2.1 Kết chiết phân bố lỏng–lỏng tổng cao ethanol bằ ng n-hexan 29 3.2.2 Định tính định danh thành phần hóa học