Vấn đề được đặt ra ở nghiên cứu này đó là một số bệnh lý khiếm khuyết tế bào vùng rìa giác mạc bẩm sinh hoặc mắc phải bởi các nguyên nhân như hội chứng steven johnson, phẫu thuật giác mạc nhiều lần, bỏng nhiệt hoặc hóa chất tạo sẹo giác mạc, nhiễm trùng, đeo contact lens... dẫn đến phá hủy lớp biểu mô giác mạc gây giảm thị lực của bệnh nhân. Để điều trị hiệu quả, bệnh nhân cần phải tạo được lớp biểu mô giác mạc thay thế.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 NGHIÊN CỨU NI CẤY TẾ BÀO GỐC VÙNG RÌA GIÁC MẠC VÀ NIÊM MẠC MÁ TỰ THÂN ĐIỀU TRỊ BỆNH LÝ BIỂU MƠ GIÁC MẠC Trần Cơng Toại*, Trần Thị Thanh Thủy*, Phan Kim Ngọc**, Diệp Hữu Thắng*** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Một số bệnh lý khiếm khuyết tế bào vùng rìa giác mạc bẩm sinh mắc phải nguyên nhân hội chứng Steven Johnson, phẫu thuật giác mạc nhiều lần, bỏng nhiệt hóa chất tạo sẹo giác mạc, nhiễm trùng, đeo contact lens…dẫn đến phá hủy lớp biểu mô giác mạc gây giảm thị lực bệnh nhân Để điều trị hiệu quả, bệnh nhân cần phải tạo lớp biểu mô giác mạc thay Vật liệu phương pháp nghiên cứu: Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu loạt ca Phương pháp nghiên cứu: Bệnh nhân chia làm nhóm dựa theo định để tiến hành ghép tế bào gốc Nhóm 1: ghép “tấm biểu mơ” tạo thành từ niêm mạc má Nhóm: ghép “tấm biểu mơ” tạo thành từ tế bào gốc vùng rìa giác mạc Tế bào rìa giác mạc niêm mạc má thu nhận theo tiêu chuẩn chọn mẫu tạo biểu mơ theo qui trình Đánh giá: Tế bào ni cấy theo dõi kính hiển vi đảo ngược pha, nhuộm mơ học HE nhuộm hóa mơ miễn dịch với marker p63 Kết ghép biểu mô bệnh nhân theo dõi dựa khám bề mặt giác mạc, đánh giá thị lực kết tạo tân mạch giác mạc Kết bàn luận: Sau tiến hành nghiên cứu, đạt số kết sau: - Nhóm 1: bề mặt nhãn cầu ổn định 6/7 mắt Thị lực cải thiện khơng q hàng - Nhóm 2: bề mặt nhãn cầu ổn định 22/23 ca Thị lực cải thiện lớn hàng 20/23 ca Kết cho thấy tính hiệu phương pháp điều trị tác giả khác giới Kết luận: Chúng sử dụng thành công kỹ thuật ni cấy tế bào gốc an tồn hữu dụng, đặc biệt điều trị bệnh lý bề mặt nhãn cầu chuyên khoa mắt Từ khóa: ghép tế bào gốc, niêm mạc má, rìa giác mạc ABSTRACT CULTURE OF AUTOGRAFT LIMBAL CELLS AND CHEEK EPITHELIAL CELLS TO TREAT CORNEAL EPITHELIUM DISEASE Tran Cong Toai, Tran Thi Thu Thuy, Phan Kim Ngoc, Diep Huu Thang * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 24 - 30 Introduction: Some pathologies of corneal cell edge region may be of congenital origin such as Steven Johnson syndrome, or can be caused by mechanical or environment condition such as corneal multiple surgeries, chemicals that eventually generate infection due to different auto-immune reaction All these condition may eventually lead to the destruction of cornea epithelial layer causing either a decrease or a total loss of vision For an effective treatment, patients need to be regenerated the corneal epithelial layer Materials and methods: Research design: Case series study Methods: Patients were divided into groups to conduct stem cell transplantation: Group 1: graft “epithelial sheets” are made up of oral mucosa Group 2: graft “epithelial sheets” are formed from stem cell of Trường ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch, **Trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên- ĐH Quốc Gia Tp.HCM Bệnh viện Mắt Tp.HCM Tác giả liên lạc: PGS TS BS Trần Công Toại ĐT: 0913.914.672 * *** 24 Hội Nghị KH KT Đại Học Y Phạm Ngọc Thạch Năm 2011 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học corneal area (limbal stem cell) Corneal cell edge and oral mucosa were included as standard sample and generate epithelial sheets in the protocol Evaluation: Cells were monitored by inverted phase microscopy, HE staining and immune-histochemical staining by p63 marker Results of the epithelial sheet transplant are monitored and evaluated by the corneal surface examination, vision and corneal new vessels Results and discussion: After conducting research, we obtained the results as follows: - Group 1: Stable surface eyeball 6/7 eyes Vision improved, but not more than row - Group 2: Stable surface eyeball 22/23 eyes Vision improved, but not more than row This result shows the effectiveness of treatment in line with other international studies Conclusion: We used a successfully technique which confirmed that cultured stem cells are safe and useful in the treatment of few eye pathological condition Key words: stem cell transplantation, oral mucosa, of corneal area (limbal stem cell) ĐẶT VẤN ĐỀ Nghiên cứu tế bào gốc lĩnh vực mang tính thời giới tiềm ứng dụng to lớn chúng lĩnh vực Y Sinh học(18,19,21,32) Tuy nhiên, tùy theo định hướng nghiên cứu nhóm nghiên cứu, vùng miền quốc gia mà khả nghiên cứu tiến hành quy mô nghiên cứu khác Ở nước ta nghiên cứu tế bào gốc bước quan tâm nhà khoa học, nhà nghiên cứu, bác sĩ lâm sàng nhà đầu tư chiến lược khoa học nhà nước đầu tư vào lĩnh vực mẽ đầy triển vọng này(8) So với nước khu vực, Việt Nam bắt đầu xây dựng chiến lược, đào tạo đội ngũ chuyên gia, sở hạ tầng mức độ đầu tư sản phẩm cơng nghệ tế bào gốc quy trình cơng nghệ, cơng trình cơng bố khoa học chun ngành …tuy nhiên điểm xuất phát Nhờ vào giúp đỡ, chuyển giao kỹ thuật từ phòng thí nghiệm tiên tiến Nhật(21,22,23) chúng tơi tiếp cận, triển khai qui trình mẻ có giá trị vô to lớn, thực nghiên cứu ứng dụng tế bào vùng rìa giác mạc niêm mạc má người tạo biểu mô điều trị bệnh lý tổn thương biểu mô giác mạc tự thân qua nuôi cấy(23,25,28) Thực đề tài cần đạt mục tiêu sau: Tạo biểu mô giác mạc từ tế bào gốc vùng rìa tế bào niêm mạc má Đánh giá kết điều trị bệnh nhân tổn thương biểu mô giác mạc ghép biểu mô tự thân qua nuôi cấy tế bào gốc VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kết nghiên cứu: nghiên cứu loạt ca Các phương pháp nghiên cứu: Tạo màng collagen từ màng ối người(2,4,10,11,16,17,20,30) - Sản phụ phải xét nghiệm âm tính với HIV, HBV, HCV, VDRL… Mẫu lấy sau sanh, trữ lọ vơ trùng có chứa dung dịch PBS (Phosphat Buffer Salin), kháng sinh, chuyển nhanh phòng thí nghiệm - Rửa màng ối dung dịch PBS máu, mô sống không cần thiết - Cắt màng ối thành mảnh khoảng 50cm2 xử lý với dung dịch trypsin 0,25% EDTA 0,02% 30 phút 37oC - Cạo bỏ lớp tế bào biểu mô màng ối, tránh làm vỡ màng đáy - Đánh giá hiệu bóc tách lớp tế bào biểu mơ màng ối phương pháp nhuộm hematoxylin eosin (nhuộm H&E) - Màng collagen bảo quản 12 tháng sau để khô tự nhiên khử trùng tia gamma - Trải mẫu màng ối đĩa insert, để khô tự nhiên buồng cấy, nhiệt độ phòng Hội Nghị KH KT Đại Học Y Phạm Ngọc Thạch Năm 2011 25 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 - Khảo sát màng ối sau xử lý cách quan sát mô học phân tích độc chất Phương pháp trải màng collagen đĩa ni(1,14,26,31) Cắt màng collagen thành mảnh có diện tích tương ứng bề mặt đĩa ni Trải căng áp sát màng collagen bề mặt đĩa nuôi (đĩa lồng - insert) cho mặt biểu mô hướng lên Để khơ tự nhiên tủ cấy Đóng gói khử trùng chiếu xạ tia từ nguồn Co60, suất liều 25 kGy(3,8,15) Các phương pháp nuôi cấy tế bào 3T3, tế bào vùng rìa giác mạc tế bào niêm mạc má theo qui trình ĐH Tokyo Dental College Ichikawa(5,7,23) Tạo biểu mô giác mạc từ TBG vùng rìa giác mạc Thu nhận mẫu tế bào vùng rìa giác mạc phòng mổ (Bệnh viện Mắt TP.HCM), cho vào dung dịch bảo quản Optisol GS, đặt hộp bảo quản lạnh 2-80C, chuyển nhanh phòng thí nghiệm Rửa lần dung dịch PBS Cắt lọc mẫu mô Nuôi đĩa insert trảii màng collagen từ màng ối có feeder tế bào 3T3 mơi trường SHEM (DEMEM/F12, 100µ/ml Streptomycine, 100U/ml Penicillin, 10ng/ml EGF, µ/ml Insulin, 0,1 µ/ml Cholera toxin, 5% FBS) Mẫu mơ có bờ biểu mơ áp màng, nhỏ giọt môi trường SHEM, ngày thêm 0,5ml môi trường, ngày thay môi trường 1ml/đĩa insert 1,5ml/đĩa 3T3 Từ 14-21 ngày tạo biểu mơ có nhiều lớp tế bào ghép lại cho bệnh nhân Một phần mẫu giữ lại sau ghép đánh giá mơ học thực hóa miễn dịch mô 26 Tạo biểu mô giác mạc từ TBG niêm mạc má Niêm mạc má lấy từ BV Mắt người tình nguyện d=0,8 cm đựng dung dịch Optisol GS giữ 40C mang phòng thí nghiệm Cắt lọc mẫu bớt phần mơ niêm mạc Tạo thành phần 2mm Ủ dung dịch Dipase 40C cho Dipase có nồng độ 0,8UI/ml Tách tế bào,đếm tế bào sống cấy đĩa insert (0,1 – x 105 cells/ml) Thay môi trường SHEM ngày, 1ml/đĩa insert 1,5ml/đĩa tế bào 3T3 Mẫu tiếp xúc khơng khí (airlifting) ngày trước ghép Từ 14-21 ngày tạo biểu mơ có nhiều lớp tế bào chuyển lại ghép cho bệnh nhân Một phần mẫu giữ lại sau ghép đánh giá mơ học hóa miễn dịch mô Điều trị bệnh lý biểu mô giác mạc kết ghép điều trị 30 bệnh nhân tình nguyện(24,27,29,33) Bệnh nhân đến khám Bệnh viện Mắt TP HCM có định ghép TBG chuyển đến khoa Giác mạc Bác sỹ chuyên khoa Giác mạc khám, hội chẩn để định điều trị Bệnh nhân bác sĩ chuyên khoa giải thích đầy đủ nhu cầu phương pháp điều trị giải pháp nuôi tế bào sau nuôi cấy, cam kết đồng ý theo mẫu Nếu bệnh nhân bị tổn thương mắt mắt lại tốt điều trị ghép TBG vùng rìa giác mạc Nếu bệnh nhân bị tổn thương hai mắt niêm mạc má tốt điều trị ghép biểu mô nuôi cấy từ tế bào niêm mạc má Bệnh nhân làm xét nghiệm tiền phẫu, khám nội khoa tổng quát, khám mắt (đặc biệt đánh giá tình trạng viêm, tân mạch phim nước mắt) Hội Nghị KH KT Đại Học Y Phạm Ngọc Thạch Năm 2011 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Lấy mẫu tế bào chuyển phòng thí nghiệm xử lý ni cấy tạo biểu mơ, hẹn trở lại ghép Hình 1: Xử lý mẫu tế bào niêm mạc má Hình 3.15: Màng ối trước cấy tế bào, nhuộm HE x 400 Hình 3.16: Màng ối sau ni cấy, nhuộm HE x400 Hình 3.17: Màng ối sau ni cấy, nhuộm P63 x 400 Hình 3.18: Tấm tế bào từ Y.Hori (Osaka, Nhật) Hình2: Đĩa insert dùng để nuôi cấy tế bào Trong nghiên cứu này, chúng tôi: - Đánh giá bước đầu việc ứng dụng ghép biểu mô điều trị bệnh lý bề mặt nhãn cầu Hình 3.9: Tế bào niêm mạc má sau ni cấy ngày Hình 3.10: Tế bào niêm mạc má sau nuôi cấy 10 ngày - Đánh giá chất lượng biểu mô tạo thành từ nuôi cấy tế bào gốc vùng rìa giác mạc từ tế bào niêm mạc má màng ối Phân loại Bệnh nhân chia làm nhóm dựa theo định: - Nhóm 1: ghép “tấm biểu mơ” tạo thành từ tế bào niêm mạc má - Nhóm 2: ghép “tấm biểu mô” tạo thành từ tế bào gốc vùng rìa giác mạc Quy trình chọn lọc bệnh nhân Tế bào gốc vùng rìa giác mạc: lấy từ kết mạc rìa cực 4x2 mm Tế bào niêm mạc má: lấy từ niêm mạc má, đường kính 8mm Mẫu đặt môi trường chuyên chở gửi đến Phòng thí nghiệm Vật liệu Sinh Hội Nghị KH KT Đại Học Y Phạm Ngọc Thạch Năm 2011 27 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 học, Bộ môn Mô - Phôi, Trường Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch thực qui trình ni cấy - Bệnh nhân phẫu thuật ghép biểu mô - Tân mạch độ 1: 5/7 mắt, độ 2: 1/7 mắt, độ 3: 1/7 mắt - Thị lực có cải thiện khơng q hàng - Bệnh nhân điều trị ngoại trú, nằm viện Đánh giá: Đánh giá kết dựa khám bề mặt giác mạc, thị lực tân mạch giác mạc (tân mạch chia làm độ: độ tân mạch vùng rìa, độ tân mạch vào giác mạc 3mm, độ tân mạch vào toàn giác mạc, độ vào toàn giác mạc thành bó tân mạch) Nhóm 1: Tấm biểu mơ tạo thành từ tế bào gốc vùng rìa giác mạc 23 bệnh nhân (16 bệnh nhân mộng thịt tái phát, bệnh nhân bỏng kiềm,1 bệnh nhân Stevens Johnson,1 bệnh nhân suy yếu tế bào gốc chưa rõ nguyên nhân bệnh nhân bị ong chích) Thời gian theo dõi trung bình 6,34 tháng Nhóm 2: Tấm biểu mô từ tế bào niêm mạc má nuôi cấy màng ối bệnh nhân (6 mắt) với hội chứng Stevens Johnson bệnh nhân bỏng hóa chất Tổng cộng mắt, thời gian theo dõi trung bình 18,4 tháng KẾT QUẢ Hình 3.25: Điều trị tổn thương sẹo giác mạc trước ghép Hình 3.26:Tế bào rìa giác mạc sau ni cấy, trước ghép Hình 3.27: Điều trị tổn thương sẹo giác mạc trước ghép BÀN LUẬN Ghép biểu mô nuôi cấy từ tế bào Nhóm 1: gốc giúp giải bệnh lý bề - Ghép tế bào gốc vùng rìa - Thời gian theo dõi trung bình 6,34 tháng - Bề mặt nhãn cầu ổn định 22/23 ca Một ca bi nhiễm trùng sau mổ 07 ngày bệnh nhân nhiễm HIV (nhiễm trùng sau điều trị ổn) - Thị lực cải thiện lớn hàng 20/23 ca (87%) mặt nhãn cầu suy yếu tế bào gốc vùng rìa giác mạc(6,9,12,13,34) Phối hợp với ghép giác mạc đem lại thị lực cho bệnh nhân tốt góp phần mang lại thành cơng phẫu thuật ghép giác mạc Cần điều trị tình trạng viêm bề mặt, tình - Tân mạch chưa phát triển 18/23 ca trạng khô mắt thật tốt giúp mang lại kết - Độ 1: 3/23 ca, độ 2: 1/23 ca độ: 1/23 tốt Nhóm 2: Bệnh nhân cần làm xét nghiệm tiền - Ghép tế bào niêm mạc má phẫu kiểm tra bệnh liên quan miễn dịch ví - Thời gian theo dõi trung bình 18,4 tháng - Bề mặt nhãn cầu ổn định 6/7 mắt 28 Hình 3.24: Mắt tổn thương sẹo giác mạc trước ghép dụ HIV, tiểu đường, viêm khớp, nhằm tiên lượng hướng điều trị Hội Nghị KH KT Đại Học Y Phạm Ngọc Thạch Năm 2011 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 engineered with or without an amniotic membrane carrier, Đối với bệnh nhân suy giảm miễn dịch cần thận trọng dễ bị nhiễm trùng phải Nghiên cứu Y học Invest Ophtalmol Vis Sci, 48: 597–604 sử dụng corticoid sau mổ Higa K, Shimmura S, Shimazaki J, Tsubota K (2005): Hyaluronic acid-CD44 interaction mediates the adhesion of lymphocytes by amniotic membrane stroma, Cornea, 24: 206-212 Phẫu thuật khơng phức tạp đòi hỏi Higa K, Shimmura S, Shimazaki J, Tsubota K (2006): Ocular surface epithelial cells up-regulate HLA-G when expanded in vitro on amniotic tỉ mỉ Chọn bệnh nhân định theo membrane substrates, Cornea, 25: 715-721 dõi chặt chẽ 10 J, James DK, Dua HS (2008): Optimization of amniotic membrane Với việc ứng dụng keo sinh học collagen giúp cho phẫu thuật đơn giản hiệu (AM) denuding for tissue engineering, Tissue engineering, 14: 371-383 11 Hori J, Wang M, Kamiya K, Takahashi H, Sakuragawa N (2006): Immunological characteristics of amniotic epithelium, Cornea, 25:53- Đa số trường hợp có tổn thương giác mạc nặng ghép tế bào gốc bước đệm việc Hopkinson A, Shanmuganathan VA, Gray T, Yeung AM, Lowe 58 12 Kevin YH Chee, Anthony Kicic, Steven J Wiffen (2006): Limbal stem cells: the search for a marker, Clinical and Experimental ghép giác mạc sau Ophthalmology, 34: 64–73 KẾT LUẬN 13 Koizumi NJ, Inatomi TJ, Quantock AJ (2000): Amniotic membrane as a substrate for cultivating limbal epithelial cells for autologous Thành công kỹ thuật nuôi cấy tế bào transplantation in rabbits, Cornea, 19: 65-71 14 gốc Kruse FE, Joussen AM, Rohrschneider K, You L, Sinn B, Baumann J, Volcker HE (2000): Cryopreserved human amniotic membrane for Phẫu thuật an toàn hữu dụng, đặc biệt trường hợp mộng thịt tái phát, trường hợp hội chứng Stevens Johnson có đục ocular surface reconstruction, Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol, 238: 68-75 15 of human amniotic membrane in experimental xenotransplantation, giác mạc cần phẫu thuật ghép giác mạc sau Invest Ophthalmol Vis Sci, 42:1539-1546 16 nhằm đem lại thị lực cho bệnh nhân trimester or during delivery, Obstet Gynecol, 78: 24-27 17 tế bào gốc điều trị bệnh lý bề mặt nhãn cầu Visual Science, 40: 878-886 18 Ariane R, Yann B (2006): Essentials of stem cell biology, Elsevier, Inc.: 440 – 444 Azuara BA, Pillai CT, Dua HS (1999) : Amniotic membrane undifferentiated growth of primate embryonic stem cells, Stem Cells, 22: 433-440 Bacakova L, Filova E, Rypacek F, Svorcik V, Stary V (2004): Cell 20 adhesion on artificial materials for tissue engineering Physiol Res, 53: membrane, Rad Phys Chem, 76:1026 – 1030 Chen HJ, Pires RT, Tseng SC (2000): Amniotic membrane 21 transplantation for severe neurotrophic corneal ulcers, Br J Ophthalmol, autologous cultivated oral mucosal epithelial transplantation, Der-Yuan W, Yi-Jen H, Vivian CY, Jan-Kan C (2003): Propagation and phenotypic preservation of rabbit limbal epithelial cells on amniotic Arch Ophthalmol, 126: 23-8 22 membrane, Investigative Ophthalmology and Visual Science, 44: 4698- the Higa K, Shimazaki J (2008): Recent advances in cultivated epithelial transplantation, Cornea, 27(1):S41-47 Higa K, Shimmura S, Kato N et al (2007): Proliferation and differentiation of transplantable rabit epithelial sheets Shimazaki J, Aiba M, Goto E et all (2002): Transplantation of human limbal epithelium cultivated on amniotic membrane for 4704 Satake Y, Dogru M, Yamane GY et all (2008): Barrier function and cytologic features of the ocular surface epithelium after 84: 826-833 Rita S, Sumita P, Chacharkar MP (2007): Effect of high doses of gamma radiation on the functional characteristics of amniotic 35-45 Miyamoto K, Hayashi K, Suzuki T, Ichihara S, Yamada T, Kano Y, Yamabe T, Ito Y (2004): Human placenta feeder layers support 399-402 Miki T, Lehmann T, Cai H, Stolz DB, Strom SC (2005): Stem cell characteristics of amniotic epithelial cells, Stem Cells, 23: 1549-1559 19 transplantation for ocular surface reconstruction, Br J Ophthalmol, 83: Meller D, Tseng SCG (1999): Stratified Conjunctival Epithelial Cell Differentiation on Amniotic Membrane, Investigative Ophthalmology & TÀI LIỆU THAM KHẢO Manabe Y, Himeno N, Fukumoto M (1991): Tensile strength and collagen content of amniotic membrane not change after the second Mở hướng việc ứng dụng Kubo M, Sonoda Y, Muramatsu R, Usui M (2001): Immunogenicity treatment of severe ocular surface disorders, Ophthalmology, 109:1285-90 23 Shimazaki J, Higa K, Kato N et all (2009): Barrier function of cultivated limbal and oral mucosal epithelial cell sheets, Invest Ophthalmol Vis Sci, 50:5672-80 Hội Nghị KH KT Đại Học Y Phạm Ngọc Thạch Năm 2011 29 Nghiên cứu Y học 24 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Shimazaki J, Higa K, Morito F et all (2007):Factors influencing 30 outcomes in cultivated limbal epithelial transplantation for Sakuragawa N (2000): Inducing proliferation of human amniotic chronic cicatricial ocular surface disorders, Am J Ophthalmol, 143: 945-53 25 epithelial (HAE) cells for cell therapy, Cell Transplant, 9:701-704 31 Amniotic membrane transplantation with or without limbal allografts for Immunologic rejection of the central graft after limbal allograft corneal surface reconstruction in patients with limbal stem cell transplantation combined with penetrating keratoplasty, Cornea, deficiency, Arch Ophthalmol, 116: 431-441 32 Shimazaki J, Shimmura S, and Tsubota K (2002): Limbal stem of cornea (gelatinous drop-like dystrophy), Cornea, 21:177-80 transplantation, N Engl J Med, 340:1697-703 33 29 Tsubota K, Satake Y, Ohyama M, Toda I, Takano Y, Ono M, Shimazaki J, Shimmura S, Tsubota K (2004): Donor source Shinozaki N, Shimazaki J (1996): Surgical reconstruction of the ocular affects the outcome of ocular surface reconstruntion in chemical surface in advanced ocular cicatricial pemphigoid and Stevens-Johnson or thermal burns of the cornea, Opthalmology, 111:38-44 28 Tsubota K, Satake Y, Kaido M et all (1999): Treatment of severe ocular-surface disorders with corneal epithelial stem cell cell transplantation for the treatment of subepithelial amyloidosis 27 Tseng SC, Prabhasawat P, Barton K, Gray T, Meller D (1998): Shimazaki J, Maruyama F, Shimmura S et all (2001): 20:149-52 26 Terada S, Matsuura K, Enosawa S, Miki M, Hoshika A, Suzuki S, Shimmura S, and Tsubota K (2002): Ocular surface syndrome, Am J Ophthalmol, 122: 38-52 34 Yiqin Du, Jing Chen, James L Funderburgh, Xiuan Zhu, Lingsong Li reconstruction update, Curr Opin Ophthalmol, 13:213-219 (2003): Functional reconstruction of rabbit corneal epithelium by Shimmura S, Tsubota K (2008): Surgical treatment of limbal human limbal cells cultured on amniotic membrane, Molecular Vision, stem cell deficiency: are we really transplanting stem cell?, Am J 9:635-643 Ophthalmal, 146:154-5 30 Hội Nghị KH KT Đại Học Y Phạm Ngọc Thạch Năm 2011 ... Tạo biểu mô giác mạc từ tế bào gốc vùng rìa tế bào niêm mạc má Đánh giá kết điều trị bệnh nhân tổn thương biểu mô giác mạc ghép biểu mô tự thân qua nuôi cấy tế bào gốc VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN... qui trình mẻ có giá trị vô to lớn, thực nghiên cứu ứng dụng tế bào vùng rìa giác mạc niêm mạc má người tạo biểu mô điều trị bệnh lý tổn thương biểu mô giác mạc tự thân qua nuôi cấy( 23,25,28) Thực... biểu mơ” tạo thành từ tế bào gốc vùng rìa giác mạc Quy trình chọn lọc bệnh nhân Tế bào gốc vùng rìa giác mạc: lấy từ kết mạc rìa cực 4x2 mm Tế bào niêm mạc má: lấy từ niêm mạc má, đường kính 8mm