Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xây dựng quy trình gây miễn dịch trên gà mái với kháng nguyên VKT, tạo cơ sở khoa học để thu thập kháng thể IgY kháng VKT từ trứng do gà mái được gây miễn dịch đẻ ra. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
ễn dịch, mẫu huyết gà thuộc lô số (gây miễn dịch với nồng độ kháng nguyên cao nhất, tương ứng với mật độ vi khuẩn x 1010 CFU/ml) cho kết mật độ quang học giếng phản ứng cao rõ rệt so với lơ gà gây miễn dịch lại (p < 0,05) Như thấy, quy trình gây miễn dịch sử dụng nghiên cứu có tác dụng kích thích gà mái tạo kháng thể IgY kháng VKT ên cạnh đó, phạm vi dải nồng độ kháng nguyên VKT sử dụng để gây miễn dịch (thể mật độ vi khuẩn từ 0,375 x 1010 x 1010 CFU/ml), cường độ đáp ứng tạo kháng thể có xu hướng tỷ lệ thuận với nồng độ kháng nguyên sử dụng gây miễn dịch OD 450 (nm) hình chữ U khay nhựa 96 giếng Khay phản ứng giữ nhiệt độ phòng giờ, sau để lắng tự nhiên 40C qua đêm Hiện tượng ngưng kết vi khuẩn đánh giá dương tính quan sát thấy hình ảnh đám ngưng kết, âm tính vi khuẩn (khơng bị ngưng kết) lắng tự nhiên xuống trung tâm đáy giếng Độ pha lỗng kháng thể (x 1.000) Hình 2: Phản ứng ELISA phát IgY kháng VKT (từ lòng đỏ trứng gà) TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 Kháng thể IgY phân lập từ lòng đỏ trứng gà pha lỗng thành nồng độ khác nhau, sau thực phản ứng ELISA để xác định có mặt kháng thể IgY kháng VKT lòng đỏ trứng Phản ứng ELISA cho kết dương tính với mẫu kháng thể IgY phân lập từ trứng gà gây miễn dịch với kháng nguyên VKT (ngay mức pha loãng 1/4.000), mẫu đối chứng âm (kháng thể phân lập từ trứng gà không gây miễn dịch) khơng có phản ứng với kháng ngun VKT Trong số kháng thể có máu gà, lớp kháng thể có cấu trúc phân tử tương tự kháng thể IgG động vật có vú, vận chuyển tích cực từ gà mái sang lòng đỏ trứng gà mái đẻ ra, lớp kháng thể gọi IgY (yolk immunoglobulin), nguồn gốc kháng thể IgY lòng đỏ trứng Bằng phương pháp gây miễn dịch gà mái thu thập kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch đẻ ra, Tim Sunnary CS (2011) thu kháng thể IgY kháng trực khuẩn mủ xanh, có tác dụng ức chế trực khuẩn mủ xanh mô hình vết thương bỏng thực nghiệm gây nhiễm trực khuẩn mủ xanh [2] Tương tự, nhóm nghiên cứu Hồng Trung Kiên CS (2010) thu IgY từ lòng đỏ trứng gà kháng vi khuẩn E ictaluri (gây bệnh mủ gan cá tra) [1] Theo Kazuyuki H CS (2010), IgY đặc hiệu với VKT có nguồn gốc từ lòng đỏ trứng gà chứng minh có tác dụng bảo vệ mơ hình chuột nhắt trắng sơ sinh nhiễm VKT [6] Trong nghiên cứu này, có mặt kháng thể IgY đặc hiệu huyết gà sau gây miễn dịch với kháng nguyên VKT, lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch sở khoa học quan trọng để tiến hành phân lập kháng thể IgY kháng VKT lòng đỏ trứng gà, sở khảo sát hoạt tính sinh học, tác dụng bảo vệ kháng thể mơ hình động vật gây nhiễm VKT Hoạt tính ngƣng kết VKT kháng thể IgY Hình 3: Phản ứng ngưng kết VKT kháng thể IgY môi trường lỏng (A: khay 96 giếng thực phản ứng ngưng kết với độ pha loãng kháng thể khác nhau; B (IgY phân lập từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch): phản ứng ngưng kết dương tính: hình ảnh đám vi khuẩn ngưng kết đáy giếng phản ứng; C: phản ứng ngưng kết âm tính: vi khuẩn lắng tự nhiên xuống đáy giếng phản ứng) Phản ứng ngưng kết vi khuẩn thực phiến nhựa 96 giếng có đáy hình chữ U Kết quả: IgY phân lập từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch với kháng nguyên VKT có khả gây ngưng kết VKT môi trường lỏng Hiệu giá kháng thể ngưng kết xác định 1/512 với dung dịch chứa kháng thể IgY phân lập từ lòng đỏ trứng (của gà gây miễn dịch) phương pháp tủa lipid với nước cất lạnh; nồng độ protein dung dịch sau tủa lipid 0,8 mg/ml (số liệu khơng trình bày báo này) TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 Cùng với kết phản ứng ELISA xác định có mặt kháng thể IgY kháng VKT lòng đỏ trứng gà, kết dương tính phản ứng ngưng kết VKT môi trường lỏng kháng thể IgY phân lập từ lòng đỏ trứng (của gà gây miễn dịch) giúp cung cấp thêm sở khoa học quan trọng để chúng tơi kết luận: ứng dụng phương pháp gây miễn dịch gà mái kháng nguyên VKT để sản xuất kháng thể IgY kháng VKT, cách phân lập kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch Tuy nhiên, phạm vi đề tài nghiên cứu này, chưa chứng minh tác dụng bảo vệ kháng thể IgY kháng VKT; mặt khác, để thu kháng thể IgY kháng VKT với hiệu giá cao, cần có nghiên cứu thực tối ưu hóa quy trình phân lập và/hoặc tinh kháng thể từ lòng đỏ trứng Tim Sunnary, Đỗ Minh Trung, Lê Thu Hồng, Lê Văn Đông Tác dụng in vivo kháng thể IgY kháng trực khuẩn mủ xanh vết thương bỏng thực nghiệm nhiễm trực khuẩn mủ xanh Tạp chí Y dược học quân 2011, 36 (8), tr.44-49 KẾT LUẬN Lee CK, Weltzin R, Soman G Oral administration of polymeric immunoglobulin A prevents colonization with Vibrio cholerae in neonatal mice Infection and Immunity 1994, 62 (3), pp.887-891 Gây miễn dịch cho gà mái với kháng nguyên VKT (V cholerae) bất hoạt nhiệt có khả kích thích đáp ứng tạo kháng thể IgY kháng VKT sau gây miễn dịch tuần Kháng thể IgY kháng VKT phân lập từ lòng đỏ trứng gà mái gây miễn dịch với kháng nguyên VKT TÀI LIỆU THAM KHẢO Hoàng Trung Kiên, Đỗ Khắc Đại, Nguyễn Ngọc Tuấn Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng Edwardsiella ictaluri gây bệnh mủ gan cá tra công nghệ tạo kháng thể IgY gà Tạp chí Thơng tin Y dược 2010, 3, tr.71-76 De S, Chaudhuri A, Dutta P Doxycycline in the treatment of cholera Bull World Health Organ 1976, 54, pp.177-179 Greenough WB, Rosenberg IS, Gordon RS Tetracycline in the treatment of cholera The Lancet 1964, 283 (7329), pp.355-357 Huu Dat Tran, Munirul Alam, Nguyen Vu Trung Multi-drug resistant Vibrio cholerae O1 variant El Tor isolated in northern Vietnam between 2007 and 2010 J Med Microbiol 2012, 61 (Pt 3), pp.431-437 Kazuyuki H, Hideyuki A, Koji U Passive oral immunization by egg yolk immunoglobulin (IgY) to Vibrio cholerae effectively prevents cholera Acta Medica Okayama 2010, 64 (3), pp.163-170 Osek J, Svennerholm Ann, Holmgren J Protection against Vibrio cholerae El Tor infection by specific antibodies against mannose-binding hemagglutinin pili Infection and Immunity 1992, 60 (11), pp.4961-4964 Yu L, Zhou Y, Wang R Multiple antibiotic resistance of Vibrio cholerae serogroup O139 in China from 1993 to 2009 PLoS ONE 2012, (6), e38633 Ngày nhận bài: 2/11/2012 Ngày giao phản biện: 28/11/2012 Ngày giao thảo in: 28/12/2012 TP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 ... phương pháp gây miễn dịch gà mái kháng nguyên VKT để sản xuất kháng thể IgY kháng VKT, cách phân lập kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch Tuy nhiên, phạm vi đề tài nghiên cứu này, chưa... Trong nghiên cứu này, có mặt kháng thể IgY đặc hiệu huyết gà sau gây miễn dịch với kháng nguyên VKT, lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch sở khoa học quan trọng để tiến hành phân lập kháng thể IgY kháng. .. ra, lớp kháng thể gọi IgY (yolk immunoglobulin), nguồn gốc kháng thể IgY lòng đỏ trứng Bằng phương pháp gây miễn dịch gà mái thu thập kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch đẻ ra, Tim