Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài nghiên cứu này được thực hiện tiến hành ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong phát hiện người lành mang gen đột biến và chẩn đoán trước sinh bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh. Nghiên cứu tiến hành khảo sát trên hai gia đình có con bị đột biến gen CYP21A2. Gia đình 1 phân tích gen từ mẫu máu của người mẹ và dịch ối thai nhi. Gia đình 2 phân tích gen từ mẫu máu của bố mẹ và mẫu ối của thai nhi. Sử dụng kỹ thuật giải trình tự và MLPA để xác định tình trạng mang gen bệnh của các đối tượng nghiên cứu.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 PHÁT HIỆN NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐỐN TRƯỚC SINH BỆNH TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN BẨM SINH Nguyễn Thị Băng Sương* TĨM TẮT Mở đầu: Tăng sản thượng thận bẩm sinh (TSTTBS – Congentinal Adrenal Hyperplasia, viết tắt là CAH) là bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể thường. 90‐95% các ca bệnh là do thiếu hụt enzyme 21‐hydroxylase (21‐ OH). Sự thiếu hụt enzyme 21‐OH xảy ra do các đột biến trên gen CYP21A2 mã hóa tổng hợp enzyme steroid 21‐hydroxylase. Mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong phát hiện người lành mang gen đột biến và chẩn đốn trước sinh bệnh TSTTBS. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Hai gia đình có con bị đột biến gen CYP21A2. Gia đình 1 phân tích gen từ mẫu máu của người mẹ và dịch ối thai nhi. Gia đình 2 phân tích gen từ mẫu máu của bố mẹ và mẫu ối của thai nhi. Sử dụng kỹ thuật giải trình tự và MLPA để xác định tình trạng mang gen bệnh của các đối tượng nghiên cứu. Kết quả: Gia đình 1 mẹ và thai nhi đều mang đột biến gen dị hợp tử thay thế Arginin bằng Cystein tại codon 426. Gia đình 2 có bố mang gen đột biến dị hợp tử mất đoạn từ exon 1 đến exon 8; mẹ mang đột biến dị hợp tử mất đoạn từ exon 1 đến exon 3; thai nhi nam mang đột biến dị hợp tử mất đoạn từ exon 1 đến exon 8. Kết luận: Ứng dụng thành cơng kỹ thuật giải trình tự và MLPA để xác định đột biến gen CYP21A2, đây là cơ sở vững chắc để phòng bệnh bằng chẩn đốn và điều trị trước sinh. Từ khố: Bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh, đột biến gen CYP21A2, mất đoạn, đột biến điểm, giải trình tự gen, MLPA. ABSTRACT DETECTION OF CONGENITAL ADRENAL HYPERPLASIA MUTANT CARRIER AND PRENATAL DIAGNOSIS Nguyen Thi Bang Suong* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2014: 150 ‐ 156 Introduction: Congenital adrenal hyperplasia (CAH) is an autosomal recessiveinherited genetic disorder. The most frequent cause is the deficiency of steroid 21‐hydroxylase (21‐OH) due to mutations in the CYP21A2 gene. Objective: Identify mutations in CYP21A2 gene by sequencing and MLPA technique. Patients and Methods: Tow families with children getting CAH disease. We analysed DNA extracted from blood and amniotic fluid samples of parents and fetus in these two families. Results: Analyzing mutations from mother and fetus of family 1 revealed that they both carried a heterozygous of missense mutant R426C in exon 10. Results from family 2 showed that the father carried heterozygous deletion from exon 1 to exon 8 of CYP21A2 gen; the mother carried heterozygous deletion from exon 1 to exon 3; the male fetus carried homologous deletion form exon 1 to exon 3 and heterozygous deletion from exon 4 to exon 8. Conclusion: Successfully detect carriers and mutants in fetus by sequencing and MLPA techniques. Keywords: Congenital adrenal hyperplasia, CYP21A2 mutants, deletions, point mutants, sequencing, MLPA. * Bộ mơn Hóa Sinh, Trung Tâm Y Sinh Học Phân Tử, Khoa Y ‐ Đại học Y Dược TPHCM Tác giả liên lạc: TS. BS. Nguyễn thị Băng Sương ĐT: 0914007038, Email: suongnguyenmd@gmail.com 150 Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 ĐẶT VẤN ĐỀ Tăng sản thượng thận bẩm sinh (TSTTBS – Congentinal Adrenal Hyperplasia, viết tắt là CAH) hay còn gọi là hội chứng sinh dục‐thượng thận, là bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể thường, được đặc trưng bởi sự thiếu hụt hoạt động của các enzyme tổng hợp hormone cortisol từ cholesteron của vỏ thượng thận. Thiếu hụt enzyme 21‐hydroxylase (21‐OH) là thể thường gặp nhất, chiếm 90‐95% các ca bệnh, với tần suất khoảng 1:10.000 đến 1:15.000 trẻ sơ sinh(3). Trong khi đó, khoa Nội tiết – Chuyển hóa – Di truyền Bệnh viện Nhi Trung ương cho biết số lượng bệnh nhân mới được chẩn đoán tăng lên hằng năm, trung bình 40‐70 trẻ mới mắc/ năm. Kết quả sàng lọc sơ sinh trên 24.459 bé sinh tại Bệnh viện Từ Dũ – TP. Hồ Chí Minh từ năm 2002 đến tháng 06/2008 cho thấy tỷ lệ các bé bị TSTTBS là 1/8153 bé sinh sống(8). Sự thiếu hụt hoạt động của enzyme 21‐OH dẫn đến sự thiếu hụt cortisol và/hoặc thiếu hụt aldosterone cũng như thừa androgen thượng thận(3). Tùy mức độ thiếu hụt enzyme 21‐OH mà bệnh biểu hiện trên lâm sàng thành 3 thể: thể cổ điển mất muối (Salt‐wasting‐SW), thể cổ điển nam hóa đơn thuần (Simplevirilizing‐SV) và thể khơng cổ điển (non‐classic). Triệu chứng lâm sàng của thể cổ điển tùy thuộc vào mức độ thiếu hụt hoạt động của enzyme. Nếu enzyme 21‐OH thiếu hụt khơng hồn tồn sẽ dẫn đến biểu hiện lâm sàng chủ yếu là hội chứng nam hóa thai nữ và dậy thì sớm ở trẻ trai. Sự thiếu hồn tồn hay gần như hồn tồn enzyme 21‐OH dẫn đến TSTTBS thể mất muối, có đến ¾ trường hợp thể mất muối có cơn suy thượng thận cấp vào ngày 5 đến ngày 14 sau sinh(2). Sự thiếu hụt enzyme 21‐OH xảy ra do các đột biến trên gen CYP21A2 mã hóa tổng hợp enzyme steroid 21‐hydroxylase. Trên 90% các đột biến này là do sự bắt chéo không đồng đều giữa gen CYP21A2 và giả gen CYP21P(3). Gen CYP21A2 và giả gen CYP21P nằm trên nhiễm sắc thể số 6p21.3 trong phức hợp hòa hợp mơ chủ yếu (Major human histocompatibility Sản Phụ Khoa Nghiên cứu Y học complex – HLA) có chiều dài xấp xỉ 30 kb. Mỗi gen CYP21A2 và CYP21P chứa 10 exons, trình tự tương đồng giữa hai gen trên các exon là 98% và trên các intron là 96%(10). Giả gen CYP21P khơng có chức năng vì một số đột biến ở vùng tận cùng 5’ của gen làm cho q trình phiên mã khơng được thực hiện. Do tỷ lệ tương đồng trình tự cao giữa hai gen nên dẫn đến hiện tượng dễ xảy ra nhiều sai sót trong q trình trao đổi chéo nhiễm sắc thể qua phân bào giảm nhiễm, các trình tự ở vùng giả gen CYP21P chuyển sang gen CYP21A2 gây nên 95% các đột biến trên gen. 5% còn lại là do tự gen CYP21A2 bị đột biến. Đến nay có khoảng hơn 100 kiểu đột biến gen CYP21A2 đã được phát hiện, trong đó chủ yếu là các đột biến điểm, còn lại là đột biến xóa đoạn, thêm đoạn, lặp đoạn và đột biến chuyển đoạn(8). Kiểu đột biến có liên quan chặt chẽ đến kiểu hình của bệnh nhân(11). Các đột biến lớn như đột biến xóa đoạn, chuyển đoạn gen lớn, đảo gen hay đột biến vơ nghĩa có thể làm mất hồn tồn hoạt tính của enzyme 21‐OH gây ra thể mất muối. Các đột biến làm mất một phần hoạt tính của enzyme 21‐OH như đột biến sai nghĩa I172N, P30L, V281 gặp ở thể bệnh khơng điển hình. Việc chẩn đốn sớm trẻ mang gen CYP21A2 bị đột biến giúp xác định chính xác giới tính và kiểu bệnh của trẻ. Điều này liên quan chặt chẽ đến điều trị trước sinh, nếu thai nhi bị bệnh là nữ và người mẹ muốn bé được ra đời, thai phụ sẽ được chỉ định sử dụng dexamethason để trẻ sinh ra có bộ phận sinh dục bình thường. Ngồi ra, việc chẩn đốn, sàng lọc sơ sinh còn giúp các bác sỹ có phác đồ điều trị thích hợp ngay khi bé ra đời, tránh những biến chứng trên trẻ sơ sinh. Theo nghiên cứu của các tác giả, việc sàng lọc sơ sinh chẩn đốn sớm trẻ mắc bệnh TSTTBS có tỷ số chi phí/lợi ích là 1/3(8). Xuất phát từ thực tiễn đó, chúng tơi tiến hành đề tài với mục tiêu“Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong phát hiện người lành mang gen đột biến và chẩn đoán trước sinh bệnh TSTTBS”. 151 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Chẩn đốn trước sinh: 02 mẫu dịch ối từ thai nhi của hai bà mẹ hai gia đình này để tiến hành chẩn đốn trước sinh. lớn trên gen CYP21A2. Kit gồm 5 probe cho gen CYP21A2 (Ex1, Ex3, Ex4, Ex6, Ex8); 3 probe cho gen CYP21A1P (E1P, I2P, E10P); 2 probe cho bổ thể C4A và C4B; 22 probe đặc trưng cho gen người làm đối chứng); 2 probe cho nhiễm sắc thể X và Y. Sản phẩm sau khuếch đại được phân tách đoạn trên hệ thống điện di mao quản GenomeLab GeXP (Beckman Coulter). Kết quả sau khi chạy điện di sẽ được phân tích tự động để tìm đột biến nhờ vào phần mềm GeneMarker version 1.6 (Softgenetics). Phương pháp nghiên cứu KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kỹ thuật tách chiết DNA từ 200 μl máu ngoại vi và dịch ối thai nhi ‐ Ly trích DNA từ máu ngoại vi: Tiến hành lấy 2 ml máu tĩnh mạch của bố và mẹ trong gia đình có tiền sử con được xác định mắc bệnh TSTTBS. Máu tươi được chống đơng bằng EDTA, được tách DNA trong vòng 24 giờ. Quy trình tách chiết DNA từ 200μl máu ngoại vi được tiến hành theo bộ kit QIAamp DNA Blood mini kit (Qiagen). Gia đình bệnh nhân CAH 01 ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Chẩn đốn người lành mang gen bệnh: Bố mẹ của 02 gia đình cótiền sử con được chẩn đốn mắc bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh, hai người con này được phân tích gen CYP21A2 và đã phát hiện được đột biến. Phân tích kiểu gen CYP21A2 của mẹ bệnh nhân Ở gia đình này có người con mắc bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh và đã được phân tích gen CYP21A2, kết quả phân tích gen đã được chúng tơi cơng bố trong nghiên cứu trước, cho thấy bệnh nhân bị đột biến điểm đồng hợp tử tại vị trí c.1276 C>T. Tiếp tục phân tích kiểu gen của người mẹ chứng tơi nhận thấy kết quả như sau: ‐ Ly trích DNA thai nhi từ mẫu dịch ối: lấy 1 ml dịch ối cho vào ống tube 2 ml, quay ly tâm 10.000 vòng/phút, thu cặn. Hòa tan cặn trong 200 nước tinh khiết và tiến hành tách DNA dịch ối bằng QiAgen Kit tương tự như quy trình tách mẫu máu ngoại vi. Xác định đột biến điểm của gen CYP21A2 Sử dụng các cặp mồi đặc hiệu để khuếch đại hai trình tự từ exon 1 đến exon 3 và exon 3 đến exon 9 của gen CYP21A2. Sản phẩm PCR được điện di trên gel agarose nồng độ 1% để kiểm tra sự tồn tại của sản phẩm khuếch đại.Sau đó tinh sạch sản phẩm PCR và giải trình tự gen theo phương pháp Sanger trên máy ABI 3500. Phân tích kết quả, so sánh với trình tự chuẩn trên NCBI để chẩn đốn tình trạng đột biến của các exon. Xác định đột biến mất đoạn gen CYP21A2 bằng kỹ thuật MLPA Sử dụng kit MLPA P050 (MRC‐ Holland) để sàng lọc các đột biến mất đoạn và chuyển đoạn 152 Hình 1: Kết quả phân tích gen CYP21A2 của mẹ bệnh nhân CAH 01 Nhận xét: Hình ảnh giải trình tự cho thấy tại nucleotid c.1276 xuất hiện sóng đơi, 1 đỉnh thể hiện nucleotid C (giống trình tự của genbank) và 1 đỉnh thể hiện nucleotid T (giống trình tự của bệnh nhân ‐ là người con trai mắc bệnh của bà). Điều này chứng tỏ người mẹ của bệnh nhân bị đột biến dị hợp tử tại vị trí c.1276 C>T. Phân tích kiểu gen CYP21A2 của thai nhi Mẹ bệnh nhân CAH 01 tiếp tục mang thai và được chẩn đốn trước sinh, kết quả phân tích kiểu gen thai nhi như sau: Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Nghiên cứu Y học kết quả của người mẹ. Điều này chứng tỏ thai nhi bị đột biến dị hợp tử tại vị trí c.1276 C>T. Gia đình bệnh nhân CAH 02 Đối với gia đình CAH 02, bệnh nhân CAH 02 bị đột biến mất đoạn gen (hình 3) nên chúng tơi tiến hành phản ứng MLPA để phân tích kiểu gen của các thành viên trong gia đình bệnh nhân. Hình 2: Kết quả phân tích gen CYP21A2 ở thai nhi của gia đình CAH 01 Nhận xét: Hình ảnh giải trình tự cho thấy tại nucleotid c.1276 xuất hiện sóng đơi tương tự như Kết quả phân tích gen của bệnh nhân và bố mẹ Ex3 Ex1 Ex6 Ex4 Ex8 Bệnh nhân CAH 02 Ex3 Ex1 Ex4 Ex6 Ex8 Bố bệnh nhân CAH 02 Ex3 Ex4 Ex1 Mẹ bệnh nhân CAH 02 Ex6 Ex8 Y Hình 3. Kết quả MLPA của bệnh nhân CAH 02 và bố mẹ bệnh nhân Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên phải): mẫu bệnh nhân CAH 02. Nhận xét: Sản Phụ Khoa ‐ Đối với mẫu bệnh nhân: Tại các đỉnh tương tứng với exon 1 và exon 3 của gen CYP21A2, mẫu người bình thường xuất hiện đỉnh nhưng 153 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Nghiên cứu Y học mẫu bệnh nhân không xuất hiện đỉnh, chứng tỏ rằng bệnh nhân bị đột biến mất đoạn đồng hợp tử từ exon 1 đến exon 3 của gen CYP21A2. Xét các đỉnh của exon 4, 6, 8, chiều cao đỉnh của bệnh nhân chỉ bằng ½ so với mẫu người bình thường, chứng tỏ rằng bệnh nhân bị đột biến mất đoạn dị hợp tử từ exon 4 đến exon 8. ‐ Đối với mẫu của người bố: Chiều cao các đỉnh của exon 1,3, 4, 6, 8 của người bố chỉ bằng ½ so với mẫu người bình thường, chứng tỏ rằng người bố bị đột biến mất đoạn dị hợp tử từ exon 1 đến exon 8. ‐ Đối với mẫu người mẹ: Chiều cao đỉnh exon 1 và exon 3 của người mẹ bằng ½ so với người bình thường, trong khi các đỉnh của exon 4, 6, 8 bằng với mẫu người bình thường. Chúng tỏ người mẹ bị đột biến mất đoạn dị hợp tử từ exon 1‐3. Tại đỉnh tương ứng với NST Y, mẫu người mẹ khơng xuất hiện đỉnh. Kết quả phân tích gen của thai nhi (em của CAH 02) Ex1 Ex3 Ex4 Ex6 Ex8 Hình 4: Kết quả phân tích kiểu gen của thai nhi. Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên phải): mẫu bệnh nhân CAH 02. các chỉ tiêu sinh hóa như tăng nồng độ 17CS, Nhận xét: Chiều cao các đỉnh của exon 1, 3, progesterone, kali, giảm nồng độ 17‐OHCS, 4, 6, 8 của thai nhi chỉ bằng ½ so với mẫu người FSH, LH và natri(9). Năm 1998, lần đầu tiên tại bình thường, chứng tỏ rằng thai nhi bị đột biến Việt Nam phương pháp PCR được áp dụng mất đoạn dị hợp tử từ exon 1 đến exon 8. nhằm xác định đột biến gen CYP21A2 trên 43 BÀN LUẬN bệnh nhân mắc bệnh TSTTBS(11). Để xác định Ở Việt Nam, trước năm 1998, bệnh TSTTBS chính xác nhất các đột biến gen CYP21A2 gây chủ yếu được chẩn đoán dựa vào các dấu hiệu bệnh TSTTBS, giải trình tự gen và kỹ thuật lâm sàng và cận lâm sàng, cùng với xét nghiệm MLPA là hai tiêu chuẩn vàng nhằm xác định tất 154 Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 cả các đột biến điểm cũng như đột biến mất đoạn, chuyển đoạn gen lớn trên gen CYP21A2. Trong nghiên cứu này, chúng tơi sử dụng kỹ thuật giải trình tự 10 exon của gen CYP21A2 và kỹ thuật MLPA để phát hiện người lành mang gen bệnh, đồng thời chẩn đoán trước sinh cho 2 gia đình đã có tiền sử con mắc bệnh TSTTBS. Khi nghiên cứu trên gia đình số 1, sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen chúng tơi xác định được người mẹ và thai nhi của gia đình này đều mang đột biến dị hợp tử thay thế nucleotide C thành T tại vị trí c.1276C>T làm thay đổi acid amin Arginine thành Cystein tại codon 426 (R426C). Theo các nghiên cứu chức năng gen in vitro, các đột biến làm phá vỡ mối liên kết của nhân hem – một cofactor cho hoạt động của protein CYP21A2 –như đột biến R426C sẽ gây ra thể nam hóa đơn thuần trên lâm sàng. Các acid amin R91 và R426 tham gia hình thành liên kết hydro với chuỗi propionate của nhân hem(5). Liên kết này không chỉ định hướng cho nhân hem trong cấu trúc protein mà còn tham gia vào q trình vận chuyển electron(13). Sự thay thế R426 bằng một acid amin có tính kỵ nước như Cystein sẽ làm phá vỡ mối tương tác của protein với nhân hem, dẫn đến enzyme mất hoạt tính và gây ra thể bệnh nam hóa đơn thuần(5). Tuy nhiên, đột biến mà người mẹ và thai nhi gia đình số 1 mang là đột biến dị hợp tử. Bệnh TSTTBS là một bệnh có sự liên quan chặt chẽ giữa kiểu gen và kiểu hình(11). Do đó, thơng thường, nếu bệnh nhân mang đột biến có khả năng gây bệnh ở thể nặng và vừa nhưng đột biến ở dạng dị hợp tử thì thường biểu hiện thể bệnh khơng cổ điển(12). Vì vậy, thai nhi trong gia đình số 1 này có thể biểu hiện bệnh ở thể khơng cổ điển. Đối với gia đình thứ 2, kiểu gen của các thành viên gia đình được minh họa trong hình 7. Gia đình này có người con mắc bệnh tăng sản thượng thận và được phân tích gen CYP21A2, kết quả cho thấy bệnh nhân bị đột biến mất đoạn đồng hợp tử từ exon 1‐3 và mất đoạn dị hợp tử từ exon 4‐8. Điều này gợi ý người mẹ Sản Phụ Khoa Nghiên cứu Y học (hoặc bố) mang 1 allele mất đoạn từ exon 1‐3, cong người bố (hoặc mẹ) mang allele mất đoạn từ exon 1‐8. Suy đốn này được khẳng định khi chúng tơi phân tích kiểu gen của người bố và mẹ của bệnh nhân. Kết quả được thể hiện ở hình 3, mẹ bệnh nhân bị đột biến mất đoạn dị hợp tử từ exon 1‐3 và bố bị mất đoạn dị hợp tử từ exon 1‐ 8. Bố mẹ trong gia đình này đều mang đột biến mất đoạn gen. Ngồi ra, ở mẫu người mẹ, tại vị trí đỉnh tương ứng với chứng NST Y kích thước 238 nucleotid khơng xuất hiện, điều này hợp lý vì người mẹ khơng có NST Y. Kết quả MLPA cho thấy thai nhi mang đột biến dị hợp tử mất đoạn exon từ 1 đến exon 8. Các đột biến mất đoạn hay chuyển đoạn là những đột biến nghiêm trọng, gây bệnh thể cổ điển mất muối(6) (Hình 6). Đột biến đồng hợp tử mất đoạn Del/Del là nguyên nhân gây ra thể bệnh cổ điển mất muối trên lâm sàng ở những bệnh nhân mang đột biến này(1). Tuy nhiên đây là bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể thường nên thông thường bệnh nhân bị đột biến đồng hợp tử, bất thường xảy ra trên cả 2 allele mới biểu hiện kiểu hình. Trường hợp này thai nhi chỉ mang đột biến trên 1 allele, allele còn lại bình thường nên có thể khơng biểu hiện kiểu hình. Với kết quả này, bác sỹ lâm sàng có thể đưa ra các tư vấn thích hợp cho gia đình cũng như đưa ra các phác đồ điều trị hiệu quả cho thai nhi sau khi sinh. KẾT LUẬN Nghiên cứu đã bước đầu ứng dụng thành cơng kỹ thuật giải trình tự gen và MLPA để sàng lọc chẩn đốn các đột biến gen CYP21A2 gây bệnh TSTTBS ở người lành mang gen bệnh và chẩn đốn trước sinh cho các thai nhi của gia đình có tiền sử con mắc bệnh TSTTBS. Xét nghiệm di truyền xác định đột biến trên gen CYP21A2 là điều kiện cần và đủ trong chẩn đốn trước sinh bệnh TSTTBS. Điều này có liên quan chặt chẽ đến điều trị trước sinh, trong trường hợp thai nhi nữ và mắc bệnh TSTTBS, tránh q trình nam hố gây bất thường bộ phận sinh dục sau khi sinh. Cũng như có thể 155 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 dừng điều trị trong trường hợp thai nhi nam hoặc thai nhi không mắc bệnh. TÀI LIỆU THAM KHẢO Abraham M, Gonzalez B, Dumic M, Razzaghy‐Azar M, Chitayat D, Sun L, Zaidi M, Wilson RC, Yuen T (2013). Genotype‐phenotype correlation in 1,507 families with congenital adrenal hyperplasia owing to 21‐hydroxylase deficiency. Proc Natl Acad Sci U S A;110(7): 2611‐6. Cao Quốc Việt (2000). Hội chứng sinh dục thượng thận. Bài giảng Nhi Khoa, Tập 2, Bộ môn Nhi Đại học y Khoa Hà Nội. Forest MG (2004), Recent advances in the diagnosis and management of congenital adrenal hyperplasia due to 21‐ hydroxylase deficiency, Hum Reprod Update, 10(6): 469‐485. Grischuk Y, Rubtsov P, Riepe FG, Grötzinger J, Beljelarskaia S, Prassolov V, Kalintchenko N, Semitcheva T, Peterkova V, Tiulpakov A, Sippell WG, Krone N (2006), Four novel missense mutations in the CYP21A2 gene detected in Russian patients suffering from the classical form of congenital adrenal hyperplasia: identification, functional characterization, and structural analysis.J Clin Endocrinol Metab; 91(12): 4976‐80. Haider S, Islam B, DʹAtri V, Sgobba M, Poojari C, Sun L, Yuen T, Zaidi M (2013), Structure‐phenotype correlations of human CYP21A2 mutations in congenital adrenal hyperplasia.Proc Natl Acad Sci U S A; 110(7): 2605‐10. Kayserili H, Darendeliler F, Uyguner O, Günöz H, Yüksel Apak M, Atalar F, Bundak R, Wilson RC, New MI, Wollnik B, Saka N (2009), Gene Mutations in Congenital Adrenal 10 11 12 13 Hyperplasia: Genotype−phenotype correlation in Turkish children. J Clin Res Pediatr Endocrinol; 1(3): 116–128. Loke KY, Lee YS, Lee WW, Poh LK (2001), Molecular analysis of CYP21 mutations for coggenital adrenal hyperplasia in Singapore, Hormone research, 55 (4): 179‐184. Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn (2011), Bệnh học phân tử, Nhà xuất bản Y học, tr.217‐229 Võ Kim Huệ, Nguyễn Thu Nhạn, Nguyễn Thị Phượng (1997), Phát hiện sớm bệnh tăng sinh tuyến thượng thận bẩm sinh thiếu 21‐hydroxylase thể mất muối ở trẻ em Việt Nam, Tuyển tập cơng trình NCKH của Nghiên cứu sinh. White PC, New MI, Dupont B (1968). Structure of human steroid 21‐hydroxylase genes. Proc Natl Acad Sci USA; 83: 5111–5. White PC, Speiser PW (2000). Congenital adrenal hyperplasia due to21‐hydroxylase deficiency. Endocr Rev; 21: 245–91. Wilson RC, Nimkarn S, Dumic M, Obeid J, Azar MR, Najmabadi H, Saffari F (2007), Ethnic‐specific distribution of mutations in 716 patients with congenital adrenal hyperplasia owing to 21‐hydroxylase deficiency.Mol Genet Metab; 90(4): 414‐21. Xu J, Voth GA (2008). Redox‐coupled proton pumping in cytochrome c oxidase: Furtherinsights from computer simulation. Biochim Biophys Acta; 1777(2):196–201 Ngày nhận bài báo: 01/11/2013 Ngày phản biện nhận xét bài báo: 26/11/2013 Ngày bài báo được đăng: 05/01/2014 156 Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em ... đốn mắc bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh, hai người con này được phân tích gen CYP21A2 và đã phát hiện được đột biến. Phân tích kiểu gen CYP21A2 của mẹ bệnh nhân Ở gia đình này có người con mắc bệnh tăng ... thuật giải trình tự 10 exon của gen CYP21A2 và kỹ thuật MLPA để phát hiện người lành mang gen bệnh, đồng thời chẩn đốn trước sinh cho 2 gia đình đã có tiền sử con mắc bệnh TSTTBS. Khi nghiên cứu trên gia đình số 1, sử dụng ... Ở gia đình này có người con mắc bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh và đã được phân tích gen CYP21A2, kết quả phân tích gen đã được chúng tôi công bố trong nghiên cứu trước, cho thấy bệnh nhân bị đột biến điểm đồng hợp tử tại