Nghiên cứu xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát và phát hiện người lành mang gen bệnh tt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN THU HÀ Nghiªn cøu xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát phát ngời lành mang gen bÖnh Chuyên ngành : Nhãn khoa Mã số : 62720157 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2019 Cơng trình hồn thành tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Vân Khánh PGS.TS Vũ Thị Bích Thủy Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nước Họp tại: Trường Đại học Y Hà Nội Vào hồi ngày tháng năm 2019 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia - Thư viện Trường Đại học Y Hà Nội NHỮNG CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN ĐÃ CƠNG BỐ Trần Thu Hà, Trần Huy Thịnh, Vũ Thị Bích Thủy, Trần Vân Khánh (2017) Xác định đột biến vùng trọng điểm gen CYP1B1 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát, Tạp chí nghiên cứu Y học, 106 (1) 79-85 Trần Thu Hà, Đỗ Thị Hương Lan, Trần Huy Thịnh, Vũ Thị Thanh, Vũ Thị Bích Thủy, Trần Vân Khánh (2017) Phát đột biến gen CYP1B1 gia đình bệnh nhân glơcơm bẩm sinh ngun phát, Tạp chí y học Việt Nam, tập 470, 94-99 Trần Thu Hà, Trần Huy Thịnh, Trần Vân Khánh (2018) Xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân glơcơm bẩm sinh ngun phát, Tạp chí nghiên cứu y học, 110(1), 32-38 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Glơcơm bẩm sinh ngun phát tình trạng tăng nhãn áp phát triển bất thường bán phần trước nhãn cầu Bệnh thường xảy hai mắt nguyên nhân gây mù lòa quan trọng trẻ nhỏ Các nghiên cứu sinh học phân tử đề cập đến gen đột biến liên quan đến bệnh lý CYP1B1, LTBP2, MYOC Trong tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 cao từ 10% đến 100% khẳng định nguyên nhân gây bệnh glôcôm bẩm sinh Những nghiên cứu mức độ in vitro in vivo protein CYP1B1 đóng vai trò quan trọng việc hình thành cấu trúc trì chức mắt Đột biến gen CYP1B1 chủ yếu đột biến điểm nằm rải rác toàn chiều dài gen; tỉ lệ phát đột biến CYP1B1 mang tính đặc trưng cho chủng tộc, châu Á khoảng 20% Hàng năm bệnh viện Mắt Trung ương tiếp nhận khoảng 20 ca bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát mắc Áp dụng chẩn đoán người mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh để đưa lời khuyên di truyền thích hợp giảm tỷ lệ trẻ mắc bệnh cộng đồng lâu dài tác động tốt tới phát triển kinh tế, xã hội Xuất phát từ thực tiễn này, đề tài "Nghiên cứu xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát phát người lành mang gen bệnh" thực với hai mục tiêu: Xác định đột biến gen CYP1B1 mối liên quan với lâm sàng bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát Phát người lành mang gen bệnh thành viên gia đình có quan hệ huyết thống với bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát Những đóng góp luận án - Đây nghiên cứu quy mô lớn Việt Nam phối hợp lâm sàng bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát với sinh học phân tử Nghiên cứu bước chuẩn bị quan trọng cho tiếp cận điều trị tương lai - Luận án đưa tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 Việt Nam, phát 10 đột biến đột biến điểm đột biến xóa đoạn lớn Kết công bố quốc tế chấp nhận đăng - Nghiên cứu đưa mối liên quan chặt chẽ số đặc điểm lâm sàng với đột biến gen CYP1B1 tỷ lệ di truyền đột biến gen phát thành viên gia đình mang gen bệnh từ có lời khuyên di truyền thích hợp cho bệnh nhân gia đình Bố cục luận án Luận án có 121 trang, gồm Đặt vấn đề (2 trang), chương: Chương 1: Tổng quan (33 trang), Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu (12 trang), Chương 3: Kết nghiên cứu (39 trang), Chương 4: Bàn luận (31 trang), Kết luận (2 trang), đóng góp (1 trang), Hướng nghiên cứu tiếp (1 trang) Ngồi có: phần tài liệu tham khảo, phụ lục, bảng, biểu đồ, hình ảnh minh họa kết Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Năm 1970, Shaffer Weiss định nghĩa glôcôm bẩm sinh nguyên phát "glôcôm di truyền phổ biến trẻ em, di truyền lặn nhiễm sắc thể thường, với bất thường đặc biệt góc khơng có tượng lùi điểm gắn chân mống mắt tạo góc vùng bè không kèm bất thường phát triển khác" Tăng nhãn áp nguyên nhân gây giác mạc to, đục chảy nước mắt rạn màng Descemet Glôcôm bẩm sinh nguyên phát bệnh gặp Hầu hết xảy hai mắt 25% khởi bệnh lúc sinh, 60% trẻ chẩn đoán tháng tuổi 80% xuất năm Qua nghiên cứu phơi thai học giải phẫu học góc tiền phòng cho thấy chế tăng nhãn áp glôcôm bẩm sinh tồn màng Barkan lưới bè Ngày nay, thuyết di truyền glôcôm bẩm sinh nguyên phát ngày đề cập đến nhiều sáng tỏ qua nghiên cứu Người ta cho gen CYP1B1 đột biến làm rối loạn sản xuất men, thay đổi phản ứng hóa sinh nội bào, tạo nên bất thường cấu trúc mạng lưới vùng bè, dẫn đến ứ trệ thủy dịch làm tăng nhãn áp Gen CYP1B1 gồm 543 acid amin, nằm nhánh ngắn nhiễm sắc thể vị trí 2p22.2 bao gồm exon, phần mã hóa gen exon thứ gồm 1629 cặp base Chẩn đốn bệnh glơcơm bẩm sinh ngun phát Chẩn đốn xác định: bệnh nhân có triệu chứng trở lên - Nhãn áp cao ≥25mmHg (nhãn áp kế Maklakov) ≥22mmHg (nhãn áp kế Icare) - Chói, chảy nước mắt, sợ ánh sáng - Đường kính giác mạc to bất thường ≥12mm - Giác mạc phù, mờ đục - Tiền phòng sâu, góc tiền phòng có tổ chức bất thường - Tổn hại lõm teo đĩa thị bệnh glơcơm Chẩn đốn phân biệt theo sơ đồ Ourgaud: Ba yếu tố glơcơm bẩm sinh là: vòng A nhãn áp cao vòng B đường kính giác mạc tăng vòng C phù mờ đục giác mạc Có khả xảy ra: Khu vực 1: hội tụ đủ yếu tố (A, B,C) glơcơm bẩm sinh ngun phát điển hình Khu vực 2: nhãn áp cao kèm theo đường kính giác mạc tăng glơcơm bẩm sinh ngun phát khơng mờ đục giác mạc cần phân biệt với bệnh giác mạc to Khu vực 3: nhãn áp tăng kèm theo đục giác mạc glôcôm trẻ lớn tuổi người trẻ, cần phân biệt với bệnh giác mạc đục glôcôm thứ phát dị tật khác Khu vực 4: đường kính giác mạc tăng kèm theo đục giác mạc Khu vực 5: đường kính giác mạc to đơn Khu vực 6: nhãn áp tăng đơn glôcôm bẩm sinh trẻ lớn tuổi xảy mắt thứ Khu vực 7: mờ đục giác mạc, sang chấn lúc sinh, xơ hóa giác mạc Chẩn đốn giai đoạn: theo Al-Hazmi : Giai đoạn nhẹ: nhãn áp 14mm, giác mạc đục trắng Điều trị bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Điều trị nội khoa bước đầu chuẩn bị cho phẫu thuật bổ sung phẫu thuật chưa đạt kết hoàn toàn thất bại Điều trị ngoại khoa với mục đích phá màng tổ chức bất thường tạo điều kiện cho thủy dịch tới vùng bè, vào ống Schlemm lưu thơng ngồi 1.2 Đột biến gen CYP1B1 mối liên quan với lâm sàng Đột biến gen CYP1B1 Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1: hay gặp Trung Đông (64,8%) Địa Trung Hải (54,4%) tình trạng kết cận huyết gây nên, châu Âu (34,7%), châu Á (21,3%), tỷ lệ thấp Mỹ (14,9%) Các loại đột biến gen CYP1B1: theo thống kê Li cộng sự, tính đến năm 2010, giới tiến hành khoảng 655 nghiên cứu đột biến gen CYP1B1 bệnh glôcôm, có 52 nghiên cứu đột biến gen CYP1B1 bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát nước khác - Đột biến sai nghĩa (missense) 66,76% hay gặp - Đột biến xóa đoạn (deletion) (14,12%) - Đột biến mất/thêm nucleotid (deletion/insertion) (0,09%) - Đột biến lặp đoạn (duplication) (4,28%) - Đột biến lặp/ nucleotid (duplication/deletion) (0,09%) - Đột biến thêm nucleotid (insertion) (2,82%) - Đột biến vô nghĩa (nonsense) (3,55%) - 89 trường hợp (8,11%) không phát đột biến Các tác giả đưa kết luận, đột biến sai nghĩa loại đột biến hay gặp Ở châu Á, tỷ lệ đột biến loại chiếm khoảng 20% tổng số bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát khoảng 60% tổng số đột biến gen CYP1B1 Các vị trí đột biến gen CYP1B1: theo thống kê Li cộng sự, thời gian 14 năm tính đến năm 2010, 542 bệnh nhân nghiên cứu, phát mang 147 vị trí đột biến khác Các kỹ thuật phát đột biến gen CYP1B1 Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction): dựa vào hoạt tính DNA polymerase xúc tác tổng hợp mạch DNA từ mạch DNA khuôn, với nguyên liệu bốn loại nucleotid Phản ứng đòi hỏi có mặt mồi xi mồi ngược có trình tự bổ sung với hai đầu trình tự DNA khn Kỹ thuật giải trình tự gen (DNA sequencing): phương pháp xác định vị trí xếp nuceotid phân tử DNA Ngày kỹ thuật giải trình tự gen ứng dụng rộng rãi để phát đột biến gen gây bệnh mắt toàn thân bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh, bệnh Wilson, viêm thị thần kinh Leber, ung thư võng mạc, bệnh thối hóa sắc tố võng mạc Hiện nay, người ta thường sử dụng hai phương pháp giải trình tự phương pháp dideoxynucleotid giải trình tự máy tự động Phương pháp MLPA (multiplex ligation-dependent probe amplification) Mối liên quan bệnh glôcôm bẩm sinh NP đột biến gen Mối liên quan với giới tính: nghiên cứu tỷ lệ đột biến hai giới không khác biệt Mối liên quan với thời gian xuất bệnh: thời gian xuất bệnh sớm nhóm bệnh nhân có mang đột biến gen CYP1B1 so với nhóm khơng có đột biến gen Tỷ lệ bị bệnh hai mắt nhóm bệnh nhân có đột biến gen CYP1B1 cao nhóm khơng có đột biến, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Mối liên quan mức độ nặng bệnh với đột biến gen CYP1B1: Trong nghiên cứu Xueli Chen (2014), mức độ đục giác mạc nhóm mang đột biến gen nặng có ý nghĩa so với nhóm khơng có đột biến gen (p=0,034) Nghiên cứu Orna Geyer (2011), mức độ đục giác mạc nặng lồi mắt trâu chiếm 58% (10/17 bệnh nhân) nhóm mang đột biến cao nhóm không đột biến 11% (2/17 bệnh nhân) (p=0,004) Nghiên cứu Wool Suh (2012) thấy nhóm có đột biến gen CYP1B1 tỷ lệ mức độ bệnh nặng cao (52,4%) so với nhóm khơng có đột biến gen (43,9%), nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 1.3 Đột biến CYP1B1 phát người lành mang gen bệnh Từ báo cáo năm 2009 Tây Ban Nha đề cập đến đột biến gen CYP1B1 di truyền gen lặn, trạng thái dị hợp tử Trong năm gần đây, ngày có nhiều nghiên cứu phát người lành mang gen bệnh thành viên gia đình bệnh nhân Việc lập phả hệ để xem xét tính chất đột biến gen di truyền giúp ích chẩn đốn trước sinh, đưa cho gia đình bệnh nhân tư vấn di truyền, chẩn đoán bệnh sớm nhằm nâng cao chất lượng dân số nói chung chất lượng điều trị bệnh nói riêng Năm 2007, đột biến p.E173K lần phát gia đình bệnh nhân Ai Cập Cùng năm đó, Chitsazian mơ tả đột biến gia đình bệnh nhân Iran bị glơcơm bẩm sinh nguyên phát với tỷ lệ 1,9% số 29 đột biến gen CYP1B1 phát Đột biến nghiên cứu Ling Chen (2015) tìm thấy gia đình gồm 19 thành viên Trung Quốc có bệnh nhân biểu bệnh glơcơm bẩm sinh nguyên phát Đột biến p.E173K nằm exon gen CYP1B1, di truyền lặn nhiễm sắc thể thường đột biến gây bệnh di truyền qua hệ Nghiên cứu Nhật Bản cho thấy có di truyền lặn bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát Bố bệnh nhân mang đột biến Asp192Val trạng thái dị hợp tử, mẹ mang đột biến Val364Met trạng thái dị hợp tử không biểu bệnh Khi di truyền cho mang đột biến trạng thái dị hợp biểu bệnh Nghiên cứu Việt Nam Đỗ Tấn (2016) thấy gia đình bệnh nhân có đột biến gen CYP1B1 di truyền từ bố mẹ sang Trong bệnh nhân mang đột biến di truyền trạng thái đồng hợp bệnh nhân mang đột biến trạng thái dị hợp tử Năm 2017, nghiên cứu María Tây Ban Nha gia đình mang đột biến gen CYP1B1 có gia đình có di truyền đột biến từ bố mẹ sang CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Bệnh nhân chẩn đoán mắc bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát bệnh viện Mắt Trung ương xét nghiệm xác định đột biến gen CYP1B1 trung tâm Nghiên cứu Gen - Protein Trường Đại học Y Hà Nội từ tháng năm 2014 đến tháng năm 2018 Các thành viên huyết thống với BN mang đột biến gen Nhóm người khỏe mạnh, tiền sử gia đình khơng có người mắc bệnh di truyền dùng để làm mẫu đối chứng trình xác định đột biến gen CYP1B1 thực kỹ thuật sinh học phân tử chạy kiểm chứng đột biến phát bệnh nhân Tiêu chuẩn lựa chọn: bệnh nhân chẩn đốn mắc bệnh glơcơm bẩm sinh ngun phát bệnh nhân có từ triệu chứng sau trở lên: Nhãn áp cao ≥25mmHg (nhãn áp kế Maklakov) ≥22mmHg (nhãn áp kế Icare).Chói, chảy nước mắt, sợ ánh sáng Đường kính ngang giác mạc to bất thường ≥12mm Giác mạc phù, mờ đục Tiền phòng sâu, góc tiền phòng có tổ chức bất thường Tổn hại lõm teo đĩa thị bệnh glơcơm Tiêu chuẩn loại trừ: bệnh nhân có bệnh toàn thân mắt kèm theo, bệnh di truyền khác Bệnh nhân đại diện gia đình khơng tự nguyện tham gia nghiên cứu 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu Thời gian: từ tháng năm 2014 đến tháng năm 2018 Địa điểm: bệnh viện Mắt Trung ương nơi chẩn đoán, điều trị quản lý bệnh nhân bị bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Trung tâm Nghiên cứu Gen - Protein Trường Đại học Y Hà Nội nơi tiến hành kỹ thuật di truyền phân tử 2.3 Phương pháp nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang Cỡ mẫu chọn mẫu: cỡ mẫu thuận tiện 86 bệnh nhân 29 thành viên gia đình 50 người khỏe mạnh để làm mẫu đối chứng Phương tiện nghiên cứu: khám mắt, dùng xác định đb gen, hóa chất Các bước tiến hành nghiên cứu Chẩn đoán bệnh nhân lập phả hệ gia đình: Tất bệnh nhân hỏi, khám bệnh theo mẫu bệnh án thống Hỏi bệnh, khám bệnh, phân loại giai đoạn bệnh Lập phả hệ gia đình Quy trình phân tích đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân: Gia đình bệnh nhân giải thích nghiên cứu kí cam đoan tự nguyện tham gia nghiên cứu Lấy khoảng 2ml máu ngoại vi chống đông EDTA Tách chiết DNA Tiến hành giải trình tự tồn gen CYP1B1 phát đột biến điểm, sử dụng cặp mồi thiết kế bao phủ toàn chiều dài gen CYP1B1 để tiến hành phản ứng PCR, sản phẩm PCR giải trình tự trực tiếp, so sánh với trình tự GeneBank để phát đột biến Tiến hành kỹ thuật MLPA xác định đột biến xóa đoạn: sử dụng Kit MLPA (MRC- Holland) Xác định đột biến khả gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát đột biến phần mềm in silico (phần mềm Polyphen 2), khả gây bệnh cao điểm đánh giá gần điểm Khẳng định đột biến giải trình tự gen CYP1B1 50 người Việt Nam bình thường khơng thấy xuất đột biến giống bệnh nhân Quy trình phát người lành mang gen bệnh: Tách chiết DNA từ mẫu máu người nhà Định vị vùng đột biến điểm đột biến xóa đoạn (dựa vào kết phân tích gen CYP1B1 bệnh nhân gia đình) để phân tích đột biến Đề xuất tư vấn di truyền Quy trình kỹ thuật nghiên cứu: Bệnh nhân thành viên gia đình bệnh nhân, người đối chứng lấy 2ml máu tĩnh mạch chống đơng EDTA với hàm lượng 1,5mg/ml Quy trình đảm bảo tuyệt đối vô trùng DNA tách chiết từ máu ngoại vi theo phương pháp phenol/chloroform Toàn exon gen CYP1B1 khuếch đại với cặp mồi đặc hiệu thiết kế trung tâm Gen – Protein trường đại học Y Hà Nội 11 3.1.7 Dấu hiệu thực thể Nhãn áp: trung bình 27,11±8,41mmHg, 55mmHg - 9mmHg Chiều dài trục nhãn cầu: trung bình 23,52±3,28mm, dài 33,10 ngắn 15,70 Kết mạc: kết mạc cương tụ gặp 55/146 mắt (chiếm 37,7%) Vùng rìa củng giác mạc: dãn lồi gặp 54 mắt (chiếm 37,0%) Giác mạc: 43 mắt giác mạc (29,4%), giác mạc đục 103 mắt (70,6%) đục nhẹ chiếm 38,4% đục trắng chiếm 32,2% Đường kính ngang trung bình 13,06±0,85mm, lớn 16,0 nhỏ 11,5 Đường kính dọc TB 12,20±0,82mm, lớn 15,0 nhỏ 11,0 15 mắt có vết Habb’s (10,3%) 131 mắt khơng có vết Habb’s (89,7%) Tiền phòng: soi góc tiền phòng thực 20/43 mắt có giác mạc (46,5%) tồn thấy tiền phòng sâu, chân mống mắt bám cao, khơng quan sát thành phần góc Đĩa thị: quan sát đĩa thị 61/146 mắt (39,7%), C/D trung bình 0,72±0,21 (0,2 - 0,9) 3.2 Kết xác định đột biến gen mối liên quan với lâm sàng 3.2.1 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 3.2.1.1 Kết tách chiết DNA: độ tinh cao với tỷ số mật độ quang bước sóng 260/280nm nằm khoảng 1,7–2,0 nồng độ mẫu tách chiết đạt từ 101,0–233,2ng/µL 3.2.1.2 Kết PCR: Sản phẩm PCR có băng đặc hiệu, rõ nét 3.2.1.3 Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1:19/86 bệnh nhân mang đột biến gen CYP1B1 (22,1%), 17/86 trường hợp có đột biến điểm (19,8%) 2/86 bệnh nhân mang đột biến xóa đoạn (2,3%) 3.2.1.4 Các dạng đột biến gen CYP1B1: có bệnh nhân anh em ruột nên đánh giá dạng đột biến BN khơng có quan hệ huyết thống, số bệnh nhân đột biến 18/85, phân bố sau: ĐB sai nghĩa hay gặp (17,6%) Đột biến vơ nghĩa (3,5%) Đột biến xóa đoạn (2,4%) đột biến làm thay đổi khung dịch mã (1,2%) 12 3.2.2 Kết xác định đột biến gen kỹ thuật giải trình tự Phân bố đột biến điểm gen CYP1B1: 17 bệnh nhân mang đột biến điểm với 12 vị trí khác DNA Chủ yếu exon (91,7%), exon (8,3%) 25 allen Đột biến sai nghĩa p.E229K chiếm tỷ lệ cao (25%), p.Q86K (16,7%) Đột biến p.Q159X tạo mã kết thúc sớm p.D218H (12,5%) Các đột biến lại tìm thấy 1BN Các đột biến điểm: ĐB công bố gây bệnh p.G61E, p.V198I, p.E229K, ĐB điểm p.Q86K, p.Q159X, p.Q164X, p.D218H, p.L191Sfs*4, p.A133T, p.L27Q, p.D242N, p.G365E Minh họa BNcó 03 ĐB (2 ĐB vơ nghĩa, ĐB sai nghĩa) Kết dự đốn gây bệnh đột biến STT cDNA Thay đổi acid amin c.80T>A p.L27Q c.256C>A p.Q86K c.397G>A p.A133T c.475C>T c.490C>T p.Q159X p.Q164X c.652G>C p.D218H c.724G>A p.D242N c.571delC p.L191Sfs*4 c.1094G>A p.G365E Số trường hợp Phân tích in silico Dị hợp Đồng hợp Loại đột biến PolyPhen Có khả Gây bệnh gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh Khả Gây bệnh lành tính Gây bệnh Gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh Gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh Điểm 0,992 0,99 0,244 1,00 1,00 0,997 13 Các đa hình gen cơng bố: p.R48G, p.A119S p.L432V 3.2.3 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 kỹ thuật MLPA Nghiên cứu phát 2/86 trường hợp có đột biến xóa đoạn (2,3%) Hình ảnh MLPA (hình trái) kết tính tốn (Relative Peak Area) phần mềm coffalyser (hình phải) bệnh nhân G45 G56 Đột biến xóa đoạn gặp bệnh nhân xác định kỹ thuật MLPA xóa đoạn hồn tồn exon đến exon 3.2.4 Mối liên quan lâm sàng đột biến gen CYP1B1 Trong tổng số 86 bệnh nhân nghiên cứu, có hai bệnh nhân anh em ruột gia đình có đột biến gen Khi đánh giá mối liên quan lâm sàng đột biến gen, nghiên cứu tiến hành phân tích 85 bệnh nhân khơng có mối quan hệ huyết thống với 144 mắt Kết thu sau: 3.2.4.1 Mối liên quan với thời gian phát bệnh: Thời gian phát bệnh nhóm bệnh nhân có mang đột biến gen trung bình 1,21±1,75 sớm nhóm khơng mang đột biến trung bình 2,99±3,88 cách có ý nghĩa thống kê với p=0,006 (T-Test) 3.2.4.2 Mối liên quan với giới tính: Tỷ lệ đột biến nam 25,0% cao tỷ lệ đột biến nữ 15,2% (p>0,05 - Test χ2) 3.2.4.3 Mối liên quan tiền sử: Tỷ lệ đột biến gen nhóm bệnh nhân có mẹ bị bệnh mang thai 60,0% cao nhóm mẹ khơng bị bệnh mang thai 18,8%, p=0,062 (Test Fisher Exact) 3.2.4.4 Mối liên quan với số mắt bị bệnh: tỷ lệ đột biến gen nhóm bệnh nhân bị bệnh hai mắt 28,8% cao nhóm bệnh nhân bị bệnh mắt 3,8% cách có ý nghĩa thống kê với p=0,009 (Test χ2) Khả xuất bệnh mắt nhóm 18 14 bệnh nhân mang đột biến cao gấp 10,12 lần nhóm 67 bệnh nhân khơng mang đột biến (OR=10,12, khoảng tin cậy 95% 1,27–80,73) 3.2.4.5 Mối liên quan với số đặc điểm lâm sàng điều trị Giai đoạn bệnh: Tỷ lệ đột biến bệnh nhân có mắt giai đoạn nặng cao (chiếm 46,8%), khác biệt có ý nghĩa thống kê với tỷ lệ đột biến nhóm bệnh nhân giai đoạn trung bình (12,9%) nhẹ (25%) với p=0,000 (Fisher Exact - Test) Nhãn áp: Trong số 85 bệnh nhân, đo nhãn áp cho 143 mắt Nhãn áp trung bình nhóm có đột biến gen 28,03±8,89mmHg cao so với nhãn áp trung bình nhóm khơng có đột biến gen 26,74±8,27mmHg, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05-T-Test) Đường kính giác mạc: Đường kính ngang giác mạc trung bình nhóm có đột biến gen 13,22±0,87mm cao so nhóm khơng đột biến 12,99±0,84mm (p>0,05) Trong đường kính dọc giác mạc trung bình nhóm có đột biến gen 12,47±0,75mm cao so nhóm khơng đột biến 12,10±0,82mm (p=0,018-T-Test) Chiều dài trục nhãn cầu: trung bình nhóm có đột biến gen 23,21±2,95mm không khác biệt so với chiều dài trục nhãn cầu trung bình nhóm khơng đột biến 23,64±3,42mm (p>0,05-T-Test) Đĩa thị: Trong số 85 bệnh nhân, quan sát đĩa thị để đánh giá mức độ lõm đĩa 58 mắt Mức độ lõm đĩa trung bình nhóm có đột biến gen 0,73±0,14 không khác biệt so với mức độ lõm đĩa trung bình nhóm khơng đột biến 0,72±0,23 (p>0,05-T-Test) Phẫu thuật: Tỷ lệ số mắt mổ lần 2, nhóm đột biến 20,6%, 2,9% cao nhóm khơng đột biến 13,6%, 1,8% Nhóm đột biến có mắt 1BN phải mổ lại lần chiếm 5,9%, nhóm khơng có đột biến khơng có BN nào, p=0,047 (Fisher Exact-Test) Các phương pháp phẫu thuật bao gồm rạch bè, cắt rạch bè, cắt bè có khơng áp chất chống chuyển hóa, đặt van dẫn lưu tiền phòng quang đơng thể mi hai nhóm bệnh nhân có khơng đột biến gen khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (Fisher Exact - Test) Phối hợp yếu tố lâm sàng: Khi đánh giá mối liên quan tổng hợp yếu tố lâm sàng với tình trạng đột biến gen CYP1B1 thu kết sau: Khi xét yếu tố thời gian xuất bệnh với tình trạng đột biến gen thấy nhóm bệnh nhân xuất bệnh sau sinh tỷ lệ 15 đột biến gen 25%, nhóm bệnh nhân xuất bệnh muộn 18,9% Khả đột biến gen CYP1B1 nhóm bệnh nhân biểu bệnh sớm sau sinh cao gấp 1,43 lần so với khả đột biến nhóm bệnh nhân biểu bệnh muộn nhiên khác biệt ý nghĩa thống kê với khoảng tin cậy 95% Khi xét hai yếu tố kết hợp thời gian xuất bệnh sau sinh tình trạng biểu bệnh hai mắt thấy tỷ lệ đột biến gen nhóm 34,5%, nhóm bệnh nhân khơng có lúc hai yếu tố tỷ lệ đột biến gen 14,3% Khả đột biến gen CYP1B1 nhóm bệnh nhân mang đồng thời hai đặc điểm bệnh biểu sớm sau sinh hai mắt cao gấp 3,16 lần so với khả đột biến nhóm bệnh nhân biểu bệnh muộn và/hoặc bệnh mắt, khác biệt có ý nghĩa thống kê với khoảng tin cậy 95% Khi xét ba yếu tố kết hợp thời gian xuất bệnh sau sinh, tình trạng biểu bệnh hai mắt thấy tỷ lệ đột biến gen nhóm 53,8% cao nhóm bệnh nhân khơng có đồng thời ba đặc điểm 15,3% Khả đột biến gen CYP1B1 nhóm bệnh nhân mang đồng thời ba đặc điểm bệnh biểu sớm 11 gia sau sinh, hai mắt giai đoạn bệnh nặng cao gấp đình 6,47 lấy lần máu bố so với khả đột biến nhóm bệnh nhân lại, khác biệt có ý mẹ nghĩa thống kê với khoảng tin cậy 95% 3.3 Kết phát người lành mang gen bệnh thành (2 gia đình lấy máu anh viên gia đình bệnh nhân glơcơm bẩm sinh ngun phát Nghiên cứu phát 19/86 trường hợp có đột biến gen em) gia CYP1B1 kỹ thuật giải trình tự MLPA, đình có haikhơng anh phát ĐB di truyền em trai gia đình tiếp tục tìm đột biến gen thành viên 18 gia đình có quan hệ huyết thống với bệnh nhân Nghiên cứu lấy 29 mẫu máu xét nghiệm thành viên thuộc 15 gia đình bệnh nhân bao gồm 13 người bố, 13 người mẹ, người em ruột bệnh nhân Kết phát 3/13 người bố, 2/13 người mẹ 1/3 người em xác định người số 11 gia đình lấy máu bố mẹ làm xét nghiệm thấy di truyền đột biến gen CYP1B1 gia đình chiếm 27,3% Trong số gia đình lấy máu bố mẹ bệnh nhân thấy có gia đình có di truyền đột biến gen CYP1B1 Cụ thể tình trạng đột biến thành viên gia đình bệnh nhân có đột biến gen CYP1B1 sau: 13gia di gia đình đình phát không phátĐB truyền ĐB di truyền 16 Kết phát đột biến thành viên gia đình bệnh nhân Người lành mang gen bệnh Bố bệnh nhân Mẹ bệnh nhân Anh/em bệnh nhân Thể Đột biến Thể Đột biến Thể Đột biến Thể đột biến đột biến đột biến đột biến Đồng hợp Xóa đoạn Dị hợp Xóa đoạn Dị hợp Xóa đoạn Dị hợp exon 1-3 exon 1-3 exon 1-3 Dị hợp Không Không Dị hợp Không Không Dị hợp Dị hợp Dị hợp Không Không Dị hợp Dị hợp Không Không Dị hợp Không Không Dị hợp Dị hợp Dị hợp Không Không Dị hợp Dị hợp Không Đồng hợp Dị hợp p.E229K Dị hợp Không Dị hợp Dị hợp Không Không Dị hợp Không Đồng hợp Xóa đoạn Dị hợp exon 1-3 Dị hợp Không Dị hợp Không Không Dị hợp Không p.E229K Dị hợp Em trai: Dị hợp p.E229K Em gái: không đột biến Bệnh nhân Mã số Đột biến G02 Xóa đoạn exon 1-3 p.Q86K p.Q159X p.Q164X p.D218H p.Q86K p.Q159X p.A133T p.L27Q p.G36D p.G61E p.Q86K p.V198I p.E229K p.D242N p.D218H p.E229K p.Q86K p.365E Xóa đoạn exon 1-3 p.E229K p.E229K p.E229K G08 G09 G11 G19 G20 G21 G24 G40 G43 G44 G56 G70 G84 G85 3.3.1 Phả hệ có di truyền đột biến Kết nghiên cứu thấy phả hệ có đột biến di truyền gồm gia đình bệnh nhân G2, G40, G56 G85 Trong gia đình mang đột biến p.E229K di truyền dạng dị hợp tử, gia đình mang đột biến xóa đoạn tồn gen CYP1B1 * Phả hệ gia đình bệnh nhân G40 17 BN mang đột biến gen p.E229K dị hợp tử đột biến dị hợp tử kết hợp p.D218H Bố BN có đột biến p.E229K thể dị hợp tử Mẹ BN không phát ĐB Bố, mẹ không phát ĐB p.D218H * Phả hệ gia đình bệnh nhân G85 Bệnh nhân mang đột biến gen p.E229K dị hợp tử Em trai bệnh nhân mang đột biến gen p.E229K dị hợp tử biểu bệnh giống bệnh nhân Mẹ bệnh nhân mang đột biến p.E229K thể dị hợp tử Bố em gái bệnh nhân không phát đột biến không mắc bệnh Nghiên cứu phát 2/86 trường hợp có đột biến xóa đoạn tồn exon 1-exon Cả hai trường hợp tuân theo quy luật di truyền Melden * Phả hệ gia đình bệnh nhân G02: Kết MLPA cho thấy: BN mang đột biến xóa đoạn hoàn toàn exon 1-3 trạng thái đồng hợp tử Bố, mẹ em gái BN người lành mang đột biến trạng thái dị hợp tử * Phả hệ gia đình bệnh nhân G56 18 Kết MLPA cho thấy bệnh nhân mang đột biến xóa đoạn hoàn toàn exon 1-3 trạng thái đồng hợp tử Bố bệnh nhân người lành mang đột biến xóa đoạn hoàn toàn exon 1-3 trạng thái dị hợp tử 3.3.2 Phả hệ không di truyền đột biến Trong số 15 phả hệ nghiên cứu, gia đình khơng phát đột biến di truyền, nhiên thấy có di truyền số đa hình đơn tiền sử đặc biệt CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Đặc điểm bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 4.1.1 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát bệnh: Thời gian phát bệnh trung bình 2,58±3,59 tháng tuổi Kết tương đương với tác giả khác Việt Nam giới Nghiên cứu Đỗ Tấn (2016) 30 bệnh nhân thấy tuổi phát bệnh từ sinh đến 10 tuổi, nhiên trung vị tháng tuổi Nghiên cứu 90 bệnh nhân Moroccan thời gian phát bệnh trung bình 26 ngày tuổi, sớm sinh muộn tháng tuổi 4.1.2 Phân bố bệnh nhân theo giới: So sánh với nghiên cứu giới nghiên cứu cho kết tương tự, bệnh nhân nam mắc bệnh nhiều nữ chênh lệch không nhiều 4.1.3 Tiền sử bệnh nhân gia đình: Trong số 86BN có gia đình G85 có anh em trai bị bệnh glơcơm bẩm sinh ngun phát Gia đình G11 có bố bà nội bị glơcơm Khơng có gia đình có tình trạng kết cận huyết Tỷ lệ trẻ thứ bị bệnh chiếm tới 53,5% nên gia đình cần tư vấn di truyền để tiên lượng tỷ lệ mắc bệnh phòng bệnh 4.1.4 Tình trạng mắt bị bệnh bệnh nhân: tỷ lệ mắt bị bệnh nhiều mắt cách có ý nghĩa thống kê với p=0,000, kết 19 phù hợp với đặc điểm bệnh nghiên cứu tác giả khác giới Nghiên cứu Latifa Hilal 90 bệnh nhân thấy 82 bệnh nhân biểu bệnh hai mắt chiếm 91,11% 4.1.5 Giai đoạn bệnh mắt bệnh nhân: Đa số mắt bị bệnh giai đoạn trung bình (63,7%) giai đoạn nặng (33,6%), giai đoạn nhẹ gặp (2,7%) Tỷ lệ giai đoạn bệnh nghiên cứu khác biệt có ý nghĩa thống kê (p=0,000) So sánh kết với nghiên cứu Đỗ Tấn cho thấy mức độ trung bình 34,6%, mức độ nặng gặp nhiều chiếm tới 65,4%, khơng có bệnh nhân giai đoạn nhẹ 4.1.6 Triệu chứng năng: Kết tương tự nghiên cứu Ezequiel Campos-Mollo (2009) Tây Ban Nha 39 bệnh nhân, tỷ lệ chói sợ ánh sáng 72%, chảy nước mắt 64% Dấu hiệu nhìn mờ khó phát nhất, gia đình phát trẻ khơng có phản xạ đưa mắt nhìn theo vật ảnh hưởng rõ đến thị lực trẻ 4.1.7 Dấu hiệu thực thể: Khám xét quan trọng bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát đánh giá tình trạng giác mạc Phù giác mạc gây nên tình trạng phù biểu mơ giác mạc đơn tăng nhãn áp, điều trị sớm giác mạc phục hồi hoàn toàn, giác mạc trở lại không ảnh hưởng đến thị lực, bệnh tiến triển kéo dài gây phù nhu mơ giác mạc vĩnh viễn không hồi phục Mức độ phù đục giác mạc đánh giá theo mức độ trong, đục lờ đục trắng Trong nghiên cứu mức độ giác mạc đục nhẹ (38,4%) cao nhóm lại khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Trong nghiên cứu chúng tơi đường kính ngang giác mạc trung bình 146 mắt đo nghiên cứu 13,06±0,85mm, lớn 16,0mm, nhỏ 11,5mm Nghiên cứu Tharwat H Mokbel (2018) 305 mắt 207 bệnh nhân Ai Cập cho kết tương tự, đường kính ngang giác mạc 12,80±1.10mm, lớn 16mm, nhỏ 11mm Rạn màng Descemet giác mạc hay gọi vết Haabs dấu hiệu thường khơng gặp giác mạc có đường kính ngang 12,5mm bệnh xuất sau tuổi Trong nghiên cứu 15 mắt có vết Habb’s chiếm 10,3% thấp nghiên cứu Latifa Hilal (2010) 38/180 mắt có vết Habb’s, tỷ lệ 21,11% tương đương nghiên cứu Ấn Độ (2013) 9% Ngồi số yếu tố khác tiền phòng, đĩa thị, nhãn áp, siêu âm 4.2 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 mối liên quan với 20 lâm sàng bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 4.2.1 Tình trạng đột biến gen CYP1B1: Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1: 22,1% Kết phù hợp với nghiên cứu trước cho thấy đột biến gen châu Á khoảng 20%.Vị trí đột biến gen tương tự nghiên cứu Đỗ Tấn 30 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát Việt Nam phát đột biến điểm nằm exon Từ nhận định đột biến điểm gen CYP1B1 BN Việt Nam xảy chủ yếu exon Bên cạnh đó, nghiên cứu phát 2/86 trường hợp có đột biến xóa đoạn kỹ thuật MLPA Với Kit mồi cho exon 1-exon 3, thấy hai bệnh nhân có xóa đoạn tồn gen Tỷ lệ đột biến xóa đoạn phát tỷ lệ đột biến 2,3%, kỹ thuật giải trình tự kỹ thuật ưu tiên để xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân.Tuy nhiên không khuếch đại exon gen CYP1B1 bệnh nhân nên phân tích MLPA 4.2.2 Mối liên quan lâm sàng đột biến gen CYP1B1 Mối liên quan với thời gian xuất bệnh nhóm bệnh nhân có mang đột biến gen sớm nhóm khơng mang đột biến tương tự nghiên cứu tác giả khác Nghiên cứu Reddy A B Ấn Độ (2004) tiến hành 64 bệnh nhân phát 24 bệnh nhân (37,5%) mang đột biến gen CYP1B1 Tất bệnh nhân xuất bệnh sớm tháng đầu sau sinh Nghiên cứu Geyer O (2010) tiến hành 34 bệnh nhân 26 gia đình Israel phát 17 bệnh nhân (50%) 12 gia đình (46%) mang đột biến gen CYP1B1 Nghiên cứu nhóm bệnh nhân có đột biến, tuổi xuất bệnh trung bình 1,3 tháng sớm nhóm khơng đột biến (4 tháng) cách có ý nghĩa thống kê (p=0,0009) Mối liên quan với giới tính Chen (2014) tiến hành nghiên cứu 192 bệnh nhân Trung Quốc cho thấy tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân nam (18,9%) cao bệnh nhân nữ (13%) Geyer (2010) Israel cho kết tương tự, khác biệt giới khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê Mối liên quan với tiền sử bệnh nhân gia đình: Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 nhóm bệnh nhân có mẹ bị bệnh mang thai 60,0% cao tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 nhóm bệnh nhân có mẹ khơng bị bệnh mang thai 18,8%, nhiên khác biệt 21 khơng có ý nghĩa thống kê với p=0,062 số liệu không đủ lớn, nghiên cứu khác chưa có kết luận vấn đề Mối liên quan với số mắt bị bệnh: Để đánh giá mối liên quan số mắt bị bệnh với tình trạng đột biến gen CYP1B1, nghiên cứu phân tích kết theo chiều thấy liên quan chặt chẽ Kết tương tự nghiên cứu tác giả khác Nghiên cứu Wool Suh (2012) cho thấy tỷ lệ xuất bệnh mắt nhóm 22 bệnh nhân mang đột biến CYP1B1 81,8%, cao so với nhóm 63 bệnh nhân khơng mang đột biến 61,9% nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p=0,087) Mối liên quan với đặc điểm lâm sàng điều trị: So sánh với tác giả khác giới nghiên cứu Xueli Chen (2013), mức độ đục giác mạc nhóm mang đột biến gen nặng có ý nghĩa so với nhóm khơng có đột biến gen (p=0,034), nhiên khơng có khác biệt nhãn áp trung bình đường kính giác mạc nhóm (p=0,064 p=0,986) Nghiên cứu Orna Geyer (2011), mức độ đục giác mạc nặng lồi mắt trâu chiếm 58% (10/17 bệnh nhân) nhóm mang đột biến cao nhóm khơng đột biến 11% (2/17 bệnh nhân) (p=0,004) Nghiên cứu Wool Suh (2011) thấy nhóm có đột biến gen CYP1B1 tỷ lệ mức độ bệnh nặng cao (52,4%) so với nhóm khơng có đột biến gen (43,9%), nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Nghiên cứu Liban (2016) khơng có khác biệt nhãn áp trung bình trước mổ (35,2mmHg 35,6mmHg), nhãn áp trung bình sau mổ (15,6mmHg 14,8mmHg), mức độ lõm đĩa (0,57±0,19 0,62±0,3) hai nhóm có khơng có đột biến gen (p>0,05) Bên cạnh mức độ nặng (đục giác mạc nặng lồi mắt trâu) thời điểm phát bệnh nhóm mang đột biến 67% cao gấp lần nhóm khơng mang đột biến, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p=0,32) 4.3 Đột biến gen CYP1B1 thành viên gia đình bệnh nhân Người mang gen bệnh người mang gen trạng thái dị hợp tử có khả truyền gen bệnh cho hệ sau Phát người mang gen bệnh sở tư vấn di truyền chẩn đốn trước sinh Glơcơm bẩm sinh ngun phát bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể thường tượng di truyền bệnh ghi nhận nhiều gia đình Trung Đơng tình hình nhân cận huyết Tỷ lệ đột biến 22 di truyền gặp 4/15 gia đình chiếm 26,7% tương đồng với nghiên cứu khác giới nghiên cứu María T GarcíaAntón Tây Ban Nha năm 2017 tỷ lệ 25%, nhiên thấp nghiên cứu Đỗ Tấn 100% phát di truyền Đột biến p.E229K: đột biến sai nghĩa, dị hợp tử Đột biến phát di truyền gia đình bệnh nhân mã số G40 G85 Đột biến Michels-Rautenstrauss mô tả lần năm 2001 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát Đức phát liên kết với biến thể p.A443G, nhiên trạng thái gây bệnh A443G chưa công bố Tác giả xác định đột biến p.E229K dị hợp đột biến gây bệnh Theo Mukesh Tanwar (2009) đột biến p.E229K xem đột biến phổ biến (p.G61E, p.P193L, p.Ter223, p.E229K, p R368H p.R390C) Đột biến tác giả Ni Li thống kê số đột biến phổ biến cộng đồng người da trắng p.E229K xác định trạng thái dị hợp tử hai bệnh nhân Pháp bị bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát, bệnh nhân Ấn Độ Tác giả Choudhary D phân tích đột biến p.E229K, vị trí acid amin 229 nằm vùng quan trọng, góp phần vào cấu trúc ba chiều protein Đột biến xảy đầu tận COOH Fxoắn vùng lân cận vùng kết dính đế Thay acid glutamic acid amin lysin dẫn đến thay đổi từ dư lượng tích điện âm cho chuỗi bên tích điện dương điều ảnh hưởng đến phân phối cục Đột biến làm rối loạn cụm cầu mối quan trọng Trong kiểu hoang dã (WT), R-194/E-229, R-194/D-333 D333/K-512 tạo thành tam giác tương tác ion, giữ I-xoắn với F-xoắn sợi S3.2 Do đột biến này, tương tác R-194/E-229 bị có khả làm ổn định tương tác ion khác protein Một báo cáo thứ hai xác định p.E229K alen hypomorphic (allen giảm hình) đề xuất đột biến hoạt động alen nguy cơ, dẫn đến phát triển tăng nhãn áp với diện gen sửa đổi ảnh hưởng mơi trường Đột biến tìm thấy làm giảm ổn định protein, p.E229K tác động đến khả chuyển hóa chất Đột biến p.D218H: theo kết phân tích in silico dự đốn khả gây bệnh đột biến gen CYP1B1, đột biến D218H đột biến có khả gây bệnh với số điểm 1,000 Đột biến p.D218H đột biến thay Aspartate thành Histidine vị trí acid 23 amin 218 Đây vị trí khởi đầu cấu trúc Alpha-helix (xoắn alpha) protein CYP1B1 Gia đình bệnh nhân mã số G40 có người Bố mẹ bệnh nhân bình thường, khơng phát bệnh Em gái bệnh nhân có 50% khả mang gen, cần làm xét nghiệm di truyền Bệnh nhân cần tư vấn di truyền trước nhân Ở gia đình bệnh nhân mang mã số G85 có anh em Phân tích gen CYP1B1 thấy anh em trai gia đình có mang đột biến p.E229K trạng thái dị hợp tử biểu bệnh glôcôm nguyên phát nặng Em gái bệnh nhân không mang gen đột biến biểu lâm sàng bình thường Mẹ bệnh nhân người lành mang gen bệnh p.E229K trạng thái dị hợp tử lặn di truyền cho con, không biểu bệnh Bố bệnh nhân không phát đột biến Bố, mẹ bệnh nhân không phát đột biến khác gen Phả hệ không tuân theo quy luật di truyền Melden nghiên cứu khác chứng minh đột biến p.E229K có khả gây bệnh trạng thái dị hợp có đột biến gen khác phối hợp mà chưa tìm hiểu nghiên cứu BN em trai cần tư vấn di truyền trước hôn nhân Đột biến xóa đoạn gen CYP1B1: hai BN mang ĐB xóa đoạn hoàn toàn exon 1-3 trạng thái đồng hợp tử, ĐB phát Hai BN biểu bệnh nặng, phẫu thuật sớm kết thất bại dẫn đến mù lòa hai mắt, sẹo giác mạc đục trắng ảnh hưởng đến thẩm mỹ Bố mẹ BN cần làm chẩn đoán trước sinh có ý định sinh thêm Em gái BN cần tư vấn di truyền kết hôn Bệnh nhân cần tư vấn di truyền trước hôn nhân Gia đình bệnh nhân G56 có anh em Bố bệnh nhân người lành mang gen bệnh trạng thái dị hợp di truyền cho con, không lấy mẫu máu mẹ bệnh nhân mẹ bệnh nhân xuất lao động nước ngồi Chúng tơi dự đoán di truyền xảy theo quy luật giống gia đình bệnh nhân G02 nên cần tư vấn di truyền, chẩn đốn trước sinh cho gia đình muốn sinh thêm 4.3.2 Các phả hệ không di truyền đột biến 11 phả hệ khơng có đột biến di truyền gồm gia đình bệnh nhân G08, G09, G11, G19, G20, G21, G24, G43, G44, G70 G84 24 KẾT LUẬN Tình trạng đột biến gen CYP1B1 mối liên với liên quan với lâm sàng bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát 19/86 bệnh nhân có đột biến gen CYP1B1 17 trường hợp xác định đột biến điểm kỹ thuật giải trình tự gen trường hợp xác định đột biến xóa đoạn kỹ thuật MLPA 10 đột biến xác định gồm đột biến điểm p.Q86K, p.Q159X, p.Q164X, p.D218H, p.L191Sfs*4, p.A133T, p.L27Q, p.D242N, p.G365E đột biến xóa đoạn tồn exon 1-3 Có mối liên quan lâm sàng tình trạng đột biến gen: Bệnh nhân mang đột biến khởi phát sớm trung bình 1,21 tháng tuổi, thường biểu bệnh hai mắt (94,4%) Bệnh nhân mang đột biến gen có giai đoạn bệnh nặng (46,8%) tỷ lệ phẫu thuật lại nhiều lần so với nhóm khơng có đột biến gen Khả đột biến gen CYP1B1 nhóm bệnh nhân mang đồng thời ba đặc điểm bệnh biểu sớm sau sinh, hai mắt giai đoạn bệnh nặng cao gấp 6,47 lần so với khả đột biến nhóm bệnh nhân lại Phát người lành mang đột biến gen CYP1B1 người nhà bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát 5/26 bố mẹ 15 bệnh nhân có đột biến gen CYP1B1 mang gen bệnh di truyền cho người bố, người mẹ người anh em bệnh nhân mang gen bệnh khơng có biểu lâm sàng người vừa mang gen đột biến vừa biểu bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Đột biến di truyền xảy phả hệ gia đình gia đình di truyền đột biến điểm, gia đình di truyền đột biến xóa đoạn 11 gia đình bệnh nhân có đột biến gen CYP1B1 khơng phát tình trạng gen bệnh di truyền Trong phả hệ gia đình bệnh nhân thấy có tượng di truyền đột biến gen đa hình gen HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO Cần phát đột biến số gen khác liên quan đến bệnh Glôcôm bẩm sinh ngun phát nhóm bệnh nhân để tìm ngun nhân gây bệnh 25 Phát người lành mang gen bệnh gia đình bệnh nhân glơcơm bẩm sinh nguyên phát để có kế hoạch quản lý, theo dõi tư vấn di truyền ... Loại đột biến PolyPhen Có khả Gây bệnh gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh Khả Gây bệnh lành tính Gây bệnh Gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh Gây bệnh Có khả Gây bệnh gây bệnh. .. Xuất phát từ thực tiễn này, đề tài "Nghiên cứu xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát phát người lành mang gen bệnh" thực với hai mục tiêu: Xác định đột biến gen CYP1B1. .. Kết phát đột biến thành viên gia đình bệnh nhân Người lành mang gen bệnh Bố bệnh nhân Mẹ bệnh nhân Anh/em bệnh nhân Thể Đột biến Thể Đột biến Thể Đột biến Thể đột biến đột biến đột biến đột biến