Bài viết Chẩn đoán trước sinh bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 Hydroxylase trình bày tăng sản thượng thận bẩm sinh (TSTTBS) là một bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể thường, khoảng trên 90% gây nên do thiếu hụt enzym 21- hydroxylase. Việc đưa ra một phác đồđiều trị thích hợp với các bà mẹ mang thai sẽ là giải pháp hiệu quả để tránh được hiện tượng nam hóa đối với trẻ gái bị bệnh,... Mời các bạn cùng tham khảo.
TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 12 Juan Tian., Guohua Yang et al (2011) Molecular diagnosis of two families with classic congenital adrenal hyperplasia, Gene, 05.019, 368 - 389 Summary MUTATION AND CARRIER DETECTION OF CONGENITAL ADRENAL HYPERPLASIA CAUSED BY 21 - HYDROXYLASE DEFICIENCY Congenital adrenal hyperplasia causes by 21- hydroxylase deficiency (CAH - 21OH) is an autosomal recessive genetic disorder due to mutation in the CYP21A2 gene The aim of this study was to identify mutations of CYP21A2 gene in patients with CAH - 21OH and detect the carrier in family members of CAH - 21OH patients 33 CAH - 21OH patients and 78 family members were selected for this study; direct DNA sequencing and MLPA were used to identify the mutation and carriers in CYP21A2 The result showed that, in the patient group, 33/33 (100%) patients were found to have mutation in CYP21A2 gene with different types of mutation and 656 A/C > G (IVS2 - 13A/C > G) was the most common mutation with 13/33 (39.5%) and following is the deletion mutation with 7/33 (21.2%) In the carrier group, 32/33 fathers, 33/33 mother and 5/12 siblings were identified as carrier Our results are important for prenatal diagnosis and genetic counseling to reduce the ratio of disease and have suitable treatment for mother in initial weeks of gestation Keywords: congenital adrenal hyperplasia, CYP21A2 mutation, carrier CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH BỆNH TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN BẨM SINH THỂ THIẾU 21 - HYDROXYLASE Ngô Thị Thu Hương1, Trần Vân Khánh1, Nguyễn Phú Đạt1, Nguyễn Viết Tiến2, Tạ Thành Văn1 Trường Đại học Y Hà Nội, 2Bệnh viện Phụ sản Trung ương Tăng sản thượng thận bẩm sinh (TSTTBS) bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể thường, khoảng 90% gây nên thiếu hụt enzym 21- hydroxylase Việc đưa phác đồ điều trị thích hợp với bà mẹ mang thai giải pháp hiệu để để tránh tượng nam hóa trẻ gái bị bệnh Nghiên cứu tiến hành với mục tiêu chẩn đoán trước sinh cho thai phụ mang gen đột biến dị hợp tử bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - OH Sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen MLPA để xác định đột biến gen thai nhi tuần thứ 16 04 thai phụ thuộc 04 gia đình bệnh nhân tăng sản thượng thận bẩm sinh Kết cho thấy, thai nhi mang đột biến dị hợp tử 656A/C > G/1763insT, thai nhi mang đột biến đồng hợp tử 2110C > T (R356W) thai nhi không mang gen đột biến gen Từ khóa: tăng sản thượng thận bẩm sinh, chẩn đoán trước sinh, đột biến gen CYP21A2 194 TCNCYH 82 (2) - 2013 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC I ĐẶT VẤN ĐỀ Tăng sản thượng thận bẩm sinh (congenital adrenal hyperplasia - TSTTBS) thể thiếu enzym 21 - hydroxylase (21 - OH) bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể số Bệnh đột biến gen CYP21A2 gây rối loạn trình sinh tổng hợp hormon vỏ thượng thận, bệnh cảnh lâm sàng suy thượng thận cấp nam hóa trẻ gái, dậy sớm giả trẻ trai [1, 2] Bệnh dự phòng phương pháp tư vấn di truyền dựa kết phát người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh Theo nghiên cứu Lee cộng sự, ước tính tỷ lệ người lành mang gen bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh 1/83 quần thể người Trung Quốc [3] Theo báo cáo khác giới, tỷ lệ chung người lành mang gen bệnh 1/55 [4, 5] Ở Việt Nam, khoa Nội tiết - Chuyển hóa - Di truyền, bệnh viện Nhi Trung ương nơi quản lý số lượng lớn khoảng 600 bệnh nhân tăng sản thượng thận bẩm sinh Tuy nhiên, việc phát hiện, quản lý chưa thực thường quy, công việc cần thiết nhằm: Chẩn đoán điều trị trước sinh cho thai nhi gái mắc bệnh để phòng làm giảm nam hóa gây mơ hồ giới tính sau sinh điều trị sớm sau sinh cho thai nhi trai Tư vấn tiền hôn nhân nhằm giảm trẻ sinh bị mắc bệnh Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn trên, đề tài thực với mục tiêu chẩn đoán trước sinh cho thai phụ mang gen đột biến dị hợp tử bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - OH Địa liên hệ: Tạ Thành Văn - Trường Đại học Y Hà Nội Số Tôn Thất Tùng, Đống Đa, Hà Nội Email: tathanhvan@hmu.edu.vn Ngày nhận: 04/03/2013 Ngày chấp thuận: 26/4/2013 TCNCYH 82 (2) - 2013 II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng thai phụ gia đình có bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu enzym 21 - hydroxylase xác định đột biến, mang thai tuần thứ 16 Phương pháp 2.1 Quy trình lấy mẫu Các thai phụ mang gen dị hợp tử có bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - OH kiểm tra siêu âm đo nồng độ HCG huyết Lấy mẫu phương pháp chọc hút dịch ối hướng dẫn siêu âm bệnh viện Phụ Sản trung ương Dịch ối bảo quản vận chuyển trung tâm Nghiên cứu Gen Protein, trường Đại học Y Hà Nội 2.2 Kỹ thuật tách chiết DNA DNA tách chiết từ tế bào ối theo quy trình phenol/chloroform Tất mẫu DNA tiến hành đo nồng độ độ tinh sạch, mẫu có OD 260 - 280 đạt từ 1,8 - sử dụng để phân tích gen 2.2 Kỹ thuật giải trình tự gen Các cặp mồi đặc hiệu sử dụng để khuyếch đại gen CYP21A2 Chu trình nhiệt phản ứng PCR: 900C - 10 giây, [960 C - 10 giây, 550C - 15 giây, 720C - phút] x 30 chu kỳ Sản phẩm PCR tinh giải trình tự máy ABI - 3100 trung tâm nghiên cứu Gen - Protein, trường Đại học Y Hà Nội Kết phân tích phần mềm CLC so sánh với kết bệnh nhân tăng sản thượng thận bẩm sinh gia đình xác định đột biến 2.3 Kỹ thuật MLPA (Multiplex ligation dependent probe amplification) Sử dụng kit MLPA P050B2 (MRC - Holland) 195 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC để phát đột biến xóa đoạn bệnh nhân người lành mang gen bệnh Thành phần kit gồm probe để khuyếch đại gen CYP21A2, probe tương ứng với vùng gen, có probe đặc trưng cho gen người sử dụng để làm đối chứng probe cho nhiễm sắc thể X Y để xác định giới tính Sản phẩm khuếch đại điện di mao quản máy giải trình tự Số lượng sản phẩm khuếch đại probe tỷ lệ thuận với số copy đoạn DNA đích đặc hiệu với probe III KẾT QUẢ Bằng kỹ thuật giải trình tự gen MLPA, phát 2/4 thai nhi khơng có đột biến gen CYP21A2, 2/4 thai nhi có đột biến gen giống anh trai thai nhi (bảng 1) Bảng Kết phân tích gen thai nhi gia đình Gia đình Bệnh nhân Bố bệnh nhân Mẹ bệnh nhân Thai nhi Gia đình 656A/C > G/656A/C > G** (anh trai) 656A/C > G* 656A/C > G* Gia đình 656A/C > G * /1763insT* (anh trai) 656A/C > G* 1763insT* 656A/C > G/1763insT*/* Gia đình 2110C > T/2110C > T** (anh trai) 2110C > T* 2110C > T* 2110C > T/2110C>T** Gia đình exon - del/exon del** (chị gái) exon - del* exon - del* Bình thường Bình thường ** Đột biến đồng hợp tử; * Đột biến di hợp tử Kết bảng cho thấy bố mẹ mang gen trạng thái dị hợp tử, bệnh nhân thai nhi có đột biến gen nhận allele đột biến từ bố mẹ Kết đột biến gen phả hệ gia đình Gia đình có người trai bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh phân tích xác định đột biến gen CYP21A2 Kết cho thấy bệnh nhân có đột biến 2110C > T trạng thái đồng hợp tử Kết phân tích gen bố, mẹ bệnh nhân cho thấy mang gen dị hợp tử 2110C > T (người lành mang gen bệnh) Bà mẹ mang thai chẩn đoán trước sinh tuần thứ 16 Kết cho thấy thai nhi bị đột biến gen giống người anh trai (hình 1) 196 TCNCYH 82 (2) - 2013 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC I II III Nữ bình thường Nam bình thường Nữ mang gen Nam mang gen Thai nhi bị bệnh 2110C Người bình thường 2110C>T R 356 W Bố bệnh nhân Nam bị bệnh 2110C>T R 356 W Bệnh nhân 2110C>T R 356 W Mẹ bệnh nhân 2110C>T R 356 W Thai nhi Hình Kết chẩn đốn trước sinh gia đình A) Phả hệ gia đình bệnh nhân; B) Kết phân tích gen CYP21A2 Mũi tên thẳng đứng vị trí đột biến, chữ số mũi tên vị trí nucleotid Kết đột biến gen phả hệ gia đình Gia đình có gái bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh phân tích xác định đột biến gen CYP21A2 Kết cho thấy, bệnh nhân có đột biến đồng hợp tử đoạn exon - Kết phân tích gen bố, mẹ bệnh nhân cho thấy họ mang gen dị hợp tử đoạn exon - (người lành mang gen bệnh) Bà mẹ mang thai chẩn đoán trước sinh tuần thứ 16 Kết cho thấy thai nhi khơng có đột biến gen giống người chị gái (hình 2) TCNCYH 82 (2) - 2013 197 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC I II III Nữ bình thường Nam bình thường Nữ mang gen Nam mang gen Thai nhi bình thường ex3 Nam bị bệnh ex1 Y Người bình thường ex3 ex1 ex3 ex1 ex3 ex1 Y Bệnh nhân Y Y ex3 Bố bệnh nhân Mẹ bệnh nhân ex1 Y Thai nhi Hình Kết chẩn đốn trước sinh gia đình A) Phả hệ gia đình bệnh nhân; B) Kết phân tích gen CYP21A2 Mũi tên thẳng đứng vị trí đột biến, ex1, ex3, đỉnh tương ứng với vị trí exon 1, gen CYP21A2; Y đỉnh tương ứng với nhiễm sắc thể Y dùng để xác định giới tính 198 TCNCYH 82 (2) - 2013 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC IV BÀN LUẬN Chẩn đoán trước sinh cho thai phụ mang gen dị hợp tử gia đình có bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh Kết cho thấy thai nhi có đột biến gen dị hợp tử 656A/ C > G/1763insT thai nhi có đột biến gen đồng hợp tử 2110C > T (R356W), thai nhi khơng có đột biến gen Theo phả hệ gia đình số số có trai mang đột biến đồng hợp tử 656A/C > G dị hợp tử 656A/C > G/1763insT thể muối Đây dạng đột biến hay gặp với tỷ lệ cao, giới (12 - 56%) tùy thuộc vào chủng tộc Đối với gia đình này, bố mẹ mang gen dị hợp tử nên người mẹ mang thai có nguyện vọng chẩn đốn trước sinh Kết phân tích gen cho thấy giống người anh trai mang đột biến, sau tư vấn, bà mẹ tự nguyện xin đình thai nghén Gia đình thứ 1, có bố mẹ mang gen dị hợp tử vị trí 656A/C > G đoạn thể muối nặng Kết chẩn đoán trước sinh người mẹ cho thấy thai nhi nam, mang đột biến dị hợp tử nên người mẹ tư vấn giữ thai Ở Tây Ban Nha, chẩn đoán trước sinh cho gia đình có nguy sinh bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh có vai trò quan trọng, đặc biệt gia đình mang gen đột biến Q138X, loại đột biến gây hoạt tính enzym hoàn toàn với biểu lâm sàng thể muối nặng [6] Tăng sản thượng thận bẩm sinh bệnh lý di truyền đơn gen lặn nhiễm sắc thể thường, bố mẹ mang gen dị hợp tử có khả 25% sinh bình bình thường, 25% sinh người lành mang gen 50% sinh bị bệnh [7, 8] Sinh người bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh gánh nặng lớn kinh tế tinh thần cho gia đình xã hội, phát chẩn đoán sớm trước sinh biện pháp để phòng ngừa bệnh vị trí exon - Người anh người chị gái thai nhi mang gen đột biến đồng hợp tử V KẾT LUẬN 656A/C > G đột biến đồng hợp tử Chẩn đoán trước sinh cho thai phụ gia đình có bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - OH cho kết : thai nhi có đột biến gen dị hợp tử 656A/C > G/1763insT, thai nhi có đột biến gen đồng hợp tử 2110C > T (R356W) thai nhi khơng có đột biến gen đoạn exon - với biểu lâm sàng muối nặng, khơng chẩn đốn sớm điều trị kịp thời nên bệnh nặng nề, chị gái gia đình số có để lại di chứng bại não Chẩn đoán trước sinh thực cho bà mẹ mang thai tuần thứ 16 Kết phân tích gen cho thấy, thai nhi không mang đột biến gen tư vấn giữ thai, bé đồng thời lập hồ sơ quản lý để có biện pháp tư vấn tiền hôn nhân sau Hiện bé sinh phát triển khỏe mạnh Nghiên cứu B.Ezquieta Tây Ban Nha (2006) phân tích gen cho gia đình có gái đầu bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - OH, mang gen đột biến đồng hợp tử Q138X với biểu lâm sàng TCNCYH 82 (2) - 2013 TÀI LIỆU THAM KHẢO Angel.O.K Chan, But.M.W (2011) Molecular analysis of congenital adrenal hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency in Hong Kong Chinese patients, Steroids, 76, 1057 - 1062 Saroj N, New M I (2011) Congenital adrenal hyperplasia due to 21 – hydroxylase deficiency, Annals of the new york academy of sciences, 1192, - 11 199 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Lee H H (2004) The chimeric CYP21P/ CYP21 gene and 21-hydroxylase deficiency, Journal Hum Genet, 49, 65 - 72 Anastasovska.V, Kocova M (2010) Detected heterozygouts during the molecular analysis of the common CYP21A2 point mutations in Macedonian patients with congenital adrenal hyperplasia and their relatives, Contri- butions, Sec, Biol.Med.Sci, 2, 71 - 82 Baumgartner-Parzer S.M, Nowotny.P, et al (2004) Carrier frequency of congenital adrenal hyperplasia (21 - hydroxylase deficiency) in a Middle European population, The journal of clinical Endocrinology & Metabolism, 90(2), 775 - 778 B.Ezquieta M Beneyto et al (2006) Gene duplication in 21-hydroxylase deficiency: the importance of accurate molecular diagnosis in carrier detection and prenatal diagnosis, Prenat Diagne, 26, 1172 - 1178 Finkielstain GP, Chen W, Mehta SP et al (2011) Comprehensive genetic analysis of 182 unrelated families with congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency, J Clin Endocrinol Metab, 96 (1), 161 - 172 Peter Wieacker, Johannes Steinhard (2010), The prenatal diagnosis of genetic dis- eases, Dtsch Arztebl Int, 107 (48), 857 - 862 Summary PRENATAL DIAGNOSIS OF CONGENITAL ADRENAL HYPERPLASIA DUE TO 21 - HYDROXYLASE DEFICIENCY Congenital adrenal hyperplasia is an autosomal recessive disorder in more than 90% of cases caused by genetic aberrations of the steroid 21-hydroxylase gene (CYP21A2) Appropriate prenatal treatment to the at-risk pregnant mother is effective in reducing genital virilization in the fetus, thus avoiding unnecessary genitoplasty in affected females This study was carried out with the purpose of prenatal diagnosis for mothers carrying heterozygous mutation in CYP21A2 gene Sequencing and MLPA methods were used to identify mutation in CYP21A2 gene for fetus at 16th week of the gestation The results showed that out of fetuses have mutation in CYP21A2 gene including fetus with heterozygous mutation of 656A/C > G/1763insT, fetus with homozygous mutation of 2110C > T (R356W) and fetus are normal Keywords: congenital adrenal hyperplasia, CYP21A2 mutation, prenatal diagnosis 200 TCNCYH 82 (2) - 2013 ... ĐẶT VẤN ĐỀ Tăng sản thượng thận bẩm sinh (congenital adrenal hyperplasia - TSTTBS) thể thiếu enzym 21 - hydroxylase (21 - OH) bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể số Bệnh đột biến gen CYP21A2 gây rối... sinh bị mắc bệnh Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn trên, đề tài thực với mục tiêu chẩn đoán trước sinh cho thai phụ mang gen đột biến dị hợp tử bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - OH Địa... hợp tử V KẾT LUẬN 656A/C > G đột biến đồng hợp tử Chẩn đoán trước sinh cho thai phụ gia đình có bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - OH cho kết : thai nhi có đột biến gen dị hợp