Đề tài với mục tiêu nghiên cứu tác dụng theo hướng kích thích miễn dịch của các công thức phối hợp từ các dược liệu Bọ mắm, Dây cóc, Xuyên tâm liên, Hoàng liên ô rô và Gừng trên thực nghiệm gây suy giảm miễn dịch bằng cyclophosphamide nhằm mục đích ứng dụng các dược liệu trên trong việc điều trị các bệnh viêm nhiễm.
NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG THEO HƯỚNG TĂNG CƯỜNG MIỄN DỊCH THỰC NGHIỆM CỦA CÁC CÔNG THỨC PHỐI HỢP TỪ DƯỢC LIỆU Lê Minh Triết∗, Nguyễn Thị Thu Hương*, Dương Thị Mộng Ngọc*, Trần Cơng Luận*, Lã Văn Kính∗∗ TĨM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu tác dụng theo hướng kích thích miễn dịch cơng thức phối hợp từ dược liệu Bọ mắm, Dây cóc, Xuyên tâm liên, Hồng liên rơ Gừng thực nghiệm gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamide nhằm mục đích ứng dụng dược liệu việc ñiều trị bệnh viêm nhiễm Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu tác dụng công thức phối hợp từ cao dược liệu chuột bình thường chuột bị gây suy giảm miễn dịch chất ức chế miễn dịch cyclophosphamide (150 mg/kg, tiêm phúc mô) Cơng thức phối hợp (Hồng liên rơ, Bọ mắm, Gừng); cơng thức phối hợp (Hồng liên rô, Xuyên tâm liên, Gừng); công thức phối hợp (Xun tâm liên, Dây cóc, Gừng) cơng thức phối hợp (Bọ mắm, Dây cóc, Gừng) Kết đánh giá dựa số thực bào máu sau phút theo phương pháp khảo sát ñộ thải carbon (carbon clearance test) Kết quả: Trên chuột bình thường có cơng thức phối hợp làm tăng số thực bào chuột bị gây suy giảm miễn dịch cơng thức phối hợp có tác dụng làm gia tăng số thực bào bị gây suy giảm cyclophosphamide Kết luận: Các công thức phối hợp cao chiết từ dược liệu Bọ mắm, Dây cóc, Hồng liên rơ Gừng có tác dụng làm gia tăng số thực bào, tăng cường miễn dịch khơng đặc hiệu Từ khóa: Bọ mắm, Dây cóc, Xun tâm liên, Hồng liên rơ, Gừng, cyclophosphamide, số thực bào, độ thải carbon, tăng cường miễn dịch SUMMARY EXPERIMENTAL STUDY ON IMMUNOSTIMULATING EFFECTOF MEDICINAL PLANT FORMULAE Le Minh Triet, Nguyen Thi Thu Huong, Duong Thi Mong Ngoc, Tran Cong Luan, La Van Kinh Objectives: Study on immunostimulating effects of formulae from Pouzolzia zeylanica, Tinospora crispa, Andrographis paniculata, Mahonia nepalensis and Zingiber officinale was performed in healthy mice and cyclophosphamide-induced immunosuppressive mice Methods: Materials used in the study including Formula (Mahonia nepalensis, Pouzolzia zeylanica and Zingiber officinale), Formula (Mahonia nepalensis, Andrographis paniculata and Zingiber officinale), Formula (Tinospora crispa, Andrographis paniculata and Zingiber officinale) and Formula (Pouzolzia zeylanica, Tinospora crispa and Zingiber officinale) Cyclophosphamide (single dose of 150 mg/kg, intraperitoneal injection) was used to induce immunosuppressive model in mice The observation parameter was blood phagocytic index of carbon clearance test Results: In healthy mice, only Formula increased phagocytic index whereas all four formulae increased phagocytic index in cyclophosphamide-induced immunosuppressive mice Conclusion: Formulae of Pouzolzia zeylanica, Tinospora crispa, Andrographis paniculata, Mahonia nepalensis and Zingiber officinale increased phagocytic index and stimulated non-specific immune function Key words: Pouzolzia zeylanica, Tinospora crispa, Andrographis paniculata, Mahonia nepalensis and Zingiber officinale, cyclophosphamide, phagocytic index, carbon clearance test, immunostimulating, immune enhancement ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Bọ mắm (cây thuốc Giòi, tên khoa học Pouzolzia zeylanica L Benn., họ Gai-Urticaceae) ñược sử dụng theo kinh nghiệm dân gian ñiều trị bệnh lý viêm nhiễm như: viêm họng, viêm ruột, lỵ, ñinh nhọt, viêm da, viêm vú, nhiễm trùng tiết niệu, vết thương bầm dập, ho lâu ngày, lao, bệnh phổi [5] Dây cóc (dây Ký ninh, tên khoa học Tinospora crispa L Miers, họ Tiết dê-Menispermaceae) ñược dùng chữa sốt rét, cảm ∗ Trung tâm sâm Dược liệu Tp HCM – Viện Dược liệu Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Miền Nam Địa liên hệ: PGS.TS Lã Văn Kính ĐT: 38291746 ∗∗ Email: lakinh@hcmgmail.com 111 cúm, phát ban, ho, làm thuốc bổ đắng giúp tiêu hóa, tiêu mụn nhọt, lở loét, ñắp vết thương, trị ghẻ [5] Xuyên tâm liên (Andrographis paniculata Burm.f Nees, thuộc họ Ô rơ Acanthaceae) dùng phổ biến y học cổ truyền Trung Quốc, Ấn Độ, Indonesia, Việt Nam thuốc quý với nhiều tác dụng dược lý ñã ñược khoa học chứng minh như: kháng khuẩn, nhiệt, giải ñộc, giảm ñau [5] Tác dụng tăng cường hệ miễn dịch Xuyên tâm liên chứng minh [3],[4] Hồng liên rơ (tên khoa học Mahonia nepalensis DC., họ Hoàng liên gai-Berberidaceae) ñược sử dụng dân gian ñể chữa kiết lỵ, tiêu chảy, viêm ruột, ăn không tiêu, viêm gan vàng da, viêm da dị ứng, mẩn ngứa, mụn nhọt [5] Theo kinh nghiệm cổ truyền Gừng (tên khoa học Zingiber officinale Roscoe, họ Gừng-Zingiberaceae) ñược dùng làm chất bổ trợ cho nhiều thuốc bổ kích thích, dùng làm thuốc chống ñộc, an thần, chống viêm, chữa ñau bụng, cảm lạnh, ho, sổ mũi, kích thích ăn ngon miệng làm dễ tiêu [5] Đề tài nghiên cứu tác dụng theo hướng kích thích miễn dịch công thức phối hợp từ dược liệu Bọ mắm, Dây cóc, Xun tâm liên, Hồng liên rơ Gừng thực nghiệm gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamide nhằm mục đích ứng dụng dược liệu việc ñiều trị bệnh viêm nhiễm ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu nghiên cứu công thức phối trộn từ cao cồn Bọ mắm (ñộ ẩm 19,7%, ñộ tro 9,7%), Dây cóc (ñộ ẩm 19,8%, ñộ tro 5,6%), Xuyên tâm liên (ñộ ẩm 15,3%, ñộ tro 11,97%), Hồng liên rơ (độ ẩm 19,18%, độ tro 4,92%) Gừng (ñộ ẩm 15,03%, ñộ tro 12,11%), với tỷ lệ phối chế khác ñược cung cấp Bộ mơn Hóa-Chế phẩm thuộc Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM Các công thức phối hợp liều thử nghiệm trình bày bảng Bảng 1: Các công thức phối hợp liều thử nghiệm Tỷ lệ (%) theo khối lượng Liều uống (g/kg thể trọng) Hồng liên rơ 8,2 Bọ mắm Gừng Hồng liên ô rô Công thức phối hợp Xuyên tâm liên Gừng Dây cóc Cơng thức phối hợp Xun tâm liên Gừng 51 40,8 5,6 59,6 34,8 41 0,705 1,41 2,82 Công thức Công thức phối hợp Công thức phối hợp 37,2 21,8 Dây cóc 51,2 Bọ mắm Gừng 21,8 27,2 0,825 1,65 3,30 0,615 1,23 2,46 0,295 0,59 1,18 Động vật nghiên cứu Chuột nhắt trắng ñực chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 20 ± gam, ñược cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang, Chuột ñược ñể ổn ñịnh tuần trước khí thử nghiệm Thể tích cho uống tiêm 10 ml/kg thể trọng chuột Phương pháp nghiên cứu [1], [2], [4] Bố trí thí nghiệm Chuột thí nghiệm chia thành hai nhóm: nhóm chuột bình thường nhóm chuột bị gây suy giảm miễn dịch (tiêm phúc mô liều Endoxan® hòa tan nước muối sinh lý liều tương ñương với cyclophosphamide 150 mg/kg thể trọng) Mỗi nhóm ñược chia thành lơ (10 con) để tiến hành điều trị công thức phối trộn từ cao dược liệu với liều khác Lô chứng âm (nước cất) lơ đối chiếu dương (Zymosan) tiến hành song song với lô thử Chỉ tiêu khảo sát: Xác ñịnh số thực bào thực nghiệm thải carbon (carbon clearance test) Nguyên tắc: xác ñịnh độ thải vật lạ có kích thước lớn từ hệ tuần hồn máu hoạt động thực bào Tiến hành: Chuột thử nghiệm ñược cho uống nước cất mẫu thử hàng ngày vào buổi sáng Một sau lần uống thứ 8, tiêm dung dịch mực víết máy Parker có độ đậm đặc định lượng tương ứng với hàm lượng carbon 751 mg/kg đường tiêm tĩnh mạch Sau lấy 20 µl máu ñám rối tĩnh mạch hốc 112 mắt chuột ống mao quản có chứa chất chống đơng EDTA thời ñiểm phút phút Mẫu máu pha ml dung dịch có ñệm natri carbonat 0,1% ño mật ñộ quang bước sóng 640 nm Tính tốn kết quả: Chỉ số thực bào tính cơng thức sau: K = lnOD1-lnOD2 T2-T1 K số biểu thải carbon OD1 OD2 mật ñộ quang ño thời ñiểm T1 (0 phút) T2 (5 phút) Đánh giá kết Các kết thu ñược thử nghiệm biểu thị số trung bình M ± SEM (Standard Error of the Mean: sai số chuẩn giá trị trung bình), xử lý số liệu thống kê dựa vào phép kiểm t-student One-way ANOVA với ñộ tin cậy 95% (P