Tác động của các yếu tố tiền phân tích như loại chất chống đông máu, nhiệt độ và thời gian lưu trữ đối với số lượng tiểu cầu trong máu người là những yếu tố khó nắm bắt. Vì vậy, mục tiêu nghiên cứu nhằm xác định loại chất kháng đông phù hợp và thời gian cần thiết để chuyển mẫu máu xét nghiệm số lượng tiểu cầu trong máu từ khi lấy máu đến khi phân tích.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI SỐ LƯỢNG TIỂU CẦU TRONG MÁU TỒN PHẦN VỚI CHẤT CHỐNG ĐƠNG EDTA VÀ TRI-NA CITRATE Nguyễn Thị Phương Trang*, Nguyễn Thị Phương Thảo* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Tác động yếu tố tiền phân tích loại chất chống đơng máu, nhiệt độ thời gian lưu trữ số lượng tiểu cầu máu người yếu tố khó nắm bắt Mục tiêu nghiên cứu: Xác định loại chất kháng đông phù hợp thời gian cần thiết để chuyển mẫu máu xét nghiệm số lượng tiểu cầu máu từ lấy máu đến phân tích Phương pháp: Máu từ người bệnh nhân thu thập vào tube có chất chống đơng EDTA TriNa Citrate, lưu trữ nhiệt độ phòng sau phân tích số lượng tiểu cầu từ thứ đến thứ từ sau lấy mẫu máy phân tích huyết học tự động Cell Dyn 1700 Kết quả: Mẫu máu bảo quản EDTA, sau lấy mẫu, số lượng tiểu cầu khơng có thay đổi, đến thứ có thay đổi số lượng tiểu cầu nhỏ Ở mẫu máu bảo quản Tri-Na Citrate, số lượng tiểu cầu thay đổi từ trở Bên cạnh đó, số lượng tiểu cầu mẫu máu bảo quản TriNa Citrate thấp nhiều so với mẫu máu bảo quản EDTA Bàn luận: Kết nghiên cứu xem xét để loại trừ việc sử dụng Tri-Na Citrate chất chống đông bảo quản mẫu máu thực xét nghiệm phân tích số lượng tiểu cầu Từ khóa: Số lượng tiểu cầu, yếu tố tiền phân tích, tri-Na citrate, EDTA, máu người ABSTRACT SURVEY CHANGES OF PLATELET NUMBER IN WHOLE BLOOD WITH ANTICOAGULANT SUBSTANCES AS EDTA AND SODIUM CITRATE Nguyen Thi Phuong Trang, Nguyen Thi Phuong Thao * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 514 - 518 Background: The effect of pre-analytical factors such as type of anticoagulant, storage temperature and time on platelet count in human blood is largely elusive Objective: Determine appropriate type of anticoagulant and essential time after sampling to analysis the platelet number Methods: Blood from random patient collected into tube containing anticoagulant EDTA and Tri-sodium citrate, stored at room temperature and then analyzed the platelet number from 1st hour to 6th hour after sampling by automatically hematology analyzer Cell Dyn 1700 Results: Blood samples were preserved with EDTA, in hours after sampling, platelet count did not change, up to hours there was a change in platelet count but little In blood sample preserved by sodium citrate, platelet count ranged from 2nd hour toward In addition, the platelet number in blood samples preserved by sodium citrate is lower than in samples preserved by EDTA Discussion: The result can be considered to eliminate the use of Tri-sodium citrate as anticoagulant for blood sample in the test analyzed platelet number Keywords: platelet number, pre-analytical factors, tri-sodium citrate, EDTA, human blood *Bệnh viện đa khoa Quận – TP.HCM Tác giả liên lạc: ThS BS Nguyễn Thị Phương Trang 514 ĐT: 01223990619 Email: khoaxetnghiem4@yahoo.com.vn Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, có thơng tin liên quan đến ảnh hưởng yếu tố tiền phân tích mẫu, lựa chọn chất chống đơng máu thích hợp, điều kiện thời gian tối ưu cho việc lưu trữ mẫu đến số lượng tiểu cầu Số lượng tiểu cầu số quan trọng chẩn đoán, theo dõi điều trị số bệnh lý, đặc biệt sốt xuất huyết Vì lý đó, nghiên cứu thực với mục đích hạn chế tối đa yếu tố ảnh hưởng đến độ xác số lượng tiểu cầu máu người ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Cỡ mẫu cách chọn mẫu - Cỡ mẫu: 111 mẫu - Cách chọn mẫu: Tiêu chuẩn chọn mẫu Mẫu máu chọn ngẫu nhiên từ bệnh nhân ngoại trú đến khám bệnh có định xét nghiệm tổng phân tích tế bào máu bệnh viện Quận –TP HCM * Tiêu chuẩn loại trừ: mẫu máu bị đông bị tiêu huyết Kỹ thuật thu thập liệu Cách lấy mẫu máu khảo sát - Mẫu máu bệnh nhân lấy trực tiếp khoa xét nghiệm cho vào tube chống đông EDTA, Citrate, để máy lắc liên tục lưu nhiệt độ phòng - Họ tên bệnh nhân tham gia nghiên cứu mã hóa thành mã số - Ngay sau lấy mẫu: Mẫu máu tube EDTA Citrate phân ống nghiệm vô khuẩn Ống nghiệm thực xét nghiệm tiểu cầu ngay, ống nghiệm lại lưu nhiệt độ phòng phân tích số lượng tiểu cầu máy huyết học tự động Cell-Dyn 1700 vào thứ 1, thứ 2, thứ thứ sau lấy máu Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Nghiên cứu Y học Tất mẫu máu bảo quản EDTA ống nghiệm ước lượng số lượng tiểu cầu kính hiển vi quang học 50% bệnh nhân tham gia nghiên cứu chọn ngẫu nhiên thực đồng thời với phương pháp đếm số lượng tiểu cầu buồng đếm Neubauer - Kết phân tích thứ dùng để so sánh với kết sau Từ đó, đưa kết luận thay đổi số lượng tiểu cầu theo thời gian Trang thiết bị, hóa chất phương pháp xét nghiệm - Bộ kit thử Diagon (Indonesia) - Mẫu nội kiểm tra Biorad (Mỹ) - Mẫu ngoại kiểm tra Randox (Anh) - Máy phân tích huyết học tự động Cell Dyn 1700 - Pipette đếm hồng cầu buồng đếm Neubauer - Tube EDTA, Citrate tube trắng – Hồng Thiện Mỹ (Việt Nam) - Micropipette loại (Đức) - Dung dịch Wright’s - Kính hiển vi - Lame kính - Máy tính phần mềm xử lý số liệu KẾT QUẢ Đề tài khảo sát thay đổi số lượng tiểu cầu theo thời gian điều kiện bảo quản nhiệt độ chất kháng đông; so sánh chênh lệch số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA Citrate 111 bệnh nhân Bệnh viện Quận thời gian từ 10/07/2011 đến 30/07/2011 Kết thay đổi số lượng tiểu cầu theo thời gian mẫu máu có kháng đơng EDTA Trắc nghiệm t tương ứng cặp (t-Test: Paired Two Sample for Means) để so sánh giá trị trung bình thứ 1, 2, có: 515 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Bảng Kết phân tích số lượng tiểu cầu trung bình mẫu máu có kháng đơng EDTA Giờ thứ Số lượng tiểu cầu trung 255,7 254,9 257,6 254,5 242,2 bình (10 /L) - P > 0,05: chênh lệch giá trị trung bình số lượng tiểu cầu thứ thứ 1, 2, mẫu máu có kháng đơng EDTA khơng có ý nghĩa (chỉ xảy ngẫu nhiên) Kết thay đổi số lượng tiểu cầu theo thời gian mẫu máu có kháng đơng Citrate Bảng Kết phân tích số lượng tiểu cầu trung bình mẫu máu có kháng đông Citrate Giờ thứ Số lượng tiểu cầu trung 170,8 178,3 152,1 146,5 140,9 bình (10 /L) - | tSta | < t0,05: thời gian không ảnh hưởng đến số lượng tiểu cầu Trắc nghiệm t tương ứng cặp (t-Test: Paired Two Sample for Means) để so sánh giá trị trung bình thứ có: Trắc nghiệm t tương ứng cặp (t-Test: Paired Two Sample for Means) để so sánh giá trị trung bình thứ thứ nhận thấy: - P > 0,05: chênh lệch giá trị trung bình số lượng tiểu cầu thứ thứ mẫu máu có kháng đơng Citrate khơng có ý nghĩa (chỉ xảy ngẫu nhiên) - P < 0,05: chênh lệch giá trị trung bình số lượng tiểu cầu thứ thứ mẫu máu có kháng đơng EDTA có ý nghĩa thống kê - | tSta | < t0,05: thời gian không ảnh hưởng đến số lượng tiểu cầu - | tSta | > t0,05: thời gian ảnh hưởng đến kết phân tích số lượng tiểu cầu Hình Sự ảnh hưởng thời gian lên số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đông Citrate - Trắc nghiệm t tương ứng cặp (t-Test: Paired Two Sample for Means) để so sánh giá trị trung bình thứ 2, 3, có: Hình Sự ảnh hưởng thời gian lên số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA - Xét thêm độ lớn chênh lệch giá trị trung bình (SMD) để xem ảnh hưởng thời gian lên số lượng tiểu cầu lớn hay nhỏ (theo tiêu chí Cohen): * SMD thứ so với thứ 0,19 < 0,2: thời gian có ảnh hưởng nhỏ lên thay đổi số lượng tiểu cầu 516 - P < 0,05: chênh lệch giá trị trung bình số lượng tiểu cầu thứ thứ 2, 3, mẫu máu có kháng đơng Citrate có ý nghĩa thống kê - | tSta | > t0,05: thời gian ảnh hưởng đến kết phân tích số lượng tiểu cầu Xét thêm độ lớn chênh lệch giá trị trung bình (SMD) để xem ảnh hưởng thời gian lên Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học số lượng tiểu cầu lớn hay nhỏ (theo tiêu chí Cohen): - | tSta | > t0,05: chất kháng đơng ảnh hưởng đến kết phân tích số lượng tiểu cầu * SMD thứ 2, so với thứ SMD < 0,49: thời gian có ảnh hưởng nhỏ lên thay đổi số lượng tiểu cầu - Xét thêm độ lớn chênh lệch giá trị trung bình (SMD) để xem ảnh hưởng chất kháng đông nghiên cứu lên số lượng tiểu cầu lớn hay nhỏ (theo tiêu chí Cohen): * SMD thứ so với thứ 0,51 < 0,79: thời gian có ảnh hưởng trung bình lên thay đổi số lượng tiểu cầu So sánh số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA Citrate điều kiện nhiệt độ thời gian Bảng Số lượng tiểu cầu trung bình mẫu máu có kháng đông EDTA Citrate Thời gian Giờ Giờ Giờ Giờ Giờ Số lượng tiểu cầu trung bình (10 /L) EDTA Citrate 255,7 170,8 254,9 178,3 257,6 152,1 254,5 146,5 242,2 140,9 Trắc nghiệm t độc lập (t-Test: Two-Sample Assuming Unequal Variances) để so sánh giá trị trung bình mẫu máu có kháng đơng EDTA mẫu máu có kháng đơng Citrate điều kiện nhiệt độ thời điểm thứ 0, 1, 2, 3, 6: * SMD > 1,0: điều có nghĩa ảnh hưởng chất kháng đông lên thay đổi số lượng tiểu cầu lớn So sánh kết phân tích số lượng tiểu cầu n gay sau lấy mẫu máy Cell-Dyn 1700 với phương pháp đếm tiểu cầu buồng đếm Neubauer Số lượng tiểu cầu trung bình (10 /L) Phân tích tự động với máu có EDTA 255,7 Phân tích tự động với máu có Citrate 170,8 Đếm tiểu cầu buồng đếm 258,1 Neubauer Phương pháp Trắc nghiệm t độc lập (t-Test: Two-Sample Assuming Unequal Variances) để so sánh giá trị trung bình mẫu máu có kháng đơng EDTA (được phân tích máy Cell-Dyn 1700) với mẫu máu mao quản (đếm số lượng tiểu cầu buồng đếm Neubauer): - P > 0,05: số lượng tiểu cầu phương pháp - | tSta | < t0,05: chênh lệch tiểu cầu phương pháp xảy cách ngẫu nhiên Trắc nghiệm t độc lập (t-Test: Two-Sample Assuming Unequal Variances) để so sánh giá trị trung bình mẫu máu có kháng đơng Citrate (được phân tích máy Cell-Dyn 1700) với mẫu máu mao quản (đếm số lượng tiểu cầu buồng đếm Neubauer): - P < 0,05: số lượng tiểu cầu phương pháp khác Hình Sự ảnh hưởng chất kháng đông lên kết phân tích tiểu cầu - | tSta | > t0,05: chênh lệch tiểu cầu phương pháp có ý nghĩa thống kê - P < 0,05: chênh lệch giá trị trung bình số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA mẫu máu có kháng đơng Citrate có ý nghĩa thống kê Số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đông EDTA Citrate so sánh với số lượng tiểu cầu đếm phương pháp đếm tiểu cầu buồng đếm Neubauer, có tương đồng số lượng tiểu cầu mẫu máu Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học 517 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 bảo quản EDTA phương pháp Điều cho thấy số lượng tiểu cầu mẫu máu bảo quản Citrate không phản ánh số lượng tiểu cầu thực bệnh nhân KẾT LUẬN Qua nghiên cứu này, nhận thấy: - Mẫu máu có kháng đơng EDTA: * Từ lúc lấy mẫu đến thứ 3, số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA khơng thay đổi * Đến thứ 6, bắt đầu có chênh lệch số lượng tiểu cầu so với lúc vừa lấy mẫu Nhưng chênh lệch nhỏ - Mẫu máu có kháng đơng Citrate: * Từ lúc lấy mẫu đến thứ 1, số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng Citrate khơng thay đổi * Từ thứ đến thứ bắt đầu có chênh lệch số lượng tiểu so với lúc vừa lấy mẫu Sự chênh lệch tương đối nhỏ thứ 3, đến thứ chênh lệch lên đến mức trung bình - Trong thời điểm, điều kiện nhiệt độ máy phân tích Cell-Dyn 1700 chênh lệch số lượng tiểu cầu mẫu máu có chất kháng đơng EDTA so với mẫu máu có kháng đơng Citrate lớn Điều cho thấy, việc chọn lựa chất kháng đơng cho mẫu máu phân tích tiểu cầu phân tích khác quan trọng EDTA chất kháng 518 đơng thích hợp cho mẫu máu dùng thực phân tích số lượng tiểu cầu - Trong nghiên cứu này, chúng tơi thực với lượng mẫu 111 mẫu thời gian dừng lại thứ kể từ lấy mẫu Do do, cần có cơng trình nghiên cứu với cỡ mẫu lớn hơn, thời gian theo dõi thay đổi tiểu cầu dài với nhiều chất kháng đông Lời cảm ơn: Chúng chân thành cảm ơn Ban Giám Đốc, phòng Kế hoạch tổng hợp, phòng Tổ chức hành chánh quản trị tất anh chị đồng nghiệp khoa Xét nghiệm Bệnh viện Quận - TP.HCM giúp đỡ trình thực đề tài TÀI LIỆU THAM KHẢO De Baca ME, Gulati G, Kocher W, Schwarting R (2006), Effects of storage of blood at room temperature on hematologic parameters measured on Sysmex XE-2100, Lab Med., 37(1): 2835 Gordan HG, Larson NL (1955), Use of sequestrene as an anticoagulant, Am J Clin Pathol., 23:613-18 Gulati GL, Hyland LJ, Kocher W, Schwarting R (2002), Automated CBC and differential result changes, Arch Pathol Lab Med., 126: 336342 International Council for Standardization in Haematology (1993), Recommendations of the international council for standardization in haematology for ethylene-diamine-tetra acetic acid anticoagulation of blood for blood cell counting and sizing, Am J Clin Pathol., 100: 371-372 Perrotta G, Roberts L, Glazier J, Schumacher HR (1998), Use of sodium citrate anticoagulant for routine hematology analysis on the CELL-DYN® 4000: an opportunity to enhance efficiency in the clinical laboratory, Lab Hematol, 4: 156-162 Reardon DM, Warner B, Trowbridge EA (1991), EDTA, the traditional anticoagulant of haematology: with increased automation is it time for a review?, Med Lab Sci., 48: 72-75 Rodak BF (1995), Diagnostic Hematology, Philadelphia, PA: W B Saunders Company Van Assendelft OW, Parvin RM (1992), Specimen collection, handling and storage In: Lewis SM, Verwilghen RL, eds Quality Assurance in haematology London: Bailliere Tindall; 1988:5-32.Van Duppen V, Verwilghen RL K2- or K3-EDTA: the anticoagulant of choice in routine haematology Clin Lab Haematol, [Web of Science] 13: 291-295 Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học ... KẾT QUẢ Đề tài khảo sát thay đổi số lượng tiểu cầu theo thời gian điều kiện bảo quản nhiệt độ chất kháng đông; so sánh chênh lệch số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA Citrate 111 bệnh... với thứ 0,51 < 0,79: thời gian có ảnh hưởng trung bình lên thay đổi số lượng tiểu cầu So sánh số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA Citrate điều kiện nhiệt độ thời gian Bảng Số lượng tiểu. .. có kháng đơng EDTA mẫu máu có kháng đơng Citrate có ý nghĩa thống kê Số lượng tiểu cầu mẫu máu có kháng đơng EDTA Citrate so sánh với số lượng tiểu cầu đếm phương pháp đếm tiểu cầu buồng đếm