Điều hòa sự biểu hiện của cyclin d1, cdk 2 và sự phosphoryl hóa protein retinoblastoma tại vị trí Ser780 và Ser795 của mek erk trong ung thư tế bào gan (HCC)

Nghiên cứu hóa mô miễn dịch cho kết quả 13% không thể phát hiện sự biểu hiện của pRB, phần còn lại cho thấy có hiện tượng tăng phosphoryl hóa pRB trong nhân của tế bào ung thư gan. Các tế bào lọan sản, tế bào lành tính và tế bào mô đệm có mức độ biểu hiện pRB cao trong nhân, nhưng lại có mức độ biểu hiện thấp đối với dạng phosphoryl hóa của pRB. Sự biểu hiện quá mức (over-expression) và sự phosphoryl hóa của ERK1/2 cũng được phát hiện bởi phương pháp Western blot trong 91% và 69% các trường hợp ung thư tế bào gan được khảo sát.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 Nghiên cứu Y học 12 ĐIỀU HÒA SỰ BIỂU HIỆN CỦA CYCLIN D1, CDK-2 VÀ SỰ PHOSPHORYL HÓA PROTEIN RETINOBLASTOMA TẠI VỊ TRÍ Ser780 VÀ Ser795 CỦA MEK-ERK TRONG UNG THƯ TẾ BÀO GAN (HCC) Đỗ Phúc Tiến, Trần Evelyne, Chow Pierce, Tan Puay Hoon, Soo Khee Chee, Văn Tần and Huỳnh Hùng TÓM TẮT Ung thư tế bào gan (HCC) lọai ung thư thường gặp vùng Đông Nam Á Mặc dù bất họat protein Retinoblastoma p105 (pRB) thường kèm với tăng trưởng tế bào, chức ung thư tế bào gan chưa thiết lập Trong nghiên cứu này, tăng phosphoryl hóa pRB vò trí Ser 780 Ser 795 phát phương pháp Western blot 71% 63% trường hợp ung thư tế bào gan khảo sát Nghiên cứu hóa mô miễn dòch cho kết 13% phát biểu pRB, phần lại cho thấy có tượng tăng phosphoryl hóa pRB nhân tế bào ung thư gan Các tế bào lọan sản, tế bào lành tính tế bào mô đệm có mức độ biểu pRB cao nhân, lại có mức độ biểu thấp dạng phosphoryl hóa pRB Sự biểu mức (over-expression) phosphoryl hóa ERK1/2 phát phương pháp Western blot 91% 69% trường hợp ung thư tế bào gan khảo sát Một cách tương tự, biểu mức E2F-1, Cyclin D1, cdc-2, Cdk-2, Cdk-4 va Cyclin A tương ứng 64%, 43%, 28%, 71% 63% trường hợp HCC khảo sát Trên in vitro, điều trò tế bào u gan HepG2 chất ức chế đặc hiệu MEK1/2 –U0126 dẫn đến làm ức chế biểu protein Cyclin D1, cdc -2 Cdk-4, gây tượng giảm phosphoryl hóa pRB vò trí Serine780 795 Sự biểu mức MEK1 họat hóa tế bào HepG2 làm tăng biểu Cyclin D1 phosphoryl hóa pRB vò trí Serine 780 795 Những kết gợi ý rằng, chế MEKERK đóng vai trò quan trọng việc điều hòa biểu Cyclin D1, Cdc2 Cdk-2, ức chế gen kiềm hãm sinh ung Retinoblastoma ung thư tế bào gan SUMMARY REGULATION OF CYCLIN D1, CDK-2 EXPRESSION AND PHOSPHORYLATION RETINOBLASTOMA AT SER780 AND SER795 OF MEK-ERK IN HCC Do Phuc Tien, Tran Evelyne, Chow Pierce, Tan Puay Hoon, Soo Khee Chee, Van Tan and Huynh Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol * Supplement of No * 2004: 89 – 96 Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignancies in South East Asia Although inactivation of retinoblastoma p105 (pRB) is often associated with cellular growth, its function in HCC has not been established In this study we reported that hyperphosphorylation of pRB at Ser780 and Ser795 was detected by Western blot analysis in 71% (33 of 46) and 63% (29 of 46) of HCCs examined respectively Immunohistochemical study revealed that pRB expression was undetectable in 13% (6 of 46) of HCCs examined and hyperphosphorylated pRB was localized in the nuclei of hepatocarcinoma cells Dysplasia or *1Laboratory of Molecular Endocrinology, Division of Cellular and Molecular Research, National Cancer Centre of Singapore, 2Department of General Surgery, 3Department of Pathology, Singapore General Hospital, Singapore 169610 and 4Department of Surgery, BinhDan Hospital, HoChiMinh City, VietNam Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 89 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 benign hepatocytes or stromal cells were strongly positive nuclear staining for pRB but exhibited weak nuclear staining for phosphorylated pRB Over-expression and phosphorylation of ERK1/2 were also detected by Western blot analysis in 91% (42 of 46) and 69% (32 of 46) of HCCs examined, respectively Similarly, overexpression of E2F-1, cyclin D1, Cdk-2, Cdk-4, and cyclin A was found in 64% (30 of 46), 43% (26 of 46), 28% (11 of 46), 71% (33 of 46) and 63% (29 of 46) HCCs studied respectively In vitro treatment of HepG2 with MEK1/2 specific inhibitor U0126 resulted in cell cycle arrest, inhibited expression of cyclin D1, Cdc-2 and Cdk2 and caused hypophosphorylation of pRB at Ser780 and Ser795 Over-expression of activated MEK1 in HepG2 increased expression of cyclin D1 and phosphorylation of pRB at Ser780 and Ser795 The results suggest that MEK-ERK pathway plays an important role in regulation of cyclin D1, Cdc-2 and Cdk-2 expression and inactivation of retinoblastoma tumour suppressor gene in hepatocellular carcinoma sinh ung (tumour suppressor gene) mã hóa cho DẪN NHẬP protein có chức quan trọng chu trình tế Ung thư tế bào gan (HCC) chiếm khoảng 40% bào13 Protein pRB phosphoprotein nhân trường hợp ung thư Đông Nam Á, Nhật Bản tế bào, có 928 aa trọng lượng phân tử Châu Phi Tỷ lệ mắc hàng năm vào khoảng từ 105kDalton, với chức bình thường kiềm hãm 25 đến triệu trường hợp1, Bệnh thường kèm tăng sinh tế bào nhờ làm giảm khả chép với tiếp xúc virus Viêm gan siêu vi B, C DNA ngăn ngừa phân chia tế bào 13-15 Sự gia tăng 1, Aflatoxin B1 Tần xuất biểu nam gấp 2-5 lần biểu protein pRB làm ngưng tăng trưởng so với nữ Việc điều trò HCC cho kết hạn tế bào ung thư in vitro in vivo14-16 Sự chế Phần lớn bệnh nhân bò ung thư tế bào gan nhập tái biểu (re-expression) protein pRB tế bào ung viện giai đọan muộn, với tiên lượng xấu3 Tỷ lệ thư làm ngưng chu trình chép tế bào pha G0sống sau năm vào khỏang 25-39% sau phẫu thuật G117 Tác dụng kiềm hãm tăng trưởng pRB Khả sống kéo dài khó bệnh nhân HCC phần nhờ khả kết hợp với E2F histone ung thư tái phát, di xuất khối u deacetylase làm giảm họat tính gen E2F mới5, Hiện chưa có phương pháp điều trò hỗ chu trình tế bào18, 19 Tăng phosphoryl hóa pRB trợ kéo dài khả sống bệnh nhân phức hợp Cyclin/cdks làm chu trình tế bào cách rõ rệt7 tiếp tục diễn tiến Một vài phức hợp ảnh hưởng đến Mặc dù chế phân tử trình sinh ung phosphoryl hóa pRB in vivo, cyclin HCC chưa rõ, vài dấu hiệu cho thấy HCC có D1/cdk-4, Cyclin E/cdk-2 Cyclin A /cdk-2 Cyclin thể kết trình bất họat gen kiềm D1 /cdk-4 thường phosphoryl hóa vò trí Serine 78020 hãm sinh ung (tumour suppressor gene), họat hoá Serine 79521, 22 Trên in vivo, pRB phosphoryl gen sinh ung yếu tố tăng trưởng Người hóa vò trí Serine 780 không gắn kết với E2F Những ta xác đònh 20 gen bò họat hóa, bất họat đột biến pRB làm khả phosphoryl hóa hay bò đột biến HCC Thay đổi p53, pRB9, thường có tác dụng ức chế tăng trưởng mạnh 2310 25 rối lọan chức p16, p21 p27 Một số lớn gen liên quan đến việc điều hòa chu dẫn đến tăng phosphoryl hóa pRB báo cáo trình tế bào điều hòa họat tính E2F bao 11 HCC Gần khám phá có gồm Cyclin E, P107 Cyclin A, cdc226 tăng biểu IGF-II phần lớn mẫu HCC Sự gia tăng dònh MEK1 họat khảo sát 12 Phần lớn gen đề cập liên quan hóa (activated MEK1) thường gặp dòng tế bào đến việc điều hòa đường dẫn truyền tín hiệu nội ung thư27, 28 Sự họat hóa đònh MEK1 góp phần bào chu trình tế bào đến sống còn29, dòch chuyển30và chuyển dạng Gen Retinoblastoma (pRB) gen kiềm hãm 90 tế bào31, 32 Sự họat hóa ERK điều hòa họat tính Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 số chất, bao gồm yếu tố mã p62 (Elk1), c-myc, ATF2, phức hợp AP-1, c-jun c-fos Trong nghiên cứu này, trình bày protein họat hóa vò trí Serine780, Serine795 Sự tăng biểu protein ERK, E2F-1, Cyclin D1, cdk-2, Cyclin A khảo sát Việc điều trò dòng tế bào u gan Hep G2 với chất ức chế MEK1/2- U0126 làm ức chế họat tính MEK-ERK, dẫn đến giảm họat tính phosphoryl hóa pRB ức chế biểu Cyclin D1và cdk-2 Sự tăng biểu MEK1 họat hóa HepG2 cell làm tăng biểu cyclin D1 làm phosphoryl hóa pRB vò trí Ser 780 795 Điều cho thấy đường họat hóa MEKERK đóng vai trò quan trọng biểu protein Cyclin D1, cdk-2, phosphoryl hóa pRB tế bào ung thư gan VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Hóa Chất U0126 LY294002 mua từ New England Biolabs Những thuốc hòa tan DMSO với nồng độ cuối không vượt 1% Chúng bảo quản điều kiện ánh sáng -20°C Các kháng thể dùng Hóa mô miễn dòch Western blot mua từ công ty Santa Cruz Biotechnology Cell Signalling Technology Bệnh nhân bệnh phẩm Các mẫu bệnh phẩm bao gồm mô bướu mô lành kế cận khối u 46 bệnh nhân điều trò Bệnh Viện Đa Khoa Singapore Bệnh phẩm thu lúc mổ, đông lạnh liquid nitrogen dự trữ 80°C sử dụng Một phần bệnh phẩm tương tự cố đònh formalin 10% đóng khối paraffin Tất trường hợp ung thư tế bào gan kể xác nhận chẩn đóan giải phẫu bệnh Dữ kiện lâm sàng bệnh nhân thu thập từ Bệnh Viện Đa Khoa Singapore Trung tâm Ung Thư Quốc Gia Singapore Hóa mô miễn dòch Những lát cắt mô (dày khoảng Nghiên cứu Y học micromet)trên tiêu (slides) khử paraffine xylene tái hấp thu nước dung dòch Ethanol12 Sau slides đun dung dòch Sodium citrate 10Mm PH 20 phút nhằm khôi phục lại hoạt tính kháng nguyên Slides ngâm dung dòch methanol có chứa hydrogen peroxide 3% với mục đích làm giảm hoạt tính men peroxidase nội sinh Để làm giảm dấu hiệu không đặc hiệu, slides ngâm skim milk 5% 15 phút Slides sau ủ với kháng thể kháng protein pRB phosphoryl hóa vò trí Ser 780 Ser 795 nhiệt độ 4°C Bước dùng phức hợp StreptavidinBiotin, thực theo dẫn sẵn có sản phẩm, thuộc công ty Lab Vision, Fremont, CA Kết sau đánh giá chuyên gia giải phẫu bệnh học Phương pháp Western blot Các mẫu bệnh phẫm, bao gồm mô bướu mô lành kề cận bướu, làm đồng (homogenize) dung dòch ly giải Các bước tuân theo công thức sẵn có12 Nuôi cấy tế bào Tế bào u gan người HepG2 có từ American Type Culture Collection Các tế bào nuôi cấy môi trường có 10% fetal bovine serum (FBS) Chúng điều trò với 10 μM U0126 10 μM LY294002 vòng 24 Các tế bào đối chứng điều trò với dimethylsulfoxide (DMSO) Các tế bào sau thu họach phân tích Western blot Các dòng tế bào có MEK1 họat hóa: Tế bào u gan HepG2 tải nạp (transfect) với 5μg pUSE-MEK1 plasmic pUSE control 28μl Lipofectamine reagent theo bước có sẵn Sau 48 giờ, tế bào nuôi cấy môi trường có 800μ /ml G418 Bốn tuần sau transfect, dòng tế bào khác phân lập phân tích Western blot Phân tích thống kê Trong việc đánh giá kết Western blot, đậm Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 91 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 độ băng protein tính tóan chuẩn hóa với băng protein α-tubulin Sự khác mức độ biểu protein phân tích ANOVA test KẾT QUẢ Những kiện giải phẫu bệnh tóm tắt sau: 33% (15/46)số bệnh nhân khảo sát có kèm xơ gan, số 26% (12/46) chẩn đóan lọan sản tế bào gan 70% bệnh nhân có khối u đa ổ 56% (26/46) số bệnh nhân có hình thành khối u vệ tinh Tỷ lệ sống sót sau năm bệnh nhân vào khỏang 74% (34/46) Trong nghiên cứu này, không khảo sát tỷ lệ sống bình quân tỷ lệ sống sau năm bệnh nhân Những khối u HCC không đồng mặt phân lọai tế bào, cần đánh gía mặt tế bào học tăng phosphoryl hóa protein pRB Tất 46 mẩu bệnh phẫm làm hóa mô miễn dòch với kháng thể kháng protein pRB dạng phosphoryl hóa vò trí Serine 780 795 pRB đóng vai trò quan trọng điều hòa chu trình tế bào13, kiềm hãm phát triển tế bào13-15và tăng trưởng khối u15, 33 Mức độ pRB không tăng rõ rệt mẫu mô bướu với mô lành kế cận Tuy nhiên có tăng phosphoryl hóa mô ung thư, biểu dòch chuyển lên băng protein vò trí 120 Kdalton, so sánh với băng protein mô lành kế cận Đối với dạng phosphoryl hóa vò trí Serine 780 795, mẫu khối u có gia tăng biểu tương ứng 71% (33/46) 63% (29/46) so với mô lành Dạng phosphoryl hóa pRB vò trí serine 807/811 biểu thấp HCC phát mô lành kế cận Yếu tố họat hóa mã E2F-1 đóng vai trò quan trọng việc điều hòa biểu gen trình tăng trưởng tế bào Dạng giảm phosphoryl hóa protein pRB kết hợp với E2F-1, từ ngăn ngừa họat hóa gen cần thiết cho pha G2 chu trình tế bào, làm cho chu trình tế bào ngừng pha G134, 35 Hình cho thấy protein E2F-1 tăng rõ rệt 64% (30/46) trường hợp HCC khảo sát Và có tăng tỷ lệ thuận tăng phosphoryl hóa pRB gia tăng biểu E2F-1 Kết chứng tỏ có tượng tăng phosphoryl hóa pRB vò trí Serine 780 795 HCC mô lành kế cận 92 Hình cho thấy có 90-100% tế bào ung thư tăng biểu protein pRB nhân tế bào Trong mô lành kế cận mô gan xơ không biểu biểu mờ nhạt dấu hiệu protein pRB Các tế bào biểu mô ống mật tế bào mô đệm không biểu Khi dùng tiêu kể nhuộm với kháng thể kháng protein pRB dạng phosphoryl lẫn không phosphoryl hóa, có biểu đồng nhân tế bào lành tính mô gan xơ tất 46 mẫu bệnh phẩm Slides A&B: nhuộm với kháng thể kháng pRB phosphoryl hóa vò trí Ser 780 Slides C&D: nhuộm với kháng thể kháng pRB phosphoryl hóa vò trí Ser 795 Hình cho thấy có tượng gia tăng biểu Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 cuûa protein Cyclin D1, Cyclin A, Cdk-2 vaø Cdk-4 43% (26/46), 63% (29/46), 28% (11/46) vaø 71% (33/46) khối u so với mô lành kế cận Hình Hình cho thấy có biểu protein ERK tăng 91% trường hợp HCC khảo sát Về mặt đònh lượng, mức độ biểu ERK tăng lần mô ung thư so với mô bình thường Khi thực phương pháp Western blot với kháng thể kháng protein ERK dạng họat hóa, 69% (32/46) trường hợp HCC có tăng biểu ERK Nghiên cứu Y học Để chứng tỏ protein MEK-ERK cần thiết cho tạo thành Cyclin D1, E2F-1, Cdk-2, phosphoryl hóa pRB chu trình tế bào;chúng điều trò dòng tế bào u gan người Hep G2 với chất ức chế MEK1/2-U0126 Tếbào HepG2 điều trò với 10 microgram U0126 10 microgram chất ức chế PI-3 kinase LY294002 24giờ Tế bào đối chứng điều trò với DMSO Bằng phương pháp Western blot cho thấy chất U0126 có tác dụng làm giảm rõ rệt biểu Cyclin D1 cdk-2 không làm giảm E2F-1 cyclin E, đồng thời làm giảm phosphoryl hóa pRB vò trí Ser 785 790 so sánh với nhóm chứng Những kết qủa cho thấy họat hóa đường dẫn truyền MEK-ERK cần thiết cho phosphoryl hóa pRB vò trí Ser 780, 795 biểu Cyclin D1, Cdk-2 Hình BÀN LUẬN Sự rối lọan chức protein liên quan đến chu trình tế bào yếu tố Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 93 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 làm phát triển HCC36-38 Sản phẩm gen pRB đóng vai trò điều hòa âm tính tăng sinh, biệt hóa tế bào sinh ung thư14-16 Cdk-4 mẫu mô HCC so với mô lành kế cận Những quan sát phù hợp với kết báo cáo trước đây38 Sự phosphoryl hóa pRB vò trí Ser 780 795 thấy 71% 63% trường hợp HCC giai đọan sớm giai đọan muộn ung thư gan Hình Sự ức chế tăng trưởng tế bào protein pRB phụ thuộc vào kết hợp với yếu tố E2F Dạng không phosphoryl pRB cần thiết cho tương tác với E2F Trong G0 giai đọan sớm G1 chu trình tế bào, dạng không phosphoryl pRB kiềm hãm họat tính gây mã yếu tố E2Fs Khi chu trình tế bào tiếp tục tiến triển, pRB trở nên tăng phosphoryl hóa, làm tách rời phức hợp pRBE2Fs; cho phép biểu gen cần thiết cho tiến triển chu trình tế bào Những nghiên cứu trước đây11 cho thấy pRB dạng gia tăng phosphoryl hóa thường gặp trường hợp khối u HCC có kích thước lớn cm Trong nghiên cứu này, cho thấy có Hình 5sự tăng đáng kể protein Cyclin D1, E2F-1, Cyclin A, Cdk- 94 Sự tích lũy Cyclin D1, Cdk-2, Cdk-4, Cyclin E cho phép hình thành phức hợp Cyclin E/cdk-2 Cyclin D1/cdk-4 Sự phosphoryl hóa pRB vò trí Ser Cyclin D1/cdk-4 làm ức chế tương tác với yếu tố mã, cho phép biểu gen cần thiết cho pha S chu trình tế bào Nghiên cứu cho thấy biểu pRB 13% trường hợp HCC khảo sát, tương tự với công trình nghiên cứu trước cho kết từ 20-28%11, 39 Cơ chế phân tử khả biểu protein pRB chưa rõ, đột biến vò trí pRB Mặc dù hai biểu biểu mức pRB quan sát với tần xuất cao HCC biệt hóa so với HCC biệt hóa vừa biệt hóa cao, nghiên cứu không Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 có trường hợp HCC biểu mức protein pRB Sự khác chưa rõ Sự biểu mức phosphoryl hóa ERK phát 91% 69% trường hợp Phân tích in vivo pRB cho kết tương tự Việc điều trò tế bào ung thư gan chất ức chế MEK1/2 dẫn đến ức chế phosphoryl hóa pRB làm giảm biểu protein Cdk-2 Cyclin D1 Hơn biểu mức MEK1 hoạt hóa làm tăng biểu Cyclin D1, Cdk-2 Santoni-Rugiu cộng sự36 báo cáo tượng tăng biểu Cyclin D1 tăng phosphoryl hóa pRB ung thư tế bào gan gây chuột transgenic c-myc/TGF-α Sự biểu mức Cyclin D1 HCC báo cáo40-42 Cyclin D1 làm tăng diễn tiến chu trình tế bào43 kích họat trình sinh ung ung thư tế bào gan37 Và mức độ tăng protein Cyclin D1 kèm với thể tiến triển nhanh HCC38, 42, 44, 45 Trong nghiên cứu chúng tôi, biểu Cyclin D1 điều hòa đường dẫn truyền MEK-ERK, đột biến làm họat hóa MEK-ERK làm tăng biểu protein Cyclin D1 HCC Điều phù hợp với nghiên cứu trước chứng tỏ họat tính gây mã gen Cyclin D1 xảy nhờ đường dẫn truyền tín hiệu Ras qua yếu tố ERK1/246-49 Mặc dù chế bệnh sinh HCC chưa biết, nghiên cứu đề nghò vai trò ERK điều hòa họat tính pRB/E2F HCC Giả thuyết phù hợp với kết tải nạp (transfect) dòng tế bào HepG2 với MEK1 dẫn đến tăng phosphoryl hóa pRB làm tăng biểu Cyclin D1 Hơn nữa, điều trò với chất ức chế MEK1/2 –U0126 làm giảm phosphoryl hóa pRB vò trí Ser 780 Serine 795, đồng thời làm giảm biểu Cyclin D1 Cdk-2 Do nghó họat hóa yếu tố MEK-ERK, không họat hóa yếu tố PKC, Raf, Abl, MEKK, ERK, JNK MKK3, MKK-4/SEK, MKK-6, Cdk-2 hay Cdk-450, cần thiết cho biểu Cyclin D1 Cdk-2 làm tăng phosphoryl hóa pRB vò trí Serine780 795 Tuy nhiên cần phải Nghiên cứu Y học xác đònh vai trò pRB có phải yếu tố then chốt rong chế sinh bệnh ung thư tế bào gan hay không Sự diện pRB tăng họat tính phosphoryl trường hợp HCC biệt hóa cao, đề nghò có bất họat đường dẫn truyền làm tăng trình sinh ung Sự biểu cao pRB dạng tăng phosphoryl hóa tế bào ung thư chứng tỏ tế bào trải qua giai đọan G1 S chu trình tế bào51-54 Trong biểu cao pRB dạng phosphoryl hóa tế bào mô lành kế cận khối u, chứng tỏ tế bào khỏi chu trình tế bào vào giai đọan yên lặng mức độ biệt hóa cuối Sự biểu dạng nốt pRB quan sát khối u gợi ý vai trò việc dẫn truyền tín hiệu nội tiết cận tiết Sự bất họat lan rộng pRB trường hợp HCC biệt hóa cao tăng tiết yếu tố IGF-II12, TGF-α55, HGF c-met56, ErbB-257 giảm tiết IGFBP-3 12 Tóm lại nghiên cứu cho thấy gia tăng biểu yếu tố E2F-1, Cyclin D1, Cyclin A, Cdk-2 Cdk-4 dạng phosphoryl pRB khối u ung thư tế bào gan Việc điều trò tế bào ung thư gan với chất ức chế MEK1/2 làm ức chế biểu Cyclin D1 Cdk-2 làm giảm phosphoryl hóa pRB Những kết cho thấy có mối liên hệ họat hóa MEK-ERK, tăng biểu Cyclin D1 tăng phosphoryl hóa pRB ung thư tế bào gan Do đó, việc ức chế đường dẫn truyền tín hiệu Ras/Raf-ERK cách để kiềm hãm phát triển ung thư tế bào gan CÁC TỪ VIẾT TẮT: HCC: Hepatocellular carcinoma, pRB: Retinoblastoma p105, ERK: Extracellular signal-regulated kinase, MAPK: Mitogen-activated protein kinase, MEK:MAPK/Erk kinase, TGF-α:Transforming growth factor-α, IGF-II: Insulin-like growth Factor II, IGFBP-3: Insulin-like growth factor binding protein TÀI LIỆU THAM KHAÛO Schafer, D F et al Lancet, 353: 1253-1257, 1999 Ince, N et al N Engl J Med, 340: 798-799, 1999 Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 95 Nghiên cứu Y học 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 96 Y Hoïc TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Soá * 2004 Okuda, K et al Cancer, 56: 918-928, 1985 Colombo, M et al J Hepatol., 15: 225-236, 1992 Huguet, C S F et al Surgery of the Liver and Billary Tract., pp 1365-1369 London: Churchill Livingstone, 2000 Lai, E et al Surgery of the Liver and the biliary tract, pp 1349-1363 London: Churchill Livingstone, 1994 Chan, E S et al Cochrane Database Syst Rev., CD001199, 2000 Zeng, J Z et al Oncogene, 21: 4932-4943, 2002 Murakami, Y et al Cancer Res., 51: 5520-5525, 1991 Lee, A V et al Biomed Pharmacother., 49: 415-421, 1995 Hui, A M et al Int J Cancer, 84: 604-608, 1999 Huynh, H et al Cell Growth Differ., 13: 115-122, 2002 Herwig, S et al 246: 581-601, 1997 Xu, H J et al Proc Natl Acad Sci U S A, 91: 98379841, 1994 Yen, A et al Exp Cell Res, 241: 324-331, 1998 Xu, H J et al Cancer Res, 56: 2245-2249, 1996 Xu, H J et al Oncogene, 15: 2589-2596, 1997 Taya, Y Trends Biochem Sci., 22: 14-17, 1997 Keck, P J et al Science, 246: 1309-1312, 1989 Kitagawa, M et al EMBO J, 15: 7060-7069, 1996 Grafstrom, R H et al Carcinogenesis, 20: 193-198, 1999 Pan, W et al Carcinogenesis, 19: 765-769, 1998 Xiao, Z X et al Nature, 375: 694-698, 1995 Lukas, J et al Genes Dev., 11: 1479-1492, 1997 Knudsen, E S et al Mol Cell Biol., 17: 5771-5783, 1997 Adams, P D et al Biophys Acta, 1471: M123-M133, 2001 Hoshino, R et al Oncogene, 18: 813-822, 1999 Amundadottir, L T et al Oncogene, 16: 737-746, 1998 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 Ballif, B A et al Cell Growth Differ., 12: 397-408, 2001 Krueger, J S et al Oncogene, 20: 4209-4218, 2001 Mansour, S J et al Science, 265: 966-970, 1994 Montesano, R et al Cell Growth Differ., 10: 317-332, 1999 Vaux, D L et al Nature, 335: 440-442, 1988 Dyson, N et al Genes Dev., 12: 2245-2262, 1998 Nevins, J R et al Cell Growth Differ., 9: 585-593, 1998 Santoni-Rugiu, E et al Cancer Res., 58: 123-134, 1998 Deane, N G et al Cancer Res., 61: 5389-5395, 2001 Masaki, T et al Hepatology, 37: 534-543, 2003 Azechi, H et al Oncol., 60: 346-354, 2001 Peng, S Y et al J Hepatol., 29: 281-289, 1998 Roncalli, M et al Hepatology, 36: 427-432, 2002 Ito, Y et al Hepatology, 30: 90-99, 1999 Albrecht, J H et al Cell Growth Differ., 10: 397-404, 1999 Nishida, N et al Cancer Res, 54: 3107-3110, 1994 Nishida, N et al Histol Histopathol., 12: 1019-1025, 1997 Tetsu, O et al Nature, 398: 422-426, 1999 Morin, P J et al Bioessays, 21: 1021-1030, 1999 Ito, Y et al Hepatology, 27: 951-958, 1998 Lavoie, J N et al J Biol Chem., 271: 20608-20616, 1996 Favata, M F et al J Biol Chem., 273: 18623-18632, 1998 Chen, P L et al Cell, 58: 1193-1198, 1989 DeCaprio, J A et al Cell, 58: 1085-1095, 1989 Buchkovich, K et al Cell, 58: 1097-1105, 1989 Mihara, K et al Science, 246: 1300-1303, 1989 Chung, Y H et al Cancer, 89: 977-982, 2000 Ueki, T et al Hepatology, 25: 862-866, 1997 Endo, K et al Liver, 20: 209-215, 2000 Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 ... tỏ protein MEK- ERK cần thiết cho tạo thành Cyclin D1, E2F-1, Cdk- 2, phosphoryl hóa pRB chu trình tế bào; chúng điều trò dòng tế bào u gan người Hep G2 với chất ức chế MEK1 /2- U0 126 T bào HepG2 điều. .. tự Việc điều trò tế bào ung thư gan chất ức chế MEK1 /2 dẫn đến ức chế phosphoryl hóa pRB làm giảm biểu protein Cdk- 2 Cyclin D1 Hơn biểu mức MEK1 hoạt hóa làm tăng biểu Cyclin D1, Cdk- 2 Santoni-Rugiu... ErbB -25 7 giảm tiết IGFBP-3 12 Tóm lại nghiên cứu cho thấy gia tăng biểu yếu tố E2F-1, Cyclin D1, Cyclin A, Cdk- 2 Cdk- 4 dạng phosphoryl pRB khối u ung thư tế bào gan Việc điều trò tế bào ung thư gan