Nội dung của bài viết xác định thứ týp HIV‐1 đang lưu hành tại thành phố Hồ Chí Minh trong những năm 2010‐2011. Kết quả nghiên cứu đã góp phần khẳng định thể ‐ tái ‐ tổ ‐ hợp CRF01_AE của siêu vi HIV‐1 lưu hành chủ yếu ở thành phố Hồ Chí Minh. Bên cạnh đó vẫn có sự lưu hành của thứ týp B và đã bắt đầu có sự xuất hiện của thể ‐ tái ‐ tổ ‐ hợp CRF01_AE_B.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 KHẢO SÁT CÁC THỨ‐TÝP (SUBTYPE) TRÊN BỆNH NHÂN NHIỄM HIV TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Huỳnh Minh Tuấn*,**, Nguyễn Kim Huyền*, Phạm Hùng Vân**, Nguyễn Thanh Bảo** TĨM TẮT Mở đầu: Cho đến nay, khả năng đột biến của siêu vi HIV‐1 tạo nên sự đa dạng sinh học nhằm tránh thốt hệ miễn dịch của ký chủ và đề kháng lại các thuốc kháng siêu vi vẫn là một thách thức trong việc điều trị căn bệnh thế kỷ này. Nhiều nghiên cứu cho thấy có sự phân bố khác nhau theo địa lý của khoảng 11 thứ týp và khoảng 48 thể‐tái‐tổ‐hợp(CRF) của HIV‐1 khắp thế giới, và có sự khác biệt đáng kể về khả năng lây truyền cũng như diễn tiến bệnh. Tại Việt Nam vẫn còn ít số liệu cơng bố trong lĩnh vực này. Mục tiêu: Xác định thứ týp HIV‐1 đang lưu hành tại thành phố Hồ Chí Minh trong những năm 2010‐ 2011. Phương pháp: Nghiên cứu được thiết kế theo phương pháp mơ tả, tiền cứu, thực hiện tại Bệnh Viện Bệnh Nhiệt Đới TP. Hồ Chí Minh từ 1/2010 đến 12/2011. Cỡ mẫu: 200. Tiêu chuẩn chọn mẫu: người bệnh được chẩn đốn xác định nhiễm HIV‐1 theo tiêu chuẩn chẩn đoán của Bộ Y Tế 2009 (3), chưa từng được điều trị thuốc kháng siêu vi. Tiến hành ly trích RNA từ huyết tương, tổng hợp cDNA, khuếch đại và giải trình tự nucleotid vùng gen envelop. Sau đó, dùng phần mềm Mega 5.05 phân tích trình tự và xây dựng cây quan hệ tiến hóa. Kết quả: Trong 200 mẫu, có 185 mẫu (chiếm 92,5%) đã thành cơng trong việc khuếch đại, giải trình tự. Kết quả cụ thể cho thấy: 175 mẫu (chiếm 94,59%) thuộc thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE; 5 mẫu (chiếm 2,7%) thuộc thứ týp B; và 3 mẫu (chiếm 1,6%) thuộc thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE_B. Kết luận: Nghiên cứu đã góp phần khẳng định thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE của siêu vi HIV‐1 lưu hành chủ yếu ở thành phố Hồ Chí Minh. Bên cạnh đó vẫn có sự lưu hành của thứ týp B và đã bắt đầu có sự xuất hiện của thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE_B. Từ khóa: HIV‐1, thứ týp, CRF01_AE ABSTRACT HIV‐1 SUBTYPE DIVERSITY IN NẠVE PATIENT IN HO CHI MINH CITY Huynh Minh Tuan, Nguyen Kim Huyen, Pham Hung Van, Nguyen Thanh Bao * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2014: 378 ‐ 383 Background: To date, the diversity of HIV‐1 mutations for avoiding host immune system and resisting against antiviral drugs remains the giant challenge to human being for successful treatment in this century. Many studies show different geographic distributions of about 11 subtypes and 48 circulating recombinant forms (CRFs) of HIV‐1, and big differences of transmission ability as well as disease progression. There is not much data of this issue in Vietnam. Objective: Determine the subtype of HIV‐1 inHo Chi Minh City during 2010‐2011. Methods: This study was designed descriptively and prospectively, performed at HCMC Hospital for Tropical Diseases from 1/2010 to 12/2011. Sample size: 200. Criteria for screening: naïve patients were diagnosed with HIV infection following Vietnam Ministry of Health 2009 Guidelines for diagnosing and treatment HIV/AIDS(3). Total whole blood samples were extracted RNA from plasma, synthesized cDNA, amplified and *Khoa Kiểm soát nhiễm khuẩn Bệnh viện Đại học Y Dược Tp. HCM ** Bộ mơn Vi sinh – Khoa Y – Đại học Y Dược Tp. HCM Tác giả liên lạc: ThS Huỳnh Minh Tuấn ĐT: 0909349918 Email: huynhtuan@yds.edu.vn. 378 Chun Đề Nội Khoa Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Nghiên cứu Y học sequenced envelop gene. Then, we used software Mega 5.05 to analyze sequences and build phylogenetic tree. Results: Among 200 collected samples, the results show that 185 (92.5%) samples were amplified and sequenced sucessfully. There are 175 individuals (94.59%) belong to CRF01_AE; 5 individuals (2.7%) belong to subtype B; and 3 individuals (1.6%) belong to CRF01_AE_B. Conclusion: Our study shows the major subtype in HCMC is CRF01_AE. Moreover, there is also subtype B and CRF01_AE_B. Keywords: HIV‐1, subtype, CRF01_AE ĐẶT VẤN ĐỀ Đã hơn 30 năm kể từ ngày hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải (AIDS = Acquired Immunodeficiency Syndrome) được mô tả trên y văn, và cũng gần bằng ngần ấy thời gian tác nhân gây bệnh được xác định là siêu vi HIV (Human Immunodeficiency Virus), con người vẫn chưa có được một loại thuốc nào có thể điều trị tận gốc căn bệnh thế kỷ này. Lý do lớn nhất có lẽ là do siêu vi HIV sở hữu nhiều cơ chế bảo vệ khả năng tấn cơng vào và tồn tại được bên trong tế bào ký chủ, và khả năng tránh thoát hệ miễn dịch cũng như là các loại thuốc kháng siêu vi. Cơ chế được nhắc đến nhiều nhất và cũng được ghi nhận là thách thức lớn nhất cho con người trong việc chế tạo thuốc điều trị là khả năng đột biến di truyền của siêu vi, tạo nên một quần thể đa dạng bên trong một người bệnh nhiễm HIV‐1, và do vậy có thể đáp ứng được, tồn tại được trước sự tấn cơng của hệ miễn dịch ký chủ và các thuốc kháng siêu vi. Siêu vi HIV‐1 gây nhiễm bệnh ở người được phân thành 3 nhóm: M (Major), O (Outlier), và N (nonmajor, nonoutlier). Trong nhóm M, siêu vi được phân chia thành các thứ týp (subtype) được định danh bằng các chữ cái; và dưới‐thứ‐ týp (sub‐subtype) được định danh bằng các số. Cho đến hiện nay đã xác định được A1, A2, A3, A4, B, C, D, F1, F2, G, H, J, K. Khác biệt di truyền giữa các cá thể siêu vi cùng một thứ týp khoảng 15‐20%, khác thứ týp có thể lên đến 25‐30%(7). Ngồi ra, hiện tượng tái tổ hợp giữa các cá thể siêu vi khác thứ týp trong cùng một cơ thể người bệnh tạo ra một biến thể siêu vi mới cũng có khả năng lây truyền từ người sang người và gây bệnh, gọi là thể‐tái‐tổ‐hợp (CRF = Circulating Nhiễm Recombinant Form), ví du của chúng tôi một mặt khẳng định thêm vào kiến thức về dịch tễ học phân tử của HIV‐1 tại Việt Nam là thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE chủ yếu lưu hành ở nước ta; một mặt cho thấy đã bắt đầu xuất hiện ngày càng nhiều hơn các thứ týp khác và cả các thể‐tái‐tổ‐hợp CRF khác (khi so sánh với các tác giả khác hồn tồn chỉ phát hiện thể‐ tái‐tổ‐hợp CRF01_AE)(4,12,16,17,18). Ví dụ nghiên cứu 381 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Nghiên cứu Y học _15 HDRR_1588 HDDR_1173 H DR 1775 H R 16 HDDR 16623 H DR _1 72 H DR _11670 H R _ HDDRR_11598 H D R_ 15 80 _ H HDDRR_ _17 H D R H D H 0.2 Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cũng phù hợp với các kiến thức từ y văn thế giới cho thấy thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE lưu hành chủ yếu ở vùng Đơng Nam Á(6,7,14). Ngồi ra, chúng tơi cũng đã xác định có ít nhất 3 mẫu thuộc thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE_B, theo quy ước của thế giới thì kết luận đây là thể CRF chứ khơng phải là URF (Unique Recombinant Form). Cây quan hệ tiến hóa giữa các thứ týp HIV‐1 dựa trên trình tự gen env: 0.4 0.6 0.8 382 20 E _1 00 27 1A E R _ D R _0 031 F 01 A R H D R _ 09 C F H D R _ H D R _1 44 3096 CR H D R _ M 30 H D R HC M H D N C H 7V NH118 7V _ 55 DR _0 03 H DR _0 H DR _00 H DR _09 H DR 100 H DR_ 116 H DR_ 01 H DR_1 87 H DR_0 H R _11 H D R _0 4 HD R_056 HD R_103 HD _146 HDR 230 HDR_ 41 HDR_1 HDR_080 HDR_107 HDR_148 HDR_1 HDR_ 84 HDR 23 12 HDR HDR_0063 98 HD H D R _038 H R _04 HDDRR_0479 _0 H H DR_ 57 H DR_ 058 HDDR_0016 H R H DR _01 H DR _0 HDDR 0964 H H D R _ 00 H D R _ 02 HDDRR_00732 H H D R _0 75 H D R _ JQ DRR_ _0 076 40 _0 07 62 31 82 02 _B _B _B B 69 7.1 _ B 07 12 1_B B E_ 1A 86 81 65484 .1_ F0 JN Y7 58 61 6781 CR A Y 49 A 7_ FJ U7R 0092232 E D R 85 H D H 09 H T 05DR 1995 H DR _1 H DR H H H D 8 V N EU H D R VN B ND G4 H471 DRR_0_12 17 CR D 86 _1 39 CR F R_ 1_ 32 H F 01 08 B HDDR0_1 AAE H R E H DR _0642 HDDR 00659 H R_ HDDR_ 2365 HD R_01583 HD R_0 HD R_0853 HDRR_0721 HDR _041 _0 HDR _24486 HDR HDR 12238 HDR_0 HDR_0493 HDR_0662 HDR_043 HDR_048 HDR_013 HDR_0199 HDR_1034 HDR_2 HDR 13 42 HDR _1037 R D H R _123 HD R_0081 H D R _18 HD R_0811 HD R_0 22 HD R_1121 HDDR_ 052 H DR_ H H H D H D R HDDRR_ _16 H _ H D R_ HDDRR_1 16653 H R _ H DR _11901 H DR _1 56 HDDR 1757 H R _ 17 H DR_ 17 HDDR_11544 H D R _ 29 HD R_1 28 HDRR_13711 H D _13 HDRR_1140 _067 HDR HDR 0104 HDR_0 95 14 HXB2_ env HDR_00 HDR_1069 HDR_050 HDR_136 HDR_125 HDR_1976 HDR_1994 HDR_1187 HDR 117 HDR _1929 HDR 19 HDRR 0908 D H R _10 HD R_1070 H D R _0 1 HD R_1045 HDDR_ 051 H DR_ 1026 H DR 00 H DR _2202 H DR _2 00 H DR _2 861 H DR _123 E H DRR_ A 60 H D 01 61 H R F R _ _0 C D H DRR_ H D X0 H G 05 0.0 Phòng, Đà Nẵng, Khánh Hòa, Cần Thơ, cơng bố 100% các mẫu nghiên cứu thuộc chủng CRF01_AE(16). HDR_246 HDR_247 HDR_2 HDR_2444 HDR 431 HDR 185 HDR HDR 249 32 HDR _ 23 07 CN.HN50 H -1 74_ H 7T CR R_6 07 FJD CRF01F01_AE H AE HDDR_30 CRF M R 01 A E H ER _11 HDDR_LBD H T H D R_ 45 RC2 H D R _ 03 CR HDDRR_11474 F0 H AE HDDRR 114338 H HDDRR_ _13 34 H R _ DR _ 40 _1 1 19 năm 2004 của tác giả Kayoko Kato và các cộng sự thực hiện trên những người nghiện chích ma túy ở miền Bắc Việt Nam cho kết quả rằng chủng HIV thứ týp E (là danh pháp cũ của thể‐ tái‐tổ‐hợp CRF01_AE) là nổi trội ở khu vực này. Tạp chí AIDS Research and Human Retroviruses vào năm 2012 công bố một nghiên cứu của tác giả Rozina Caridha và cộng sự cho thấy 100% các mẫu thu thập được trên đối tượng phụ nữ mang thai nhiễm HIV từ 2005‐2007 ở Hà Nội, Hải Phòng đều thuộc thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE. Trong năm 2010, Tạ Thị Thu Hồng và cộng sự ở Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương đã khảo sát đột biến kháng thuốc trên đối tượng nhiễm HIV chưa điều trị tại các tỉnh/thành Hà Nội, Hải Chuyên Đề Nội Khoa Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 KẾT LUẬN Nghiên cứu của chúng tơi góp phần khẳng định thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE của siêu vi HIV‐1 lưu hành chủ yếu ở các tỉnh thành phía nam của Việt Nam gồm cả TP. Hồ Chí Minh. Tuy nhiên bên cạnh đó vẫn có sự lưu hành của thứ týp B và đã bắt đầu có sự xuất hiện của thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE_B. TÀI LIỆU THAM KHẢO Baeten JM, Chohan B, Lavreys L, et al (2007). HIV‐1 subtype D infection is associated with faster disease progression than subtype A in spite of similar plasma HIV‐1 loads. J Infect Dis, 195:1177‐1180. Blackard JT, Cohen DE, Mayer KH (2002). Human immunodeficiency virus superinfection and recombination: current state of knowledge and potential clinical consequences. Clin Infect Dis, 34:1108‐1114. Bộ Y tế (2009). Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị bệnh nhiễm HIV/AIDS (Ban hành kèm theo Quyết định số 3003/QĐ‐BYT ngày 19/8/2009 của Bộ trưởng Bộ Y tế), 8‐9. Nhà xuất bản Y học, Hà Nội. Caridha R, Ha TT, Gaseitsiwe S, Hung PV, Anh NM, Bao NH, Khang DD, Hien NT, Cam PD, Chiodi F, Ehrnst A (2012). Short communication: Phylogenetic Characterization of HIV Type 1 CRF01_AE V3 Envelope Sequences in Pregnent Women in Northern Vietnam. Journal of AIDS Research and Human Retroviruses, 28:852‐856. Cilliers T, Nhlapo J, Coetzer M, et al (2003). The CCR5 and CXCR4 coreceptors are both used by human immunodeficiency virus type 1 primary isolates from subtype C. J Virol, 77:4449‐4456. Costello C, Nelson KE, Suriyanon V, et al (2005). HIV‐1 subtype E progression among northern Thai couples: traditional and non‐traditional predictors of survival. Int J Epidemiol, 34:577‐584. Hemelaar J, Gouws E, Ghys PD, Osmanov S (2006). Global and regional distribution of HIV‐1 genetic subtypes and recombinants in 2004. AIDS, 20:W13‐W23. Huang W, Eshleman SH, Toma J, et al (2007). Coreceptor tropism in human immunodeficiency virus type 1 subtype D: Nhiễm 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Nghiên cứu Y học high prevalence of CXCR4 tropism and heterogeneous composition of viral populations. J Virol, 81:7885‐7893. Hudgens MG, Longini IM Jr, Vanichseni S, et al (2002). Subtype‐specific transmission probabilities for human immunodeficiency virus type 1 among injecting drug users in Bangkok, Thailand. Am J Epidemiol, 155:159‐168. John‐Stewart GC, Nduati RW, Rousseau CM, et al (2005). Subtype C is associated with increased vaginal shedding of HIV‐1. J Infect Dis, 192:492‐496. Kanki PJ, Hamel DJ, Sankale JL, et al (1999). Human immunodeficiency virus type 1 subtypes differ in disease progression. J Infect Dis, 179:68‐73. Kato K, Shiino T, Kusagawa S, Sato H, Nohtomi K, Shibamura K, Nguyen TH, Pham KC, Truong XL, Mai HA, Hoang TL, et al (2004). Genetic Similarity of HIV Type 1 Subtype E in a Recent Outbreak among Infecting Drug Users in Northern Vietnam to Strains in Guangxi Province of Southern China. Journal of AIDS Research and Human Retroviruses, 15:1157‐1168. Kiwanuka N, Laeyendecker O, Robb M, et al (2008). Effect of human immunodeficiency virus type 1 (HIV‐1) subtype on disease progression in persons from Rakai, Uganda, wtih incident HIV‐1 infection. J Infect Dis, 197:707‐713. McCutchan FE, Hegerich PA, Brennan TP, et al (1992). Genetic variants of HIV‐1 in Thailand. AIDS Res Hum Retroviruses, 8:1887‐1895. Renjifo B, Gilbert P, Chaplin B, et al (2004). Preferential in‐ utero transmission of HIV‐1 subtype C as compared to HIV‐1 subtype A or D. AIDS, 18:1629‐1636. Tạ Thị Thu Hồng và cộng sự (2010). Khảo sát đột biến kháng thuốc trên đối tượng nhiễm HIV chưa điều trị tại Việt Nam.Tạp chí Y học dự phòng, 20: 65‐69. Trần Chí Thành, Trương Xn Liên(2005). Xác định thứ týp HIV‐1 ở Thành phố Hồ Chí Minh. Tạp chí Y học dự phòng, 15:75‐80. Trương Xn Liên và cộng sự (2010). HIV kháng thuốc trên bệnh nhân nhiễm HIV tại Tp.HCM. Báo cáo tại Hội nghị quốc gia phòng chống HIV/AIDS lần thứ IV 2010. Ngày nhận bài báo: 07/11/2013 Ngày phản biện nhận xét bài báo: 28/11/2013 Ngày bài báo được đăng: 05/01/2014 383 .. .HIV chưa điều trị tại Việt Nam.Tạp chí Y học dự phòng, 20: 6 5‐6 9. Trần Chí Thành, Trương Xn Liên(2005). Xác định thứ týp HIV 1 ở Thành phố Hồ Chí Minh. Tạp chí Y học dự phòng, 15:7 5‐8 0. ...đầu xuất hiện ngày càng nhiều hơn các thứ týp khác và cả các thể‐tái‐tổ‐hợp CRF khác (khi so sánh với các tác giả khác hồn tồn chỉ phát hiện th ‐ tái‐tổ‐hợp CRF01_AE)(4,12,16,17,18). Ví dụ nghiên cứu ...khẳng định thể‐tái‐tổ‐hợp CRF01_AE của siêu vi HIV 1 lưu hành chủ yếu ở các tỉnh thành phía nam của Việt Nam gồm cả TP. Hồ Chí Minh. Tuy nhiên bên cạnh đó vẫn có sự lưu hành của thứ týp B và