Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nang bổ khí hoạt huyết

Nghiên cứu với mục tiêu nhằm: Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nang bổ khí hoạt huyết làm cơ sở cho các nghiên cứu thực nghiệm lâm sàng tiếp theo... Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM VIÊN NANG BỔ KHÍ HOẠT HUYẾT Lâm Bích Thảo*, Dương Thị Mộng Ngọc*, Nguyễn Phương Dung** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Dựa vào thuốc cổ truyền thành tựu nghiên cứu khoa học gần thảo dược, chế phẩm viên nang Bổ Khí Hoạt Huyết” nhà nghiên cứu Khoa Y học Cổ truyền Đaị học Y Dược TP HCM điều chế Chế phẩm dùng để nghiên cứu tác dụng ổn định lipid máu bệnh nhân rối loạn chuyển hóa lipid Mục tiêu: Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nang Bổ khí hoạt huyết làm sở cho nghiên cứu thực nghiệm lâm sàng Phương pháp: Định tính hợp chất saponin, alkaloid, flavonoid paeoniflorin phản ứng hố học sắc kí lớp mỏng Định lượng paeoniflorin chế phẩm phương pháp đo quang phổ tử ngoại khả kiến Kết quả: Đã xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nang Bổ Khí Hoạt Huyết Định tính phản ứng hố học sắc ký lớp mỏng cho thấy chế phẩm có diện hợp chất saponin, flavonoid, alkaloid paeoniflorin Lượng paeoniflorin viên nang 6,3 mg Kết luận: Viên nang Bổ Khí Hoạt Huyết tiêu chuẩn hóa giúp ích cho việc ổn định quy trình sản xuất ổn định chất lượng sản phẩm Phương pháp phân tích đáng tin cậy Kết nghiên cứu áp dụng cho nghiên cứu triển khai Từ khoá:Viên nang Bổ Khí Hoạt Huyết, paeoniflorin ABSTRACT STUDY ON THE STANDARDIZATION OF BO KHI HOAT HUYET CAPSULES Lam Bich Thao, Duong Thi Mong Ngoc, Nguyen Phuong Dung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No – 2012 : 224 – 229 Background: Based on folk remedies and recently scientific achievements in traditional medicine, the preparation “Bo Khi Hoat Huyet capsule” was prepared by the researchs from Faculty of Traditional Medicine - University of Medicine and Pharmacy at Ho Chi Minh City The hypocholesterolemic effect on dyslipidemic patients will be investigated in clinical trials Objectives: The aim of the study was to build the standard for analyzing the Bo Khi Hoat Huyet capsules Methods: Chemical reactions and thin layer chromatography were used to identify the presence of saponins, alkaloids, flavonoids and paeoniflorin in Bo Khi Hoat Huyet capsules Quantitatitive determination of paeoniflorin in the capsules was carried by spectrophotometric method Results: Standards for testing of Bo Khi Hoat Huyet capsules were establised Identification by chemical reactions and TLC showed the presence of saponin, alkaloid, flavonoid compounds and paeoniflorin in the product Amount of paeoniflorin in a capsule was determined to be 6.3 mg Conclusions: The Bo Khi Hoat Huyet capsules have been standardized for stabilizing the producing process  Trung tâm Sâm Dược liệu TP HCM ** Khoa Y học cổ truyền - Đại học Y Dược Tp HCM Tác giả liên lạc: DS Lâm Bích Thảo ĐT: 0909325233 224 Email: thaonhi19842002@yahoo.com Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học as well as the quality of product The analytical method was proven to be reliable This result is used to further study Keywords: Bo Khi Hoat Huyet capsules, paeoniflorin ĐẶT VẤN ĐỀ Bổ Khí Hoạt Huyết (BKHH) có nguồn gốc từ thuốc cổ truyền Bổ Dương Hoàn Ngũ Thang, gia thêm Nhân sâm, Bạch thược Bài thuốc sử dụng Cơ sở – Bệnh viện Đại học Y dược TPHCM theo hướng phòng chống tăng cholesterol máu dạng viên hoàn cứng Hạn chế dạng bào chế cổ truyền người bệnh phải uống số lượng lớn viên hồn 15 – 30 viên/ lần, khơng thuận tiện sử dụng điều trị dài ngày Để tiện lợi việc sử dụng thuốc cho người bệnh, Bộ môn Bào chế Đông dược – Đại học Y Dược TPHCM nghiên cứu chuyển từ dạng hoàn sang dạng viên nang cứng với thành phần công dụng tương tự dạng bào chế cũ Trong khuôn khổ đề tài này, áp dụng phương pháp lý hóa để khảo sát độ ẩm, độ tro, độ rã, định tính nhóm hoạt chất chủ yếu có chế phẩm Áp dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng để xác định diện dược liệu thành phần chế phẩm Đồng thời, áp dụng phương pháp đo quang phổ bước sóng 228 nm để định lượng hoạt chất paeoniflorin – hoạt chất có tác dụng hạ cholesterol máu Bạch thược, Xích thược viên nang Bổ Khí Hoạt Huyết Từ đó, góp phần tiêu chuẩn hóa kiểm nghiệm chất lượng chế phẩm nghiên cứu triển khai, tiến tới giới thiệu sản phẩm cho cộng đồng ĐỐI TƯỢNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Viên nang Bổ Khí Hoạt Huyết (BKHH) sản xuất Bộ mơn Bào chế Đông dược – Khoa Y học cổ truyền – Đại học Y Dược TPHCM Thành phần gồm dược liệu (Hoàng kỳ, Hồng hoa, Đào nhân, Nhân sâm, Đương qui, Địa long, Xích thược, Bạch thược, Xuyên khung): NSX 170810, lọ chứa 50 viên nang số Bột Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền nang có màu nâu đậm, vị nhẫn đắng, mùi thơm đặc trưng Phương tiện Hóa chất: methanol (TQ Merck); anhydric acetic (Merck); ethyl acetate (TQ Merck); chloroform (TQ); paeoniflorin chuẩn (Sigma Aldrich, 099K1305, độ tinh khiết ≥ 98%).Dụng cụ: máy siêu âm (lma, LC60H); tủ sấy; bể cách thủy; bình sắc kí; cân số lẻ (Mettler Tolerdo, AB204); máy quang phổ tử ngoại khả kiến (Thermo Spectronic - Heios ) Phương pháp khảo sát độ ẩm, độ tan rã, độ đồng khối lượng1 Khảo sát độ ẩm (mất khối lượng sấy khô) theo DĐVN IV, mục 9.6, trang PL-182: Cân 0,5g bột chế phẩm, sấy 1050C đến khối lượng khơng đổi Lặp lại thí nghiệm lần.Khảo sát độ tan rã theo DĐVN IV, mục 11.6, trang PL-226: Thực với viên lấy ngẫu nhiên, môi trường nước.Khảo sát độ đồng khối lượng theo DĐVN IV, mục 11.3, trang PL-221 (khối lượng trung bình viên ± 7,5%): Thực với 20 viên nang lấy ngẫu nhiên Định tính phương pháp hóa học Thực phản ứng hóa học để xác định diện hợp chất alkaloid, flavonoid, saponin chế phẩm.Hợp chất alkaloid: Dùng dịch chiết H2SO4 5% g bột chế phẩm, siêu âm 30 phút, làm phản ứng màu với thuốc thử (TT) đặc trưng hợp chất alkaloid (Mayer, Bouchardat, Dragendroff).Hợp chất flavonoid: Dùng dịch chiết ethanol 96% g bột chế phẩm, siêu âm nóng 30 phút, làm phản ứng màu đặc trưng hợp chất flavonoid (NaOH 10%, FeCl3 10%, chì acetat 5%).Hợp chất saponin: Cân khoảng g bột chế phẩm, thêm 20 ml ethanol 96%, siêu âm nóng 30 phút, lọc Lấy ml dịch lọc đến cắn Hòa cắn với 0,5 ml anhydric acetic, ml chloroform cho vào ống 225 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 nghiệm, cho từ từ vào ống nghiệm H2SO4 đđ (phản ứng Lieberman) Định tính phương pháp sắc kí lớp mỏng6 Dung dịch mẫu thử Hoàng kỳ, Đào nhân, Hồng hoa: Cân 20 g bột chế phẩm dược liệu, thêm 200 ml nước cất, đun sôi 20 phút, cách thủy 30 phút, lọc qua bông, để nguội Lắc dịch lọc với ether ethylic (3 lần x 100ml) Tập trung dịch ether ethylic 2ml dùng để làm dung dịch chấm sắc kí Dung dịch mẫu thử Địa long, Xuyên khung: Cân 20 g bột chế phẩm dược liệu thêm 200 ml nước cất, đun sôi 20 phút, cách thủy 30 phút, lọc qua bông, để nguội Dịch lọc lắc với ether ethylic (3 lần x 100 ml) Lấy phần dịch nước lắc tiếp với chloroform (3 lần x 100 ml), loại dịch chloroform Lấy phần dịch nước lắc với ethyl acetat (3 lần x 100 ml) Tập trung dịch ethyl acetat ml dùng làm dung dịch chấm sắc kí Dung dịch mẫu thử Xuyên khung: Cân 20 g bột chế phẩm dược liệu, thêm 200 ml nước cất, đun sôi 20 phút, cách thủy 30 phút, lọc qua bông, để nguội Dịch lọc lắc với ether ethylic (3 lần x 100 ml), loại dịch ether ethylic Dịch nước lắc tiếp với chloroform (3 lần x 100 ml) Tập trung dịch chloroform 2ml dùng làm dung dịch chấm sắc kí Dung dịch mẫu thử Nhân sâm: Cân g bột chế phẩm dược liệu, thêm 50 ml methanol, siêu âm 30 phút, lọc Tập trung dịch lọc, 2ml dùng để làm dung dịch chấm sắc kí Dung dịch mẫu thử Bạch thược, Xích thược: Cân g bột chế phẩm dược liệu, thêm 50 ml ethanol 96%, siêu âm 30 phút, lọc Tập trung dịch lọc, ml dùng để làm dung dịch chấm sắc kí Điều kiện sắc kí: Bản mỏng nhơm Silicagel 60F254 (dày 0,25 mm, 20 x 20 cm) Merck, Germany Các hệ dung môi khai triển ethyl acetat – acid formic – nước (10:3:2:1) để xác định diện Đương qui Chloroform – ethyl acetat (9:1) để xác định diện Xuyên khung, Hồng hoa Toluen – ethyl acetat (5:5) để xác định diện Hoàng kỳ, Đào nhân, Chloroform – ethyl acetat – methanol – nước (40:5:10:0,2) để xác định diện Bạch thược, Xích thược n-Butanol- acid aceticnước (7:1:2) để xác định diện Nhân sâm Thể tích chấm: 20µl dung dịch dược liệu đối chiếu, 20µl dung dịch chế phẩm, µl dung dịch paeoniflorin chuẩn Phát Soi UV 254 nm, 365 nm để phát vết Đào nhân, Địa long, Xuyên khung, Hồng hoa, Đương qui Thuốc thử Anisaldehyd, 1050C để phát vết Địa long, Hồng hoa Thuốc thử H2SO4 10% / cồn, 1050C để phát vết Nhân sâm Thuốc thử Vanillin 5%/H2SO, 1050C để phát vết Hồng kỳ, Bạch thược, Xích thược Định lượng paeoniflorin chế phẩm phương pháp quang phổ dựa vào đường cong chuẩn paeoniflorin chuẩn methanol Thiết lập giai mẫu: Cân xác mg paeoniflorin chuẩn, hòa tan 10 ml methanol Dùng micro pipette lấy xác dung dịch chuẩn tích 100 µl, 200 µl, 300 µl, 400 µl, 500 µl cho vào bình định mức 10 ml, thêm methanol tới vạch, lắc Đo quang máy quang phổ tử ngọai khả kiến Thermo Spectromic HEIOS (max = 228 nm) Dịch methanol: Cân xác 0,5g bột chế phẩm, chiết kiệt nhiều lần methanol Cô dịch chiết khoảng 100 ml qui vào bình định mức 100 ml, lắc Dùng micro pipet hút xác ml dịch chiết đến cắn Hòa cắn methanol vào bình định mức 10ml thêm methanol tới vạch, lắc Đo quang max = 228 nm Toluen – ethyl acetat – acid formic (20:8:0,5) để xác định diện Địa longToluen – 226 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Cơng thức xác định lượng hoạt chất tính theo paeoniflorin mẫu thử dựa vào đường chuẩn y= 0,007x - 0,0069 C ( mg / viên )  At  0,0069 b x100 x x10  0,007 p Trong đó:At: Độ hấp thu mẫu thử.b: Khối lượng trung bình bột chế phẩm viên (g)p: Khối lượng bột chế phẩm thử (g) KẾT QUẢ Độ ẩm, độ rã, độ đồng khối lượng viên nang BKHH Bảng 1: Độ ẩm, thời gian rã, độ đồng khối lượng viên nang BKHH Số lần lặp u cầu lại thí Trung bình phải đạt nghiệm Độ ẩm (%) 7,25 ± 0,02 ≤9 Thời gian rã (phút) 5,33 ± 0,77 ≤ 30 Khối lượng trung bình bột thuốc 20 0,4866 ± 0,0074 viên (g) Độ đồng khối ± 7,5 % 20 0,4501- 0,5231 lượng (g) KLTB viên Chỉ tiêu Nghiên cứu Y học Độ ẩm viên nang BKHH 7,25%Thời gian rã trung bình viên nang BKHH 5,33 phút