Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu và cao chiết từ dâu tằm (morus alba l ), họ dâu tằm và viễn chí, họ viễn chí (polygalaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TPHCM  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỮU CƠ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU VÀ CAO CHIẾT TỪ DÂU TẰM (Morus alba L.), HỌ DÂU TẰM (Moraceae) VÀ VIỄN CHÍ (Polygala japonica Houtt), HỌ VIỄN CHÍ (Polygalaceae) Giáo viên hướng dẫn khoa học: ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Sinh viên thực hiện: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN TP.HCM – Năm 2013 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ SƠ ĐỒ iv Phần 1:MỞ ĐẦU Phần 2: TỔNG QUAN GIỚI THIỆU VỀ CÁC DƯỢC LIỆU 1.1 Cây Dâu tằm (Morus alba L.) [1,4,5,10,11,12,15,16,17,19] 1.2 Cây viễn chí (Polygala japonica Houtt) [5,9,10,11,14,18,20] .8 CƠ SỞ LÝ THUYẾT VỀ PHƯƠNG PHÁP CHIẾT: [4,8] 13 2.1 Chiết lỏng - lỏng 13 2.2 Chiết siêu âm 14 2.3 Chiết Soxhlet 14 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỚP MỎNG [2,3,8,9] 14 ĐỊNH TÍNH BẰNG PHẢN ỨNG HÓA HỌC [1,4,8] .15 PHỔ TỬ NGOẠI KHẢ KIẾN (PHỔ UV - VIS) [1,2,9] 15 5.1 Khái niệm 15 5.2 Đặc điểm .15 Phần 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 18 1.1 Đối tượng nghiên cứu 18 1.2 Dung mơi, hóa chất, trang thiết bị 18 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 2.1 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu 19 2.2 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao 27 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU 36 1.2 Khảo sát độ tinh khiết nguyên liệu .36 1.3 Định tính hợp chất hóa thực vật nguyên liệu 37 1.4 Định lượng hợp chất hóa thực vật nguyên liệu .42 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM CAO CHIẾT 43 2.1 Khảo sát độ tinh khiết cao chiết .43 2.2 Định tính hợp chất hóa thực vật cao .44 2.3 Định lượng hợp chất hóa thực vật cao .50 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN 52 KIẾN NGHỊ 54 2.1 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu 54 2.2 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO v LỜI CẢM ƠN  Trong suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp này, hướng dẫn tận tình q thầy anh chị, bạn thực khóa luận, đề tài Trung tâm Sâm Dược Liệu TP.HCM tạo điều kiện giúp em hoàn thành tốt khóa luận Em xin gởi lời cảm ơn chân thành đến: o Gia đình ủng hộ tinh thần, vật chất tạo điều kiện cho em năm học vừa qua suốt trình làm khóa luận o Các thầy Khoa Hóa học trường ĐH Sư Phạm TP.HCM tận tụy dạy dỗ em suốt khóa học trường o PGS.TS Trần Cơng Luận, Giám Đốc Trung tâm Sâm Dược liệu tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận o Cô ThS Dương Thị Mộng Ngọc chị Nguyễn Thị Ngọc Đan người trực tiếp hướng dẫn truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm tạo điều kiện tốt để em thực tốt khóa luận o Cơ Nguyễn Thị Hoa, chị Lâm Thị Bích Thảo, anh Bùi Thế Vinh quý thầy cô, anh chị trung tâm Sâm Dược Liệu hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện tốt thời gian em thực khóa luận o Các bạn sinh viên trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên, ĐH Nông Lâm TP.HCM bạn sinh viên lớp giúp đỡ, chia sẻ kinh nghiệm học tập vui buồn suốt thời gian em làm khóa luận Trung tâm Sinh viên thực PHẠM THỊ KIM KHUYÊN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT NL: Nguyên liệu dd: Dung dịch TT: Thuốc thử SKLM: Sắc ký lớp mỏng MeOH: Methanol n-BuOH: n- butanol EtOAc: Ethyl acetat HCl: Acid chlohydric H SO : Acid sulfuric CHCl : Chloroform CH COOH: Acid acetic (CH CO) O: Anhydric acetic NaOH: Natri hydroxyd FeCl : Sắt (III) chlorid AlCl : Nhôm chlorid H O: Nước cất R f : Ratio of flow UV: Ultraviolet LD 50 : Lethal Dose 50 DĐVN: Dược điển Việt Nam ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Các chế phẩm từ Dâu tằm Bảng Các chế phẩm từ Viễn chí 13 Bảng Dung mơi- hóa chất- trang thiết bị 18 Bảng Định tính hợp chất flavonoid nguyên liệu Dâu tằm 21 Bảng Định tính hợp chất hóa thực vật nguyên liệu Viễn chí 21 Bảng Định tính hợp chất flavonoid cao Dâu tằm 28 Bảng Định tính hợp chất hóa thực vật cao Viễn chí 29 Bảng Độ ẩm nguyên liệu 36 Bảng Độ tro toàn phần nguyên liệu 36 Bảng 10 Độ tro không tan acid nguyên liệu 37 Bảng 11 Hàm lượng flavonoid tính theo rutin nguyên liệu Dâu tằm 42 Bảng 12 Hàm lượng saponin toàn phần nguyên liệu Viễn chí 42 Bảng 13 Độ ẩm cao chiết 43 Bảng 14 Độ tro toàn phần cao chiết 43 Bảng 15 Hàm lượng flavonoid tính theo rutin cao Dâu tằm 50 Bảng 16 Hàm lượng saponin toàn phần cao Viễn chí 50 iii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ SƠ ĐỒ Hình Cây Dâu tằm (Morus alba L.) Hình Rễ Viễn chí (Radix Polygala japonica Houtt) Hình Phản ứng hóa học nguyên liệu Dâu tằm 38 Hình SKLM kiểm tra diện chất rutin nguyên liệu Dâu tằm 39 Hình Phản ứng nguyên liệu Viễn chí 40 Hình 7.Phản ứng hóa học cao Dâu tằm 44 Hình SKLM kiểm tra diện nguyên liệu cao Dâu tằm 45 Hình SKLM kiểm tra diện chất chuẩn rutin cao Dâu tằm 46 Hình 10 Phản ứng hóa học caoViễn chí 47 Hình 11 SKLM kiểm tra diện nguyên liệu cao Viễn chí 49 Sơ đồ Sơ đồ xác định hàm lượng flavonoid tổng Dâu tằm 24 Sơ đồ Định lượng saponin toàn phần nguyên liệu Viễn chí 26 Sơ đồ Sơ đồ xác định hàm lượng flavonoid tổng Dâu tằm 32 Sơ đồ Định lượng saponin toàn phần cao Viễn chí theo phương pháp cân Namba 34 iv Phần 1: MỞ ĐẦU Việt Nam quốc gia nằm bán đảo Đông Dương Hiện nay, vấn đề mơi trường khơng khí Việt Nam quan tâm nhiều từ thành phố lớn đến vùng nông thôn thành thị Không khí khí mà hít thở khơng khí ẩm, bao gồm hỗn hợp chất dạng khí tích gần khơng đổi có chứa lượng nước định tùy thuộc vào nhiệt độ áp suất khí Vì vậy, thường đối mặt với bệnh hô hấp ho, nghẹt xoang suyễn…Hiện nay, để điều trị loại bệnh này, dược phẩm tây y sử dụng rộng rãi, nhiên, bên cạnh tác dụng trị liệu tác dụng phụ đáng kể ảnh hưởng đến thể trạng chung người sử dụng Trước tình hình Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) khuyến cáo quốc gia nên phát triển y học cổ truyền việc chăm sóc sức khoẻ cộng đồng, đó, việc sử dụng nguồn dược liệu thiên nhiên làm thuốc phòng chữa bệnh xu hướng y học Việt Nam y học giới Trong kho tàng y học dân gian có nhiều thuốc thuốc, nhiên phần lớn thuốc thuốc sử dụng theo kinh nghiệm dân gian mà chưa nghiên cứu, đánh giá cách khoa học Đã từ lâu dân gian ta sử dụng Dâu tằm thuốc chữa phong thấp, chữa cảm mạo, ho, họng đau, nhức đầu, mắt đỏ, chảy nước mắt, phát ban, huyết áp cao, mồ trộm Còn Viễn chí xem lồi trị viêm phổi, ho có nhiều đờm, bạch đới, lỵ, lo âu, ngủ Trước thực trạng này, Trung tâm Sâm Dược liệu TP.Hồ Chí Minh nghiên cứu sản phẩm điều trị bệnh hô hấp từ dược liệu Trong trình nghiên cứu sản phẩm điều trị bệnh việc đánh giá chất lượng nguyên liệu bán thành phẩm, đảm bảo hiệu sử dụng tính an tồn nguyên liệu bán thành phẩm sản xuất, quản lý, phân phối sử dụng cơng tác kiểm nghiệm cần phải quan tâm nhiều Chính vậy, để tiếp tục hồn thành hồ sơ nghiên cứu sản phẩm điều trị bệnh hô hấp từ dược liệu, đề tài “Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu cao chiết từ Dâu tằm (Morus alba L.), họ Dâu tằm (Moraceae) Viễn chí (Polygala japonica Houtt), họ Viễn chí (Polygalaceae)” thực với mục tiêu sau:  Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu Dâu tằm (Morus alba L.) Viễn chí (Polygala japonica Houtt)  Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao chiết từ Dâu tằm (Morus alba L.) Viễn chí (Polygala japonica Houtt) Khóa luận tốt nghiệp Kết kiến nghị 2.2.1.2 Dựa vào sắc kí lớp mỏng Kiểm tra diện nguyên liệu cao Dâu tằm EtOAc - HCOOH CHCl - MeOH (9:1) CHCl - MeOH (9:1) CHCl - MeOH (9:1) H O (50:4:10), lớp 1 2 Nguyên liệu 2 Cao Quan sát đèn Phun thuốc thử Phun thuốc thử Phun thuốc thử tử ngoại bước NaOH 10% NaOH 10% H SO 10% sóng 365nm cồn Quan sát cồn Quan sát cồn Quan sát đèn tử ngoại bước ánh sáng thường ánh sáng thường sau sấy 105oC sóng 365nm Hình SKLM kiểm tra diện nguyên liệu cao Dâu tằm • Nhận xét: Màu sắc giá trị R f vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ nguyên liệu Dâu tằm tương ứng với màu sắc giá trị R f vết thu cao Dâu tằm Như vậy, chứng tỏ thành phần hóa thực vật nguyên liệu Dâu tằm diện cao Dâu tằm SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 45 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết kiến nghị Kiểm tra diện chất chuẩn rutin cao Dâu tằm EtOAc - HCOOH - CH COOH - H O (100:11:11:26) Cao Trùng vết 3 Chuẩn rutin Phun thuốc thử AlCl 5% MeOH, sấy 105oC đến xuất vết Quan sát đèn tử ngoại bước Quan sát ánh sáng thường sóng 365nm Hình SKLM kiểm tra diện chất chuẩn rutin cao Dâu tằm • Nhận xét: Màu sắc giá trị R f vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ cao Dâu tằm tương ứng với màu sắc giá trị R f vết chuẩn rutin Như vậy, có diện chuẩn rutin cao Dâu tằm SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 46 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết kiến nghị 2.2.2 Cao Viễn chí 2.2.2.1 Dựa vào phản ứng hóa học Phản ứng Liebermann- Burchard Hình Phản ứng hóa học cao Viễn chí Dung dịch đối chứng Dung dịch sau phản ứng SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 47 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết kiến nghị 2.2.2.2 Dựa vào sắc ký lớp mỏng Kiểm tra diện nguyên liệu cao Viễn chí CHCl - MeOH (9:1) CHCl - MeOH (9:1) CHCl - MeOH (9:1) 1.Nguyên liệu Cao Quan sát đèn tử Quan sát đèn tử Phun ngoại bước sóng 254nm 2 ngoại bước sóng 365nm thuốc thử H SO 10% cồn, sấy 105oC đến xuất vết Quan sát ánh sáng thường SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 48 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết kiến nghị n-BuOH-AcOH-H O n-BuOH-AcOH-H O n-BuOH-AcOH-H O (7:1:2) (7:1:2) (7:1:2) 1 2 • Nguyên liệu 2 Cao Quan sát đèn tử Quan sát đèn tử Phun thuốc thử H SO ngoại bước sóng 254nm ngoại bước sóng 365nm 10% cồn, sấy 105oC đến xuất vết Quan sát ánh sáng thường Hình 10 SKLM kiểm tra diện nguyên liệu cao Viễn chí • Nhận xét: Màu sắc giá trị R f vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ nguyên liệu Viễn chí tương ứng với màu sắc giá trị R f vết thu cao Viễn chí Như vậy, chứng tỏ thành phần hóa thực vật nguyên liệu Viễn chí diện cao Viễn chí SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 49 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết kiến nghị 2.3 Định lượng hợp chất hóa thực vật cao 2.3.1 Cao Dâu tằm Quy trình định lượng hợp chất flavonoid phương pháp phổ tử ngoại khả kiến dựa chất chuẩn rutin Độ hấp thu cực đại rutin chuẩn đo 424nm Tiến hành đo mẫu thử bước sóng ta thu bảng sau: Cao Dâu tằm Khối lượng cao (g) Lần Lần Lần 0,5313 0,5348 0,5258 Độ hấp thu mẫu chuẩn (A c ) 0,307 Độ hấp thu mẫu trắng thử (A’ t ) 0,294 0,296 0,299 Độ hấp thu mẫu thử (A t ) 0,518 0,515 0,519 20,8967 20,2965 20,7382 Hàm lượng flavonoid tính theo rutin (%) Trung bình 20,6438 Bảng 15 Hàm lượng flavonoid tính theo rutin cao Dâu tằm • Nhận xét: Hàm lượng flavonoid tính theo rutin cao Dâu tằm 20,6438% 2.3.2 Cao Viễn chí Hàm lượng saponin tồn phần thu sau: Cao Viễn chí Lần Lần Lần Khối lượng cao (g) 1,0576 1,0549 1,0439 Khối lượng cắn saponin toàn phần (g) 0,3426 0,3394 0,3386 Hàm lượng cắn saponin toàn phần (%) 40,860 40,582 40,913 Trung bình 40,785 Bảng 16 Hàm lượng saponin tồn phần cao Viễn chí • Nhận xét: Hàm lượng saponin toàn phần thu cao 40,785% SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 50 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Khóa luận tốt nghiệp Kết luận kiến nghị KẾT LUẬN Qua trình thực nghiệm làm quen với cơng tác nghiên cứu khoa học, em thực vấn đề sau: Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu Dâu tằm Viễn chí theo chuyên luận “Dược Liệu” Dược Điển Việt Nam như:  Độ ẩm  Độ tro toàn phần  Độ tro không tan acid  Đánh giá chất lượng nguyên liệu mặt định tính hai phương pháp: − Phản ứng hóa học − Sắc ký lớp mỏng  Đánh giá chất lượng nguyên liệu mặt định lượng − Hàm lượng flavonoid tổng nguyên liệu Dâu tằm phương pháp quang phổ tử ngoại - khả kiến − Hàm lượng saponin tồn phần ngun liệu Viễn chí theo phương pháp cân Namba Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao Dâu tằm cao Viễn chí theo chuyên luận Dược Điển Việt Nam :  Độ ẩm  Độ tro toàn phần  Đánh giá chất lượng cao Dâu tằm cao Viễn chí mặt đinh tính hai phương pháp: − Phản ứng hóa học − Sắc ký lớp mỏng  Đánh giá chất lượng cao Dâu tằm cao Viễn chí mặt định lượng SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 52 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết luận kiến nghị − Hàm lượng flavonoid cao Dâu tằm phương pháp quang phổ tử ngoại- khả kiến − Hàm lượng saponin toàn phần cao Viễn chí theo phương pháp cân Namba SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 53 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết luận kiến nghị KIẾN NGHỊ Qua trình xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu cao Dâu tằm, Viễn chí em xin đề nghị bảng tiêu chuẩn sở để kiểm nghiệm sau: 2.1 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu 2.1.1 Nguyên liệu Dâu tằm STT Các tiêu chí u cầu Phương pháp thử Độ ẩm Khơng 15% DĐVN IV Độ tro toàn phần Không 20% DĐVN IV Độ tro không tan acid Không 4,5% DĐVN IV Định tính • Phản ứng hóa học Mẫu thử phải cho phản TCCS ứng với TT NaOH 20% TT FeCl 5% • Sắc ký lớp mỏng Các vết thu sắc kí đồ mẫu thử phải có giá trị R f màu sắc tương đồng với vết thu chất chuẩn rutin Định lượng Hàm lượng flavonoid TCCS tính theo rutin khoảng 3,57% - 4,83% SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 54 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết luận kiến nghị 2.1.2 Nguyên liệu Viễn chí STT Các tiêu chí Phương pháp thử Yêu cầu Độ ẩm Không 14% DĐVN IV Độ tro tồn phần Khơng q 6% DĐVN IV Độ tro không tan acid Không 1,5% DĐVN IV Định tính • Phản ứng hóa học Mẫu thử phải có phản DĐVN IV ứng tạo bọt phản ứng Liebermann- Burchard • Sắc ký lớp mỏng Mẫu thử phải cho sắc TCCS ký đồ có vết phát quang đèn tử ngoại bước sóng 366 nm vết phun thuốc thử vanillin 2% ethanol acid sulfuric Định lượng Hàm lượng hợp chất TCCS saponin toàn phần khoảng 19,2% - 23,4% SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 55 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết luận kiến nghị 2.2 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao 2.2.1 Cao Dâu tằm STT Các tiêu chí Yêu cầu Phương pháp thử Độ ẩm Không 10% DĐVN IV Độ tro tồn phần Khơng q 15% DĐVN IV Mẫu thử phải cho phản ứng TCCS Định tính • Phản ứng hóa học với TT NaOH 20% TT FeCl 5% • Sắc ký lớp mỏng Các vết thu sắc kí đồ mẫu thử phải có giá trị R f màu sắc tương đồng với vết thu Nguyên liệu dâu tằm Chất chuẩn rutin Định lượng Hàm lượng flavonoid tính TCCS theo rutin khoảng 17,5% - 23,7% SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 56 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC Khóa luận tốt nghiệp Kết luận kiến nghị 2.2.2 Cao Viễn chí STT Các tiêu chí Phương pháp thử Yêu cầu Độ ẩm Không 25 % DĐVN IV Độ tro tồn phần Khơng q 2% DĐVN IV Định tính • Phản ứng hóa học Mẫu thử phải có phản ứng TCCS Liebermann- Burchard Các vết thu sắc • Sắc ký lớp mỏng kí đồ mẫu thử phải có giá trị R f màu sắc tương đồng với vết thu nguyên liệu Viễn chí Định lượng Hàm saponin lượng hợp toàn khoảng chất TCCS phần nằm 36,7% - 44,9% SVTH: PHẠM THỊ KIM KHUYÊN 57 ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, 2009 Bộ mơn Dược Liệu, Giáo trình phương pháp nghiên cứu Dược liệu, Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh, 2004 Bộ Y tế, Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, 2005 Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam - tập I, NXB KH & KT, Hà Nội, 182-184, 2003 Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y Học, TP.HCM, 9092, 2004 Hồng Trị, Tối ưu hóa quy trình chiết xuất 10-deacetyl baccatin III (10-DAB) taxol từ cành thông đỏ dài (Taxus wallichiana Zucc.), Khóa luận tốt nghiệp cử nhân hóa học, 2009 Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ, Bài giảng chiết xuất dược liệu, Tài liệu giảng dạy sinh viên dược 5, Trường ĐH Y Dược TP.HCM, Bộ môn dược liệu Nguyễn Kim Phi Phụng, Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh, 2007 Ngơ Văn Thu, “Bài giảng dược liệu”, tập I Trường đại học Dược Hà Nội, 2011 10 Phạm Thanh Kì, “Bài giảng dược liệu”, tập II Trường đại học Dược Hà Nội, 1998 11 Viện Dược Liệu, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập II, NXB Khoa học kỹ thuật, 2004 Tiếng nước 12 Camila B Pereira, Aline Marin, Tiago D T Maki, Raquel M M.Necchi, Melania Palermo Manfron, Physico­chemical quality control and dosage of total polyphenols, flavonoids of Morus alba Leaves (MORACEAE), Saúde (Santa Maria), Ahead of Print, v.37, n.2, pp.57­68, 2011 13 Dušan Malešev and Vesna Kunti, Investigation Of Metal–Flavonoid Chelates And The Determination Of Flavonoids Via Metal–Flavonoid Complexing v Reactions, Institute of Physical Chemistry, Faculty of Pharmacy, University of Belgrade, Serbia, pp 921-928, 2007 14 Honglan Wang Jie Gao, Danni Zhu and Boyang Yu, Two new Triterpenoid Saponins isolated from Polygala japonica, China Pharmaceutical University, 2006 15 Jun Wang, Fu An Wu, Hui Zhao, Li Liu and Qiu Sheng Wu, Isolation of flavonoids from mulberry (Morus alba L.) leaves with macroporous resins, African Journal of Biotechnology Vol (13), pp 2147-2155, July, 2008 16 Kai Nie, Zhonghai Tang, Xu Wu, Xiaona Xu, Yizeng Liang, Huang Li and Liqun Rao, Optimization of total flavonoids extraction from mulberry leaf using an ethanol-based solvent system, Journal of Medicinal Plants Research Vol 6(12), pp 2373-2380, 30 March, 2012 17 Mărghita , L Al, D Dezmirean, Laura Laslo, Adela Moise, Olimpia Popescu, O Maghear, Validated Method For Estimation Of Total Flavonoids, in Romanian Propolis, Romania, Bulletin USAMV-CN, pp 63 -64,2007 18 Qing-Chun Xue, Chuang-Jun Li, Li Zuo, Jing-Zhi Yang and Dong-Ming Zhang, Three new xanthones from the roots of Polygala japonica Houtt, Journal of Asian Natural Products Research, Vol.11, No.5, 465–469,May 2009 19 Shreeda S Adhyapak, Comparison of extraction techniques for quantitative determination of Rutin from morus Alba Linn by reverse phase high performance liquid chromatography, International Journal of Pharma and Bio Sciences, vol 2, issue 1, pp 751-752, 2011 20 Walter A Jacobs and Otto Isler, The Sapogenins Of Polygala Senega, Laboratories of The Rockefeller Institute for Medical Research, New York, pp 155-157, 1937 vi ... chiết từ Dâu tằm (Morus alba L. ), họ Dâu tằm (Moraceae) Viễn chí (Polygala japonica Houtt), họ Viễn chí (Polygalaceae) thực với mục tiêu sau:  Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu Dâu tằm. .. .19 2.1 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu 19 2.2 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao 27 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU ... nghiệm nguyên liệu Dâu tằm (Morus alba L. ) Viễn chí (Polygala japonica Houtt)  Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao chiết từ Dâu tằm (Morus alba L. ) Viễn chí (Polygala japonica Houtt) Phần TỔNG